儀器第二講20110916課件

1、1生物大分子的儀器分離與分析生物大分子的儀器分離與分析 生物反應(yīng)器工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室生物反應(yīng)器工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室儀器分析平臺(tái)儀器分析平臺(tái)2開(kāi)始上課，請(qǐng)同學(xué)們將手機(jī)開(kāi)到靜音、振開(kāi)始上課，請(qǐng)同學(xué)們將手機(jī)開(kāi)到靜音、振動(dòng)檔，最好是關(guān)機(jī)！動(dòng)檔，最好是關(guān)機(jī)！3個(gè)人介紹個(gè)人介紹 姓名：邱勇雋姓名：邱勇雋Email：電話：電話：642539042001-2009年在凱賽生物研發(fā)中心工作年在凱賽生物研發(fā)中心工作9年年4基本概念基本概念 化學(xué)分析起源于化學(xué)分析起源于17世紀(jì)，是借助化學(xué)反應(yīng)和化學(xué)計(jì)量學(xué)的關(guān)系來(lái)確定世紀(jì)，是借助化學(xué)反應(yīng)和化學(xué)計(jì)量學(xué)的關(guān)系來(lái)確定被分析物質(zhì)含量的一類分析方法，測(cè)定時(shí)需要使用化學(xué)試劑、天平

2、和被分析物質(zhì)含量的一類分析方法，測(cè)定時(shí)需要使用化學(xué)試劑、天平和玻璃器皿等，主要用于物質(zhì)的常量測(cè)定。玻璃器皿等，主要用于物質(zhì)的常量測(cè)定。儀器分析起源于儀器分析起源于19世紀(jì)，是利用復(fù)雜的專有設(shè)備，通過(guò)測(cè)定物質(zhì)某特世紀(jì)，是利用復(fù)雜的專有設(shè)備，通過(guò)測(cè)定物質(zhì)某特定物理、化學(xué)和生物學(xué)性質(zhì)的參數(shù)及其變化，并與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)比，來(lái)定物理、化學(xué)和生物學(xué)性質(zhì)的參數(shù)及其變化，并與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)比，來(lái)分析樣品的化學(xué)成分、某成分含量、化學(xué)結(jié)構(gòu)、序列信息等。每種儀分析樣品的化學(xué)成分、某成分含量、化學(xué)結(jié)構(gòu)、序列信息等。每種儀器分析有其相對(duì)獨(dú)立的理論基礎(chǔ)和方法原理。器分析有其相對(duì)獨(dú)立的理論基礎(chǔ)和方法原理。分析化學(xué)被不嚴(yán)格的區(qū)分為化

3、學(xué)分析和儀器分析兩大類。分析化學(xué)被不嚴(yán)格的區(qū)分為化學(xué)分析和儀器分析兩大類?；瘜W(xué)分析是儀器分析的基礎(chǔ)：儀器分析樣品的預(yù)處理方法，與化學(xué)分化學(xué)分析是儀器分析的基礎(chǔ)：儀器分析樣品的預(yù)處理方法，與化學(xué)分析的預(yù)處理分析方法析的預(yù)處理分析方法相似相似；儀器分析是；儀器分析是相對(duì)相對(duì)測(cè)量的方法，需要標(biāo)準(zhǔn)物測(cè)量的方法，需要標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)儀器進(jìn)行校正，用標(biāo)準(zhǔn)樣品與待測(cè)樣品進(jìn)行比較，從而獲得測(cè)定質(zhì)對(duì)儀器進(jìn)行校正，用標(biāo)準(zhǔn)樣品與待測(cè)樣品進(jìn)行比較，從而獲得測(cè)定的結(jié)果，而標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)定通常用化學(xué)分析的方法來(lái)標(biāo)定的結(jié)果，而標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)定通常用化學(xué)分析的方法來(lái)標(biāo)定 5基本概念基本概念 儀器分析主要涉及結(jié)構(gòu)分析、定性分析、序列分析

4、、定量分析和半定量分析。儀器分析主要涉及結(jié)構(gòu)分析、定性分析、序列分析、定量分析和半定量分析。結(jié)構(gòu)分析：利用各種儀器分析手段方法（包括元素分析、光譜分析、核結(jié)構(gòu)分析：利用各種儀器分析手段方法（包括元素分析、光譜分析、核磁共振譜分析、質(zhì)譜分析、旋光分析、磁共振譜分析、質(zhì)譜分析、旋光分析、X射線衍射分析等）對(duì)未知物質(zhì)射線衍射分析等）對(duì)未知物質(zhì)的分子和晶體結(jié)構(gòu)（包括分子的各個(gè)基團(tuán)和所有原子）進(jìn)行測(cè)定、拼接、的分子和晶體結(jié)構(gòu)（包括分子的各個(gè)基團(tuán)和所有原子）進(jìn)行測(cè)定、拼接、分析和表征的整個(gè)過(guò)程。分析和表征的整個(gè)過(guò)程。序列分析：是指測(cè)定某類物質(zhì)連接順序的分析形式。序列分析：是指測(cè)定某類物質(zhì)連接順序的分析形式

5、。定性分析：是指分析確定樣品中某物質(zhì)是否存在的分析形式。定性分析：是指分析確定樣品中某物質(zhì)是否存在的分析形式。定量分析：是指測(cè)定樣品中某物質(zhì)含量多少的分析形式。定量分析：是指測(cè)定樣品中某物質(zhì)含量多少的分析形式。半定量分析：將一定范圍內(nèi)的定量分析分成若干等級(jí)并依次表明相對(duì)含半定量分析：將一定范圍內(nèi)的定量分析分成若干等級(jí)并依次表明相對(duì)含量的多寡，定量分析的粗化、定性分析的細(xì)化量的多寡，定量分析的粗化、定性分析的細(xì)化6基本概念基本概念 儀器分析的優(yōu)點(diǎn)：儀器分析的優(yōu)點(diǎn)： 自動(dòng)化、智能化、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好、分自動(dòng)化、智能化、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好、分析時(shí)間短、檢測(cè)通量高、工作強(qiáng)度小析時(shí)間短、檢測(cè)通量高、工

6、作強(qiáng)度小儀器分析的特點(diǎn)；儀器分析的特點(diǎn)； 困難性：知識(shí)面廣；復(fù)雜性：種類繁多；重困難性：知識(shí)面廣；復(fù)雜性：種類繁多；重要性：應(yīng)用廣泛、操作簡(jiǎn)便；神秘性：價(jià)格要性：應(yīng)用廣泛、操作簡(jiǎn)便；神秘性：價(jià)格昂貴、操作復(fù)雜昂貴、操作復(fù)雜7儀器分析的分類儀器分析的分類類型類型 原理原理 相關(guān)方法相關(guān)方法 光學(xué)分析光學(xué)分析 通過(guò)測(cè)定電磁輻射的某些基本性質(zhì)（反射、折射、通過(guò)測(cè)定電磁輻射的某些基本性質(zhì)（反射、折射、干涉、衍射、散射和偏振等）的變化來(lái)分析待測(cè)物干涉、衍射、散射和偏振等）的變化來(lái)分析待測(cè)物質(zhì)質(zhì) 折射法、干涉法、散射濁度法、旋光法、折射法、干涉法、散射濁度法、旋光法、X射線衍射法、射線衍射法、電子衍射法電

7、子衍射法 光譜分析光譜分析 以光的吸收、發(fā)射和拉曼散射等作用建立的分析方以光的吸收、發(fā)射和拉曼散射等作用建立的分析方法，通過(guò)檢測(cè)光譜的波長(zhǎng)和強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行分析法，通過(guò)檢測(cè)光譜的波長(zhǎng)和強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行分析 原子發(fā)射光譜法、原子吸收光譜法、原子熒光光譜法、紫原子發(fā)射光譜法、原子吸收光譜法、原子熒光光譜法、紫外外-可見(jiàn)光譜法、紅外吸收光譜法、激光拉曼光譜法、核磁可見(jiàn)光譜法、紅外吸收光譜法、激光拉曼光譜法、核磁共振波譜法、熒光光譜法、分子熒光光度法、分子磷光光共振波譜法、熒光光譜法、分子熒光光度法、分子磷光光度法、化學(xué)發(fā)光法度法、化學(xué)發(fā)光法 電化學(xué)分析電化學(xué)分析 通過(guò)物質(zhì)在溶液中的電化學(xué)性質(zhì)及其變化來(lái)進(jìn)行分通過(guò)

