粉防己堿預(yù)處理減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷的機(jī)制研究

1、粉防己堿預(yù)處理減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷的機(jī)制研究 09-05-17 17:05:00 編輯：studa20 作者：劉忠民熊進(jìn)文林智敏徐振萍沈文律【摘要】 目的 研究粉防己堿(tetrandrine,TET)預(yù)處理對(duì)大鼠肝缺血再灌注損傷的預(yù)防作用及其機(jī)制。方法 大鼠肝臟左中葉缺血50 min，再灌注24 h后處死(I/R組)，TET+I/R組缺血前30 min腹腔注射TET(50 mg/kg)，余同I/R組。大鼠處死前采血檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT),天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST),乳酸脫氫酶(LDH),取缺血肝組織進(jìn)行超氧化物歧化酶(SOD),一氧化氮(NO)，丙二醛(MDA)，濕重干重(

2、W/D)比檢測(cè)和組織學(xué)檢查。結(jié)果 I/R組血清ALT,AST和LDH升高，組織MDA水平,W/D比值也明顯升高，SOD活性和NO含量下降。在TET+I/R組，血清ALT,AST,LDH，以及組織W/D比值較I/R組降低，SOD活性和NO含量升高。此外，TET+I/R組大鼠血清ALT,AST,組織MDA 和W/D比值較假手術(shù)組升高，SOD活性和NO含量降低.組織學(xué)檢查顯示TET+I/R組肝損害減輕。結(jié)論 TET能減輕但不能防止肝I/R損傷的發(fā)生，減少脂質(zhì)過(guò)氧化物產(chǎn)生是TET抗I/R損傷的原因之一。 【關(guān)鍵詞】粉防己堿；缺血再灌注；大鼠 【Abstract】 Objective The effec

3、t of tetrandrine(TET)pretreatment of Wistar rats subjected to warm hepatic ischemia/reperfusion(I/R)was investigated.Metheds After 50 minutes of ischemia in the left and median lobes of the liver and 24 hours of reperfusion(I/R group),the rats were killed.The TET+I/R group rats were pretreated with

4、TET(50 mg/kg body weight IP)30 minutes prior to the onset of ischemia.Blood samples were taken for measurement of alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST),and lactate dehydrogenase(LDH).Tissue was taken from the ischemic lobes for measurement of superoxide dismutase(SOD),malonyl

5、dialdehyde(MDA),and myeloperoxidase(MPO); determination of the wet/dry weight(W/D)ratio; and histologic studies.Results The results showed that ALT,AST,and LDH levels in serum were increased in the I/R group; tissue MDA generation,MPO activity,and the W/D ratio were also increased,accompanied by dec

6、reased SOD activity.The serum ALT,AST,and LDH levels,as well as the tissue MPO level and W/D ratio,were lower in the TET+I/R group than in the I/R group; and the SOD level was higher in the TET+IR group than in the I/R group.Moreover,the serum ALT and AST,tissue MDA,and W/D ratio in the TET+I/R grou

7、p were higher,and the SOD was lower than in the sham group.The histologic examination showed protection against liver damage in the TET+I/R group.Conclusion The results demonstrated that pretreatment with TET could somewhat protect the liver against I/R injury but does not prevent it.The simultaneou

8、s decrease of both lipid peroxide generation and polymorphonuclear neutrophil infiltration in the ischemic liver may explain the acquisition of tolerance following administration of TET. 【Key words】Tetrandrine; Ischemia reperfusion; Rat 粉防己堿(tetrandrine,TET)是千金藤屬防己科植物粉防己的主要活性成分，屬雙芐基異喹啉類。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)TET藥理

9、作用機(jī)制進(jìn)行了較為廣泛的研究，表明TET具有抗缺血再灌注損傷1-3，但其確切機(jī)制尚不清楚。本文在體內(nèi)研究TET對(duì)肝I/R損傷的保護(hù)作用，并探討其可能機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。 1 材料和方法 11 材料 雄性Wistar大鼠15只，體質(zhì)量180200 g，購(gòu)于山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)前自由進(jìn)食水。TET粉劑購(gòu)于江西彭澤制藥廠，純度98%。TET溶于1 N鹽酸，用5 N 的NaOH調(diào)整pH值至74，貯存濃度為10 mg/ml。 12 實(shí)驗(yàn)方案 大鼠術(shù)前禁食1夜，腹腔注射戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉，開(kāi)腹，游離肝臟左中葉肝動(dòng)脈和門靜脈分支，以無(wú)創(chuàng)傷微動(dòng)脈夾阻斷50 min。其余肝葉肝動(dòng)脈和門靜脈血液

10、供應(yīng)以及小腸靜脈不受影響，以防小腸靜脈壓升高。再灌注自移除血管夾開(kāi)始。切口分層縫合，皮下注射丁丙諾啡(02 mg/kg)止痛。TET+I/R組大鼠缺血前30 min腹腔注射TET(50 mg/kg)，假手術(shù)組和I/R組大鼠給予生理鹽水(5 ml/kg)。假手術(shù)組大鼠只開(kāi)腹進(jìn)行游離血管手術(shù)而不阻斷血管。再灌注后24 h處死大鼠，取血用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，乳酸脫氫酶(LDH)活性。同時(shí)取缺血肝組織兩塊，一塊用于檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)，一氧化氮(NO)以及丙二醛(MDA)含量，另一塊以10%福爾馬林固定行組織學(xué)檢查。 13 肝組織SO

