殘留溶劑測(cè)定法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、1.目的：建立殘留溶劑測(cè)定法（二部）檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并按規(guī)程進(jìn)行檢驗(yàn), 保證檢驗(yàn)操作規(guī)范化。2. 依據(jù):2.1. 中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部。3. 范圍：適用于所有用殘留溶劑測(cè)定法（二部）測(cè)定的供試品。4. 責(zé)任：檢驗(yàn)員、質(zhì)量控制科主任、質(zhì)量管理部經(jīng)理對(duì)本規(guī)程負(fù)責(zé)。5. 正文:5.1. 藥品中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中， 以及在制劑制備過(guò)程中使 用的，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機(jī)溶劑。 藥品中常見(jiàn)的殘留溶劑及限度見(jiàn)附表1,除另有規(guī)定外，第一、第二、第三類(lèi)溶劑的殘留限度應(yīng)符合表1中的規(guī)定；對(duì)其他溶劑，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝的特點(diǎn)，制定相應(yīng)的限度，使其符合產(chǎn)品規(guī) 范、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管

2、理規(guī)范（GMP）或其他基本的質(zhì)量要求。5.2. 本法照氣相色譜法（附錄VE）測(cè)定。53色譜柱5.3.1. 毛細(xì)管柱：除另有規(guī)定外，極性相近的同類(lèi)色譜柱之間可以互換使用。531.1. 非極性色譜柱：固定液為100%的二甲基聚硅氧烷的毛細(xì)管柱。5.3.1.2. 極性色譜柱：固定液為聚乙二醇（PEG-20M）的毛細(xì)管柱。5.3.1.3. 中性色譜柱：固定液為（35%二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷、（50%二苯基-（50%二甲基聚硅氧烷、（35%二苯基-（65%）二甲基聚硅氧烷、（14% 氰丙基苯基-（86%二甲基聚硅氧烷、（6%氰丙基苯基-（94%二甲基聚硅氧 烷的毛細(xì)管柱等。5.3.1.4. 弱極

3、性色譜：柱固定液為（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷、（5% ） 二苯基-（95% ）二甲基硅氧烷的毛細(xì)管柱等。5.3.2. 填充柱：以直徑為0.180.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他適宜的填料作為固定相。5.4. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。5.4.1. 用待測(cè)物的色譜峰計(jì)算，毛細(xì)管色譜柱的理論板數(shù)一般不低于5000;填充柱的理論板數(shù)一般不低于1000。1.5。5.4.2. 色譜圖中，待測(cè)物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于5.4.3. 以?xún)?nèi)標(biāo)法測(cè)定時(shí)，對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣 5次，所得待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物峰面 積之比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD不大于5%;若以外標(biāo)法測(cè)定,所得待測(cè)物峰面積 的R

4、SD應(yīng)不大于10%。5.5. 供試品溶液的制備。5.5.1. 頂空進(jìn)樣：除另有規(guī)定外，精密稱(chēng)取供試品0.11g,通常以水為溶劑;對(duì)于非水溶性藥物，可采用 N, N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜或其他適宜溶劑； 根據(jù)供試品和待測(cè)溶劑的溶解度，選擇適宜的溶劑且應(yīng)不干擾待測(cè)溶液的測(cè)定。根據(jù)各品種項(xiàng)下殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，其濃度應(yīng)滿(mǎn)足系統(tǒng)定量測(cè) 定的需要。5.5.2.溶液直接進(jìn)樣：精密稱(chēng)取供試品適量，用水或合適的有機(jī)溶劑使溶解；根 據(jù)各品種項(xiàng)下殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，其濃度應(yīng)滿(mǎn)足系統(tǒng)定量測(cè)定 的需要。5.6. 對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取各品種項(xiàng)下規(guī)定檢查的有機(jī)溶劑適量， 采用與 制備

5、供試品溶液相同的方法和溶劑制備對(duì)照品溶液； 如用水作溶劑，應(yīng)先將待測(cè) 有機(jī)溶劑溶解在50匯甲基亞砜或N,N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀釋。若為限度檢查，根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定確定對(duì)照品溶液的濃度； 若為定量測(cè)定, 為保證定量結(jié)果的正確性，應(yīng)根據(jù)供試品中殘留溶劑的實(shí)際殘留量確定對(duì)照品溶 液的濃度；通常對(duì)照品溶液的色譜峰面積不宜超過(guò)供試品溶液中對(duì)應(yīng)的殘留溶劑 的色譜峰面積2倍。必要時(shí)，應(yīng)重新調(diào)整供試品溶液或?qū)φ掌啡芤旱臐舛取?.7. 測(cè)定法。5.7.1. 第一法（毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣等溫法）。5.7.1.1. 當(dāng)需要檢查有機(jī)溶劑的數(shù)量不多，且極性差異較小時(shí)，可采用此法。5.7.12色譜條件：柱溫

