細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察試驗(yàn)報(bào)告

1、篇一：培養(yǎng)基的制備與滅菌實(shí)驗(yàn)報(bào)告 陜西師范大學(xué)遠(yuǎn)程教育學(xué)院 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告報(bào)告題目培養(yǎng)基的制備與滅菌 姓名劉偉 學(xué)號(hào) 專業(yè)生物科學(xué) 批次 / 層次 指導(dǎo)教師 學(xué)習(xí)中心培養(yǎng)基的制備與滅菌1.2.3.、目的要求 掌握微生物實(shí)驗(yàn)室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 掌握培養(yǎng)基的配置原則和方法。 掌握高壓蒸汽滅菌的操作方法和注意事項(xiàng)。、基本原理將滅菌的物品放在一個(gè)密閉和加待蒸汽將鍋內(nèi)冷空氣從排氣閥中沸點(diǎn)升高，獲得高于100C的溫牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基： 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中 含有一般細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需要的最基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以可供細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖之用。 高

2、壓蒸汽滅菌： 主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。 壓的滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋內(nèi)水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。 趨盡，關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱。此時(shí)蒸汽不溢出，壓力增大， 度導(dǎo)致菌體蛋白凝固變性，而達(dá)到滅菌的目的。三、實(shí)驗(yàn)材料1. 藥品：牛肉膏、蛋白胨、 nacl 、瓊脂、 1mol/l 的 naoh 和 hcl 溶液。2. 儀器及玻璃器皿：天平、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、三 角瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品：藥匙、稱量紙、 ph 試紙、記號(hào)筆、棉花等。 四、操作步驟（一）玻璃器皿的洗滌和包裝1 玻璃器皿的洗滌 玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。 將三角瓶、 試管、培養(yǎng)

3、皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中 用 毛刷刷洗，然后用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡，再用自來水及蒸 餾水沖洗。洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。2滅菌前玻璃器皿的包裝（1 ） 培養(yǎng)皿的包扎：培養(yǎng)皿由一蓋一底組成一套，可用報(bào)紙將幾套培養(yǎng)皿包 成一包，或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內(nèi)，加蓋滅菌。包裝后的培養(yǎng)皿須經(jīng)滅 菌之后才能使用。（2） 移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花（勿用脫脂棉 ），它的作用是避免外界及口中雜菌進(jìn)入管內(nèi)，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應(yīng)距管口約0.5cm左右，棉花自身長(zhǎng)度約11.5cm。塞棉花時(shí).可用一外圍拉直的曲別針、 將少許

4、棉花塞 入管口內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜，吹時(shí)以能通氣而又不使棉花滑下為準(zhǔn)。先將報(bào)紙裁成寬約 5cm左右的長(zhǎng)紙條，然后將已塞好棉花的移液管尖端放在長(zhǎng)條報(bào)紙的一端， 約成45C角，折疊紙條包住尖端，用左手握住移液管身，有手將移液管壓緊.在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條，折疊打結(jié)，準(zhǔn)備滅菌。（二）液體及固體培養(yǎng)基的配制過程1 液體培養(yǎng)基配制（ 1 ）稱量（假定配制 1000ml 培養(yǎng)基）按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨5.0gnaci放入燒杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒 杯。（ 2 ）溶化

5、在上述燒杯中先加入少于所需要的水量（如約700ml）,用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解，將藥品完全溶解后，補(bǔ)充水到所需的總體積（1000ml）;如果配制固體培養(yǎng)基時(shí)，將稱好的瓊脂放人已溶的藥品中，再加熱溶化，最后補(bǔ)足所損失的水分。Pho用剪刀剪出一小段ph試紙，然后用鑷子夾取此段ph 范圍，如培養(yǎng)基偏酸或偏堿寸，可用 1mol/l naoh ph 寸，應(yīng)逐滴加入 naoh 或 hci 溶液，防止局部過酸或過 ph試紙測(cè)試，直至 ph達(dá)7.4-7.6 o反之,（ 3）調(diào) ph調(diào)ph： 般用ph試紙測(cè)定培養(yǎng)基的 ph 試紙,在培養(yǎng)基中蘸一下,觀看其 或1mol/l hcl溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)

