粉防己堿預處理減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷的機制研究

1、粉防己堿預處理減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷的機制研究 09-05-17 17:05:00 編輯：studa20 作者：劉忠民熊進文林智敏徐振萍沈文律【摘要】 目的 研究粉防己堿(tetrandrine,TET)預處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的預防作用及其機制。方法 大鼠肝臟左中葉缺血50 min，再灌注24 h后處死(I/R組)，TET+I/R組缺血前30 min腹腔注射TET(50 mg/kg)，余同I/R組。大鼠處死前采血檢測丙氨酸氨基轉移酶(ALT),天門冬氨酸氨基轉移酶(AST),乳酸脫氫酶(LDH),取缺血肝組織進行超氧化物歧化酶(SOD),一氧化氮(NO)，丙二醛(MDA)，濕重干重(

2、W/D)比檢測和組織學檢查。結果 I/R組血清ALT,AST和LDH升高，組織MDA水平,W/D比值也明顯升高，SOD活性和NO含量下降。在TET+I/R組，血清ALT,AST,LDH，以及組織W/D比值較I/R組降低，SOD活性和NO含量升高。此外，TET+I/R組大鼠血清ALT,AST,組織MDA 和W/D比值較假手術組升高，SOD活性和NO含量降低.組織學檢查顯示TET+I/R組肝損害減輕。結論 TET能減輕但不能防止肝I/R損傷的發(fā)生，減少脂質過氧化物產(chǎn)生是TET抗I/R損傷的原因之一。 【關鍵詞】粉防己堿；缺血再灌注；大鼠 【Abstract】 Objective The effec

3、t of tetrandrine(TET)pretreatment of Wistar rats subjected to warm hepatic ischemia/reperfusion(I/R)was investigated.Metheds After 50 minutes of ischemia in the left and median lobes of the liver and 24 hours of reperfusion(I/R group),the rats were killed.The TET+I/R group rats were pretreated with

4、TET(50 mg/kg body weight IP)30 minutes prior to the onset of ischemia.Blood samples were taken for measurement of alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST),and lactate dehydrogenase(LDH).Tissue was taken from the ischemic lobes for measurement of superoxide dismutase(SOD),malonyl

5、dialdehyde(MDA),and myeloperoxidase(MPO); determination of the wet/dry weight(W/D)ratio; and histologic studies.Results The results showed that ALT,AST,and LDH levels in serum were increased in the I/R group; tissue MDA generation,MPO activity,and the W/D ratio were also increased,accompanied by dec

6、reased SOD activity.The serum ALT,AST,and LDH levels,as well as the tissue MPO level and W/D ratio,were lower in the TET+I/R group than in the I/R group; and the SOD level was higher in the TET+IR group than in the I/R group.Moreover,the serum ALT and AST,tissue MDA,and W/D ratio in the TET+I/R grou

7、p were higher,and the SOD was lower than in the sham group.The histologic examination showed protection against liver damage in the TET+I/R group.Conclusion The results demonstrated that pretreatment with TET could somewhat protect the liver against I/R injury but does not prevent it.The simultaneou

8、s decrease of both lipid peroxide generation and polymorphonuclear neutrophil infiltration in the ischemic liver may explain the acquisition of tolerance following administration of TET. 【Key words】Tetrandrine; Ischemia reperfusion; Rat 粉防己堿(tetrandrine,TET)是千金藤屬防己科植物粉防己的主要活性成分，屬雙芐基異喹啉類。近年來國內外對TET藥理

9、作用機制進行了較為廣泛的研究，表明TET具有抗缺血再灌注損傷1-3，但其確切機制尚不清楚。本文在體內研究TET對肝I/R損傷的保護作用，并探討其可能機制，現(xiàn)報告如下。 1 材料和方法 11 材料 雄性Wistar大鼠15只，體質量180200 g，購于山東省實驗動物中心。實驗前自由進食水。TET粉劑購于江西彭澤制藥廠，純度98%。TET溶于1 N鹽酸，用5 N 的NaOH調整pH值至74，貯存濃度為10 mg/ml。 12 實驗方案 大鼠術前禁食1夜，腹腔注射戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉，開腹，游離肝臟左中葉肝動脈和門靜脈分支，以無創(chuàng)傷微動脈夾阻斷50 min。其余肝葉肝動脈和門靜脈血液

10、供應以及小腸靜脈不受影響，以防小腸靜脈壓升高。再灌注自移除血管夾開始。切口分層縫合，皮下注射丁丙諾啡(02 mg/kg)止痛。TET+I/R組大鼠缺血前30 min腹腔注射TET(50 mg/kg)，假手術組和I/R組大鼠給予生理鹽水(5 ml/kg)。假手術組大鼠只開腹進行游離血管手術而不阻斷血管。再灌注后24 h處死大鼠，取血用全自動生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉移酶(ALT)，天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)，乳酸脫氫酶(LDH)活性。同時取缺血肝組織兩塊，一塊用于檢測超氧化物歧化酶(SOD)，一氧化氮(NO)以及丙二醛(MDA)含量，另一塊以10%福爾馬林固定行組織學檢查。 13 肝組織SO

