HPLC-ELSD法測(cè)定阿膠補(bǔ)血口服液中黃芪甲苷含量

1、HPLC-ELSD法測(cè)定阿膠補(bǔ)血口服液中黃芪甲苷含量         11-05-15 16:59:00     編輯：studa20                 作者：劉同祥,尚寶昌,陳富君,王繼蜂【摘要】  目的 建立阿膠補(bǔ)血口服液中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法。方法 采用HPLC-ELSD法,色譜柱：Be

2、tasil C18 (4.6 mm×200 mm,5 m),流動(dòng)相：甲醇-水(7426),流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ；ELSD參數(shù)：漂移管溫度90 ,氣體流量2.0 L/min。結(jié)果 黃芪甲苷在0.432.15 g之間呈良好線性關(guān),回歸方程為：Y=1.536 37X+0.921 58, r=0.999 9(n=6)；平均加樣回收率97.98%,RSD=1.03%。結(jié)論 本方法準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好,可作為阿膠補(bǔ)血口服液的質(zhì)量控制方法。 【關(guān)鍵詞】  HPLC-ELSD；阿膠補(bǔ)血口服液；黃芪甲苷；含量測(cè)定     

3、   Abstract：Objective To establish a method for the determination of Astragaloside in Ejiao Buxue Koufuye. Methods HPLC-ELSD was used to determine directly Astragaloside IV in Ejiao Buxue Koufuye on Betasil C18 column, using CH3OH-H2O (7426) as a mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min.

4、 The temperature of drift tube for ELSD was 90 and the flow rate of N2 was 2.0 L/min. Results The linear range of Astragaloside was 0.432.15 g, Y=1.536 37X+0.921 58, r=0.999   9 (n=6), the average recovery of the added sample was 98.5% and RSD=0.98%. Conclusion The method is accurate and r

5、eliable with a good reproducibility. It can be used for the quality control of Ejiao Buxue Koufuye. Key words：HPLC-ELSD；Ejiao Buxue Koufuye；Astragaloside ；determination    阿膠補(bǔ)血口服液為中藥復(fù)方制劑,由黃芪、阿膠、熟地黃、黨參、枸杞子、白術(shù)組成,具有滋陰補(bǔ)血、補(bǔ)中益氣、健脾潤肺之功,用于久病體虛、血虧目眩、虛癆咳嗽等癥1。黃芪為方中主藥,現(xiàn)代藥理研究表明,黃芪具有增強(qiáng)免疫、抗疲勞、促

6、進(jìn)代謝等功用,而黃芪的活性成分主要為皂苷類,黃芪甲苷又是其主要活性成分之一。本試驗(yàn)采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(HPLC-ELSD)法,對(duì)阿膠補(bǔ)血口服液中黃芪甲苷的含量進(jìn)行了研究,建立了方中黃芪甲苷的HPLC-ELSD含量測(cè)定方法。1  儀器與試藥    DIONEX高效液相色譜儀,ASI-100自動(dòng)進(jìn)樣器,Altech 2000ES型ELSD檢測(cè)器,Chromeleon色譜工作站；十萬分之一電子天平。黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)0781-200109,購自中國藥品生物制品檢定所)；阿膠補(bǔ)血口服液(批號(hào)050501、050502、050503,河南省四方藥

7、業(yè)有限公司生產(chǎn))。甲醇為色譜純；水為雙蒸水。2  方法與結(jié)果 2.1  色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)  Betasil C18色譜柱(4.6 mm×200 mm,5 m)；流動(dòng)相為甲醇-水(7426)；流量：1.0 mL/min；柱溫：30 ；ELSD漂移管溫度90 ,氣體流量2.0 L/min。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液20 L注入高效液相色譜儀,按上述色譜條件測(cè)定,記錄色譜圖,理論塔板數(shù)以黃芪甲苷計(jì)不低于3 000,黃芪甲苷色譜峰與相鄰峰的分離度不低于1.5,陰性對(duì)照溶液在黃芪甲苷峰位置處無干擾峰,黃芪甲苷與樣品中其他組分色譜峰

8、可完全分離(見圖1)。2.2  對(duì)照品溶液的制備    精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品10.75 mg,置5 mL量瓶中,加甲醇溶解后稀釋至刻度(黃芪甲苷對(duì)照品濃度2.15 mg/mL),搖勻,精密量取1 mL,于5 mL量瓶中加甲醇稀釋至刻度,作為對(duì)照品溶液(黃芪甲苷對(duì)照品濃度0.43 mg/mL)。2.3  供試品溶液的制備    精密吸取本品10 mL,用正丁醇萃取3次,每次10 mL,合并正丁醇液,加入氨試液2次,每次20 mL,棄去氨試液層,合并正丁醇液層,水浴蒸干,殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? mL,作為供試品溶液

9、。取缺黃芪陰性樣品,同供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。2.4  線性關(guān)系考察    分別精密吸取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5 L,注入液相色譜儀,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以進(jìn)樣量的常用對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),峰面積的常用對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程：Y=1.536 37X+0.921 58,r=0.999 9(n=6)。結(jié)果顯示,黃芪甲苷在0.432.15 g之間呈良好線性關(guān)系。2.5  精密度試驗(yàn)    精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液30 L,注入液相色譜儀,連續(xù)進(jìn)樣5次,測(cè)定黃芪甲苷的吸收峰面積,RSD=1.