6、堿，破壞培養(yǎng)基中成分。邊加邊攪拌，并不時(shí)用用1mol / lhcl進(jìn)行調(diào)節(jié)。 2固體培養(yǎng)基的配制 配制固體培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸,再將稱好的瓊脂（1.52 ）加入,并用玻棒不斷攪拌,以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化,最后補(bǔ)足因蒸發(fā)而失去 水分。（三）培養(yǎng)基的分裝 根據(jù)不同需要,可將已配好培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶?jī)?nèi),分裝時(shí)注意不要使培養(yǎng)基沾污管 口或瓶口, 造成污染。 如操作不小心, 培養(yǎng)基沾污管口或瓶口時(shí), 可用鑷子夾一小塊脫脂棉, 擦去管口或瓶口的培養(yǎng)基,并將脫脂棉棄去。中指及無名指夾佐玻璃管嘴， 若所用試管大小為 14 左有為宜； 如分裝固體或半固體培養(yǎng)基時(shí)， 用于制

7、作斜面的固體培養(yǎng)基的分裝量為管高 13 為宜。使培養(yǎng)基直接流入試管內(nèi)。15 X 150 mm寸，液體培養(yǎng)基在瓊脂完全融化后， 應(yīng)趁 1/5（約3 4mi）,半固體培養(yǎng)1 試管的分裝 取一個(gè)玻璃漏斗,裝在鐵架上,漏斗下連一根橡皮管,橡皮管下端再與另一玻璃管相接,橡 皮管的中部加一彈簧夾。分裝時(shí),用左手拿住空試管中部,并將漏斗下的玻璃管嘴插入試管 內(nèi),以右手拇指及食指開放彈簧夾, 裝入試管培養(yǎng)基的量視試管大小及需要而定, 可分裝至試管高度 熱分裝于試管中。基分裝量為管高的2三角瓶的分裝用于振蕩培養(yǎng)微生物時(shí),可在 250 m1 用于制作 平板培養(yǎng)基用時(shí)，可在 250 m1三角瓶中加入150ml粉（按

8、2%計(jì)算），滅菌時(shí)瓶中瓊脂粉同時(shí) 被融化。（四）棉塞的制作及試管、三角瓶的包扎 為了培養(yǎng)好氣性微生物,需提供優(yōu)良通氣條件,同時(shí)為防止雜菌污染,則必須對(duì)通入試管或 三角瓶?jī)?nèi)空氣預(yù)先進(jìn)行過濾除菌。通常方法是在試管及三角瓶口加上棉花塞等。1 試管棉塞的制作 制棉塞時(shí),應(yīng)選用大小、厚薄適中的普通棉花一塊,鋪展于左手拇指和食指扣成的團(tuán)孔上, 用右手食指將棉花從中央壓入團(tuán)孔中制成棉塞然后直接壓入試管或三角瓶口。也可借用玻 璃棒塞入,也可用折疊卷塞法制作棉塞。制作的棉塞應(yīng)緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過松，塞 好后以手提棉塞，試管不下落為準(zhǔn)。棉塞的23 在試管內(nèi)， 1 3 在試

9、管外。目前也有采用硅膠塞代替棉塞直接蓋在試管口上。將裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或硅膠塞的試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。用記號(hào)筆注明培 養(yǎng)基名稱及配制日期，滅菌待用。2三角瓶棉塞制作 通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時(shí)為了進(jìn)行液體振蕩培養(yǎng)加大通氣量，則可 用 8 層紗布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅膠塞直接蓋在瓶口上。在裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或包扎八層紗布或蓋好硅膠塞的三角瓶口上，再包上一層牛皮紙并 用線繩捆好，滅菌待用。（五）培養(yǎng)基的滅菌將上述培養(yǎng)基以 0.103mpa ,121 C, 20min高壓蒸氣滅菌。滅菌過程：1. 加水：首先將內(nèi)層鍋取出,再向外層鍋內(nèi)加入適量的水,使水面沒

