銀杏黃酮對(duì)D-半乳糖衰老模型小鼠的作用

1、    銀杏黃酮對(duì)D-半乳糖衰老模型小鼠的作用             作者：竇麗華，馬玉奎，丁元升 【摘要】  目的  研究銀杏黃酮對(duì)D-半乳糖所致小鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降和各項(xiàng)衰老指標(biāo)的對(duì)抗作用，以期探討銀杏黃酮的抗衰老作用機(jī)制。方法  以D-半乳糖衰老模型小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以其體重、免疫器官重量、肝腦丙二醛(MDA)和脂褐素(LF)的含量，全血谷胱甘肽過氧化氫酶(GSH-P）、紅細(xì)胞過氧化氫酶(CAT)和腦

2、中超氧化物歧化酶(SOD)的活力，腦中谷氨酸水平為指標(biāo)，全面考察銀杏黃酮的抗衰老作用。結(jié)果  銀杏黃酮(125、250、500mg/kg，ig)，能對(duì)抗連續(xù)6周給5%D-半乳糖0.25ml/10g所致小鼠腦組織中LPO、LF含量的升高，提高全血GSH-P、紅細(xì)胞CAT和腦中SOD的活力，并對(duì)抗小鼠體重、脾臟及胸腺指數(shù)下降。結(jié)論  銀杏黃酮能有效地對(duì)抗D-半乳糖所致的小鼠多項(xiàng)衰老指標(biāo)的出現(xiàn)，促進(jìn)衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。        【關(guān)鍵詞】  銀杏黃酮；D-半乳糖；衰老；小鼠；L-谷氨酸 &#

3、160;          【Abstract】  Objective  By using the D-galactose-induced aging mice，the effects and mechanism of Ginkgo flavone on aging were investigated.Methods  Ginkgo flavone were given to mice by ig and D-galactose were injected into mice

4、 for six weeks.Then，the ability of study of mice，the content of LPO，LF and the L-glutamate，the body weight，the index of thymus and spleen，the activities of superoxide dismutase(SOD)，catalase(CAT)and whole blood glutathione peroxidase(GSH-P)were determined.Results  To the D-galactose-induced agi

5、ng mice，Ginkgo flavone(125，250，500mg·kg，ig)reduced the content of LPO，LF，L-glutamate in brain，inhibited the decrease of body weight and the weight of thymus and spleen，enhance the activities of SOD in brain，CAT in erythrocyte and whole blood GSH-P.Conclusion  Ginkgo flavone shows a remarka

6、ble anti-aging effect on the D-galactose-induced aging mice.        【Key words】  Ginkgo flavone； aging； D-galactose； mice； L-glutamate        銀杏黃酮(Ginkgo flavone)是從中草銀杏中提取分離的有效成分，及基礎(chǔ)研究，表明，銀杏黃酮對(duì)衰老和老年性癡呆有一定的治療作用，認(rèn)為作用機(jī)制可能是使衰老動(dòng)物和老年性癡呆人腦組織中

7、M受體上調(diào)。但衰老是個(gè)綜合過程，涉及機(jī)體各個(gè)系統(tǒng)、不同結(jié)構(gòu)層次的多項(xiàng)指標(biāo)。目前銀杏黃酮對(duì)老化相關(guān)酶、老化代謝產(chǎn)物的影響報(bào)道尚少，特別是谷氨酸和衰老的關(guān)系是近幾年研究的熱點(diǎn)。本文采用D-半乳糖衰老模型小鼠考察了Ginkgo flavone 對(duì)上述多項(xiàng)指標(biāo)的影響，同時(shí)測(cè)定動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的變化。        1          1.1  動(dòng)物  昆明種小鼠合格證號(hào)：SCXK(魯)20030004，體重1822g，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

8、60;       1.2  藥品與試劑  銀杏黃酮(Ginkgo flavone)：沈陽藥科大學(xué)植化教研室提供。D-半乳糖：Sigma公司生產(chǎn)，上海生化試劑公司分裝，批號(hào)：980927。硫代巴比妥酸(Thibarbituric acid，TBA)：上海制劑二廠，批號(hào)：920620。芐胺(Benzyl amine)：新華活性材料研究所，批號(hào)：20000123。谷胱苷肽(GSH)：上海政翔醫(yī)用科技實(shí)業(yè)服務(wù)部化學(xué)試劑研究所，批號(hào)：990915。二硫硝基苯(dithionitobenzene；DTNB)：FLUKA產(chǎn)品，批號(hào)：98

9、0716。L-谷氨酸：上海康達(dá)氨基酸廠產(chǎn)品，批號(hào)：20000531。茚三酮：上海試劑三廠產(chǎn)品，批號(hào)：990325。GSH-P、CAT、SOD測(cè)定試劑盒均為南京建成生物工程研究所提供，批號(hào)：20030225。        1.3  儀器  WFZ800-D2型紫外可見分光光度計(jì)，北京第二光學(xué)儀器廠；HITACHI650-60型熒光分光光度計(jì)，日本；電泳儀，DYY-型，北京六一儀器廠；721分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠；910雙波長(zhǎng)薄層掃描儀，日本島津公司。     

