高效液相色譜法測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星血藥濃度及其藥動(dòng)學(xué)研究

1、    高效液相色譜法測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星血藥濃度及其藥動(dòng)學(xué)研究        摘要采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星的血藥濃度。色譜條件為：紫外檢測(cè)波長(zhǎng)277nm；分析柱為HP-RP-ODSC18柱，4.6×220mm；流動(dòng)相：乙腈(溴化四丁基銨0.008mol.L-1+磷酸二氫鉀水溶液0.011mol.L-1)=1486，配好后磷酸調(diào)pH至2.74±0.02。本法血清最低檢出濃度0.01g.ml-1。對(duì)10名受試者口服500mg兩種鹽酸環(huán)丙沙星

2、片后進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)和生物利用度研究。藥-時(shí)曲線經(jīng)擬合為二室開放模型，其T1/2分別為4.68±0.53h與4.40±0.47h，Tmax分別為1.28±0.07h與1.33±0.07h，Cmax分別為6.44±0.61(g.ml-1)與5.88±0.40(g.ml-1)，AUC分別為19.88±1.83(g.h-1.ml-1)和19.24±1.08(g.h-1.ml-1)。供試品片劑的相對(duì)生物利用度為103.32±4.81%(99.58±4.63%，經(jīng)含量校正)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析兩種制劑具有生物等效性。關(guān)

3、鍵詞鹽酸環(huán)丙沙星，高效液相色譜，藥物動(dòng)力學(xué)，生物利用度鹽酸環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin Hydrochloride)是新一代的氟喹諾酮類合成抗菌藥，具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)(尤對(duì)革蘭陰性桿菌作用強(qiáng))，同時(shí)又具有口服吸收完全，體內(nèi)分布廣泛等特點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外已廣泛用于臨床，取得了良好的治療效果1.2。10名健康男性志愿者口服兩廠家環(huán)丙沙星片劑500mg，用自建的HPLC法測(cè)定供試品與對(duì)照品鹽酸環(huán)丙沙星不同時(shí)間的血藥濃度。經(jīng)藥物動(dòng)力學(xué)軟件3P87計(jì)算鹽酸環(huán)丙沙星的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和供試品片劑的相對(duì)生物利用度，以評(píng)價(jià)供試品與對(duì)照品鹽酸環(huán)丙沙星在人體內(nèi)的作用程度，為臨床治療的有效性和安全性提供依據(jù)。1材料

4、和方法1.1受試者漢族健康男性志愿受試者10名，一般體檢、實(shí)驗(yàn)室檢查(血、尿常規(guī)，肝、腎功能)及心電均正常，且均無煙酒史。1.2藥品與試劑供試品鹽酸環(huán)丙沙星片劑(250mg/片；含量99.5%；溶出度96.9%；批號(hào)941025，由江西東方立可生制藥有限公司提供)；對(duì)照品鹽酸環(huán)丙沙星片劑(商品名“環(huán)福星”，250mg/片；含量95.9%；批號(hào)940701，由上海信誼藥廠生產(chǎn))；鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品由上海三維制藥公司提供；內(nèi)標(biāo)二氟哌酸(標(biāo)準(zhǔn)品，由中國(guó)醫(yī)學(xué)生物技術(shù)研究所提供)；乙腈為色譜純；磷酸、磷酸二氫鉀、溴化四丁基銨、三氯乙酸均為分析純。1.3儀器和色譜條件高效液相色譜儀(美國(guó)惠普公司HPLC1

5、050系統(tǒng)，包括泵、紫外檢測(cè)器、數(shù)據(jù)采集與數(shù)據(jù)處理工作站-HP486/50計(jì)算機(jī)與3365ChemStation色譜工作站軟件)；色譜柱(HP-RP-ODSC18柱，4.6×220mm)；3P87軟件運(yùn)行于PC286計(jì)算機(jī)。色譜條件：流動(dòng)相為乙腈(溴化四丁基銨0.008mol.L-1+磷酸二氫鉀水溶液0.011mol.L-1)=1486。配好后磷酸調(diào)pH至2.74±0.02，0.45m濾膜抽濾，超聲脫氣。流速1.2ml.min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)277nm，靈敏度0.025AUFS。柱溫25，取樣速率10次.SEC-1。本法鹽酸環(huán)丙沙星與二氟哌酸的保留時(shí)間分別是5.31min和7

6、.51min，有效理論塔板數(shù)(Neff=1.2×104，R=8.28)，血清最低檢出濃度0.01g.ml-1。1.4生物標(biāo)本測(cè)定方法取血清0.5ml，加入內(nèi)標(biāo)二氟哌酸20l(0.816g)，旋渦振蕩5min；加入0.5ml甲醇，再旋渦振蕩5min；4000r.min-1離心15min，取上清液，真空揮干溶劑，流動(dòng)相50l溶解，以0.22m微孔濾膜過濾后進(jìn)樣20l。1.5鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線精稱鹽酸環(huán)丙沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)用流動(dòng)相溶解定容，并配成7.263g.ml-1的儲(chǔ)備液，再分別稀釋成7.263，2.905，0.726，0.175，0.058g.ml-1的溶液，按生物樣本的處理方法至加入

7、0.5ml血清起依法測(cè)定之。以As(樣品峰面積)/Ai(內(nèi)標(biāo)峰面積)對(duì)濃度C回歸，得回歸方程：Y=0.492X+2.186×10-3，r=0.9919?；厥章蕿?6.38±3.31%；日內(nèi)、日間RSD分別為4.05%和5.02%。1.6試驗(yàn)方法10名受試者實(shí)驗(yàn)前15d未服過任何藥物，受試前12h內(nèi)禁食，當(dāng)日早晨空腹，隨機(jī)分成2組：5人分別口服供試品片劑各500mg，另5人分別口服對(duì)照品各500mg。給藥后3h按統(tǒng)一食譜進(jìn)餐，試驗(yàn)期間飲水自便。受試者接受交叉給藥供試品和對(duì)照品各一次，間隔7d。服藥后分別于0，0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.0，9.0，12