10、過加熱蛇 管,與三角擱架相平為宜。切勿忘記檢查水位,加水量過少,滅菌鍋會(huì)發(fā)生燒干引起炸裂事 故。2. 裝料：放回內(nèi)層鍋,并裝入待滅菌的物品。注意不要裝得太擠,以免妨礙蒸 汽流通而影響滅菌效果。裝有培養(yǎng)基的容器放置時(shí)要防止液體溢出,三角瓶與試管口端均不 要與桶壁接觸,以免冷凝水淋濕包扎的紙而透入棉塞。3. 加蓋：將蓋上與排氣孔相連的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi),擺正鍋蓋, 對(duì)齊螺口,然后以對(duì)稱方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓,使螺栓松緊一致,勿使漏氣,并打開 排氣閥。4. 排氣：打開電源加熱滅菌鍋,將水煮沸,使鍋內(nèi)的冷空氣和水蒸汽一起從排 氣孔中排出。一般認(rèn)為當(dāng)排出的氣流很強(qiáng)并有噓聲時(shí),表明鍋內(nèi)的空氣

11、已排盡,沸騰后約需5 分鐘。5. 升壓：冷空氣完全排盡后,關(guān)閉排氣閥,繼續(xù)加熱,鍋內(nèi)壓力開始上升。6. 保壓：當(dāng)壓力表指針達(dá)到所需壓力時(shí),控制電源,開始計(jì)時(shí)并維持壓力至所 需的時(shí)間。如本實(shí)驗(yàn)中采用 0.1mpa, 121.5C, 20分鐘滅菌。滅菌的主要因素是溫度而不是壓力,因此鍋內(nèi)的冷空氣必須完全排盡后,才能關(guān)閉排氣閥, 維持所需壓力。7. 降壓：達(dá)到滅菌所需的時(shí)間后,切斷電源,讓滅菌鍋溫度自然下降,當(dāng)壓力 表的壓力降至“ 0”后,方可打開排氣閥,排盡余下的蒸汽,旋松螺栓,打開鍋蓋,取出滅菌 物品,倒掉鍋內(nèi)剩水。壓力一定要降到“ 0”后,才能打開排氣閥,開蓋取物。否則就會(huì)因鍋 內(nèi)壓力突然下降

12、,使容器內(nèi)的培養(yǎng)基或試劑由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出容器口,造成瓶口被 污染,甚至灼傷操作者。（六）斜面和平板的制作1 斜面的制作 將已滅菌裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管, 趁熱置于木棒或玻棒上, 使成適當(dāng)斜度, 凝固后即成斜面。 斜面長(zhǎng)度不超過試管長(zhǎng)度 l 2 為宜。如制作半團(tuán)體或固體深層培養(yǎng)基時(shí),滅菌后則應(yīng)垂直放置至凝固。2平板的制作將裝在三角瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基融化后，待冷至50 C左右傾入無菌培養(yǎng)皿中。溫度過高時(shí)，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低于50C，培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應(yīng)在火旁進(jìn)行,左手拿培養(yǎng)皿,右手拿三角瓶的底部或試管,左手同時(shí)用小指和手掌將棉塞打開，灼燒瓶口，用左手大

13、拇指將培養(yǎng)皿蓋打開一縫，至瓶口正好伸入，傾入 1015ml 培養(yǎng)基，迅速蓋好皿蓋，置于桌上，輕輕旋轉(zhuǎn)平皿，使培養(yǎng)基均勻分布于整個(gè)平皿 中，冷凝后即成平板。（七）培養(yǎng)基的滅菌檢查滅菌后的培養(yǎng)基，一般需進(jìn)行無菌檢查。 最好取出12管（瓶），置于37C溫箱中培養(yǎng)12天， 確定無菌后方可使用。篇二：微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè) 專業(yè)： 學(xué)號(hào)： 姓名：消毒和滅菌， 細(xì)菌的分離與培養(yǎng)， 細(xì)菌群體和個(gè)體形態(tài)特征的觀察，從而掌握微生物實(shí)驗(yàn)的各種操作方法， 培養(yǎng)對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)的興趣。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?探究檢測(cè)其病原菌的類型并通過一系列的觀察與鑒定從而確定其病原菌的名稱和性質(zhì)。在實(shí) 踐中學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的制備、