8、物質(zhì)在溶液中的電化學(xué)性質(zhì)及其變化來(lái)進(jìn)行分析的方法析的方法 電導(dǎo)分析法、電位分析法、電解分析法、庫(kù)侖分析法、伏電導(dǎo)分析法、電位分析法、電解分析法、庫(kù)侖分析法、伏安法、極譜分析法安法、極譜分析法 色譜分析色譜分析 利用待測(cè)物質(zhì)的物理化學(xué)和生物學(xué)特性的不同在線利用待測(cè)物質(zhì)的物理化學(xué)和生物學(xué)特性的不同在線分離待測(cè)的混合物，然后進(jìn)行檢測(cè)（在線）或衍生分離待測(cè)的混合物，然后進(jìn)行檢測(cè)（在線）或衍生后檢測(cè)的儀器分析方法后檢測(cè)的儀器分析方法 氣相色譜、薄層色譜、高效液相色譜、超高效液相色譜、氣相色譜、薄層色譜、高效液相色譜、超高效液相色譜、電動(dòng)色譜電動(dòng)色譜 電泳分析電泳分析 利用待測(cè)物質(zhì)的電遷移特性的不同在線分

9、離待測(cè)的利用待測(cè)物質(zhì)的電遷移特性的不同在線分離待測(cè)的混合物，然后進(jìn)行在線檢測(cè)混合物，然后進(jìn)行在線檢測(cè) 瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、自由流電泳技術(shù)、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、自由流電泳技術(shù)、等電聚焦電泳、高效毛細(xì)管電泳、雙向（等電聚焦電泳、高效毛細(xì)管電泳、雙向（2D）凝膠電泳、）凝膠電泳、DNA序列分析儀、微流控芯片電泳序列分析儀、微流控芯片電泳 質(zhì)譜分析質(zhì)譜分析 依據(jù)待測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量與電荷比的不同來(lái)進(jìn)行分離和依據(jù)待測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量與電荷比的不同來(lái)進(jìn)行分離和分析的方法。用于定性、同位素分析、有機(jī)物的結(jié)分析的方法。用于定性、同位素分析、有機(jī)物的結(jié)構(gòu)分析和蛋白質(zhì)分析等構(gòu)分析和蛋白質(zhì)分析等

10、 單聚焦質(zhì)譜、雙聚焦質(zhì)譜、飛行時(shí)間質(zhì)譜、四極桿質(zhì)譜單聚焦質(zhì)譜、雙聚焦質(zhì)譜、飛行時(shí)間質(zhì)譜、四極桿質(zhì)譜 放射化學(xué)分析放射化學(xué)分析 利用核衰變過(guò)程中產(chǎn)生的放射性輻射來(lái)進(jìn)行分析的利用核衰變過(guò)程中產(chǎn)生的放射性輻射來(lái)進(jìn)行分析的方法方法 同位素示蹤法、放射分析法同位素示蹤法、放射分析法 熱分析熱分析 通過(guò)測(cè)定物質(zhì)的某些性質(zhì)如質(zhì)量、體積、熱導(dǎo)或反通過(guò)測(cè)定物質(zhì)的某些性質(zhì)如質(zhì)量、體積、熱導(dǎo)或反應(yīng)熱與溫度之間的動(dòng)態(tài)關(guān)系，可進(jìn)行成分分析，但應(yīng)熱與溫度之間的動(dòng)態(tài)關(guān)系，可進(jìn)行成分分析，但多用在熱力學(xué)、動(dòng)力學(xué)和化學(xué)反應(yīng)機(jī)理等方面的研多用在熱力學(xué)、動(dòng)力學(xué)和化學(xué)反應(yīng)機(jī)理等方面的研究究 差熱分析、差示掃描量熱法、熱重量法、測(cè)溫滴

11、定法差熱分析、差示掃描量熱法、熱重量法、測(cè)溫滴定法 8儀器分析的發(fā)展趨勢(shì)儀器分析的發(fā)展趨勢(shì)提高檢測(cè)靈敏度提高檢測(cè)靈敏度儀器分析智能化儀器分析智能化儀器分析儀器分析“現(xiàn)場(chǎng)化現(xiàn)場(chǎng)化”和和“小型化小型化” 儀器分析微型化儀器分析微型化儀器分析民用化儀器分析民用化9分析儀器的性能指標(biāo)分析儀器的性能指標(biāo) 精密度：分析數(shù)據(jù)的精密度指同一臺(tái)分析儀器的同一方精密度：分析數(shù)據(jù)的精密度指同一臺(tái)分析儀器的同一方法多次測(cè)定得到數(shù)據(jù)間的一致程度法多次測(cè)定得到數(shù)據(jù)間的一致程度靈敏度：指區(qū)別具有微小濃度差異分析能力的度量，取靈敏度：指區(qū)別具有微小濃度差異分析能力的度量，取決于校準(zhǔn)曲線的斜率和儀器設(shè)備的重現(xiàn)性或精密度。決于校

12、準(zhǔn)曲線的斜率和儀器設(shè)備的重現(xiàn)性或精密度。檢出限：物質(zhì)檢出的最低濃度范圍檢出限：物質(zhì)檢出的最低濃度范圍動(dòng)態(tài)范圍（線性范圍）動(dòng)態(tài)范圍（線性范圍）響應(yīng)速度：指儀器對(duì)檢測(cè)信號(hào)的反應(yīng)速度，定義為儀器響應(yīng)速度：指儀器對(duì)檢測(cè)信號(hào)的反應(yīng)速度，定義為儀器達(dá)到信號(hào)總變化量一定百分?jǐn)?shù)所需的時(shí)間達(dá)到信號(hào)總變化量一定百分?jǐn)?shù)所需的時(shí)間分辨率：指儀器鑒別由兩組近組分產(chǎn)生信號(hào)的能力，不分辨率：指儀器鑒別由兩組近組分產(chǎn)生信號(hào)的能力，不同類型儀器分辨率的指標(biāo)不同同類型儀器分辨率的指標(biāo)不同國(guó)內(nèi)外對(duì)于各種分析儀器性能及指標(biāo)尚無(wú)統(tǒng)一認(rèn)識(shí)和標(biāo)準(zhǔn)，不同類型儀器、不同國(guó)內(nèi)外對(duì)于各種分析儀器性能及指標(biāo)尚無(wú)統(tǒng)一認(rèn)識(shí)和標(biāo)準(zhǔn)，不同類型儀器、不同廠家

13、生產(chǎn)的同一類型儀器，甚至同一廠家生產(chǎn)的同一類型不同型號(hào)儀器常提供不廠家生產(chǎn)的同一類型儀器，甚至同一廠家生產(chǎn)的同一類型不同型號(hào)儀器常提供不同性能指標(biāo)或參數(shù)。同性能指標(biāo)或參數(shù)。 10分析儀器的性能指標(biāo)分析儀器的性能指標(biāo) 靈敏度：儀器的靈敏度用校準(zhǔn)靈敏度表示，即靈敏度：儀器的靈敏度用校準(zhǔn)靈敏度表示，即校準(zhǔn)曲線的斜率，隨所選用的校準(zhǔn)物質(zhì)不同，校準(zhǔn)曲線的斜率，隨所選用的校準(zhǔn)物質(zhì)不同，靈敏度的數(shù)據(jù)不同，儀器制造商提供的靈敏度靈敏度的數(shù)據(jù)不同，儀器制造商提供的靈敏度數(shù)據(jù)，一般應(yīng)提供測(cè)試條件和校準(zhǔn)物質(zhì)。數(shù)據(jù)，一般應(yīng)提供測(cè)試條件和校準(zhǔn)物質(zhì)。檢出限：儀器的檢出限需要指出所使用檢出限：儀器的檢出限需要指出所使用/針

14、對(duì)的針對(duì)的物質(zhì)物質(zhì) 11分析儀器的性能指標(biāo)分析儀器的性能指標(biāo) Cm靈敏度，靈敏度，LOQ：定量檢測(cè)最低濃度，一般定義為：定量檢測(cè)最低濃度，一般定義為10倍空白重復(fù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)倍空白重復(fù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)差，這點(diǎn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差約差，這點(diǎn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差約30%，隨著濃度增加而迅速降低，隨著濃度增加而迅速降低，LOL：檢測(cè)上限，：檢測(cè)上限，標(biāo)準(zhǔn)曲線偏離線性響應(yīng)的濃度范圍，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是標(biāo)準(zhǔn)曲線偏離線性響應(yīng)的濃度范圍，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是100% CmLOQLOL線性范圍線性范圍12分析儀器的性能指標(biāo)分析儀器的性能指標(biāo) 儀器定量校準(zhǔn)方法：內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法儀器定量校準(zhǔn)方法：內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和被測(cè)定物質(zhì)不是同一物質(zhì)內(nèi)標(biāo)法

15、：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和被測(cè)定物質(zhì)不是同一物質(zhì)外標(biāo)法：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與被測(cè)定物質(zhì)是同一物質(zhì)外標(biāo)法：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與被測(cè)定物質(zhì)是同一物質(zhì)13分析方法的建立分析方法的建立 方法的可靠性方法的可靠性 通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析來(lái)實(shí)現(xiàn)的，主要論證的通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析來(lái)實(shí)現(xiàn)的，主要論證的參數(shù)有參數(shù)有專一性、靈敏度（檢出限）、定量限、精專一性、靈敏度（檢出限）、定量限、精密度或穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度、耐用性、線性范圍、標(biāo)密度或穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度、耐用性、線性范圍、標(biāo)準(zhǔn)曲線、回歸方程和回收率等準(zhǔn)曲線、回歸方程和回收率等 14分析方法的建立分析方法的建立明確目標(biāo)明確目標(biāo)收集信息收集信息選擇方法選擇方法預(yù)實(shí)驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)撰寫(xiě)撰寫(xiě)SOP預(yù)實(shí)驗(yàn)方案

