實(shí)驗(yàn)五離體小腸平滑肌的生理特性及藥物作用的觀察

1、實(shí)驗(yàn)五 離體小腸平滑肌的生理特性及藥物作用的觀察【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)一種離體組織器官實(shí)驗(yàn)方法 ; 觀察離子成分、 酸堿度、 溫度、乙酰膽堿、 去甲腎上腺素對離體家兔小腸平滑肌的作用； 分析平滑肌活動的某些生理特性及 理化環(huán)境改變對它的影響?！緦?shí)驗(yàn)原理】消化道平滑肌具有自動節(jié)律性、 較大的伸展性， 對化學(xué)物質(zhì)、 溫度及牽張刺 激較為敏感等生理特性?！緦?shí)驗(yàn)材料】實(shí)驗(yàn)動物：家兔， 2.0-2.5kg實(shí)驗(yàn)藥品：臺式液、 0.01%去甲腎上腺素溶液、 0.01%乙酰膽堿溶液、 0.01%阿托 品溶液、 1.0%氯化鈣溶液、 1mol/l 鹽酸溶液、 1mol/l 氫氧化鈉溶液。 實(shí)驗(yàn)器材：恒溫平滑肌槽、小燒

2、杯、污物杯、張力換能器、雙凹夾、溫度計(jì)、BL-420 生物信號系統(tǒng)、絲線等?！緦?shí)驗(yàn)步驟】1. 恒溫浴槽的準(zhǔn)備工作；2. 標(biāo)本制備；3. 儀器連接與設(shè)置；4. 啟動計(jì)算機(jī)，打開 BL-420 生物信號系統(tǒng)，調(diào)節(jié)參數(shù)，開始記錄。觀察項(xiàng)目1. 自動節(jié)律性收縮，描記一段離體小腸平滑肌的收縮曲線，觀察其節(jié)律性 收縮及張力水平。2. 觀察膽堿能受體激動劑對腸斷收縮的影響及阻斷劑的作用。（1） 乙酰膽堿的作用： 向浴槽標(biāo)本管中加入 0.01%的乙酰膽堿溶液 12 滴，觀察腸管張力和收縮有何變化。作用產(chǎn)生后，洗滌三次，進(jìn) 行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。（2） 阿托品的作用：向浴槽標(biāo)本管中加入 0.01%的阿托品溶液 23 滴

3、， 兩分鐘后，再加入 0.01%的乙酰膽堿溶液 12 滴，觀察腸管張力和收縮 有何變化。與（ 1）比較結(jié)果后，洗滌三次，待其活動穩(wěn)定后，進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。3. 觀察腎上腺素能受體激動劑對腸斷收縮的影響及阻斷劑的作用去甲腎上腺素的作用：向浴槽標(biāo)本管中加入 0.01%的去甲腎上腺素 23 滴，觀察腸管張力和收縮有何變化。然后洗滌三次，待其活動穩(wěn)定后， 進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。4觀察鈣離子對腸斷收縮的影響向浴槽標(biāo)本管中加入 1%的氯化鈣溶液 23 滴，觀察腸管平滑肌的反 應(yīng)。然后洗滌三次，待其活動穩(wěn)定后，進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。5觀察酸堿度對腸斷收縮的影響向浴槽標(biāo)本管中加入 1mol/l 的鹽酸溶液 12 滴，觀察平

4、滑肌的反應(yīng)， 待作用出現(xiàn)明顯后， 在此基礎(chǔ)上，加入 1mol/l 的NaOH溶液 12滴，觀察平滑肌 的反應(yīng)?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】1. 乙酰膽堿對腸斷收縮的影響：小腸平滑肌收縮活動加強(qiáng)。2. 阿托品和乙酰膽堿對腸斷收縮的影響：小腸平滑肌收縮活動不受影響3. 去甲腎上腺素對腸斷收縮的影響：小腸平滑肌收縮活動減弱4. 鈣離子對腸斷收縮的影響：小腸平滑肌收縮活動加強(qiáng)5. 酸堿度對腸斷收縮的影響：小腸平滑肌收縮活動先減弱后恢復(fù)【注意事項(xiàng)】1. 腸管勿牽拉過緊或過松，且連線必須垂直 , 且不得與浴槽的管壁等接觸，以 免摩擦。2. 浴槽中的液體的量應(yīng)以高過腸斷為準(zhǔn)，并保持液面高度一致。3. 藥物應(yīng)滴在腸管附近，