14、 細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定等技巧。接種環(huán)、接種針、污物盤、普通冰柜、隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱、稱量紙、藥勺、牛皮紙、硫酸紙、橡二、實(shí)驗(yàn)材料 器材 打火機(jī)、油性筆、酒精燈、 奧林巴斯 cx21 型生物顯微鏡、電爐、試管（帶棉塞） 皮筋、尺子、錐形瓶、高壓蒸汽滅菌器、鑷子、玻片、吸水紙、拭鏡紙 試劑藥品 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、蒸餾水、膿汁標(biāo)本、糞便標(biāo)本、石蠟油、生理鹽水、結(jié)晶紫、盧戈碘 液、 95%乙醇、稀釋復(fù)紅、葡萄糖微量發(fā)酵管（2 支）、乳糖微量發(fā)酵管（ 2 支）、青霉素抗菌素紙片、鏈霉素抗菌素紙片、慶大霉素抗菌素紙片、血漿、福氏志賀菌診斷血清三、方法與步驟用橡干粉培養(yǎng)基7蒸餾水7加熱溶化7分裝7集中放在試

15、管筐里7罩上硫酸紙、牛皮紙7 皮筋扎好 7放入講臺(tái)邊的滅菌桶或滅菌筐內(nèi)7送到高壓蒸汽滅菌室（洗刷室）7滅菌7（1 ）平板培養(yǎng)基：傾注平板 10ml7瓊脂完全凝固后，平板倒放74 C冰箱保存?zhèn)溆?。? ）斜面培養(yǎng)基：培養(yǎng)基趁熱斜放7瓊脂凝固以后，4 C冰箱保存?zhèn)溆谩?貼上標(biāo)簽后滅菌使用。空氣的細(xì)菌學(xué)檢查每組 1 個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，選擇采樣地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室、衛(wèi)生間或任選地點(diǎn)）7將平板蓋打開，蓋朝下放置在平板旁邊7平板暴露于空氣中15min 7平板倒扣蓋上7作標(biāo)記737 C溫箱培養(yǎng)24h 7觀察結(jié)果。人體體表的細(xì)菌學(xué)檢查 甲乙常規(guī)洗手，丙丁標(biāo)準(zhǔn)洗手。甲和乙、丙和丁共用 1 個(gè)平板 按規(guī)定在普通平板上接種手

16、指上的細(xì)菌。第 1 格為洗手前，第 2 格為洗手后，第 3格為消毒 后，第 4 格空白對(duì)照。接種環(huán)燒灼滅菌7分別取膿汁標(biāo)本與糞便標(biāo)本點(diǎn)在普通平板和依紅美藍(lán)平板上，各做兩份， 7燒掉接種環(huán)上多余的標(biāo)本7冷卻后，應(yīng)用分區(qū)劃線分離法，將膿汁標(biāo)本接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平 板（2份），糞便標(biāo)本接種于伊紅美藍(lán)平板（2份）7接種環(huán)燒灼滅菌7將平板倒置37 C培養(yǎng)1824h7觀察結(jié)果 。37 C培養(yǎng)過夜7保存?zhèn)溆媒臃N環(huán)燒灼滅菌7挑選平板上典型的四種單菌落（白色、黃色、紫黑色、粉紅色）進(jìn)行斜面 接種純培養(yǎng)7做好標(biāo)記7接種環(huán)燒灼滅菌7斜面培養(yǎng)基置于環(huán)于玻片上7挑取細(xì)菌培養(yǎng)物少許與2-3回合7結(jié)晶紫初染lmin7水洗革蘭氏

