超高倍顯微診斷儀在亞健康診斷中的應(yīng)用研究

1、超高倍顯微診斷儀在亞健康診斷中的應(yīng)用研究            【關(guān)鍵詞】  儀在亞健康         【摘要】 目的 探討超高倍顯微診斷儀（THMMDI）在亞健康診斷中的應(yīng)用價值，建立HLB血檢對亞健康診斷的方法和標準。方法 585名普通行政人員和120名飛行員，取小指尖血制成血涂片，使用THMMDI進行檢測分析。所得結(jié)果與臨床檢查結(jié)果進行對比，以評價符合率。并以飛行員作為HLB血檢

2、的健康標準。結(jié)果 HLB血檢與臨床檢查結(jié)果大部分疾病符合率較高，脊柱系統(tǒng)疾病最高達90.5%，腫瘤、關(guān)節(jié)疾病、胃部疾病、心血管疾病、脂肪肝等也達85%以上，但個別疾病如結(jié)石等符合率較低，需進一步跟蹤。結(jié)論 HLB血檢對于評價個體的健康狀況有較高價值，是一種快捷、比較準確、客觀的早期發(fā)現(xiàn)人體機能異常的手段，它為進一步進行臨床檢查提供了線索。關(guān)鍵詞 顯微術(shù) 健康 診斷 HLB血檢    The study on evaluation of human sub-health status by using Hua  multimedia computing m

3、icroscopy diagnostic instrument （THMMDI）examination     Zhang Yange，Wu Liuxin，Sun Xuelei，et al.     Institute of Aviation Medicine，AF.Beijng100036.     【Abstract】 Objective To explore the accuracy of THMMDI diagnosis with clinical physical examination，and

4、 establish the method and standard of diagnose for sub-health by HLB blood test.Methods Blood samples of585ordinary people and120pilots from tip of small fingers were examined with THMMDI.Diagnostic results of THMMDI were compared with those of routine clinical physical examination.The result of The

5、 HLB blood test of pilots was regarded as the health standard.Results General diagnosed coincidences rates were more than85%，few diseases were low，it is necessary to follow up.Conclusion It is valuable to evaluate the health status for THMMDI.It might be an accurate，rapid，objective and convenient me

6、ans for HLB bloodtest.    Key words microscopy health diagnosis HLB blood test       亞健康是20世紀80年代末期提出的醫(yī)學(xué)新理念，是指介于健康與疾病之間的邊緣狀態(tài)。按照世界衛(wèi)生組織對健康的定義，“亞健康”的含義應(yīng)為軀體、心理社會和環(huán)境方面處于欠完滿狀態(tài)，即疾病前狀態(tài)。若及時采取措施干預(yù)，即可阻止其向疾病狀態(tài)發(fā)展。因此，及時鑒別亞健康狀態(tài)或疾病早期是非常重要的。關(guān)于亞健康的檢查及診斷目前尚無統(tǒng)一的方法及標準。美國學(xué)者布萊福德（Rob

7、ert W.Braford）研究出一套多媒體超高倍顯微分析診斷系統(tǒng)，也稱布氏顯微鏡。根據(jù)氧化自由基理論及凝血機制，ROS（reactive oxygen otoxic specis）或相關(guān)產(chǎn)物引起的病變最終在所有的疾病狀態(tài)和代謝紊亂中都起了作用 1  。由于過剩的自由基改變了正常的凝血通路，使得病理變化在凝血片上反應(yīng)出來，通過這種特殊顯微鏡，識別出凝血片中的自由基代謝產(chǎn)物，以此來判定人體的健康狀況。布拉德確定了這類生化作用引起的特殊生物標志物，在血中留下特殊的標志，通過顯微鏡被觀察到，他將此檢查方法命名為HLB血檢（Heitan-Lagard-Bradford Blood Test）

8、 2  。因此，通過HLB血檢，可根據(jù)血中ROS的分布來診斷和監(jiān)測人體的功能障礙和病理狀態(tài)。    這項技術(shù)為醫(yī)學(xué)界開辟了新的未知領(lǐng)域，被譽為“顯微技術(shù)領(lǐng)域中里程碑式的突破”和“21世紀醫(yī)學(xué)的聽診器”。以全息胚理論、自由基理論和細胞學(xué)理論為基礎(chǔ)，只取指尖一滴血，通過對血細胞形態(tài)、部分代謝產(chǎn)物識別，而對人體病理生理功能及亞健康狀態(tài)做出評估。我們使用清華大學(xué)改進的布氏顯微鏡（THMMDI）對飛行員和普通人群進行了亞健康檢查，并與臨床檢查結(jié)果進行對比。旨在建立一套診斷亞健康狀態(tài)的方法和標準。    1 資料與方法 