16、預(yù)實(shí)驗(yàn)方案專一性專一性靈敏度靈敏度定量限定量限線性范圍線性范圍操作通量操作通量實(shí)驗(yàn)方案實(shí)驗(yàn)方案精密度精密度準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度耐用性耐用性條件實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)15分析方法的建立分析方法的建立明確目標(biāo)：明確目標(biāo)：樣品的來(lái)源：發(fā)酵液、成品、三廢樣品的來(lái)源：發(fā)酵液、成品、三廢雜質(zhì)（干擾物質(zhì)）：結(jié)構(gòu)類似物、降解產(chǎn)物雜質(zhì)（干擾物質(zhì)）：結(jié)構(gòu)類似物、降解產(chǎn)物樣品形式：固體、液體、氣體、混合物樣品形式：固體、液體、氣體、混合物樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度：靈敏度、濃度變化范圍樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度：靈敏度、濃度變化范圍對(duì)分析結(jié)果的要求：穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度、精確度等對(duì)分析結(jié)果的要求：穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度、精確度等樣品分析的通量要求：操作時(shí)間要

17、求樣品分析的通量要求：操作時(shí)間要求成本要求成本要求16分析方法的建立：分析方法的建立：發(fā)酵液中葡萄糖含量的測(cè)定發(fā)酵液中葡萄糖含量的測(cè)定明確目標(biāo)：明確目標(biāo)：樣品的來(lái)源：發(fā)酵液樣品的來(lái)源：發(fā)酵液雜質(zhì)（干擾物質(zhì)）：菌體、其他有機(jī)物雜質(zhì)（干擾物質(zhì)）：菌體、其他有機(jī)物樣品形式：液體或固（菌體）液混合物樣品形式：液體或固（菌體）液混合物樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度：樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度：0.1-30g/L結(jié)果的要求：過(guò)程控制，相對(duì)量，誤差可大結(jié)果的要求：過(guò)程控制，相對(duì)量，誤差可大樣品分析的通量要求：樣品分析的通量要求：ASAP、同時(shí)測(cè)定、同時(shí)測(cè)定5個(gè)樣個(gè)樣成本要求成本要求17分析方法的建立分析方法的建立收集信息（

18、查閱文獻(xiàn)）：收集信息（查閱文獻(xiàn)）：待測(cè)物質(zhì)的理化性質(zhì)待測(cè)物質(zhì)的理化性質(zhì)可能存在雜質(zhì)的理化性質(zhì)可能存在雜質(zhì)的理化性質(zhì)待測(cè)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)待測(cè)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)/通用測(cè)定方法及其適用范圍通用測(cè)定方法及其適用范圍可選方法的理論基礎(chǔ)可選方法的理論基礎(chǔ)閱讀儀器的使用說(shuō)明書(shū)閱讀儀器的使用說(shuō)明書(shū)18文獻(xiàn)檢索要注意以下問(wèn)題：文獻(xiàn)檢索要注意以下問(wèn)題：在建立分析方法時(shí)要注重尋找經(jīng)典的分析方法，要注重從書(shū)本上系在建立分析方法時(shí)要注重尋找經(jīng)典的分析方法，要注重從書(shū)本上系統(tǒng)地收集相關(guān)理論知識(shí)而不是僅僅看統(tǒng)地收集相關(guān)理論知識(shí)而不是僅僅看PaperPaper在使用每臺(tái)設(shè)備之前要仔細(xì)的閱讀說(shuō)明書(shū)在使用每臺(tái)設(shè)備之前要仔細(xì)的閱讀說(shuō)明書(shū)/ /操

19、作手冊(cè)，而不是簡(jiǎn)單操作手冊(cè)，而不是簡(jiǎn)單的向師兄的向師兄/ /師姐學(xué)習(xí)師姐學(xué)習(xí)文獻(xiàn)僅供參考，不能認(rèn)為文獻(xiàn)上的東西就一定是對(duì)的，很多的方法、文獻(xiàn)僅供參考，不能認(rèn)為文獻(xiàn)上的東西就一定是對(duì)的，很多的方法、結(jié)果在未經(jīng)過(guò)親手驗(yàn)證之前，不能假設(shè)它就是對(duì)的結(jié)果在未經(jīng)過(guò)親手驗(yàn)證之前，不能假設(shè)它就是對(duì)的要確保檢索數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性：通過(guò)多個(gè)來(lái)源數(shù)據(jù)的一致性來(lái)保證數(shù)據(jù)要確保檢索數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性：通過(guò)多個(gè)來(lái)源數(shù)據(jù)的一致性來(lái)保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，開(kāi)題報(bào)告所有引用的數(shù)據(jù)都必須標(biāo)明出處；的準(zhǔn)確性，開(kāi)題報(bào)告所有引用的數(shù)據(jù)都必須標(biāo)明出處；看文獻(xiàn)要注重看他人的實(shí)驗(yàn)思路、實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以及結(jié)果看文獻(xiàn)要注重看他人的實(shí)驗(yàn)思路、實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)設(shè)

20、計(jì)，以及結(jié)果的表示方法、對(duì)于結(jié)果的討論分析，而不是僅僅關(guān)注他人的實(shí)驗(yàn)結(jié)的表示方法、對(duì)于結(jié)果的討論分析，而不是僅僅關(guān)注他人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（水平）；果（水平）；對(duì)于需要參考的重要方法，要注意該方法的適用范圍，要查到最原對(duì)于需要參考的重要方法，要注意該方法的適用范圍，要查到最原始的文獻(xiàn)。始的文獻(xiàn)。分析方法的建立分析方法的建立19分析方法的建立：分析方法的建立：發(fā)酵液中葡萄糖含量的測(cè)定發(fā)酵液中葡萄糖含量的測(cè)定理化性質(zhì)理化性質(zhì)分析方法分析方法常用范圍常用范圍右旋糖右旋糖/旋光性旋光性旋光儀旋光儀純品純度測(cè)量純品純度測(cè)量單醛基單醛基/還原性還原性水楊酸比色法水楊酸比色法發(fā)酵過(guò)程檢測(cè)發(fā)酵過(guò)程檢測(cè)單醛基單醛基/還

21、原性還原性硫酸銅滴定法硫酸銅滴定法純品純度測(cè)量純品純度測(cè)量底物單一性底物單一性酶電極法酶電極法血糖測(cè)定血糖測(cè)定/發(fā)酵發(fā)酵底物單一性底物單一性酶反應(yīng)比色法酶反應(yīng)比色法血糖測(cè)定血糖測(cè)定/發(fā)酵發(fā)酵結(jié)構(gòu)專一性結(jié)構(gòu)專一性HPLC糖類混合區(qū)分糖類混合區(qū)分20分析方法的建立：分析方法的建立：發(fā)酵液中葡萄糖含量的測(cè)定發(fā)酵液中葡萄糖含量的測(cè)定選擇方法選擇方法 可以選擇水楊酸法或者酶法，如果發(fā)酵過(guò)程只可以選擇水楊酸法或者酶法，如果發(fā)酵過(guò)程只關(guān)注總糖，并且希望測(cè)試耗材費(fèi)用較低，可以關(guān)注總糖，并且希望測(cè)試耗材費(fèi)用較低，可以選擇水楊酸法，如果發(fā)酵過(guò)程需要知道確切的選擇水楊酸法，如果發(fā)酵過(guò)程需要知道確切的葡萄糖濃度，可以

22、選擇酶法葡萄糖濃度，可以選擇酶法21分析方法的建立：預(yù)實(shí)驗(yàn)分析方法的建立：預(yù)實(shí)驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)方案預(yù)實(shí)驗(yàn)方案實(shí)驗(yàn)方案包括的內(nèi)容實(shí)驗(yàn)方案包括的內(nèi)容：目的和意義、實(shí)驗(yàn)原：目的和意義、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)方案、所需資源、日程安排、實(shí)驗(yàn)理、實(shí)驗(yàn)方案、所需資源、日程安排、實(shí)驗(yàn)預(yù)期結(jié)果、參考文獻(xiàn)預(yù)期結(jié)果、參考文獻(xiàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)方案考察的因子：專一性、靈敏度、預(yù)實(shí)驗(yàn)方案考察的因子：專一性、靈敏度、定量限、線性范圍（初步）、操作通量定量限、線性范圍（初步）、操作通量22分析方法的建立分析方法的建立 ：專一性：專一性專一性（專一性（Specificity）：又叫特異性，是指在其他成分（如背景物質(zhì)、降解產(chǎn)物、）：又叫特異性，是指在其他