17、染色： 取潔凈載玻片7用滅菌操作后的接種環(huán)取生理鹽水 1-2 鹽水輕輕抹勻7待涂片干燥后在酒精燈火焰外側(cè)快速來回7盧戈碘液媒染1min7水洗7 95%乙醇脫色約20s水洗稀釋品紅復(fù)染 1min水洗吸 干 , 鏡檢。肉湯接種法 : 接種環(huán)燒灼滅菌7分別在斜面培養(yǎng)物中挑取菌苔少許7立即移入肉湯培養(yǎng)基管中7在接近液 面的管壁上輕輕研磨7沾取少量肉湯調(diào)和7混勻7試管口通過火焰2-3 次滅菌7塞好棉塞735 C 培養(yǎng) 46h接種環(huán)燒灼滅菌7分別取之前實(shí)驗(yàn)中得到的四種菌液在普通平板密集涂布7接種環(huán)燒灼滅菌7 標(biāo)記: 青、鏈、慶 7鑷子火焰消毒7貼青霉素、鏈霉素、慶大霉素紙片7按壓7鑷子消毒7倒置37 C培

18、養(yǎng)1824h7觀察結(jié)果取干凈玻片一張7在左右兩邊分別滴加兔血漿1-2滴，生理鹽水 1 滴7接種環(huán)燒灼滅菌7冷卻7分別用接種環(huán)取之前實(shí)驗(yàn)所得到的白色和黃色 菌苔（23 個(gè)菌落的菌量 ）與血漿研磨混合7邊混勻邊觀察結(jié)果7接種環(huán)燒灼滅菌7稍等片 刻，觀察結(jié)果37 C接種針燒灼滅菌7用滅菌接種針分別刮取實(shí)驗(yàn)所得到的紫黑色和粉紅色菌苔7分別接種在 葡萄糖發(fā)酵微量管中和乳糖發(fā)酵微量管內(nèi)7接種環(huán)燒灼滅菌7將微量管平放在平板內(nèi)7 培養(yǎng)過夜后7觀察結(jié)果。接種針燒灼滅菌7分別用接種針在紫黑色和粉紅色的斜面取菌7從半固體培養(yǎng)基中心垂直 刺入，可刺達(dá)近底管處，但不要到達(dá)管底7循原來的路線退出接種針7試管口迅速通過火焰

19、 2-3次滅菌7塞好棉塞7燒灼滅菌接種針7 37C培養(yǎng)24h7觀察結(jié)果取潔凈的載玻片一張7將磨面近端設(shè)為對(duì)照區(qū)7滴加生理鹽水15ul 7遠(yuǎn)端設(shè)為試驗(yàn)區(qū)7滴加福氏志賀菌診斷血清 15ul 7接種環(huán)燒灼滅菌7用接種環(huán)分別取粉紅色菌苔7研磨于鹽水 或血清內(nèi)，混合均勻7接種環(huán)燒灼滅菌7載玻片來回傾側(cè)7觀察結(jié)果四、結(jié)果與討論對(duì)膿汁中細(xì)菌的分析討論1 、用普通平板，從膿汁標(biāo)本中分離出金黃色和白色兩種菌落。2、 在顯微鏡下觀察時(shí)，這兩種細(xì)菌均為g+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是典型的葡萄 球菌。3、結(jié)合菌落的顏色，可以初步斷定，這是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。說明為凝固酶陽4、通過血漿凝固酶試驗(yàn)， 觀察

20、到黃色菌落的細(xì)菌能使血漿產(chǎn)生顆粒性物質(zhì)， 性；白色菌落則沒有凝集反應(yīng)，說明其為凝固酶陰性。5、 最后進(jìn)行的是藥敏試驗(yàn)，從培養(yǎng)基上可以觀察到， 不同的抗生素所形成的抑菌圈不同。 其 中青霉素對(duì)金黃色葡萄球菌最敏感。對(duì)糞便中細(xì)菌的分析討論1 、用伊紅美藍(lán)平板分離菌落時(shí)， 可以從糞便標(biāo)本中分離出紫黑色具有金屬光澤的菌落和粉紅 色半透明菌落。2、 在顯微鏡下觀察時(shí)， 這兩種菌均為g-桿菌，排列不規(guī)則，從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌。3、經(jīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)， 可以觀察到， 紫黑色的細(xì)菌能使葡萄糖和乳糖的試管變色和產(chǎn)生氣體； 粉 紅色的細(xì)菌只能使葡萄糖的試管變色。粉紅色的細(xì)菌只在4、經(jīng)半固體動(dòng)力試驗(yàn)， 觀察到紫黑色