10、0;  2  方法        2.1  D-半乳糖衰老模型的建立  取健康小鼠75只，隨機(jī)分為正常組、模型組、給藥組。各給藥組ig Ginkgo flavone(125、250、500mg/kg)；正常組和模型組ig等體積的CMCNa；給藥同時(shí)模型組和各給藥組皮下注射5%D-半乳糖0.25ml/10g；正常組皮下注射等體積的生理鹽水；連續(xù)6周，最后1天灌胃和注射D-半乳糖2h后，進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)，次日測(cè)定記憶成績(jī)。然后處死，測(cè)定各項(xiàng)衰老指標(biāo)。    

11、0;   2.2  D-半乳糖衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的測(cè)定(跳臺(tái)法)  將動(dòng)物放入跳臺(tái)箱內(nèi)適應(yīng)3min，然后立即通36V交流電。動(dòng)物受到電擊，其正常反應(yīng)是跳回平臺(tái)以躲避傷害性刺激，如此訓(xùn)練5min。24h后重做測(cè)驗(yàn)，此即記憶保持測(cè)驗(yàn)。記錄小鼠第1次跳下平臺(tái)的潛伏期和5min內(nèi)的錯(cuò)誤次數(shù)。        2.3  D-半乳糖衰老模型小鼠腦組織MDA、LF含量測(cè)定小鼠斷頭處死，立即取腦，用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定組織丙二醛(MDA)的含量；用熒光法測(cè)定腦組織中LF的含量。 

12、       2.4  D-半乳糖衰老模型小鼠全血GSH-P、紅細(xì)胞CAT和腦中SOD活力的測(cè)定  小鼠末次給藥后第2天眼眶取血，斷頭處死取全腦，分別按試劑盒說明測(cè)定GSH-P、CAT和SOD。        2.5  小鼠腦組織中谷氨酸含量的測(cè)定  小鼠斷頭處死，立即取全腦適量，用0.61mol/L的三氯乙酸制作10%的勻漿，取上清液用石油醚-正丁醇洗后，點(diǎn)樣，電泳，茚三酮顯色后用雙波長(zhǎng)薄層掃描儀測(cè)定全腦谷氨酸的含量。  &

13、#160;     2.6  學(xué)方法  各組數(shù)據(jù)采用x±s表示，組間比較采用t。        3  結(jié)果        3.1  銀杏黃酮對(duì)衰老模型小鼠體重及免疫器官重量的影響  與正常組比較，衰老模型小鼠體重及胸腺和脾臟指數(shù)降低，而銀杏黃酮(125、250、500mg/kg)可顯著抑制體重、胸腺和脾臟指數(shù)的降低，見表1。 Tab 1  The effect of Ginkg

14、o flavone on the index of body weight，thymus and spleen of D-galactose-induced seniled mice  （x±s，n=15）   注：P0.01，compared with control group；*P0.01，*P0.05，compared with model group        3.2  銀杏黃酮對(duì)衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響  與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠記憶明顯衰退，表現(xiàn)為錯(cuò)誤次數(shù)增加，

15、潛伏期縮短(均P0.01)。與模型組比較，銀杏黃酮(125，250，500mg/kg)可使小鼠錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少，潛伏期明顯延長(zhǎng)，見表2。Tab 2  The effect of Ginkgo flavone on the eeficit of learning and memory induced by D-galactose on mice in step-down tese  (x±s，n=15) 注：P0.01，compared with normal group；*P0.05，*P0.01，compared with model group &#

16、160;      3.3  銀杏黃酮對(duì)D-半乳糖致小鼠衰老模型腦內(nèi)LPO、LF、含量的影響  與正常組比較，衰老模型小鼠腦組織中LPO、LF、含量增高，而銀杏黃酮(125、250、500mg/kg)可顯著抑制LPO、LF含量的增高，見表3。 Tab 3  Effect of Ginkgo flavone on the content of LPO and LF on D-galactose-induced seniled mice  (x±s，n=15)   注：P0.01 compared

17、with control group；*P0.05，*P0.01，compared with D-galactose group        3.4  銀杏黃酮對(duì)D-半乳糖致衰老模型小鼠全血GSH-P、紅細(xì)胞CAT和腦中SOD活力的影響  與正常組比較，衰老模型小鼠全血GSH-P、紅細(xì)胞CAT和腦中SOD活力明顯降低，而銀杏黃酮(125、250、500mg/kg)可顯著抑制3種酶活力的降低，見表4。 Tab 4  Effect of Ginkgo flavone on the activity of SOD of