5、藥物作用若不明顯， 可以不加藥物， 但不可一次過多。4. 每次加藥出現(xiàn)反應(yīng)后，應(yīng)必須立即更換浴槽內(nèi)的臺式液至少三次，待腸管恢 復(fù)穩(wěn)定活動后，再觀察下一個項(xiàng)目。【實(shí)驗(yàn)思考】1. 哺乳動物離體器官或組織在灌流液中保持良好狀態(tài)應(yīng)具備的條件？溫度：本實(shí)驗(yàn)控制恒定溫度 37 度；濕度：要時(shí)刻記住用相應(yīng)的潤濕液潤濕， 本次試驗(yàn)用哺乳動物的臺氏液； PH：要與哺乳動物體液相似； 避免不必要的刺激： 不要用手或者是金屬觸碰； 離子成分與濃度： 要與相關(guān)的動物體液相似， 本實(shí)驗(yàn) 是臺氏液。2. 每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析及原因解釋：滴加乙酰膽堿后小腸平滑肌收縮明顯增強(qiáng)， 這是因?yàn)橐阴Ｄ憠A與小腸平滑肌 肌膜上的 M受體

6、結(jié)合后，可以在膜去極化未達(dá)到一定的電位時(shí)提前激活更多的慢 鈣通道，使大量的鈣離子內(nèi)流， 進(jìn)而使動作電位產(chǎn)生的頻率增加， 所以小腸的平 滑肌收縮增強(qiáng)； 先加阿托品再加乙酰膽堿后對小腸平滑肌的收縮不影響。 因?yàn)?阿托品是乙酰膽堿的抑制劑， 故先加阿托品再加乙酰膽堿， 乙酰膽堿對小腸平滑 肌的收縮不影響；加入去甲腎上腺素后， 可見離體腸管活動減弱， 去甲腎上腺素， 主要有和 腎上腺素能受體，去甲腎上腺素與 2 腎上腺素受體結(jié)合占優(yōu)勢，引起平滑肌的 舒張，故平滑肌收縮活動減弱。加入 CaCl2 后，離體腸管活動增強(qiáng)。這是因?yàn)?加入氯化鈣后， 細(xì)胞外液 Ca2+濃度升高，則 Ca2+內(nèi)流增加，使得細(xì)胞內(nèi)

7、液中 Ca2+ 濃度升高， Ca2+與鈣調(diào)蛋白結(jié)合增加，促進(jìn)了橫橋的激活，因而收縮力增加。 滴加鹽酸后小腸平滑肌收縮明顯減弱， 因?yàn)榧尤臌}酸后， 小腸所處環(huán)境的氫離子 濃度升高， 氫離子可以影響慢鈣通道的開放， 是鈣離子內(nèi)流減少， 進(jìn)而影響動作 電位產(chǎn)生的頻率， 另外氫離子能與鈣離子競爭鈣調(diào)蛋白結(jié)合的位點(diǎn)， 使肌凝蛋白 ATP 酶活性下降、 和肌絲滑行的生化過程，以小腸的平滑肌收縮顯著減弱。幾 秒后加入氫氧化鈉后中和了氫離子， 使小腸所處的環(huán)境恢復(fù)正常， 所以其收縮慢 慢趨于正常。3. 維持哺乳動物離體小腸平滑肌活動和維持離體蛙心活動所需的條件的不同： 心臟使用的是任氏液，而小腸使用的是臺式液，心臟可以直接暴露在空氣中， 而小腸需要浸泡再臺式液中， 心臟可以在普通室溫下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)， 而小腸需要在接 近 37的水溫下且要不斷通氣才有較為強(qiáng)烈的收縮活動。4. 鈣離子在平滑肌收縮中起的作用： 當(dāng)平滑肌細(xì)胞受刺激而興奮時(shí)， 鈣離子由膜外進(jìn)入膜內(nèi)， 并在胞內(nèi)基質(zhì)一種磷 酸激酶的作用下，使肌凝蛋白磷酸化，從而誘發(fā)肌漿網(wǎng)中的鈣離子進(jìn)一步釋放， 肌鈣蛋白分子的 C 亞單位與鈣離子結(jié)合， 導(dǎo)致肌凝蛋白和肌動蛋白相結(jié)合， 造成 平滑肌收縮。5. 去