11、D、NO和MDA檢測(cè) 肝組織SOD、NO和MDA檢測(cè)方法嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。 14 肝組織水含量測(cè)定 肝組織水含量以組織濕重干重(W/D)比表示。肝組織樣本稱重，然后85干燥48 h，比值以下列公式計(jì)算：(濕重-干重)/(干重)100%。 15 組織學(xué)檢查 福爾馬林固定的肝組織石蠟包埋，切片常規(guī)HE染色。觀察中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，并根據(jù)細(xì)胞腫脹、嗜酸性核包涵體、核固縮、細(xì)胞漿空泡形成、肝竇擴(kuò)張來(lái)判斷肝組織損傷程度。 16 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 結(jié)果以均值標(biāo)準(zhǔn)差(xs)表示。以t檢驗(yàn)分析組間差異，P005認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié)果 21 血清ALT、AST、LDH活性

12、 I/R組血清ALT為(1529987)IU/L，明顯高于假手術(shù)組(511)IU/L,P005。TET+I/R組ALT為(17756)IU/L，較I/R組降低(P005)，但仍高于假手術(shù)組(P001)。I/R組血清AST為(1858971)IU/L，高于假手術(shù)組(19824)IU/L,P001和TET+I/R組(511145 IU/L,P005)，且假手術(shù)組與TET+I/R組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)。 I/R組血清LDH為(2644732)IU/L，高于假手術(shù)組(1154366)IU/L,P001和TET+I/R組(1372702)IU/L,P005。以上結(jié)果顯示肝臟左中葉缺血50

13、 min、再灌注24 h后血清ALT、AST以及LDH活性明顯升高，缺血前30 min經(jīng)腹腔注射TET(50 mg/kg)預(yù)處理可減輕I/R損傷。 09-05-17 17:05:00 編輯：studa2022 MDA含量 與假手術(shù)組比較，I/R組和TET+I/R組大鼠MDA含量明顯升高(P005)。 TET+I/R組大鼠MDA含量低于I/R組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。 23 SOD活性 如表1所示，I/R組SOD活性明顯低于假手術(shù)組(P0001)，TET+I/R組SOD活性低于假手術(shù)組(P001)，但高于I/R組(P005)。 24 NO含量 如表1所示，I/R組NO含量明顯低于假手術(shù)組(

14、P0001)和TET+I/R組(P001)，且TET+I/R組NO含量仍低于假手術(shù)組(P0001)。 25 組織水含量 如表1所示，I/R組W/D比值高于假手術(shù)組(P0001)和TET+I/R組(P001)，且TET+I/R組W/D比值也高于假手術(shù)組(P005)。 26 組織學(xué)檢查 假手術(shù)組無(wú)明顯組織學(xué)病變，I/R組肝組織有明顯中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),灶性肝細(xì)胞壞死和水腫，TET+I/R組大鼠可見(jiàn)肝竇淤血和細(xì)胞漿空泡形成，但程度明顯低于I/R組。 3 討論 本研究顯示缺血50 min、再灌注24 h后大鼠肝損害嚴(yán)重，TET可減輕肝I/R損傷，表現(xiàn)為肝功能改善(血清ALT,AST和LDH活性降低)，組織

15、學(xué)改變(含水量減少，損害程度減輕)。 肝臟I/R損傷是臨床常見(jiàn)的現(xiàn)象，在肝臟功能衰竭或多系統(tǒng)器官功能衰竭的發(fā)病中具有重要作用，但其具體的作用機(jī)制還不十分明確。在引發(fā)I/R損傷的眾多因素中，氧自由基(oxygen free radicals,OFR)的產(chǎn)生是重要原因之一4-7。臨床及實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明肝臟I/R損傷與OFR介導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)。脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程可通過(guò)其副產(chǎn)物(主要是MDA)而測(cè)定，同時(shí)內(nèi)源性抗氧化酶如SOD可保護(hù)組織免受I/R損傷，其含量或活性在I/R時(shí)下降。應(yīng)用自由基清除劑或I/R 前的預(yù)處理能明顯減輕OFR導(dǎo)致的肝臟損傷4-7。 既往研究表明TET抑制OFR的產(chǎn)生或活性，并且TET的

16、抗氧化作用對(duì)心肌、肝臟的I/R損傷都具有保護(hù)作用1-3。在本研究中，I/R后MDA產(chǎn)生明顯增加，SOD活性降低，肝細(xì)胞水腫和壞死，血清ALT、AST和LDH活性明顯升高。這些結(jié)果支持脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程I/R導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷的設(shè)想。TET能降低血清MDA，升高SOD活性，表明TET能通過(guò)抑制導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化而保護(hù)肝臟免受I/R損傷。 總之，大鼠肝缺血前的TET預(yù)處理對(duì)肝臟的I/R損傷具有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)。TET可用于預(yù)防和治療I/R損傷。 參考文獻(xiàn) 1 Shen YC,Chen CF,Sung YJ.Tetrandrine ameliorates ischaemia-repe

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