6、一般為40100C ;常以氮?dú)鉃檩d氣，流速為每分鐘1.02.0ml;以水為溶劑時(shí)頂空瓶平衡溫度為 7085C,頂空瓶平衡時(shí)間為3060分鐘；進(jìn)樣口溫度為200C ;如采用火焰離子化檢測(cè)器（FID ），溫度為250C。5.7.1.3. 測(cè)定法：取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣不少于2次，測(cè)定待測(cè)峰的峰面積。5.7.1.4. 對(duì)色譜圖中未知有機(jī)溶劑的鑒別，可參與附表2進(jìn)行初篩。5.7.2. 第二法（毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣系統(tǒng)程序升溫法）。5.7.2.1. 當(dāng)需要檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量較多，且極性差異較大時(shí)，可采用此法。5.7.22色譜條件：柱溫一般先在40C維持8分鐘，再以每分鐘8C的升溫速率 升至1

7、20C，維持10分鐘；以氮?dú)鉃檩d氣，流速為每分鐘 2.0ml ;以水為溶劑時(shí) 頂空瓶平衡溫度為7085C,頂空瓶平衡時(shí)間為3060分鐘；進(jìn)樣口溫度為200r ;如采用FID檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為250Eo5.7.2.3. 具體到某個(gè)品種的殘留溶劑檢查時(shí)，可根據(jù)該品種項(xiàng)下殘留溶劑的組成 調(diào)整升溫程序。5.7.2.4.測(cè)定法：取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣不少于2次，測(cè)定待測(cè)峰的峰面積。5.7.2.5. 對(duì)色譜圖中未知有機(jī)溶劑的鑒別，可參考附表3進(jìn)行初篩。5.7.3. 第三法（溶液直接進(jìn)樣法）。5.7.3.1. 可采用填充柱，亦可采用適宜極性的毛細(xì)管柱。5.7.3.2. 測(cè)定法：取對(duì)照品溶液

8、和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣23次，測(cè)定待測(cè) 峰的峰面積。5.7.33計(jì)算法。5.7.3.3.1. 限度檢查：除另有規(guī)定外，按品種項(xiàng)下規(guī)定的供試品溶液濃度測(cè)定。 以?xún)?nèi)標(biāo)法測(cè)定時(shí)，供試品溶液所得被測(cè)溶劑峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比不得大于對(duì) 照品溶液的相應(yīng)比值。以外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，供試品溶液所得被測(cè)溶劑峰面積不得大 于對(duì)照品溶液的相應(yīng)峰面積。5.7332定量測(cè)定：按內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法計(jì)算各殘留溶劑的量。5.8. 【附注】。5.8.1. 除另有規(guī)定外，頂空條件的選擇。5.8.1.1. 應(yīng)根據(jù)供試品中殘留溶劑的沸點(diǎn)選擇頂空平衡溫度。對(duì)沸點(diǎn)較高的殘留 溶劑，通常選擇較高的平衡溫度；但此時(shí)應(yīng)兼顧供試品的熱分解特性， 盡

9、量避免 供試品產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物對(duì)測(cè)定的干擾。5.8.1.2. 頂空平衡時(shí)間一般為3045分鐘，以保證供試品溶液的氣-液兩相有足夠 的時(shí)間達(dá)到平衡。頂空平衡時(shí)間通常不宜過(guò)長(zhǎng)，如超過(guò) 60分鐘，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導(dǎo)致定量準(zhǔn)確性的降低。5.8.1.3. 對(duì)照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。5.82定量方法的驗(yàn)證。5.8.2.1.當(dāng)采用頂空進(jìn)樣時(shí)，供試品與對(duì)照品處于不完全相同的基質(zhì)中，故應(yīng) 考慮氣液平衡過(guò)程中的基質(zhì)效應(yīng)（供試品溶液與對(duì)照品溶液組成差異對(duì)頂空氣 液平衡的影響）。由于標(biāo)準(zhǔn)加入法可以消除供試品溶液基質(zhì)與對(duì)照品溶液基質(zhì)不 同所致的基質(zhì)效應(yīng)的影響，故通常采用標(biāo)準(zhǔn)加入法驗(yàn)