21、的細(xì)菌使半固體培養(yǎng)基成渾濁狀態(tài)， 接種針插入的方向聚集。5、綜上所述，紫黑色的細(xì)菌為大腸埃希菌，粉紅色的細(xì)菌為志賀菌。6、最后進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌對(duì)青霉素不敏感，對(duì)慶大霉素和鏈霉素都敏感。 綜上所述，膿汁標(biāo)本中分離得黃色菌落為金黃色葡萄球菌，白色菌落為白色葡萄球菌，致病 菌為金黃色葡萄球菌； 糞便標(biāo)本中分離得紫黑色菌落為大腸埃希菌， 粉紅菌落為福氏志賀菌， 致病菌為福氏志賀菌。篇三：微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告動(dòng)物微生物及免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?（一）掌握一般培養(yǎng)基的制備原理及要求，掌握培養(yǎng)基酸堿度的測(cè)定，熟悉一 般培養(yǎng)基的制備過程和各種器皿滅菌方法。（二）掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和方法，掌

22、握細(xì)菌抹片的制備方法和革蘭 氏染色法及油鏡的使用方法，并認(rèn)識(shí)革蘭氏染色的反應(yīng)特性。（三）掌握學(xué)習(xí)用微生物學(xué)原理診斷疾病的一般方法及步驟。二、實(shí)驗(yàn)用品（一）器材 量筒、燒杯、電子天平、漏斗、三角燒瓶、空試劑瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、 紙、紗布、脫脂棉、天平、電爐、試劑瓶瓶塞、扎繩、放大鏡、包裝紙、洗耳球、酒精燈、 載玻片、火柴、吸水紙、剪刀、記號(hào)筆、接種環(huán)、注射器、鑷子、鉗子、毫米尺、培養(yǎng)箱、 水浴培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、油鏡（二）試劑及材料 肘胨、蛋白胨、豬膽鹽、氯化鈉、瓊脂、乳糖、 清、 胰化蛋白胨、 酵母提取物、 氫氧化鈉、 病豬內(nèi)臟 三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）培養(yǎng)基的制備（所有用到的器皿都

23、已 臺(tái)內(nèi)完成，并放在無菌操作臺(tái)內(nèi)）1 、麥康凱培養(yǎng)基（1）組成：蛋白胨17g、肘胨3g、豬膽鹽5g、氯化鈉5g、瓊脂17g、乳糖10g、0.01%結(jié)晶紫水溶液10ml、0.5%中性紅水溶液 5ml、蒸餾水1000ml（2）方法：將蛋白胨、肘胨、豬膽鹽和氯化鈉溶解于 400ml 蒸餾水中，調(diào)節(jié)液混合，分裝于燒瓶?jī)?nèi)，用紗布、扎繩等捆好后，121 C高壓滅菌1530min。待冷卻至50 55 C時(shí)，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后 傾注平板。 注：結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后需經(jīng)高壓滅菌。2、血清平板（ 1 ） 組成：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、牛血清（ 2） 方法：將滅菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱熔化，冷卻至 混勻，傾注平板。注

24、：不得將牛血清一并加入后再滅菌。3、lb 培養(yǎng)基（1）組成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、（2）方法：在 950ml 蒸餾水中加入胰化蛋白胨、ph 試0.01%結(jié)晶紫水溶液、 0.5%中性紅水溶液、血 鹽酸、 牛血清、 革蘭氏染色液、 蒸餾水、 小白鼠、121 C高壓滅菌1530min，傾注平板在無菌操作4550C時(shí)，加入牛血清，并氯化鈉10g、瓊脂15g酵母提取物、瓊脂和氯化鈉，調(diào)節(jié)ph至7.4，加熱熔化，分裝于瓶中，用紗布、扎繩等捆好后，121 C高壓滅菌1530min。 待冷卻至50 55 C時(shí)，傾注平板。4、液體培養(yǎng)基（在 lb 培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，裝入大試劑瓶中，不加瓊脂，不分裝）（