23、成分（如背景物質(zhì)、降解產(chǎn)物、雜質(zhì)等）存在的情況下，所采用的分析方法仍然能夠準(zhǔn)確測(cè)定某物質(zhì)的特性，雜質(zhì)等）存在的情況下，所采用的分析方法仍然能夠準(zhǔn)確測(cè)定某物質(zhì)的特性，反映采用的分析方法用于復(fù)雜樣品檢測(cè)時(shí)互相干擾程度的量度。如果儀器分析反映采用的分析方法用于復(fù)雜樣品檢測(cè)時(shí)互相干擾程度的量度。如果儀器分析方法缺少專一性，則該方法很難準(zhǔn)確檢測(cè)某物質(zhì)的含量，在分析方法建立過(guò)程方法缺少專一性，則該方法很難準(zhǔn)確檢測(cè)某物質(zhì)的含量，在分析方法建立過(guò)程中，要首先確定其專一性?？疾斓氖侄沃饕需b定反應(yīng)、雜質(zhì)測(cè)定和含量測(cè)定中，要首先確定其專一性?？疾斓氖侄沃饕需b定反應(yīng)、雜質(zhì)測(cè)定和含量測(cè)定等方法。如方法的專一性較低，

24、應(yīng)采用多種分析方法加以補(bǔ)充。等方法。如方法的專一性較低，應(yīng)采用多種分析方法加以補(bǔ)充。鑒定反應(yīng)：待測(cè)物質(zhì)應(yīng)能與可能存在的其他物質(zhì)（雜質(zhì)、降解產(chǎn)物等）相區(qū)分，鑒定反應(yīng)：待測(cè)物質(zhì)應(yīng)能與可能存在的其他物質(zhì)（雜質(zhì)、降解產(chǎn)物等）相區(qū)分，在不含待測(cè)物質(zhì)的條件下，樣品分析呈陰性。在不含待測(cè)物質(zhì)的條件下，樣品分析呈陰性。含量測(cè)定：在雜質(zhì)可獲得的情況下，在樣品中加入雜質(zhì)，將測(cè)定結(jié)果與未加雜含量測(cè)定：在雜質(zhì)可獲得的情況下，在樣品中加入雜質(zhì)，將測(cè)定結(jié)果與未加雜質(zhì)的樣品相比較，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾。使用此方法應(yīng)注意排除雜質(zhì)加入質(zhì)的樣品相比較，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾。使用此方法應(yīng)注意排除雜質(zhì)加入過(guò)程對(duì)樣品的干擾，如雜質(zhì)

25、加入后樣品體積、重量的變化從而導(dǎo)致待測(cè)物質(zhì)在過(guò)程對(duì)樣品的干擾，如雜質(zhì)加入后樣品體積、重量的變化從而導(dǎo)致待測(cè)物質(zhì)在體系中的濃度發(fā)生改變。體系中的濃度發(fā)生改變。雜質(zhì)測(cè)定：在知道樣品雜質(zhì)的情況下，往樣品中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)雜質(zhì)測(cè)定：在知道樣品雜質(zhì)的情況下，往樣品中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)能否與待測(cè)物質(zhì)分離。能否與待測(cè)物質(zhì)分離。對(duì)比測(cè)定：將測(cè)定的結(jié)果與另一個(gè)驗(yàn)證了的方法進(jìn)行結(jié)果比較，觀察兩種方法對(duì)比測(cè)定：將測(cè)定的結(jié)果與另一個(gè)驗(yàn)證了的方法進(jìn)行結(jié)果比較，觀察兩種方法檢測(cè)的結(jié)果是否一致。檢測(cè)的結(jié)果是否一致。23分析方法的建立分析方法的建立 ：靈敏度：靈敏度 靈敏度又叫檢出限或檢測(cè)限，是指樣品中被測(cè)

26、物質(zhì)能夠靈敏度又叫檢出限或檢測(cè)限，是指樣品中被測(cè)物質(zhì)能夠被可靠檢測(cè)出的最低值，為某種檢測(cè)方法檢測(cè)在所述條被可靠檢測(cè)出的最低值，為某種檢測(cè)方法檢測(cè)在所述條件下對(duì)樣品待測(cè)物質(zhì)的最少物質(zhì)或最低物質(zhì)濃度的能力，件下對(duì)樣品待測(cè)物質(zhì)的最少物質(zhì)或最低物質(zhì)濃度的能力，為一種限度試驗(yàn)的參數(shù)。為一種限度試驗(yàn)的參數(shù)。 對(duì)不同的檢測(cè)方法，靈敏度有不同的表示方式。在儀器對(duì)不同的檢測(cè)方法，靈敏度有不同的表示方式。在儀器分析中，用于能夠顯示基線噪聲的分析方法，即將已知分析中，用于能夠顯示基線噪聲的分析方法，即將已知低濃度的樣品測(cè)定出的信號(hào)值與空白樣品測(cè)定出的信號(hào)低濃度的樣品測(cè)定出的信號(hào)值與空白樣品測(cè)定出的信號(hào)值進(jìn)行比較，計(jì)

27、算出能夠被可靠檢出的待測(cè)物質(zhì)的最低值進(jìn)行比較，計(jì)算出能夠被可靠檢出的待測(cè)物質(zhì)的最低濃度或量，一般習(xí)慣上將信噪比（濃度或量，一般習(xí)慣上將信噪比（S/N）為）為3:1或或2:1時(shí)對(duì)時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度或注入物質(zhì)的量確定為靈敏度或檢出限。應(yīng)的濃度或注入物質(zhì)的量確定為靈敏度或檢出限。 在進(jìn)行儀器分析的檢出限測(cè)定時(shí)，應(yīng)附測(cè)試的圖譜，說(shuō)在進(jìn)行儀器分析的檢出限測(cè)定時(shí)，應(yīng)附測(cè)試的圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢出限的結(jié)果。明測(cè)試過(guò)程和檢出限的結(jié)果。24分析方法的建立：定量限分析方法的建立：定量限 定量限的確定方法：一般以信噪比（定量限的確定方法：一般以信噪比（S/N）等于）等于10：1時(shí)對(duì)時(shí)對(duì)應(yīng)的物質(zhì)濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定

28、應(yīng)的物質(zhì)濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定與檢出限的區(qū)別：定量限規(guī)定的最低測(cè)得濃度應(yīng)符合一定與檢出限的區(qū)別：定量限規(guī)定的最低測(cè)得濃度應(yīng)符合一定的精密度和準(zhǔn)確度的要求。的精密度和準(zhǔn)確度的要求。定量限是指樣品中待測(cè)物質(zhì)能夠被定量測(cè)定的最低量或最低定量限是指樣品中待測(cè)物質(zhì)能夠被定量測(cè)定的最低量或最低濃度，且其測(cè)定的結(jié)果還需對(duì)應(yīng)一定的準(zhǔn)確度和精密度，定濃度，且其測(cè)定的結(jié)果還需對(duì)應(yīng)一定的準(zhǔn)確度和精密度，定量限一般用于儀器分析，在進(jìn)行雜質(zhì)和降解產(chǎn)物測(cè)定方法研量限一般用于儀器分析，在進(jìn)行雜質(zhì)和降解產(chǎn)物測(cè)定方法研究時(shí)，應(yīng)確定定量限。究時(shí)，應(yīng)確定定量限。25分析方法的建立分析方法的建立 ：線性范圍：線性范圍線性范圍線性

29、范圍線性：是指在設(shè)計(jì)的檢測(cè)范圍內(nèi)，儀器分析的結(jié)果與樣品線性：是指在設(shè)計(jì)的檢測(cè)范圍內(nèi)，儀器分析的結(jié)果與樣品中的實(shí)際待測(cè)物質(zhì)濃度呈直接正比例的關(guān)系的程度。也就中的實(shí)際待測(cè)物質(zhì)濃度呈直接正比例的關(guān)系的程度。也就是待測(cè)物質(zhì)的濃度或質(zhì)量的變化與儀器測(cè)試結(jié)果（或儀器是待測(cè)物質(zhì)的濃度或質(zhì)量的變化與儀器測(cè)試結(jié)果（或儀器響應(yīng)信號(hào)）呈線性的關(guān)系。響應(yīng)信號(hào)）呈線性的關(guān)系。線性范圍：是指在能夠達(dá)到規(guī)定的精密度、準(zhǔn)確度和線性線性范圍：是指在能夠達(dá)到規(guī)定的精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的最高到最低限待測(cè)物質(zhì)濃度或的條件下，測(cè)試方法適用的最高到最低限待測(cè)物質(zhì)濃度或量的區(qū)間。量的區(qū)間。應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線