10、證定量方法的準(zhǔn)確性；當(dāng)標(biāo) 準(zhǔn)加入法與其他定量方法的結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法的結(jié)果為準(zhǔn)。5.8.3. 干擾峰的排除：供試品中的未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物易對(duì)殘留溶劑的測(cè)定產(chǎn)生干擾。干擾作用包括在測(cè)定的色譜系統(tǒng)中未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解產(chǎn) 物與待測(cè)物的結(jié)構(gòu)相同（如甲氧基熱裂解產(chǎn)生甲醇）。當(dāng)測(cè)定的殘留溶劑超出限 度，但未能確定供試品中是否有未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物對(duì)測(cè)定有干擾作用 時(shí)，應(yīng)通過(guò)試驗(yàn)排除干擾作用的存在。對(duì)第一類(lèi)干擾作用，通常采用在另一種極 性不同的色譜柱系統(tǒng)中對(duì)相同供試品再進(jìn)行測(cè)定， 比較不同色譜系統(tǒng)中對(duì)相同供 試品再進(jìn)行測(cè)定，比較不同色譜系統(tǒng)中測(cè)定結(jié)果的方法。 如兩者結(jié)果一致，則

11、可以排除測(cè)定中有共出峰的干擾。對(duì)第二類(lèi)干擾作用，通常要通過(guò)測(cè)定已知不含該 溶劑的對(duì)照樣品來(lái)加以判斷。5.8.4. 含氮堿性化合物的測(cè)定。5.8.4.1.普通氣相色譜儀中的不銹鋼管路、進(jìn)樣器的襯管等對(duì)有機(jī)胺等含氮堿性化合物具有較強(qiáng)的吸附作用，致使其檢出靈敏度降低，應(yīng)采用惰性的硅鋼材料或 鎳鋼材料管路；采用溶液直接進(jìn)樣法測(cè)定時(shí)，供試品溶液應(yīng)不呈酸性，以免待測(cè) 物與酸反應(yīng)后不易汽化。5.842.通常采用弱極性的色譜柱或其填料預(yù)先經(jīng)堿處理過(guò)的色譜柱分析含氮堿性化合物，如果采用胺分析專(zhuān)用柱進(jìn)行分析，效果更好。5.8.4.3. 對(duì)不宜采用氣相色譜法測(cè)定含氮堿性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等，可采用其他方法如

12、離子色譜法等測(cè)定。5.8.5. 檢測(cè)器的選擇：對(duì)含鹵素元素的殘留溶劑如三氯甲烷等，采用電子捕獲檢 測(cè)器（ECD），易得到高的靈敏度。5.8.6. 由于不同的實(shí)驗(yàn)室在測(cè)定同一供試品時(shí)可能采用了不同的實(shí)驗(yàn)方法，當(dāng)測(cè)定結(jié)果處于合格與不合格邊緣時(shí)，以采用內(nèi)標(biāo)或標(biāo)準(zhǔn)加入法為準(zhǔn)。5.8.7. 頂空平衡溫度一般應(yīng)低于溶解供試品所用溶劑的沸點(diǎn)10C以下，能滿(mǎn)足檢測(cè)靈敏度即可；對(duì)于沸點(diǎn)過(guò)高的溶劑，如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、 乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等，用頂空進(jìn)樣測(cè)定的靈敏度不如直接進(jìn)樣， 一般不宜 用頂空進(jìn)樣方法測(cè)定。5.8.8. 利用保留值定性是氣相色譜中最常用的定性方法。色譜系統(tǒng)中載氣的流對(duì)

13、保留時(shí)間（RART只受柱溫和固定相性質(zhì)的影響，以此作為定性分析參數(shù)較可靠。應(yīng)用中通常選用甲烷測(cè)定色譜系統(tǒng)的死體積（to ）RART= tR "tot'R-to式中tR為組分的保留時(shí)間；t'R為參比物的保留時(shí)間。附表1 ：藥品中常見(jiàn)的殘留溶劑及限度。溶劑名稱(chēng)限度%溶劑名稱(chēng)限度%第一類(lèi)溶劑第二類(lèi)溶劑（應(yīng)該避免使用）（應(yīng)該限制使用）苯0.0002二氧六環(huán)0.038四氯化碳0.00042-乙氧基乙醇0.0161，2-二氯乙烷0.0005乙二醇0.0621，1-二氯乙烷0.0008甲酰胺0.0221，1，1- 三氯乙烷0.15正己烷0.029第二類(lèi)溶劑甲醇0.3（應(yīng)該限制使用）