9、60;  1.1 一般資料 飛行員120名，均為男性，年齡2353歲，平均年齡33歲。飛行時間3002000h，平均飛行時間1291h。普通人群為行政人員和科研干部，585名，男325名，女260名，年齡3560歲，平均年齡45歲。    1.2 儀器 多媒體超高倍顯微分析儀（清華同方研制）。    1.3 方法 用采血筆快速刺入右手小指尖，輕輕擠出一小滴，于玻片的重量接觸皮膚，順序采取6滴血液于玻片上。將標本置于無空氣污染處干燥35min，再輕輕擠一滴血，立即用蓋玻片蓋上血滴，輕壓使之完全散開，以備作活血觀察。然后，用相差

10、光或暗視野鏡下觀察標本。用DIN20鏡頭觀察凝血片。以THMMDI儀器的診斷方法對每位受試者作出健康狀態(tài)的描述，與受試者主訴及臨床檢查結(jié)果作對比。檢查內(nèi)容包括:脊柱系統(tǒng)疾病、頭頸部疾病、胃部疾病、心血管疾病、脂肪肝、泌尿生殖系統(tǒng)疾病、關(guān)節(jié)疾病、結(jié)石及腫瘤等，其中30名檢查了血甘油三酯和膽固醇，并與鏡下乳糜微粒的數(shù)量進行了對比。HMMDI檢查與臨床檢查均為陽性為符合。受試者都接受病史調(diào)查及臨床全面體檢。    2 結(jié)果    2.1 健康飛行員HLB檢查結(jié)果 由于飛行員都是經(jīng)全面體檢，健康狀況較好的人群，故以此做為健康人的HLB血液檢查

11、標準。    2.1.1 活血片檢查結(jié)果 在20000倍顯微鏡下，觀察到的RBC，為雙凹圓盤狀，單個游離狀態(tài)，WBC可看到中性粒細胞、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞，單核細胞，及血小板。見不到跳動的乳糜微粒及膽固醇結(jié)晶。    2.1.2 凝血片檢查結(jié)果 健康飛行員的凝血片為連接致密的纖維蛋白網(wǎng)之間的紅細胞團。以此做為健康人的HLB血檢標準。根據(jù)Braford的描述，將其定為0級。    2.1.3 標準為0級，飛行人員健康的評估 飛行員0級比例為84.2%（101/120），表現(xiàn)為連接致密的纖維蛋

12、白網(wǎng)之間的紅細胞團，見不到白色的ROS。見圖1，圖2。    2.2 普通人群HLB檢查結(jié)果    2.2.1 活血片檢查結(jié)果 在血粘稠度高的人中，可見到紅細胞呈緡錢狀排列，在血脂增高（甘油三酯或膽固醇）的人群中可見到跳動的乳糜微粒。一般情況下，空腹、血脂正常時，活血片中，鏡下見不到乳糜微粒。但并不是絕對的，與前一天晚餐的脂肪含量有關(guān)。在鏡下見到數(shù)量不等的乳糜微粒的人群中，有65%甘油三酯增高;21%甘油三酯屬正常高限（1.51.7mmol/l）;14%血脂正常。我們將鏡下乳糜微粒的數(shù)量與血中甘油三酯和膽固醇的含量進行了相關(guān)性分析，相

13、關(guān)系數(shù)分別為0.2和0.19，P>0.05無統(tǒng)計學(xué)意義。即無法根據(jù)鏡下乳糜微粒的數(shù)量評估血甘油三酯和膽固醇的含量。但在其中12名受試者中，乳糜微粒每5個視野平均810個以上時，血脂>1.9mmol/L。    2.2.2 健康人的比例 以凝血片0級為健康標準，在585 名受試者中，有39名符合健康人的標準，占6.7%，將過敏體質(zhì)這一項未歸為亞健康。    2.2.3 各項陽性指征的診斷符合率 以THMMDI診斷結(jié)果與受試者主訴及臨床檢查結(jié)果進行比較。兩者都判為陽性者為符合。見表1。圖1 健康人的凝血圖  