30、性、準(zhǔn)確度、精密度的結(jié)應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度的結(jié)果和要求來(lái)確定線性范圍。果和要求來(lái)確定線性范圍。26分析方法的建立分析方法的建立 ：精密度：精密度重現(xiàn)性（重現(xiàn)性（Reproductivity）：是指在不同實(shí)驗(yàn)室，不同檢測(cè)人員測(cè)定結(jié)果的精）：是指在不同實(shí)驗(yàn)室，不同檢測(cè)人員測(cè)定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法被法定為標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)。如建立藥典的法密度。當(dāng)分析方法被法定為標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)。如建立藥典的法定分析方法時(shí)，通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)室之間的協(xié)同檢測(cè)得出重現(xiàn)性的結(jié)果報(bào)告，在協(xié)定分析方法時(shí)，通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)室之間的協(xié)同檢測(cè)得出重現(xiàn)性的結(jié)果報(bào)告，在協(xié)同檢驗(yàn)的過(guò)程中，重現(xiàn)性

31、結(jié)果要求記載在法定方法建立的起草說(shuō)明中。同檢驗(yàn)的過(guò)程中，重現(xiàn)性結(jié)果要求記載在法定方法建立的起草說(shuō)明中。中間精密度：是指在同一實(shí)驗(yàn)室中，不同時(shí)間由不同檢測(cè)人員在不同檢測(cè)設(shè)備中間精密度：是指在同一實(shí)驗(yàn)室中，不同時(shí)間由不同檢測(cè)人員在不同檢測(cè)設(shè)備上測(cè)定結(jié)果的精密度。為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行上測(cè)定結(jié)果的精密度。為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度的測(cè)試，變動(dòng)因素為日期、不同分析人員和不同設(shè)備。中間精密度的測(cè)試，變動(dòng)因素為日期、不同分析人員和不同設(shè)備。重復(fù)性（重復(fù)性（Repeatability）：是指在相同條件下，由一個(gè)分析人員重復(fù)測(cè)定所得）：是指在相同條件下

32、，由一個(gè)分析人員重復(fù)測(cè)定所得結(jié)果計(jì)算出的精密度。考察重復(fù)性時(shí)，需要在給定的范圍內(nèi)至少用結(jié)果計(jì)算出的精密度?？疾熘貜?fù)性時(shí)，需要在給定的范圍內(nèi)至少用9次測(cè)定結(jié)次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，如制備果進(jìn)行評(píng)價(jià)，如制備3個(gè)不同濃度的樣品，每個(gè)樣品測(cè)定個(gè)不同濃度的樣品，每個(gè)樣品測(cè)定3次；或?qū)⒋郎y(cè)物質(zhì)的次；或?qū)⒋郎y(cè)物質(zhì)的濃度當(dāng)作濃度當(dāng)作100%，用至少測(cè)定，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。精密度是指在規(guī)定的條件下同一樣品平行分析結(jié)果相互之間的接近程度。精密度一精密度是指在規(guī)定的條件下同一樣品平行分析結(jié)果相互之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（CV）表示。

33、平行的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)越靠近某一平均值，）表示。平行的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)越靠近某一平均值，實(shí)驗(yàn)方法的穩(wěn)定性越高，數(shù)據(jù)的精密度越高；相反，數(shù)據(jù)的離散度也越大，數(shù)據(jù)的實(shí)驗(yàn)方法的穩(wěn)定性越高，數(shù)據(jù)的精密度越高；相反，數(shù)據(jù)的離散度也越大，數(shù)據(jù)的精密度越低，方法的穩(wěn)定性越差。對(duì)不同的檢測(cè)條件，精密度有不同的表現(xiàn)方式，精密度越低，方法的穩(wěn)定性越差。對(duì)不同的檢測(cè)條件，精密度有不同的表現(xiàn)方式，即重現(xiàn)性、重復(fù)性、中間精密度。即重現(xiàn)性、重復(fù)性、中間精密度。27分析方法的建立分析方法的建立 ：準(zhǔn)確度：準(zhǔn)確度含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度：某物質(zhì)用已知純度的對(duì)照平或樣含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度：某物質(zhì)用已知純度的對(duì)照平或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得的結(jié)果

34、與建立了準(zhǔn)確度的另一品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得的結(jié)果與建立了準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較，利用這種對(duì)比的方法來(lái)推測(cè)分方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較，利用這種對(duì)比的方法來(lái)推測(cè)分析方法的準(zhǔn)確度析方法的準(zhǔn)確度制備制備3個(gè)不同濃度的樣品，各個(gè)樣品測(cè)定個(gè)不同濃度的樣品，各個(gè)樣品測(cè)定3次，對(duì)比次，對(duì)比要評(píng)估一種新方法準(zhǔn)確度的高低，只能將其與一種經(jīng)典可要評(píng)估一種新方法準(zhǔn)確度的高低，只能將其與一種經(jīng)典可靠的方法比較，這一經(jīng)典的方法被認(rèn)定能夠測(cè)定樣品的真靠的方法比較，這一經(jīng)典的方法被認(rèn)定能夠測(cè)定樣品的真值。值。準(zhǔn)確度是指用該方法平行測(cè)定所得的均數(shù)與樣品真實(shí)值或參考準(zhǔn)確度是指用該方法平行測(cè)定所得的均數(shù)與樣品真實(shí)值或參

35、考值的吻合程度，一般用百分回收率表示。根據(jù)考察對(duì)象的不同，值的吻合程度，一般用百分回收率表示。根據(jù)考察對(duì)象的不同，有不同的準(zhǔn)確度，即含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度和雜質(zhì)定量測(cè)定的有不同的準(zhǔn)確度，即含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度和雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度。準(zhǔn)確度。28分析方法的建立分析方法的建立A低精密度低精密度低準(zhǔn)確度低準(zhǔn)確度C高精密度高精密度低準(zhǔn)確度低準(zhǔn)確度D高精密度高精密度高準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度B低精密度低精密度高準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度29分析方法的建立分析方法的建立 ：耐用性：耐用性耐用性是指在檢測(cè)條件稍有變化的情況下，待測(cè)物質(zhì)的檢耐用性是指在檢測(cè)條件稍有變化的情況下，待測(cè)物質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果不受影響的承受程度。耐用性高表明工作環(huán)

36、境的變測(cè)結(jié)果不受影響的承受程度。耐用性高表明工作環(huán)境的變化對(duì)分析方法沒(méi)有明顯的負(fù)面影響，同時(shí)表明實(shí)驗(yàn)室和操化對(duì)分析方法沒(méi)有明顯的負(fù)面影響，同時(shí)表明實(shí)驗(yàn)室和操作人員之間在常規(guī)條件下測(cè)試結(jié)果的穩(wěn)定性好。作人員之間在常規(guī)條件下測(cè)試結(jié)果的穩(wěn)定性好。開(kāi)始建立新方法時(shí)，就應(yīng)考慮新方法的耐用性的考察，如開(kāi)始建立新方法時(shí)，就應(yīng)考慮新方法的耐用性的考察，如檢測(cè)條件要求嚴(yán)格，就應(yīng)該在新方法開(kāi)發(fā)中說(shuō)明。典型的檢測(cè)條件要求嚴(yán)格，就應(yīng)該在新方法開(kāi)發(fā)中說(shuō)明。典型的變動(dòng)因素包括被測(cè)定溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)和時(shí)間變動(dòng)因素包括被測(cè)定溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)和時(shí)間等。如在液相色譜中，典型的條件變化因素是流動(dòng)相的組等。如在液

37、相色譜中，典型的條件變化因素是流動(dòng)相的組成和成和pH值、不同廠商或不同批號(hào)的色譜柱、柱溫、進(jìn)樣值、不同廠商或不同批號(hào)的色譜柱、柱溫、進(jìn)樣口和檢測(cè)器的溫度等。口和檢測(cè)器的溫度等。30分析方法的建立：實(shí)驗(yàn)操作分析方法的建立：實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作的描述再怎么細(xì)致也不過(guò)分；實(shí)驗(yàn)操作的描述再怎么細(xì)致也不過(guò)分；實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程前要注意操作條件的驗(yàn)證和確認(rèn)；如：實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程前要注意操作條件的驗(yàn)證和確認(rèn)；如：搖床溫度搖床溫度30 實(shí)驗(yàn)操作要具有可重復(fù)性，不僅僅是自己可以在一實(shí)驗(yàn)操作要具有可重復(fù)性，不僅僅是自己可以在一定的誤差范圍內(nèi)重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)其他人按照實(shí)定的誤差范圍內(nèi)重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)其他人按照實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行，可

38、以得到同樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；驗(yàn)操作進(jìn)行，可以得到同樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；在實(shí)驗(yàn)操作上，細(xì)節(jié)決定成??！在實(shí)驗(yàn)操作上，細(xì)節(jié)決定成敗！31分析方法的建立：數(shù)據(jù)記錄分析方法的建立：數(shù)據(jù)記錄規(guī)范規(guī)范實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄 實(shí)驗(yàn)記錄需要記錄：實(shí)驗(yàn)記錄需要記錄：實(shí)驗(yàn)思路、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)思路、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象、原始數(shù)據(jù)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、結(jié)果討論現(xiàn)象、原始數(shù)據(jù)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、結(jié)果討論 實(shí)驗(yàn)記錄就是一份完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)記錄就是一份完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告32分析方法的建立分析方法的建立 ：撰寫(xiě)：撰寫(xiě)SOP 分析方法建立的完成，不是以可以測(cè)定某物質(zhì)的濃度為分析方法建立的完成，不是以可以測(cè)定某物質(zhì)的濃度為標(biāo)準(zhǔn)，而是以完成該分析方