14、2-甲氧基乙醇0.005乙腈0.041甲基丁基酮0.005氯苯0.036甲基環(huán)己烷0.118三氯甲烷0.006N-甲基吡啶咯烷酮0.053環(huán)己烷0.388硝基甲烷0.0051,2-二氯乙烯0.187吡啶0.02速、載氣的溫度和柱溫等的變化都會(huì)使保留值改變,從而影響定性結(jié)果。校正相二氯甲烷0.06四氫噻吩0.0161,2-二甲基乙烷0.01四氫化萘0.01N，N-二甲基乙酰胺0.109四氫呋喃0.072N，N-二甲基甲酰胺0.088甲苯0.0891,1,2-三氯乙烯0.008二甲苯0.217溶劑名稱(chēng)限度%溶劑名稱(chēng)限度%第三類(lèi)溶劑（藥品GMP第三類(lèi)溶劑（藥品或其他質(zhì)量要求限制使用）GMP或其他質(zhì)量

15、要求限制使用）醋酸丙酮甲氧基苯正丁醇仲丁醇乙酸丁酯叔丁基甲基醚異丙基苯二甲基亞砜乙醇乙酸乙酯乙醚甲酸乙酯甲酸正庚烷乙酸異丁酯乙酸異丙酯乙酸甲酯0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5甲基異丁基酮異丁醇正戊烷正戊醇正丙醇異丙醇乙酸丙酯第四類(lèi)溶劑（尚無(wú)足夠毒理學(xué)資料）1,1-二乙氧基丙烷1,1-二甲氧基甲烷2,2-二甲氧基丙烷異辛烷異丙醚甲基異丙基酮甲基四氫呋喃石油醚三氯醋酸0.50.50.50.50.50.50.53-甲基-1-丁醇0.5三氟醋酸丁酮0.5 通常含有60%間二甲苯、14%對(duì)二甲苯、9%鄰二甲苯和17%乙苯。 藥品

16、生產(chǎn)企業(yè)在使用時(shí)應(yīng)提供該類(lèi)溶劑在制劑中殘留水平的合理性論證報(bào) 告。附表2常見(jiàn)有機(jī)溶劑在等溫法測(cè)定時(shí)相對(duì)于丁酮的保留值參考值溶劑名稱(chēng)tR/minRART溶劑名稱(chēng)tR/minRART柱溫40 C柱溫40C甲醇1.8280.126正戊烷1.6820.032乙醇2.0900.268正己烷1.7870.075乙腈2.1790.315乙醚1.8420.097丙酮2.2760.368異辛烷1.9260.131異丙醇2.3560.411異丙醚1.9430.138正戊烷2.4870.481叔丁基甲基醚2.0050.163乙醚2.4890.482正庚烷2.0210.169甲酸乙酯2.5220.501環(huán)己烷2.15

17、90.225二甲氧基甲烷2.5840.5341,1-二氯乙烯2.2090.2451,1-二氯乙烯2.6090.547二甲氧基甲烷2.2430.259乙酸甲酯2.6350.561甲基環(huán)己烷2.4050.324二氯甲烷2.6550.572丙酮2.8760.515硝基甲烷2.8070.654甲酸乙酯2.9670.551正丙醇2.9820.748乙酸甲酯3.0000.5641,2-二氯乙烯3.109.8171, 2-二氯乙烯3.3470.705叔丁基甲基醚3.2520.894四氫呋喃3.4030.727丁酮3.4491.000甲基四氫呋喃3.4810.758仲丁醇3.6661.117四氯化碳3.635

18、0.821正己烷3.8981.2421,1,1-三氯乙烷3.6530.828異丙醚3.9081.247乙酸乙酯3.8100.891非極性色譜柱極性色譜柱乙酸乙酯3.9131.250乙酸異丙酯3.9800.960三氯甲烷3.9541.272甲醇4.0620.993四氫呋喃4.2641.439丁酮4.0791.000異丁醇4.2641.4401,2-二甲氧基乙烷4.6041.2121,2-二氯乙烷4.5171.576甲基異丙基酮4.7161.2571,1,1-三氯乙烷4.8081.733二氯甲烷4.7581.274甲基異丙基酮4.9761.823異丙醇4.8221.3001,2-二甲氧基乙烷4.9