14、;  圖2 健康人的纖維蛋白網(wǎng)，連接致密    表1 HLB血檢與臨床檢查結(jié)果的符合率（略）        注:表中符合率=THMMDI與主訴及臨床檢查均為陽性人數(shù)/THMMDI陽性人數(shù)    2.2.4 在THMMDI檢查中發(fā)現(xiàn)的有價值的病例 病例A，該受試者16滴干血片為廣泛分布的大塊活性氧毒性物（ROS，reactive oxygen species）。做超聲檢查后證實，為雙側(cè)腎臟萎縮（圖3）。病例B，該受試者16滴干血片中央?yún)^(qū)可見2個較大ROS，并

15、有內(nèi)容物。臨床確診為子宮頸癌，（圖4）。發(fā)現(xiàn)3例ROS偏位，臨床確診為乳腺腺瘤。1例中央?yún)^(qū)36滴較大ROS，臨床確診子宮腫瘤。    2.2.5 根據(jù)ROTS的數(shù)量將干血片分級 分為健康型（0 級），標準為無ROS出現(xiàn)或偶見細小散在ROS。亞健康型（級），標準為紅細胞被10%20%的ROS取代;亞臨床型（級），標準為紅細胞被30%的ROS取代，建議做進一步臨床檢查;臨床型（級），標準為紅細胞被30%40%以上的ROS取代;必須做進一步臨床檢查。 圖3 該病例雙側(cè)腎臟萎縮，腎功異常圖4 子宮頸癌，中央?yún)^(qū)可見大塊ROTS，有內(nèi)含物   

16、3 討論    WHO的一項全球性調(diào)查表明:真正健康的人僅占5%，患有疾病的人占20%，而75%的人處于亞健康狀態(tài)。亞健康狀態(tài)的普遍存在，嚴重影響著人類的學(xué)習(xí)、工作效率，對社會整體的可持續(xù)發(fā)展起著不可忽視的內(nèi)在制約作用。因此，亞健康問題已成為受社會關(guān)注的的熱點之一。亞健康作為健康與疾病的中介狀態(tài)，具有可向疾病發(fā)展、又可向健康逆轉(zhuǎn)的雙向性，因此，對亞健康的診斷，及時采取干預(yù)措施，有助于個體向健康方向轉(zhuǎn)化，對阻止疾病的發(fā)生、發(fā)展是極其有價值的。但只根據(jù)臨床表現(xiàn)評價亞健康，缺少一定的客觀性，很難發(fā)現(xiàn)軀體內(nèi)潛在的疾病。HLB血檢查通過取自小指指尖的一滴血，對全身的健康狀況

17、進行評估，簡便易行。觀察分為兩部分，活血部分即在布氏顯微鏡下直接觀察血中各種細胞成分，觀察其形態(tài)、分布及白細胞活力，通過和臨床檢查結(jié)果對比，發(fā)現(xiàn)在普通人群中，比較有意義的亞健康指標為紅細胞呈緡錢狀排列，提示血粘稠度偏高。乳糜微粒每5個視野在56個以下時，我們將鏡下乳糜微粒的數(shù)量與血中甘油三酯和膽固醇的含量進行了相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)分別為0.2和0.19，P>0.05.無統(tǒng)計學(xué)意義。即無法根據(jù)鏡下乳糜微粒的數(shù)量評估血甘油三酯和膽固醇的含量，尤其是在60歲以上人群。但是，當(dāng)乳糜微粒每5個視野平均810個以上時，提示血脂一定是增高的。鏡下見到膽固醇結(jié)晶的臨床意義還不能確定，因為膽固醇結(jié)晶的數(shù)量

18、與快速血膽固醇檢測值相關(guān)性分析，無統(tǒng)計學(xué)意義。    凝血片檢查的理論基礎(chǔ)是自由基學(xué)說。這種學(xué)說認為，機體在代謝過程中不斷產(chǎn)生自由基，人體過剩的自由基會損傷細胞膜，進而損害細胞器，損傷細胞內(nèi)的遺傳基因，導(dǎo)致衰老與疾病 3  。例如，癌癥的發(fā)生是由于自由基攻擊基因，導(dǎo)致基因斷裂、重排和交聯(lián)，使得人體內(nèi)的原發(fā)癌基因大量復(fù)制成為癌變細胞。心腦血管疾病也是常見的自由基疾病，是由于體內(nèi)過剩的自由基攻擊細胞膜，使血小板凝集、紅細胞老化、血管內(nèi)皮細胞損傷，產(chǎn)生血栓、動脈粥樣硬化，進而形成心肌和腦組織缺血，即心腦血管疾病。布拉德根據(jù)氧化自由基理論，過剩的自由基改變了正常