39、法的標(biāo)準(zhǔn)，而是以完成該分析方法的SOP為標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)SOP中必備的要素：中必備的要素：分析方法建立的依據(jù)：國(guó)標(biāo)、藥典分析方法建立的依據(jù)：國(guó)標(biāo)、藥典分析方法所需使用的儀器、設(shè)備、器皿分析方法所需使用的儀器、設(shè)備、器皿樣品的取樣量設(shè)定（線性范圍）樣品的取樣量設(shè)定（線性范圍）詳細(xì)的操作步驟（包括器皿的清潔方法）詳細(xì)的操作步驟（包括器皿的清潔方法）每個(gè)操作參數(shù)都有寬容度每個(gè)操作參數(shù)都有寬容度每個(gè)工藝條件都有數(shù)據(jù)支持每個(gè)工藝條件都有數(shù)據(jù)支持1. 方法驗(yàn)證的原始數(shù)據(jù)方法驗(yàn)證的原始數(shù)據(jù)33分析方法的建立分析方法的建立 ：撰寫(xiě)：撰寫(xiě)SOP 驗(yàn)證驗(yàn)證SOP的好壞最簡(jiǎn)單的方法就是讓其他人按照的好壞最簡(jiǎn)單的方法就是讓

40、其他人按照SOP操作能否得到和撰寫(xiě)人一樣的結(jié)果操作能否得到和撰寫(xiě)人一樣的結(jié)果 在在SOP撰寫(xiě)的時(shí)候要注意細(xì)節(jié)的描寫(xiě)，避免閱讀的人撰寫(xiě)的時(shí)候要注意細(xì)節(jié)的描寫(xiě)，避免閱讀的人產(chǎn)生歧義產(chǎn)生歧義 如：水浴溫度如：水浴溫度30 34儀器分析的一般過(guò)程儀器分析的一般過(guò)程樣品的采集樣品的采集樣品的預(yù)處理樣品的預(yù)處理（待測(cè)物的衍生化）（待測(cè)物的衍生化）儀器的校正儀器的校正樣品的測(cè)量與表征樣品的測(cè)量與表征分析數(shù)據(jù)的處理與結(jié)果輸出分析數(shù)據(jù)的處理與結(jié)果輸出35儀器分析的一般過(guò)程：取樣儀器分析的一般過(guò)程：取樣樣品的采集：樣品必須具有代表性，并且不能被污染，樣品的采集：樣品必須具有代表性，并且不能被污染，也不應(yīng)有組分的損

41、失；也不應(yīng)有組分的損失；根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮侠碓O(shè)計(jì)取樣時(shí)間及取樣量以及樣品保藏根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮侠碓O(shè)計(jì)取樣時(shí)間及取樣量以及樣品保藏方式；方式；步步留樣步步留樣，樣品完成分析后要保留一定時(shí)間，以便于出樣品完成分析后要保留一定時(shí)間，以便于出現(xiàn)問(wèn)題后可以追溯分析現(xiàn)問(wèn)題后可以追溯分析標(biāo)簽清晰：標(biāo)明物料名稱（標(biāo)簽清晰：標(biāo)明物料名稱（What）、人（）、人（Who）、時(shí)）、時(shí)間（間（When）36儀器分析的一般過(guò)程：預(yù)處理儀器分析的一般過(guò)程：預(yù)處理樣品的預(yù)處理：樣品體系復(fù)雜，不利于進(jìn)行物理學(xué)特性樣品的預(yù)處理：樣品體系復(fù)雜，不利于進(jìn)行物理學(xué)特性的測(cè)定，必須進(jìn)行預(yù)處理，以消除干擾、富集待測(cè)成分、的測(cè)定，必須進(jìn)行預(yù)處理，

42、以消除干擾、富集待測(cè)成分、保護(hù)分析儀器；保護(hù)分析儀器；分離除雜有離線分離和在線分離，離線分離如離心去除分離除雜有離線分離和在線分離，離線分離如離心去除菌體、過(guò)濾除水等，在線分離如菌體、過(guò)濾除水等，在線分離如HPLC測(cè)定混合糖、測(cè)定混合糖、GC測(cè)定小分子有機(jī)物等；測(cè)定小分子有機(jī)物等；常見(jiàn)的預(yù)處理手段：稀釋、過(guò)濾常見(jiàn)的預(yù)處理手段：稀釋、過(guò)濾/離心、加熱離心、加熱/制冷、調(diào)制冷、調(diào)pH、遮蔽遮蔽衍生：某些待測(cè)物質(zhì)沒(méi)有很強(qiáng)的物理學(xué)特性，需要衍生；衍生：某些待測(cè)物質(zhì)沒(méi)有很強(qiáng)的物理學(xué)特性，需要衍生；或者通過(guò)衍生將待測(cè)物和雜質(zhì)進(jìn)行區(qū)分或者通過(guò)衍生將待測(cè)物和雜質(zhì)進(jìn)行區(qū)分37儀器分析的一般過(guò)程：儀器校正儀器分析

43、的一般過(guò)程：儀器校正儀器校正：分析儀器在使用前或使用時(shí)必須經(jīng)過(guò)校正；儀器校正：分析儀器在使用前或使用時(shí)必須經(jīng)過(guò)校正；校正的內(nèi)容：零點(diǎn)校正、線性校正、滿度校正等校正的內(nèi)容：零點(diǎn)校正、線性校正、滿度校正等校正需要使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校正需要使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 物質(zhì)純度的分類：試劑級(jí)（物質(zhì)純度的分類：試劑級(jí)（AR、BR、CP、GR）、工）、工業(yè)級(jí)業(yè)級(jí)注意某些設(shè)備在使用前需要預(yù)熱注意某些設(shè)備在使用前需要預(yù)熱儀器的校正需要仔細(xì)閱讀相關(guān)說(shuō)明書(shū)儀器的校正需要仔細(xì)閱讀相關(guān)說(shuō)明書(shū)/操作手冊(cè)操作手冊(cè)38儀器分析的一般過(guò)程：樣品測(cè)量?jī)x器分析的一般過(guò)程：樣品測(cè)量?jī)x器使用前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)儀器使用前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)/操作手冊(cè)操作手冊(cè)使用

44、過(guò)程中嚴(yán)格遵守使用過(guò)程中嚴(yán)格遵守SOP樣品多的時(shí)候要注意編號(hào)，避免混淆結(jié)果樣品多的時(shí)候要注意編號(hào)，避免混淆結(jié)果39儀器分析的一般過(guò)程：數(shù)據(jù)處理儀器分析的一般過(guò)程：數(shù)據(jù)處理要注重記錄和保存原始數(shù)據(jù)，如要注重記錄和保存原始數(shù)據(jù)，如HPLC、GC的圖譜，而不僅僅是記錄實(shí)驗(yàn)最終結(jié)果的圖譜，而不僅僅是記錄實(shí)驗(yàn)最終結(jié)果注重有效數(shù)字位數(shù)及其所表示的意義注重有效數(shù)字位數(shù)及其所表示的意義要注重?cái)?shù)據(jù)處理過(guò)程中的誤差傳遞要注重?cái)?shù)據(jù)處理過(guò)程中的誤差傳遞要以圖、表等直觀的形式表達(dá)數(shù)據(jù)，同類數(shù)要以圖、表等直觀的形式表達(dá)數(shù)據(jù)，同類數(shù)據(jù)超過(guò)三個(gè)，必須作圖表示據(jù)超過(guò)三個(gè)，必須作圖表示40 有效數(shù)字：實(shí)際能測(cè)到的數(shù)字，反映測(cè)量的

45、準(zhǔn)有效數(shù)字：實(shí)際能測(cè)到的數(shù)字，反映測(cè)量的準(zhǔn)確程度，有效數(shù)字保留的位數(shù)，應(yīng)根據(jù)分析方確程度，有效數(shù)字保留的位數(shù)，應(yīng)根據(jù)分析方法和儀器準(zhǔn)確度來(lái)確定，應(yīng)使數(shù)值中只有最后法和儀器準(zhǔn)確度來(lái)確定，應(yīng)使數(shù)值中只有最后一位是可疑的；一位是可疑的； 數(shù)字?jǐn)?shù)字“0”0”作為普通數(shù)字使用，是有效數(shù)字，作作為普通數(shù)字使用，是有效數(shù)字，作為定位數(shù)字使用，不是有效數(shù)字；為定位數(shù)字使用，不是有效數(shù)字； pHpH的有效數(shù)字的有效數(shù)字 有效數(shù)字的運(yùn)算：絕對(duì)誤差最大者為標(biāo)準(zhǔn)有效數(shù)字的運(yùn)算：絕對(duì)誤差最大者為標(biāo)準(zhǔn)儀器分析的一般過(guò)程：有效數(shù)字儀器分析的一般過(guò)程：有效數(shù)字41 一個(gè)沒(méi)有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的分析方法，是無(wú)法確保結(jié)果一個(gè)沒(méi)有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的