19、851.828乙醇4.9751.362苯5.2811.988苯4.9771.362乙酸異丙酯5.3112.004乙酸丙酯6.0201.784正丁醇5.3402.019三氯乙烯6.6432.035四氯化碳5.4702.089甲基異丁基酮7.2022.261環(huán)己烷5.5832.150乙腈7.3682.328甲基四氫呋喃5.6762.201乙酸異丁酯7.4972.380三氯乙烯6.7602.785三氯甲烷7.9852.577二氧六環(huán)6.8232.819仲丁醇8.3902.740異辛烷6.9572.891甲苯8.7462.884正庚烷7.4343.148正丙醇9.2383.083乙酸丙酯4.4783.

20、172二氧六環(huán)10.3353.526甲基環(huán)己烷8.6283.7921,2-二氯乙烷10.8273.724甲基異丁基酮8.7382.851乙酸丁酯11.0123.7993-甲基-1-丁醇8.8703.922甲基丁基酮11.4863.990吡啶9.2834.145甲烷1.602甲苯11.1805.168柱溫80C正戊醇11.3825.276異丁醇3.5773.045甲烷1.594正丁醇4.4604.334柱溫80 C硝基甲烷4.8854.948乙酸異丁酯3.6112.099異丙基苯5.2885.543甲基丁基酮3.8592.345吡啶5.6256.035乙酸丁酯4.2992.7783-甲基-1-

21、丁醇5.9346.486氯苯5.2533.726氯苯6.4397.223甲氧基苯7.4365.890正戊醇7.3328.527異丙基苯8.1486.589丁酮2.1761.000丁酮2.5021.000甲烷1.491甲烷1.493柱溫120C柱溫120C甲氧基苯3.8379.890四氫化萘8.06729.609四氫化萘7.42724.484丁酮1.6301.000丁酮1.6501.000甲烷1.405甲烷1.404附表3常見(jiàn)有機(jī)溶劑在程序升溫法測(cè)定時(shí)相對(duì)于丁酮的保留值參考值溶劑名稱(chēng)tR/minRART溶劑名稱(chēng)tR/minRART甲醇1.8460.127正戊烷1.6910.033乙醇2.1210

22、.272正己烷1.8070.076乙腈2.2010.314乙醚1.8560.094丙酮2.3030.367異辛烷1.9570.131異丙醇2.4010.419異丙醚1.9660.135正戊烷2.5120.477叔丁基甲基醚2.0530.167乙醚2.5190.481正庚烷2.0630.171甲酸乙酯2.5440.494環(huán)己烷2.2170.228二甲氧基甲烷2.6110.5291,1-二氯乙烯2.2670.2461,1-二氯乙烯2.6230.535二甲氧基甲烷2.3030.260乙酸甲酯2.6650.558甲基環(huán)己烷2.4880.328二氯甲烷2.6740.562丙酮2.9880.513硝基甲烷

23、2.8390.649甲酸乙酯3.0940.552正丙醇3.0510.760乙酸甲酯3.1260.5641,2-二氯乙烯3.1280.8011, 2-二氯乙烯3.5110.707叔丁基甲基醚3.3020.892四氫呋喃3.5610.725非極性色譜柱極性色譜柱丁酮3.5071.000甲基四氫呋喃3.6530.759仲丁醇3.7561.131四氯化碳3.8210.822正己烷3.9661.2411,1,1-三氯乙烷3.8330.826異丙醚3.9710.244乙酸乙酯4.0170.894乙酸乙酯3.9811.249乙酸異丙酯4.2070.964三氯甲烷4.0050.262甲醇4.2950.997四氫呋喃4.3870.462丁酮4.3031.000異丁醇4.3971.4681,2-二甲氧基乙烷4.8751.2121,2-二氯乙烷4.61241.581甲基異丙基酮5.0051.2601,1,1-三氯乙烷4.8431.702二氯甲烷5.0411.273甲基異丙基酮5.0871.830異丙醇5.0691.2841,2-二甲氧基乙烷5.0991.837乙醇5.2751.360苯5