8、.0，24.0h抽取靜脈血，室溫(約15)放置1h，3000r.min-1離心15min，分離出血清，-20冰箱保存?zhèn)錅y(cè)。1.7研究數(shù)據(jù)處理根據(jù)藥時(shí)曲線，用3P87軟件在計(jì)算機(jī)上進(jìn)行了處理，經(jīng)F檢驗(yàn)，擬合優(yōu)度，結(jié)合AIC進(jìn)行判斷，用具有滯后時(shí)間的口服吸收二室開放模型自動(dòng)擬合，求算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。統(tǒng)計(jì)采用配對(duì)t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1單劑量口服鹽酸環(huán)丙沙星片劑500mg后，10名志愿者各時(shí)間點(diǎn)平均血清中鹽酸環(huán)丙沙星濃度見表1。表1口服500mg鹽酸環(huán)丙沙星片后平均血藥濃度(±s，n=10)時(shí)間(h)供試品組血藥濃度(g.ml-1)±s對(duì)照品組血藥濃度(g.ml-1)±s0.5

9、2.742±0.3652.444±0.2861.05.818±0.7655.158±0.5561.57.121±0.6497.102±0.4332.05.341±0.3974.503±0.3143.03.346±0.3983.475±0.1574.01.785±0.3121.884±0.1996.00.653±0.0600.670±0.0119.00.180±0.0180.225±0.05312.00.109±0.0130.1

10、19±0.03424.00.016±0.0030.015±0.0052.2鹽酸環(huán)丙沙星片劑藥動(dòng)學(xué)特性及供試品相對(duì)生物利用度見表2。2.2.1口服供試品片劑及對(duì)照品片劑后，吸收迅速，吸收半衰期分別為0.9±0.1h與1.0±0.1h；吸收滯后時(shí)間分別為0.33±0.01h和0.33±0.02h;Tmax分別為1.3±0.1h與1.3±0.1h，Cmax分別為6.4±0.6g.ml-1與5.9±0.4g.ml-1；表觀分布容積分別為38.4±5.0L與42.7±3.1L

11、；消除半衰期分別為4.7±0.5h和4.4±0.5h；藥物血漿清除率分別為25.7±2.2L.h-1與26.1±1.5L.h-1。以上參數(shù)均經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，P0.05，兩者之間差異均無顯著性，并與文獻(xiàn)報(bào)道3，4相一致。 表2口服鹽酸環(huán)丙沙星片后平均藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(±s，n=10)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)供試品片±s對(duì)照品片±sKa(h-1)0.5±0.10.5±0.1LagTime(h)0.33±0.010.33±0.02K10(h-1)0.7±0.10.6±0.1K12(h-1)0.

12、08±0.020.09±0.03K21(h-1)0.17±0.020.19±0.03T1/2(h)0.9±0.11.0±0.1T1/2(h)4.7±0.54.4±0.5Tmax(h)1.3±0.11.3±0.1Cmax(mg.ml-1)6.4±0.65.9±0.4V/F(L)38.4±5.042.7±3.1AUC(g.h-1.ml-1)19.9±1.819.2±1.1Cl/F(L.h-1)25.7±2.226.1±1

13、.5F(%)103.3±4.8%(99.6±4.6%，校正后)2.2.2生物利用度供試品與對(duì)照品的AUC(024h)分別為19.9±1.8g.h-1.ml-1與19.2±1.1g.h-1.ml-1，口服供試品片劑與對(duì)照品片劑的相對(duì)生物利用度為103.3±4.8%(經(jīng)含量校正后為99.6±4.6%)。 3討論鹽酸環(huán)丙沙星的血藥濃度HPLC測(cè)定通常用熒光檢測(cè)器檢測(cè)，結(jié)果基線易漂移，理論塔板數(shù)也不高。本實(shí)驗(yàn)建立了靈敏度較高且穩(wěn)定性好的紫外檢測(cè)方法，該法回收率高，日內(nèi)、日間變異系數(shù)小，理論塔板數(shù)也較高，適用于鹽酸環(huán)丙沙星的藥動(dòng)學(xué)過程檢測(cè)要求。

14、10例健康志愿者交叉口服鹽酸環(huán)丙沙星供試品或?qū)φ掌菲瑒┖蟮乃?時(shí)曲線符合二房室開放式模型，實(shí)測(cè)血清藥物濃度-時(shí)間曲線與理論曲線基本重合。從藥-時(shí)曲線看，其血藥濃度較高，對(duì)全身組織細(xì)菌感染能起良好的治療作用。供試品和對(duì)照品片劑在體內(nèi)吸收迅速，盡管有一個(gè)很短的吸收遲滯時(shí)間，但達(dá)峰時(shí)間仍很短，所有藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)差異均無顯著性，說明兩者體內(nèi)過程相似，人體生物利用度等效。作者單位：周秦秦傅穎君況榮華戴群熊玉卿江西醫(yī)學(xué)院衛(wèi)生部臨床藥理基地南昌330006參考文獻(xiàn)1Campoli-Richards DM, Mond JP,Price A,Benfield P.Ciprofloxacin a revie w of its antibacterial activity pharmacokinetic properties and therapeutic use. Drugs,1988,35:3732張萬(wàn)革.環(huán)丙氟哌酸的作用特點(diǎn)及臨床評(píng)價(jià).中國(guó)藥學(xué)雜志，1992，27：2973Tom Bergan.Pharmacokinetics of ciprofloxacin intrarenous and increasin g oral doses. The