巴西蜂膠最佳提取工藝研究

1、巴西蜂膠最佳提取工藝研究                       作者：付梅紅，方婧，王祝舉，唐力英【摘要】  目的建立巴西蜂膠最佳提取工藝。方法進行了不同提取溶劑、不同提取時間、不同提取溫度、不同料液比、不同提取次數(shù)的考察，以總黃酮為檢測指標，優(yōu)選提取工藝。結(jié)果最佳提取工藝為：加入蜂膠量40倍的80%乙醇，40提取4 h，提取兩次。結(jié)論該提取工藝合理、

2、可行。 【關鍵詞】  巴西蜂膠； 提取工藝； 總黃酮Abstract:ObjectiveTo study the extraction method of total flavonoids in Brazilian propolis.MethodsWith the content of the total flavonoids as the index, the effect of ethanol concentration, extraction time, extraction temperature and solvent quantity on recovery rate o

3、f total flavonoids was studied.ResultsThe best extraction condition was :adding 40 fold 80% ethanol, the temperature of circumfluence was 40 and the time of extraction was 4 h.ConclusionThis extraction method is convenient and feasible.Key words:Brazilian propolis;  Preparative technique; 

4、 Total flavonoids    蜂膠為蜂的干燥分泌物。論文論文參考網(wǎng)具有抗菌消炎、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、加速組織愈合等功效1。蜂膠成分比較復雜，其中有黃酮類化合物，以及多種氨基酸、脂肪酸、酶類、維生素、微量元素等成分，黃酮類化合物是蜂膠中的主要活性成分。因此在提取工藝的研究中，選擇以總黃酮（以蘆丁計）為定量指標，優(yōu)選蜂膠提取工藝條件。目前文獻報道均為國產(chǎn)蜂膠最佳提取工藝研究，未見產(chǎn)地為巴西的蜂膠最佳提取工藝研究。因此筆者對巴西地產(chǎn)蜂膠原料的最佳提取工藝進行了如下研究。1  材料與儀器1.1  材料藥材，產(chǎn)于巴西，由北京伊瓜蘇國際投資咨詢有

5、限公司提供。對照品，蘆丁購自中國藥品生物制品檢定所（0080-9705）。聚酰胺粉（100-200目），水為去離子重蒸水，試劑均為分析純。1.2 儀器紫外-可見分光光度儀（Agilent 8453E）。超聲波清洗器（功率150W，頻率20kHz）。2  方法2.1  方法的建立 采用可見-紫外分光光度儀測定總黃酮（以蘆丁計）含量2。2.1.1  對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得。2.1.2  供試品溶液的制備 取本品粉末（過三號篩）約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，

6、精密加入80%乙醇10 ml，40溫浸4 h，取出，放冷，搖勻，濾過，重復提取1次。合并濾液，精密量取續(xù)濾液1ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，拌勻，于水浴上揮干溶劑，轉(zhuǎn)入層析柱。先用20 ml苯洗，棄去苯液，然后用甲醇洗脫，定容至25 ml。搖勻，即得。2.1.3  測定 分別取對照品溶液和供試品溶液，于波長360 nm測定吸收值。以蘆丁為標準品測定標準曲線，求回歸方程，計算供試品中總黃酮含量。2.2  提取工藝的考察2.2.1  線性關系考察精密吸取濃度為0.5 mg/ml的蘆丁對照品溶液1，2，3，4，5 ml于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，

7、搖勻，轉(zhuǎn)入比色管中，于波長360 nm比色。結(jié)果表明，蘆丁在0.050.25 mg之間呈良好的線性關系，r=0.999 2。見表1及圖1。表1  蘆丁線性關系考察溶質(zhì)量m/mg吸光度（略）2.2.2 不同濃度乙醇的考察取本品粉末（過3號篩）約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入不同濃度的乙醇25 ml，超聲處理30 min，取出，放冷，搖勻，濾過。精密量續(xù)濾液1 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，拌勻，于水浴上揮干溶劑，轉(zhuǎn)入層析柱。先用20 ml苯洗，棄去苯液，然后用甲醇洗脫，定容至25ml。搖勻，于波長360 nm測定吸收值，以回歸方程計算供試品中總黃酮含量。結(jié)果見

