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文檔簡介

1、生物多肽工藝流程一、固相肽合成 (1)投料:樹脂加入固相合成儀,加入DCM溶脹,抽干后加入DMF洗滌,洗滌結(jié)束抽干備用。 (2)縮合:將氨基酸用一定體積的DMF溶解,加入縮合劑活化后投入固相合成儀,補充DMF至反應濃度,攪拌反應。 (3)脫除保護基:以Kaiser試劑檢測反應程度,反應結(jié)束后抽干溶劑,DMF洗滌,加入PIP/DMF溶液脫除保護基,以Kaiser試劑檢測反應程度,反應完畢抽干溶劑,DMF洗滌,準備加入下一個氨基酸。 (4)縮合循環(huán):按照樹脂序列依次連接氨基酸,按照“脫保護洗滌活化氨基酸投料縮合洗滌”步驟進行縮合循環(huán)操作,按照氨基酸序列完成剩余n個氨基酸的縮合。 (5)出料:合成結(jié)

2、束之后用IPA和DCM交叉洗滌樹脂,完成樹脂收縮收縮,出料至不銹鋼托盤。 (6)樹脂干燥:樹脂在真空干燥箱中室溫干燥,干燥完畢稱重,計算收率。 (7)有機廢液回收,集中處理。 (8)清場:操作結(jié)束后操作人員及時清場。 二、樹脂裂解 (1)配液:按照裂解液成分比例配置裂解液,并提前置冰柜中冷藏保存。 (2)投料:肽樹脂加入反應釜中,加入預冷的裂解液,攪拌反應。 (3)出料:裂解結(jié)束后放出反應液,抽濾除去樹脂并以TFA洗滌。 (4)濃縮:裂解液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀室溫濃縮至小體積。 (5)析出:濃縮后的反應液傾入預冷的甲基叔丁基醚(簡稱醚)中,攪拌使析出大量固體。 (6)離心:濁液離心,并用預冷的醚洗滌

3、。 (7)粗肽干燥:滌完成的粗肽轉(zhuǎn)至真空干燥箱中室溫干燥。 (8)有機廢液回收,集中處理。 (9)清場:操作結(jié)束后操作人員及時清場。 三、多肽HPLC純化 (1)溶解:操作人員將粗肽溶解,調(diào)節(jié)PH至工藝規(guī)定范圍。 (2)過濾:濾去粗肽溶液中不溶物,過濾ACN和純化水。 (3)配制純化液:根據(jù)工藝內(nèi)容配制A相(乙腈)和B相(水)。 (4)純化:在制備型液相上進行純化,分別接收流份。 (5)檢驗及返工:對制備流份進行檢查,合并合格流份,其他部分根據(jù)需要再次純化。 (6)廢棄流動相按有機廢液回收,集中處理。 四、濃縮過濾凍干 (1)濃縮:合并濾液旋蒸除去有機溶劑,有機廢液回收, 集中處理。 (2)過濾:濃縮后水相無菌過濾。 (3)凍干:濾液

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