11、D、NO和MDA檢測 肝組織SOD、NO和MDA檢測方法嚴格按試劑盒說明進行，試劑盒購于南京建成生物工程研究所。 14 肝組織水含量測定 肝組織水含量以組織濕重干重(W/D)比表示。肝組織樣本稱重，然后85干燥48 h，比值以下列公式計算：(濕重-干重)/(干重)100%。 15 組織學檢查 福爾馬林固定的肝組織石蠟包埋，切片常規(guī)HE染色。觀察中性粒細胞浸潤，并根據(jù)細胞腫脹、嗜酸性核包涵體、核固縮、細胞漿空泡形成、肝竇擴張來判斷肝組織損傷程度。 16 統(tǒng)計學方法 結果以均值標準差(xs)表示。以t檢驗分析組間差異，P005認為差異具有統(tǒng)計學意義。 2 結果 21 血清ALT、AST、LDH活性

12、 I/R組血清ALT為(1529987)IU/L，明顯高于假手術組(511)IU/L,P005。TET+I/R組ALT為(17756)IU/L，較I/R組降低(P005)，但仍高于假手術組(P001)。I/R組血清AST為(1858971)IU/L，高于假手術組(19824)IU/L,P001和TET+I/R組(511145 IU/L,P005)，且假手術組與TET+I/R組之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P001)。 I/R組血清LDH為(2644732)IU/L，高于假手術組(1154366)IU/L,P001和TET+I/R組(1372702)IU/L,P005。以上結果顯示肝臟左中葉缺血50

13、 min、再灌注24 h后血清ALT、AST以及LDH活性明顯升高，缺血前30 min經(jīng)腹腔注射TET(50 mg/kg)預處理可減輕I/R損傷。 09-05-17 17:05:00 編輯：studa2022 MDA含量 與假手術組比較，I/R組和TET+I/R組大鼠MDA含量明顯升高(P005)。 TET+I/R組大鼠MDA含量低于I/R組，但差異無統(tǒng)計學意義(表1)。 23 SOD活性 如表1所示，I/R組SOD活性明顯低于假手術組(P0001)，TET+I/R組SOD活性低于假手術組(P001)，但高于I/R組(P005)。 24 NO含量 如表1所示，I/R組NO含量明顯低于假手術組(

14、P0001)和TET+I/R組(P001)，且TET+I/R組NO含量仍低于假手術組(P0001)。 25 組織水含量 如表1所示，I/R組W/D比值高于假手術組(P0001)和TET+I/R組(P001)，且TET+I/R組W/D比值也高于假手術組(P005)。 26 組織學檢查 假手術組無明顯組織學病變，I/R組肝組織有明顯中性粒細胞浸潤,灶性肝細胞壞死和水腫，TET+I/R組大鼠可見肝竇淤血和細胞漿空泡形成，但程度明顯低于I/R組。 3 討論 本研究顯示缺血50 min、再灌注24 h后大鼠肝損害嚴重，TET可減輕肝I/R損傷，表現(xiàn)為肝功能改善(血清ALT,AST和LDH活性降低)，組織

15、學改變(含水量減少，損害程度減輕)。 肝臟I/R損傷是臨床常見的現(xiàn)象，在肝臟功能衰竭或多系統(tǒng)器官功能衰竭的發(fā)病中具有重要作用，但其具體的作用機制還不十分明確。在引發(fā)I/R損傷的眾多因素中，氧自由基(oxygen free radicals,OFR)的產(chǎn)生是重要原因之一4-7。臨床及實驗證據(jù)表明肝臟I/R損傷與OFR介導的脂質過氧化有關。脂質過氧化過程可通過其副產(chǎn)物(主要是MDA)而測定，同時內源性抗氧化酶如SOD可保護組織免受I/R損傷，其含量或活性在I/R時下降。應用自由基清除劑或I/R 前的預處理能明顯減輕OFR導致的肝臟損傷4-7。 既往研究表明TET抑制OFR的產(chǎn)生或活性，并且TET的

16、抗氧化作用對心肌、肝臟的I/R損傷都具有保護作用1-3。在本研究中，I/R后MDA產(chǎn)生明顯增加，SOD活性降低，肝細胞水腫和壞死，血清ALT、AST和LDH活性明顯升高。這些結果支持脂質過氧化過程I/R導致肝細胞損傷的設想。TET能降低血清MDA，升高SOD活性，表明TET能通過抑制導脂質過氧化而保護肝臟免受I/R損傷。 總之，大鼠肝缺血前的TET預處理對肝臟的I/R損傷具有明顯的保護作用，其機制可能與抑制脂質過氧化有關。TET可用于預防和治療I/R損傷。 參考文獻 1 Shen YC,Chen CF,Sung YJ.Tetrandrine ameliorates ischaemia-repe

17、rfusion injury of rat myocardium through inhibition of neutrophil priming and activation.Br J Pharmacol,1999，128(7):1593-1601. 2 Yu XC,Wu S,Wang GY,et al.Cardiac effects of the extract and active components of radix stephaniae tetrandrae.II.Myocardial infarct,arrhythmias,coronary arterial flow and h

18、eart rate in the isolated perfused rat heart.Life Sci,2001，68(25):2863-2872. 3 曾荻洵,趙明,劉衛(wèi)東,等.粉防己堿對大鼠肝臟缺血和再灌注損傷的防護作用.中華創(chuàng)傷雜志,2000，16(6):367-370. 4 Giakoustidis D,Papageorgiou G,Iliadis S,et al.Intramuscular administration of very high dose of -tocopherol protects liver from severe ischemia/reperfusion injury.World J Surg,2002，26:872-877. 5 Peralta C,Bulbena O,Xaus CP,et al.Ischemic preconditioning:a defense mechanism against the reactive oxygen species generated after hepatic ischemia reperfusion.Transplantation,2