19、的凝血通路，使得病理變化在凝血片上反應(yīng)出來，他將此檢查方法命名為HLB血檢（Heitan-Lagard-Bradford Blood Test）。事實上，血液凝固過程是要有許多凝血因子參加的極為復(fù)雜的    連鎖化學(xué)反應(yīng)?？偟慕Y(jié)果是使血液中的呈溶膠狀態(tài)的纖維 蛋白原變成凝固狀態(tài)的纖維蛋白。血液凝固過程可被描述為單位鏈的形成，纖維蛋白網(wǎng)的交叉連接，形成血凝塊。在單位鏈形成前，首先是纖維蛋白原的活化，通過各種凝血因子（XIII），導(dǎo)致纖維蛋白網(wǎng)的形成，導(dǎo)致血凝。當(dāng)血液凝固時，大多數(shù)因子被消耗，合成凝血塊。血液暴露在玻璃表面，活化了凝血的內(nèi)源通路，正常情況下，血凝塊在顯

20、微鏡下應(yīng)是交叉的顯微蛋白網(wǎng)間的血細胞團 2  。    在病理狀況下，由于氧自由基代謝過剩，產(chǎn)生半透明的纖維蛋白復(fù)合物，也就是我們所稱的活性氧毒性物（ROS）。ROS的沉積，代替了RBC及纖維蛋白網(wǎng)。ROS的形狀和程度提示特殊的病理變化。在治療有效后，凝血模式（clotting pattern）轉(zhuǎn)變?yōu)檎ＤＪ?。這些變化被認為是因為一種疾病狀態(tài)是由于血液成分的變化和凝血能力的變化。高凝和低凝狀態(tài)、過量的ROS產(chǎn)生及清除能力的下降，可在所有退化性疾病中見到。這些過程將無疑會導(dǎo)致正常血凝過程的改變和異常凝血模式的發(fā)展 4  。  

21、  在癌癥病人，通過ROS代謝標記可診斷和監(jiān)測癌癥病人的治療反應(yīng)。在癌癥病人，ROS大量的產(chǎn)生，同時身體內(nèi)源性清除酶（SOD）降低或消失，谷胱甘肽過氧化酶和過氧化氫酶在癌癥病人劇減，產(chǎn)生大量的過氧化氫，損害機體細胞和許多生物系統(tǒng)。過氧化氫的作用包括影響紅細胞的溶解、抑制硫氰酸酶和其它的酶、抑制免疫系統(tǒng)、改變胞膜、影響消化系統(tǒng)、改變機體代謝活動、抑制硫氰酸鹽的產(chǎn)生 5  。為什么血檢查對于監(jiān)測癌癥有價值?在代謝性疾病包括癌癥病人，其原發(fā)機制是唾液酸酶的活動，唾液酸酶直接對纖維蛋白原起作用，產(chǎn)生纖維蛋白單體，導(dǎo)致唾液酸的釋放。纖維蛋白單體的產(chǎn)生和唾液酸組成的糖蛋白，在癌細胞外形

22、成外衣。過氧化氫的過量產(chǎn)生，刺激唾液酸酶，導(dǎo)致唾液酸從纖維蛋白單體中清除。纖維蛋白原然后聚合，產(chǎn)生凝膠樣纖維蛋白復(fù)合物沉積（SFC or FCD，soluble fibrin complex deposits）。    在幾乎所有疾病中，都是由于ROS相關(guān)酶的缺乏或ROS的過量產(chǎn)生引起的ROS增加，生物機制為:過氧化氫刺激唾液酸酶，使唾液酸從纖維蛋白單體中清除，導(dǎo)致纖維蛋白原聚合，產(chǎn)生FCD。這是為什么在凝血片中可監(jiān)測各種代謝疾病中ROS的過量產(chǎn)生的理由。根據(jù)我們的結(jié)果，我們將凝血圖分為03級。0級為完好的凝血片，為健康型;1級，亞健康型，標準為紅細胞被10%的R

23、OS取代;亞臨床型（級），標準為紅細胞被20%的ROS取代，在此水平，如果FCD是惡性病變的結(jié)果，癌本身在臨床上可能并不會被檢測到。此指征可成為癌的早期預(yù)警系統(tǒng)，建議做進一步臨床檢查;臨床型（級），標準為紅細胞被30%以上的ROS取代;必須做進一步臨床檢查，將得到臨床證實。研究已顯示治療的介入可改變FCD，因此，HLB血檢對于監(jiān)測病情，藥物劑量是有價值的。德國已有學(xué)者使用掃描電鏡結(jié)合HLB血檢查揭示了FCD結(jié)構(gòu)的區(qū)別。清晰的區(qū)域和特殊的疾病有高度的相關(guān)性。提示對疾病有高度的預(yù)見性。HLB血檢查對于提示體內(nèi)的病理狀態(tài)是一個有價值的工具。通過指血的系列血滴，在干凈的玻片上，在顯微鏡下觀察。血滴的解