46、分析方法，是無(wú)法確保結(jié)果的可信度的！的可信度的！ 知道如何建立一個(gè)適當(dāng)?shù)姆治龇椒ㄖ廊绾谓⒁粋€(gè)適當(dāng)?shù)姆治龇椒?要準(zhǔn)確的表述實(shí)驗(yàn)結(jié)果要準(zhǔn)確的表述實(shí)驗(yàn)結(jié)果 要養(yǎng)成仔細(xì)閱讀設(shè)備說(shuō)明書(shū)要養(yǎng)成仔細(xì)閱讀設(shè)備說(shuō)明書(shū)/ /操作手冊(cè)的習(xí)慣操作手冊(cè)的習(xí)慣總結(jié)總結(jié)42紫外紫外- -可見(jiàn)吸收光譜分析法可見(jiàn)吸收光譜分析法 概概 述述 光吸收的基本定律光吸收的基本定律 紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì) 定性與定量分析定性與定量分析43定義定義 基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的分析方法稱為吸光光度法，包括比色法、可的分析方法稱為吸光光度法，包括比色法、可見(jiàn)分光光度法及紫外分光

47、光度法等。采用分光見(jiàn)分光光度法及紫外分光光度法等。采用分光光度計(jì)對(duì)物質(zhì)吸光度進(jìn)行測(cè)定，從而求出物質(zhì)光度計(jì)對(duì)物質(zhì)吸光度進(jìn)行測(cè)定，從而求出物質(zhì)含量的方法，稱之為分光光度法。含量的方法，稱之為分光光度法。44紫外吸收光譜：分子價(jià)電子（最外層電子）能級(jí)躍遷。紫外吸收光譜：分子價(jià)電子（最外層電子）能級(jí)躍遷。波長(zhǎng)范圍：波長(zhǎng)范圍：100-760 nm.(1) 遠(yuǎn)紫外光區(qū)遠(yuǎn)紫外光區(qū): : 100-200nm (2) 近紫外光區(qū)近紫外光區(qū): : 200-400nm(3)可見(jiàn)光區(qū)可見(jiàn)光區(qū): :400-760nm 250 300 350 400nm1234e e 可用于結(jié)構(gòu)鑒定和定量分析?？捎糜诮Y(jié)構(gòu)鑒定和定量分析。

48、4546 紫外紫外-可見(jiàn)吸收光譜分析法是利用物質(zhì)的分子可見(jiàn)吸收光譜分析法是利用物質(zhì)的分子對(duì)某一波長(zhǎng)范圍的光的吸收作用，對(duì)物質(zhì)進(jìn)對(duì)某一波長(zhǎng)范圍的光的吸收作用，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析、定量分析及結(jié)構(gòu)分析的方法。行定性分析、定量分析及結(jié)構(gòu)分析的方法。 按所吸收光的波長(zhǎng)區(qū)域不同，分為紫外分光按所吸收光的波長(zhǎng)區(qū)域不同，分為紫外分光光度法光度法(200-400nm)和可見(jiàn)分光光度法和可見(jiàn)分光光度法(400-760nm)，合稱為紫外，合稱為紫外可見(jiàn)分光光度法可見(jiàn)分光光度法(200-760nm)。 分光光度法是在比色法分光光度法是在比色法( colorimetry)的基礎(chǔ)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。上發(fā)展起來(lái)的。 47分

49、光光度法分光光度法與與比色法區(qū)別比色法區(qū)別 比色法只限于在可見(jiàn)光區(qū)，分光光度法則可以比色法只限于在可見(jiàn)光區(qū)，分光光度法則可以擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。 比色法用的單色光是來(lái)自濾光片，譜帶寬度從比色法用的單色光是來(lái)自濾光片，譜帶寬度從40120nm，精度不高，分光光度法則要求近，精度不高，分光光度法則要求近于真正單色光，其光譜帶寬最大不超過(guò)于真正單色光，其光譜帶寬最大不超過(guò)35nm，在紫外區(qū)可到，在紫外區(qū)可到1nm以下，來(lái)自棱鏡或光以下，來(lái)自棱鏡或光柵，具有較高的精度。柵，具有較高的精度。 48紫外紫外可見(jiàn)分光光度法特可見(jiàn)分光光度法特點(diǎn)點(diǎn)儀器設(shè)備和操作都比較簡(jiǎn)單，費(fèi)用少

50、，分析速度較快。儀器設(shè)備和操作都比較簡(jiǎn)單，費(fèi)用少，分析速度較快。靈敏度較高。靈敏度較高。有較好的選擇性。通過(guò)適當(dāng)?shù)剡x擇測(cè)量條件，一般可有較好的選擇性。通過(guò)適當(dāng)?shù)剡x擇測(cè)量條件，一般可在多種組分共存的體系中，對(duì)某一種物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。在多種組分共存的體系中，對(duì)某一種物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。精密度和準(zhǔn)確度較高。在儀器設(shè)備和其他測(cè)量條件較精密度和準(zhǔn)確度較高。在儀器設(shè)備和其他測(cè)量條件較好的情況下，其相對(duì)誤差可減小到好的情況下，其相對(duì)誤差可減小到1一一2。 用途廣泛。醫(yī)藥、化工、冶金、環(huán)境保護(hù)、地質(zhì)等諸用途廣泛。醫(yī)藥、化工、冶金、環(huán)境保護(hù)、地質(zhì)等諸多領(lǐng)域多領(lǐng)域-已成為必不可少的測(cè)試手段之一。已成為必不可少的測(cè)試手段之一

51、。無(wú)機(jī)和有機(jī)物質(zhì)無(wú)機(jī)和有機(jī)物質(zhì)-定性和定量測(cè)定定性和定量測(cè)定,結(jié)構(gòu)分析結(jié)構(gòu)分析。49 理論上將具有同一波長(zhǎng)的光稱為單色光理論上將具有同一波長(zhǎng)的光稱為單色光，由不由不同波長(zhǎng)的光組成的光稱為復(fù)合光。同波長(zhǎng)的光組成的光稱為復(fù)合光。 人眼能感覺(jué)到的光稱為可見(jiàn)光人眼能感覺(jué)到的光稱為可見(jiàn)光，它的波長(zhǎng)范圍它的波長(zhǎng)范圍約為約為400760nm。白光白光(日光、白熾燈光、日日光、白熾燈光、日光燈光等光燈光等)是由各種不同色光按一定強(qiáng)度比例是由各種不同色光按一定強(qiáng)度比例混合而成的?；旌隙傻?。 一束白光通過(guò)三棱鏡可分為紅、橙、黃、綠、一束白光通過(guò)三棱鏡可分為紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等七種色光，這七種色光可以混合

52、青、藍(lán)、紫等七種色光，這七種色光可以混合為白光。實(shí)驗(yàn)證明，如果把適當(dāng)?shù)膬煞N色光按為白光。實(shí)驗(yàn)證明，如果把適當(dāng)?shù)膬煞N色光按一定強(qiáng)度比例混合，也可以成為白光，這兩種一定強(qiáng)度比例混合，也可以成為白光，這兩種色光稱為互補(bǔ)色光。色光稱為互補(bǔ)色光。 日光等白光是一對(duì)對(duì)互補(bǔ)色光按適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度比日光等白光是一對(duì)對(duì)互補(bǔ)色光按適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度比例混合而成的。例混合而成的。50 物質(zhì)的顏色和對(duì)光的選擇性吸收物質(zhì)的顏色和對(duì)光的選擇性吸收 物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色與光有著密切的關(guān)系物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色與光有著密切的關(guān)系-與光的組與光的組成和物質(zhì)本身的結(jié)構(gòu)有關(guān)。成和物質(zhì)本身的結(jié)構(gòu)有關(guān)。 當(dāng)光束照射到物質(zhì)上時(shí)，物質(zhì)對(duì)于不同波長(zhǎng)的光當(dāng)光束照射到物質(zhì)