10、37%(n=5)。2.6  穩(wěn)定性試驗(yàn)    精密吸取供試品溶液20 L,在0、1、2、5、24 h分別注入液相色譜儀,測(cè)定黃芪甲苷峰面積,RSD=1.067%(n=5),表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。2.7  重現(xiàn)性試驗(yàn)    取同一批樣品(批號(hào)050501),重復(fù)測(cè)定5次,結(jié)果平均含量為0.02953 mg/mL,RSD=0.13%。     11-05-15 16:59:00     編輯：studa202.8  加樣

11、回收率試驗(yàn)   取已知含量的樣品(批號(hào)050501,0.029 53 mg/mL),量取6份,每份10 mL,分為3組,每組2份,分別精密加入濃度為0.430 mg/mL的黃芪甲苷對(duì)照品0.8、1.0、1.2 mL,按上述方法測(cè)定其含量,并計(jì)算加樣回收率,平均回收率為97.98%,RSD=1.03%。結(jié)果見表1。 表1  加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）2.9  樣品測(cè)定    分別精密吸取對(duì)照品溶液2、5 L,供試品溶液20 L,注入液相色譜儀,測(cè)定,并以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算含量,結(jié)果見表2。表2  樣品測(cè)定結(jié)果(略)

12、3  討論    黃芪甲苷含量測(cè)定一般采用薄層掃描法2、高效液相色譜 -蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(HPLC-ELSD)3、高效液相色譜-紫外檢測(cè)器法4-5、HPLC-示差折光檢測(cè)法6,還有用柱前衍生化高效液相色譜-紫外檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定7。黃芪甲苷無特征紫外吸收,僅在200 nm處有弱的末端吸收,需采用紫外末端波長檢測(cè),對(duì)溶劑要求較高,測(cè)試成本昂貴；且在其它皂苷類成分的存在時(shí),干擾嚴(yán)重,分離度下降,重現(xiàn)性差,很難利用HPLC-UV聯(lián)用測(cè)定黃芪甲苷含量。采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè),則克服了上述不利因素,具有專屬性強(qiáng)、靈敏度高、不受雜質(zhì)成分干擾等優(yōu)點(diǎn)。因此,本實(shí)驗(yàn)采用HP

13、LC-ELSD的方法,測(cè)定方中黃芪甲苷的含量。    方法學(xué)考察結(jié)果表明,HPLC-ELSD聯(lián)用測(cè)定黃芪甲苷含量重現(xiàn)性好,回收率高,方法準(zhǔn)確可靠,可用于阿膠補(bǔ)血口服液的質(zhì)量控制?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 國家藥典委員會(huì).部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第10冊(cè)M.1996.81.2 洪麗娟,張均濤,馮年平.薄層掃描法測(cè)定黃芪降糖顆粒中黃芪甲苷的含量J.中成藥,2005,27(10)：附4.3 裘飛君,王岳鈞,俞建平.HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪生脈飲中黃芪甲苷含量J.中國藥業(yè)2005,14(11)：374 李歡欣,郝桂明,趙春杰,等.反相高效液相色譜法測(cè)定黃芪中黃芪甲

14、苷的含量J.中國藥學(xué)雜志,2003,38(3)：212.5 錢廣生,劉三康,李章萬.HPLC測(cè)定黃芪注射液中黃芪甲苷的含量J.華西藥學(xué)雜志,2002,17(1)：41.6 池玉梅,鄭 泉.HPLC-示差折光檢測(cè)法測(cè)定黃芪中黃芪甲苷的含量J.中藥材,2000,23(7)：397.7 姚美村,齊 瑩,車鎮(zhèn)濤,等.柱前衍生化法測(cè)定黃芪中黃芪甲苷的含量J.天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2000,12(4)：172.     11-05-15 16:59:00     編輯：studa202.8  加樣回收率試驗(yàn) 

15、  取已知含量的樣品(批號(hào)050501,0.029 53 mg/mL),量取6份,每份10 mL,分為3組,每組2份,分別精密加入濃度為0.430 mg/mL的黃芪甲苷對(duì)照品0.8、1.0、1.2 mL,按上述方法測(cè)定其含量,并計(jì)算加樣回收率,平均回收率為97.98%,RSD=1.03%。結(jié)果見表1。 表1  加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）2.9  樣品測(cè)定    分別精密吸取對(duì)照品溶液2、5 L,供試品溶液20 L,注入液相色譜儀,測(cè)定,并以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算含量,結(jié)果見表2。表2  樣品測(cè)定結(jié)果(略)3  討論&

16、#160;   黃芪甲苷含量測(cè)定一般采用薄層掃描法2、高效液相色譜 -蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(HPLC-ELSD)3、高效液相色譜-紫外檢測(cè)器法4-5、HPLC-示差折光檢測(cè)法6,還有用柱前衍生化高效液相色譜-紫外檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定7。黃芪甲苷無特征紫外吸收,僅在200 nm處有弱的末端吸收,需采用紫外末端波長檢測(cè),對(duì)溶劑要求較高,測(cè)試成本昂貴；且在其它皂苷類成分的存在時(shí),干擾嚴(yán)重,分離度下降,重現(xiàn)性差,很難利用HPLC-UV聯(lián)用測(cè)定黃芪甲苷含量。采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè),則克服了上述不利因素,具有專屬性強(qiáng)、靈敏度高、不受雜質(zhì)成分干擾等優(yōu)點(diǎn)。因此,本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-ELSD的方法,測(cè)定方中黃芪甲苷的含量。    方法學(xué)考察結(jié)果表明,HPLC-ELSD聯(lián)用測(cè)定黃芪甲苷含量重現(xiàn)性好,回收率高,方法準(zhǔn)確可靠,可用于阿膠補(bǔ)血口服液的質(zhì)量控制。【參考文獻(xiàn)】  1 國家藥典委員會(huì).部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第10冊(cè)M.1996.81.2 洪麗娟,張均濤,馮年平.薄層掃描法測(cè)定黃芪降糖顆粒中黃芪甲苷的含量J.中成藥,2005,27(10)：附4.3 裘飛君,王岳鈞,俞建平.HPLC-ELSD法測(cè)定黃