8、表2及圖2。同時測定了各個樣品的出膏率。結(jié)果見表3及圖3。表2  不同濃度乙醇考察（略）表3  不同濃度乙醇出膏率考察樣品號干膏重/g出膏率（）論文參考網(wǎng)    結(jié)果顯示，隨著乙醇濃度的增加總黃酮百分含量也在逐漸升高，在濃度到達70%后趨于平穩(wěn)。出膏率則是在乙醇濃度到達80%后最高，而后呈下降趨勢。因此選定80%乙醇為提取溶劑。2.2.3  不同提取時間的考察取本品粉末（過3號篩）約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%乙醇25 ml，室溫浸泡不同的時間，取出，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液1 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰

9、胺粉吸附，拌勻，于水浴上揮干溶劑，轉(zhuǎn)入層析柱。先用20 ml苯洗，棄去苯液，然后用甲醇洗脫，定容至25ml。搖勻，于波長360 nm測定吸收值，以回歸方程計算供試品中總黃酮含量。結(jié)果見表4及圖4。同時測定了各個樣品的出膏率。結(jié)果見表5及圖5。表4  不同提取時間考察提取時間（略）表5  不同提取時間出膏率考察提取時間t/h干膏重m/g出膏率（略）    結(jié)果顯示，蜂膠在提取2 h后已提取完全，而出膏率4 h高于2 h，故選擇提取時間為4 h。2.2.4  不同提取溫度的考察取本品粉末（過3號篩）約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中

10、，精密加入80%乙醇25 ml，不同的溫度下提取4 h，取出，放冷，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液1 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，拌勻，于水浴上揮干溶劑，轉(zhuǎn)入層析柱。先用20 ml苯洗，棄去苯液，然后用甲醇洗脫，定容至25 ml。搖勻，于波長360 nm測定吸收值，以回歸方程計算供試品中總黃酮含量。結(jié)果見表6及圖6。同時測定了各個樣品的出膏率。結(jié)果見表7及圖7。表6  不同提取溫度的考察（略）表7  不同提取溫度出膏率（略）    結(jié)果顯示，隨著溫度的升高總黃酮的百分含量先升高，后降低，在40達到最大。而出膏率則隨著溫度的升高逐漸增加，這

11、可能是由于隨著溫度的升高，蜂膠中其他物質(zhì)的溶出量不斷增加，導致出膏率增加而總黃酮提取量減少。因此提取溫度選擇在40為宜。2.2.5 不同料液比的考察取本品粉末（過3號篩）約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入不同量的80%乙醇，40下提取4 h，取出，放冷，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液1 ml于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，拌勻，于水浴上揮干溶劑，轉(zhuǎn)入層析柱。先用20 ml苯洗，棄去苯液，然后用甲醇洗脫，定容。搖勻，于波長360 nm測定吸收值，以回歸方程計算供試品中總黃酮含量。結(jié)果見表8及圖8。同時測定了各個樣品的出膏率。結(jié)果見表9及圖9。表8  不同料液比的考察（略）

12、表9  不同料液比出膏率（略）結(jié)果顯示，隨著料液比的增加總黃酮的百分含量在40倍量時達到最高。因此選定溶劑為原料量40倍的比例為最佳。2.2.6 不同提取次數(shù)的考察取本品粉末（過3號篩）約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40倍量的80%乙醇，40下提取4 h，分別提取3次，取出，放冷，搖勻，濾過。測定了各個樣品的出膏率。結(jié)果見表10及圖10。表10  不同提取次數(shù)出膏率（略）結(jié)果顯示，提取兩次后已基本提取完全，因此選擇提取兩次為宜。3  討論    通過對不同濃度的乙醇、不同提取時間、不同提取溫度、不同料液比以及提取次數(shù)的考察研究，由結(jié)果可見，蜂膠在提取2 h后已提取完全，而4 h出膏率高于2 h出膏率，因此我們確定了產(chǎn)地巴西的蜂膠最佳提取工藝為加入原料藥40倍的80%乙醇，40提取4 h，提取兩次，此時總黃酮百分含量（以蘆丁計）為46.40%，出膏率為60.25%。    蜂膠提取工藝研究文獻報道均為國產(chǎn)蜂膠，未見巴西