實(shí)驗(yàn)五用大腸桿菌生長曲線的測(cè)定ppt課件

1、林親雄林親雄 閻春蘭閻春蘭 李曉華李曉華一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理一個(gè)典型的生長曲線分為延緩期、對(duì)數(shù)期、一個(gè)典型的生長曲線分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)時(shí)期穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)時(shí)期微生物數(shù)量的測(cè)定方法微生物數(shù)量的測(cè)定方法稀釋平板計(jì)數(shù)法稀釋平板計(jì)數(shù)法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法最大約率法最大約率法光電比濁法光電比濁法稀釋平板計(jì)數(shù)法稀釋平板計(jì)數(shù)法對(duì)樣品稀釋培育，據(jù)構(gòu)成的菌落數(shù)計(jì)數(shù)。對(duì)樣品稀釋培育，據(jù)構(gòu)成的菌落數(shù)計(jì)數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：活菌計(jì)數(shù)方法，對(duì)設(shè)備要求不高。優(yōu)點(diǎn)：活菌計(jì)數(shù)方法，對(duì)設(shè)備要求不高。缺陷：操作復(fù)雜。缺陷：操作復(fù)雜。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法運(yùn)用血球計(jì)數(shù)板在

2、顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。運(yùn)用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，計(jì)數(shù)直觀。優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，計(jì)數(shù)直觀。缺陷：計(jì)數(shù)結(jié)果為活細(xì)菌和死菌體的總和。缺陷：計(jì)數(shù)結(jié)果為活細(xì)菌和死菌體的總和。最大約率法最大約率法 待測(cè)菌液經(jīng)十倍系列稀釋，每稀釋度做待測(cè)菌液經(jīng)十倍系列稀釋，每稀釋度做3-53-5個(gè)反復(fù)，經(jīng)培育后，檢查細(xì)菌的生長，以有細(xì)個(gè)反復(fù)，經(jīng)培育后，檢查細(xì)菌的生長，以有細(xì)菌生長的最后三個(gè)稀釋度的管數(shù)作數(shù)量目的，菌生長的最后三個(gè)稀釋度的管數(shù)作數(shù)量目的，由數(shù)理統(tǒng)計(jì)表查出近似值，再乘以數(shù)量目的第由數(shù)理統(tǒng)計(jì)表查出近似值，再乘以數(shù)量目的第一位的稀釋倍數(shù)，即為原菌液中的菌數(shù)。一位的稀釋倍數(shù)，即為原菌液中的菌數(shù)。最大約

3、率法最大約率法例如：某細(xì)菌在稀釋培育法中生長情況如下：例如：某細(xì)菌在稀釋培育法中生長情況如下：稀釋度：稀釋度： 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8反復(fù)數(shù)：反復(fù)數(shù)： 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5有菌生長管數(shù)：有菌生長管數(shù)： 5 5 5 4 1 0 5 5 5 4 1 0根據(jù)上述結(jié)果，數(shù)量目的為根據(jù)上述結(jié)果，數(shù)量目的為“541541，查表得近似值為，查表得近似值為1717，乘，乘以第一位數(shù)的稀釋倍數(shù)，得出原始培育物的活菌數(shù)以第一位數(shù)的稀釋倍數(shù)，得出原始培育物的活菌數(shù)=17=17105105個(gè)個(gè)優(yōu)點(diǎn)

4、：活菌計(jì)數(shù)，適用于特殊細(xì)菌。優(yōu)點(diǎn)：活菌計(jì)數(shù)，適用于特殊細(xì)菌。缺陷：計(jì)數(shù)結(jié)果為概值。缺陷：計(jì)數(shù)結(jié)果為概值。光電比濁法是利用在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)光電比濁法是利用在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比的原理。當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞在胞濃度與透光度成反比的原理。當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞在溶液中數(shù)量越多，濁度越大，在光電比色計(jì)中溶液中數(shù)量越多，濁度越大，在光電比色計(jì)中測(cè)定時(shí)所吸收的光線越多。測(cè)定時(shí)所吸收的光線越多。優(yōu)點(diǎn)：簡便快速，適宜于自動(dòng)控制。優(yōu)點(diǎn)：簡便快速，適宜于自動(dòng)控制。 缺陷：測(cè)定結(jié)果受培育液成分影響；某些樣品缺陷：測(cè)定結(jié)果受培育液成分影響；某些樣品 樣品不適宜用此法。樣品不適宜用此法。 三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器

5、材四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1.1.樣品測(cè)試前的調(diào)試樣品測(cè)試前的調(diào)試 比色皿經(jīng)蒸餾水清洗后，必需經(jīng)待測(cè)樣比色皿經(jīng)蒸餾水清洗后，必需經(jīng)待測(cè)樣品潤洗。比色皿的毛面用吸水紙擦干，而光品潤洗。比色皿的毛面用吸水紙擦干，而光面只能用吸水紙吸干，以免光面被劃破。面只能用吸水紙吸干，以免光面被劃破。 比色皿之間吸光度進(jìn)展比較。比色皿之間吸光度進(jìn)展比較。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 記錄不同大腸桿菌培育液的記錄不同大腸桿菌培育液的OD600OD600值，值，并繪制大腸桿菌的生長曲線。并繪制大腸桿菌的生長曲線。 五、思索題五、思索題光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么？這種計(jì)數(shù)法有何光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么？這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺陷

6、？優(yōu)缺陷？假設(shè)用活菌計(jì)數(shù)法制造生長曲線，他以為會(huì)有假設(shè)用活菌計(jì)數(shù)法制造生長曲線，他以為會(huì)有什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺陷？什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺陷？ 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材N-乙酰葡糖胺四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1.1.南湖水中微生物的測(cè)定南湖水中微生物的測(cè)定每個(gè)培育皿每個(gè)培育皿加加0.1ml 0.1ml 稀稀釋液釋液(LTA)2.2.口腔、人民幣和門把手微生物的測(cè)定口腔、人民幣和門把手微生物的測(cè)定 用棉簽分別從牙周、人民幣紙幣和門把手外用棉簽分別從牙周、人民幣紙幣和門把手外表挑取微生物，然后放入裝有表挑取微生物，然后放入裝有0.5 ml0.5 ml無菌水的無菌水的EPEP管中，顛倒均勻后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋管中，顛倒均勻后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋白胨平板中，涂布均勻。白胨平板中，涂布均勻。3.3.實(shí)驗(yàn)室空氣中微生物的測(cè)定實(shí)驗(yàn)室空氣中微生物的測(cè)定 將牛肉膏蛋白胨平板蓋揭開，分別置實(shí)驗(yàn)臺(tái)將牛肉膏蛋白胨平板蓋揭開，分別置實(shí)驗(yàn)臺(tái)1010，2020，3030，4040，5050，60 min60 min后，蓋上皿蓋，倒置培育。后，蓋上皿蓋，倒置培育。4.4.自來水、橙