53、上時(shí)，物質(zhì)對(duì)于不同波長(zhǎng)的光的吸收、透射、反射、折射的程度不同，而使物的吸收、透射、反射、折射的程度不同，而使物質(zhì)呈現(xiàn)不同的顏色。質(zhì)呈現(xiàn)不同的顏色。 對(duì)固體物質(zhì)來(lái)說(shuō)，當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時(shí)，如果對(duì)固體物質(zhì)來(lái)說(shuō)，當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時(shí)，如果物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)的光完全吸收，則呈現(xiàn)黑色；如物質(zhì)對(duì)各種波長(zhǎng)的光完全吸收，則呈現(xiàn)黑色；如果完全反射，則呈現(xiàn)白色；如果對(duì)各種波長(zhǎng)的光果完全反射，則呈現(xiàn)白色；如果對(duì)各種波長(zhǎng)的光均勻吸收則呈現(xiàn)灰色；如果選擇地吸收某些波均勻吸收則呈現(xiàn)灰色；如果選擇地吸收某些波長(zhǎng)的光，則呈現(xiàn)反射或透射光的顏色。長(zhǎng)的光，則呈現(xiàn)反射或透射光的顏色。 51 對(duì)溶液來(lái)說(shuō)，溶液呈現(xiàn)不同的顏色是由于溶液中的

54、對(duì)溶液來(lái)說(shuō)，溶液呈現(xiàn)不同的顏色是由于溶液中的質(zhì)點(diǎn)質(zhì)點(diǎn)(離子或分子離子或分子)對(duì)不同波長(zhǎng)的光具有選擇性吸收而對(duì)不同波長(zhǎng)的光具有選擇性吸收而引起的。引起的。 當(dāng)白光通過(guò)某種溶液時(shí)，如果它選擇性地吸收了白當(dāng)白光通過(guò)某種溶液時(shí)，如果它選擇性地吸收了白光中某種色光，則溶液呈現(xiàn)透射光的顏色，也就是光中某種色光，則溶液呈現(xiàn)透射光的顏色，也就是說(shuō)，溶液呈現(xiàn)的是它吸收光的互補(bǔ)色光的顏色。物說(shuō)，溶液呈現(xiàn)的是它吸收光的互補(bǔ)色光的顏色。物質(zhì)呈現(xiàn)顏色與吸收光波長(zhǎng)的關(guān)系見(jiàn)表質(zhì)呈現(xiàn)顏色與吸收光波長(zhǎng)的關(guān)系見(jiàn)表 互補(bǔ)色光圖 紫青藍(lán)青藍(lán)黃橙紅白光綠52物質(zhì)的顏色與吸收光顏色和波長(zhǎng)的關(guān)系物質(zhì)的顏色與吸收光顏色和波長(zhǎng)的關(guān)系物質(zhì)的顏色

55、物質(zhì)的顏色 吸收光吸收光顏色顏色波長(zhǎng)（波長(zhǎng)（nm）黃綠黃綠 紫紫400-450 黃黃藍(lán)藍(lán)450-480橙橙青藍(lán)青藍(lán)480-490紅紅青青490-500紫紅紫紅綠綠500-560紫紫黃綠黃綠560-580藍(lán)藍(lán)黃黃580-600青藍(lán)青藍(lán)橙橙600-650青青紅紅650-76053吸收光譜曲線吸收光譜曲線 如果將各種波長(zhǎng)的單色光依次通過(guò)某一固定濃度的有如果將各種波長(zhǎng)的單色光依次通過(guò)某一固定濃度的有色溶液，測(cè)量每一波長(zhǎng)下有色溶液對(duì)光的吸收程度色溶液，測(cè)量每一波長(zhǎng)下有色溶液對(duì)光的吸收程度(即吸光即吸光度度 A)，然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得到，然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得到一

56、條曲線，稱為吸收光譜曲線一條曲線，稱為吸收光譜曲線(簡(jiǎn)稱吸收曲線簡(jiǎn)稱吸收曲線)。從曲線可。從曲線可以清楚地看到該有色溶液對(duì)光的吸收情況。以清楚地看到該有色溶液對(duì)光的吸收情況。吸收光譜圖示意吸收光譜圖示意 KMnO4 溶液的光吸收曲線溶液的光吸收曲線 54 吸收峰（吸收峰（1）-最大吸收波長(zhǎng)最大吸收波長(zhǎng)( max)，谷（，谷（2）-最低吸收波長(zhǎng)最低吸收波長(zhǎng)( min)； 肩峰（肩峰（3） ； 末端吸收（末端吸收（4） 。 圖圖12是四個(gè)不同濃度是四個(gè)不同濃度 KMnO4溶液的光吸收曲線溶液的光吸收曲線。55從圖上可以看到：從圖上可以看到： KMnO4溶液對(duì)不同溶液對(duì)不同 波長(zhǎng)的光吸收情況不同。波

57、長(zhǎng)的光吸收情況不同。 對(duì)波長(zhǎng)為對(duì)波長(zhǎng)為525nm的綠色的綠色 光吸收最多，在吸收曲線上有一高峰，而對(duì)紅色光和光吸收最多，在吸收曲線上有一高峰，而對(duì)紅色光和紫色光吸收很少，幾乎能完全透過(guò)，因此紫色光吸收很少，幾乎能完全透過(guò)，因此KMnO4溶液溶液呈紫紅色；呈紫紅色； 不同濃度不同濃度KMnO4溶液的吸收曲線形狀相似，最大吸收溶液的吸收曲線形狀相似，最大吸收波長(zhǎng)不變?？勺鳛槲镔|(zhì)定性分析的依據(jù)；波長(zhǎng)不變?？勺鳛槲镔|(zhì)定性分析的依據(jù)； 同一物質(zhì)不同濃度的溶液，在一定波長(zhǎng)處吸光度隨濃同一物質(zhì)不同濃度的溶液，在一定波長(zhǎng)處吸光度隨濃度增加而增大。若在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，靈度增加而增大。若在最大吸收波長(zhǎng)處

58、測(cè)定吸光度，靈敏度最高。這個(gè)特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。敏度最高。這個(gè)特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。 56紫外、可見(jiàn)吸收光譜法研究的主要對(duì)象紫外、可見(jiàn)吸收光譜法研究的主要對(duì)象 幾乎所有有機(jī)分子的紫外、可見(jiàn)吸收光譜都是幾乎所有有機(jī)分子的紫外、可見(jiàn)吸收光譜都是由于由于n n 和共扼的和共扼的 躍遷產(chǎn)生。并隨著躍遷產(chǎn)生。并隨著共軛系統(tǒng)延長(zhǎng)，其最大吸收波長(zhǎng)向長(zhǎng)波方向移動(dòng)。共軛系統(tǒng)延長(zhǎng)，其最大吸收波長(zhǎng)向長(zhǎng)波方向移動(dòng)。因此因此紫外、可見(jiàn)吸收光譜法主要研究醛、酮、紫外、可見(jiàn)吸收光譜法主要研究醛、酮、 、 - -不飽和醛酮、芳香化合物、雜環(huán)化合物、共扼多不飽和醛酮、芳香化合物、雜環(huán)化合物、共扼多烯等化合物。

59、烯等化合物。57紫外光譜電子躍遷類型紫外光譜電子躍遷類型 ： n*躍遷躍遷 *躍遷躍遷 飽和化合物無(wú)紫外吸收飽和化合物無(wú)紫外吸收 電子躍遷類型與分子結(jié)構(gòu)及存在基團(tuán)有密切聯(lián)系電子躍遷類型與分子結(jié)構(gòu)及存在基團(tuán)有密切聯(lián)系 根據(jù)分子結(jié)構(gòu)根據(jù)分子結(jié)構(gòu)推測(cè)可能產(chǎn)生的電子躍遷類型；推測(cè)可能產(chǎn)生的電子躍遷類型； 根據(jù)吸收譜帶波長(zhǎng)和電子躍遷類型根據(jù)吸收譜帶波長(zhǎng)和電子躍遷類型 推測(cè)分子中可能存在的基團(tuán)（分子結(jié)構(gòu)鑒定）推測(cè)分子中可能存在的基團(tuán)（分子結(jié)構(gòu)鑒定）58朗伯朗伯比耳定律比耳定律 分光光度法的定量依據(jù)是朗伯分光光度法的定量依據(jù)是朗伯比耳定律比耳定律（Lambert-Beers Law ） Alg（I0/I）K

60、CL式中：式中：I0為入射光強(qiáng)度；為入射光強(qiáng)度； I為透射光強(qiáng)度；為透射光強(qiáng)度； A為吸光度；為吸光度； L為液層厚度為液層厚度(即光程長(zhǎng)度即光程長(zhǎng)度)； C為溶液濃度；為溶液濃度； K為吸光系數(shù)；為吸光系數(shù)； 上式是朗伯上式是朗伯比耳定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式，其物理意義比耳定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式，其物理意義為：為：當(dāng)一束平行單色光通過(guò)均勻的有色溶液時(shí)，溶液當(dāng)一束平行單色光通過(guò)均勻的有色溶液時(shí)，溶液的吸光度與溶液的濃度和液層厚度的乘積成正比。的吸光度與溶液的濃度和液層厚度的乘積成正比。 朗伯朗伯比耳定律不僅適用于有色溶液，也適用于其比耳定律不僅適用于有色溶液，也適用于其它它均勻、非散射的吸光物質(zhì)均勻、非散射