25、二）病料取材在病豬死亡后，首先用顯微鏡檢查其末梢血液膜片中是否有炭疽桿菌存在， 未發(fā)現(xiàn)，則立即用消毒的器械對(duì)其進(jìn)行生理解剖，觀察其病理特征現(xiàn)象，取出病豬的十二指 腸、胃、肝臟三處的組織物，并注意組織的完整性，用儲(chǔ)物袋密封保存。（三）細(xì)菌粗培養(yǎng)1 、消毒滅菌： 操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套， 及用酒精燈外焰對(duì)待用器械進(jìn)行火焰滅菌。再用消毒水對(duì)無菌操作臺(tái)內(nèi)桌面2、接種（1）在無菌操作臺(tái)酒精燈旁打開用儲(chǔ)物袋密封保存的病料,先左手持鑷子右 手持剪刀,把病料剪出一個(gè)小口。（2）右手持滅過菌的接種環(huán),左手持平板,并用拇指、食指及中指將平皿揭開約 20左右,然后將接種環(huán)前端插入小口旋轉(zhuǎn)一下后, 再

26、用劃線接種的方法接種到一個(gè)血清 平板上。（3）用記號(hào)筆在平板底部作好日期、操作人員、部位等標(biāo)記,并將平板倒放。 以此方法,分別接種十二指腸、胃粘膜、肝臟于血清平板上,各接種 2 個(gè)血清平板。3、培養(yǎng)：將接種好的血清平板倒扣放入37 C培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng) 24小時(shí)。 注：劃線接種時(shí)盡量劃開,以保證長(zhǎng)出單個(gè)菌落,且劃線時(shí)接種環(huán)應(yīng)盡量?jī)A斜,以免劃破培養(yǎng)基（后同）；待接種完畢后熄滅無菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈,關(guān)閉好無菌操作臺(tái)窗口,打開無菌操作臺(tái)內(nèi)的紫外 燈。 。（四）細(xì)菌純培養(yǎng)1 、菌落特征判斷 待粗培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng) 24小時(shí)后,取出用放大鏡觀察記錄單個(gè)小菌落的形態(tài)特征并用實(shí)驗(yàn)報(bào)告 紙記錄好,并在平板底部上做好

27、觀察標(biāo)記,其形態(tài)特征包括大小、形狀、菌落邊緣、表面構(gòu) 造、隆起度、濕潤(rùn)度、透明度、顏色等。2、取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢（1 ） 取干凈的載玻片,用記號(hào)筆在其一面做好正反面標(biāo)記,再在載玻片另一 面中央滴上一小滴蒸餾水。（2）將接種環(huán)在火焰上滅菌,待冷卻后,在酒精燈旁從標(biāo)記的單個(gè)小菌落中 取少許細(xì)菌置于蒸餾水中混勻（同時(shí)蓋好平板倒扣置于一旁） ,用接種環(huán)涂成直徑約 1.5cm 的菌膜,再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過固定好細(xì)菌,待冷卻進(jìn)行染色。先滴加草酸結(jié)晶紫溶液染色 12min ，再水洗；然后滴加革蘭氏碘液溶液12min,再水洗；隨后滴加 95%勺酒精脫色3060s，再水洗；最后滴加稀釋的品紅進(jìn)行 3060s，再水洗；待干燥或吸水紙吸干后鏡檢。將干燥的載玻片放在 1000倍油鏡下,滴加一滴松柏油進(jìn)行鏡檢,觀察其（3） 染色 復(fù)染（4） 形態(tài)特征,判斷細(xì)菌的種屬。3、細(xì)菌接種培養(yǎng)（ 1 ） 消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套,再用消毒水對(duì) 無菌操作臺(tái)內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對(duì)待用器械進(jìn)行火焰滅菌。（2） 接種：右手持滅過菌的接