24、釋來自上萬例玻片的檢查。經(jīng)驗數(shù)據(jù)確定了凝血模式與不同疾病的相關(guān)性。通過廣泛的研究發(fā)現(xiàn)了不同的凝血模式和已確診疾病的密切關(guān)系。    另一個有價值的指征是凝血成分（纖維蛋白網(wǎng)），做為生物探針評價體內(nèi)代謝平衡狀態(tài)。纖維蛋白是被稱為纖維蛋白單體的蛋白單位的鏈，構(gòu)成這個鏈的單位形成于纖維蛋白原的活化，使其聚合成纖維蛋白。然而，纖維蛋白只代表凝血形成的第一階段。纖維蛋白鏈是可溶的，在濕的情況下（未完全凝集時），鏡下不能被識別。在第二階段，通過凝血因子XIII的作用，纖維蛋白鏈交叉形成硬凝（不可溶的）。大量的研究證明，ROS作用于因子XIII，抑制其活化 6  。先

25、天的因子XIII缺乏，極少見，而因子XIII的缺乏在各種疾病中較常見，源于活力的減低。包括癌，腎病、肝病、動脈粥樣硬化、胃炎和各種血液病。研究提示因子XIII的活力水平和疾病的嚴重程度相關(guān) 7  。這個結(jié)果符合前面提到的血中ROS的活動與疾病的進程有關(guān)。ROS抑制因子XIII的活化，抑制纖維蛋白網(wǎng)的產(chǎn)生，使得纖維蛋白網(wǎng)斷裂，在鏡下可觀察到。因此，通過一滴血，根據(jù)在HLB血檢鏡下觀察到的FCD和纖維蛋白網(wǎng)的情況，可評估個體的健康狀況。第三個理論根據(jù)是全息胚學(xué)說。生物體由處于不同發(fā)育階段的、具有不同特化程度的全息胚組成，其中發(fā)育程度較高的全息胚又由發(fā)育程度較低的全息胚組成。全息胚理論表明

26、機體的某一部分都具有整體的縮影，儲存著機體的全部信息，點滴血液同樣具有機體的信息相關(guān)性，這也源于我國傳統(tǒng)的中醫(yī)理論生物全息律。布氏以玻片上一滴血的中心劃分8個同心圓，每一區(qū)域代表人體不同系統(tǒng)或臟器。ROTS出現(xiàn)在某一區(qū)域，就表明相應(yīng)系統(tǒng)或臟器功能失調(diào)或病變。國內(nèi)也有學(xué)者應(yīng)用布氏顯微鏡對普通人群進行了亞健康研究 8  ，符合率和我們的結(jié)果相似。我們共做了120名飛行員和585名普通人群的HLB血檢，在檢查中發(fā)現(xiàn)了一些有價值的病例。有的符合率較高，有的符合率稍低，有些病例還需進一步跟蹤，以探索對疾病的預(yù)測準確性。飛行員是一特殊職業(yè)，經(jīng)嚴格的選拔，定期體檢，在臨床上是健 康的。由于常規(guī)的體

27、育鍛煉，合理的飲食結(jié)構(gòu)，盡管工作壓力比較大，但他們的健康狀況優(yōu)于普通人群。這點在我們的研究中也得到了很好的驗證。作者以飛行員群體作為健康人的HLB血檢標準，對于評估個體的健康狀況進行了有意義的探索。從我們的結(jié)果來看，HLB血檢根據(jù)ROS的量及纖維蛋白網(wǎng)連接的致密程度，對于評價人體的體質(zhì)及應(yīng)激能力有其特殊價值。它為進一步做臨床實驗室檢查提供了線索，是亞健康篩查比較有意義的一項特殊方法，值得深入進行研究。    參考文獻    1 Oxidology.The Study Reactive Oxygen Species（ROS）and Their Metabolism in Health and Disease，Bradford，RW，Allen，HW&Culbert ML，1985，Bradford Research Institute，Chula Vista，CA.Chem.Absts，103:69356.    2 Oxidology，Bradford R，Allen H Chula Vista，CA.Bradford Foundation.2nd Edition，June，1997.  &#