含羞草石蠟切片的制作

1、含羞草(Mimosa pudica L.,又稱“知羞草”,屬于豆科植物,具二回羽狀復(fù)葉,掌狀排列,總柄很長(zhǎng),基部膨大成葉枕,受到觸動(dòng)即閉合下垂。全株生有茸毛及銳刺,盛夏以后開(kāi)花,粉紅色的頭狀花序像一團(tuán)團(tuán)小絨球。萼鐘狀,有8個(gè)小齒,花瓣4個(gè),雄蕊4個(gè)。莢果25節(jié),每節(jié)含一粒種子。含羞草原產(chǎn)美洲,現(xiàn)已歸化于熱帶各地,是我國(guó)廣東常見(jiàn)的雜草。含羞草受到刺激時(shí)葉片便下垂,含羞草的這種敏感運(yùn)動(dòng)雖然是長(zhǎng)期的自然選擇下形成的保護(hù)反應(yīng),但引起了很多科學(xué)家的興趣。一些學(xué)者認(rèn)為是電刺激產(chǎn)生的動(dòng)作電位解說(shuō),另外一些研究者認(rèn)為是化學(xué)物質(zhì)所致,還有人研究認(rèn)為是其葉子的特殊結(jié)構(gòu)和功能所致,但至今未見(jiàn)進(jìn)一步的報(bào)道。筆者嘗試運(yùn)

2、用石蠟切片法觀察含羞草葉片的表面結(jié)構(gòu),以提供從解剖學(xué)上觀察和研究其結(jié)構(gòu)和產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)變化的理論基礎(chǔ)。1材料與方法1.1供試材料含羞草采自廣東省揭陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院苗圃;石蠟為上海標(biāo)本模型廠生產(chǎn),熔點(diǎn)為5456。1.2儀器與試劑主要儀器:旋轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)(浙江科迪儀器設(shè)備有限公司,KD-202恒溫箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司,GZX-9246 M BE水浴鍋(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司,X21FS1奧林巴斯光學(xué)顯微鏡(日本奧林巴斯公司等。主要試劑:冰醋酸、乙醇、二甲苯、番紅、固綠、加拿大樹(shù)膠等。1.3取材與固定FAA固定液的配制:3份無(wú)水乙醇+1份冰醋酸;取含羞草合并時(shí)的葉片,將其浸入到FAA固定液中,約30mi

3、n。1.4脫水與透明1.4.1脫水將固定液中的材料取出,用50%乙醇反復(fù)沖洗幾遍,然后轉(zhuǎn)入60%乙醇70%乙醇80%乙醇95%乙醇(95%乙醇(無(wú)水乙醇中脫水,在60%、70%、80%乙醇中脫水各30min,在95%乙醇和無(wú)水乙醇中脫水各5min。因?yàn)樵诟邼舛鹊娜芤褐?如果停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng),容易導(dǎo)致材料變硬。1.4.2透明脫水后的材料依次移入2/3無(wú)水乙醇+1/3二甲苯1/2無(wú)水乙醇+1/2二甲苯1/3無(wú)水乙醇+2/3二甲苯二甲苯(I二甲苯(II中透明,前3步各級(jí)停留30min,進(jìn)入純二甲苯時(shí)停留10min,以防時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致材料收縮或變脆。在進(jìn)入純二甲苯中時(shí),若材料周圍出現(xiàn)乳狀渾濁,說(shuō)明材料中仍殘

4、留水分,應(yīng)退回脫水過(guò)程重新脫水,然后再透明。1.5浸蠟與包埋1.5.1浸蠟在盛有材料及二甲苯的燒杯中加入與二甲苯等量的石蠟,然后加蓋放在45恒溫箱中,經(jīng)12d石蠟不再繼續(xù)熔化為止,打開(kāi)杯蓋,并將恒溫箱調(diào)到60,讓二甲苯慢慢蒸發(fā),約24h后,用鑷子將材料撥入盛有融熔石蠟的燒杯中,每隔25h換1次純蠟,共換2次,使留在組織中的透明劑完全排除后包埋。1.5.2包埋將已融化的純石蠟迅速倒入紙盒中,片刻間紙盒底部即能凝固一薄層,隨即將材料用已加熱的鑷子移入紙盒內(nèi),并迅速將材料按照所需的切面整齊排好(切面朝向底部。在這個(gè)過(guò)程中,鑷子要不斷的在酒精燈上加熱,沿紙盒和材料的周圍輕輕移動(dòng),將材料周圍的氣泡趕出,

5、同時(shí)也使得材料和四周的石蠟溫度一致,避免石蠟?zāi)毯蠛筒牧习l(fā)生分離。待石蠟的表面凝固一薄層時(shí),平穩(wěn)的將紙盒放入冷水中,使石蠟迅含羞草石蠟切片的制作趙云1,李濤1,陳增潔21.揭陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,廣東揭陽(yáng)522051;2.濰坊職業(yè)學(xué)院,山東濰坊261041摘要:通過(guò)對(duì)含羞草進(jìn)行取材、固定、脫水、透明、浸蠟、切片、脫蠟、染色、透明等一系列過(guò)程的試驗(yàn)研究,掌握了含羞草石蠟切片的制作方法,總結(jié)出了含羞草石蠟切片制作過(guò)程中的關(guān)鍵技術(shù),并通過(guò)顯微觀察分析,從解剖學(xué)上為研究含羞草的運(yùn)動(dòng)機(jī)理提供了理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞:含羞草;石蠟切片;顯微鏡中圖分類號(hào):S545文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1002-204X(201104

6、-0045-02 Manufaction of Paraffin Section on Mimosa pudicaZHAO Yun et al(Jie Yang Vocational and Technical College,Jieyang,Guangdong522051Abstract Manufacture method of paraffin section on Mimosa Pudica was mastered by experimental research of drawing materials, fixing,dewatering,transparence,waxing,

7、section,dewaxing,dyeing,etc.In this present study,the key technology of manufacturing paraffin section on Mimosa pudica were summarized,which provided the foundation for further researching motion mechanism of Mimosa pudica on anatomy by microscopic observation and analysis.Key words Mimosa pudica;P

8、araffin section;Microscope作者簡(jiǎn)介:趙云(1985-,女,山東安丘人,助教,從事藥用植物學(xué)研究。收稿日期:2011-03-05寧夏農(nóng)林科技,Ningxia Journal of Agri.and Fores.Sci.&Tech.2011,52(04:45-4645速凝固。1.6切片、貼片1.6.1切片拆去紙盒,將蠟塊修成梯形(有材料的一面較小,另一面較大,容易粘在載蠟器上,裝在切片機(jī)上,將蠟塊切成1014m 的薄片。1.6.2粘片配制赫伯特粘貼劑,溶液甲:明膠1g+蒸餾水100mL+甘油15mL+石碳酸2g ;溶液乙:甲醛4mL+蒸餾水100mL 。在擦凈的載

9、玻片上滴上1滴溶液甲,用潔凈的小手指涂勻,然后加上12滴溶液乙,然后用小鑷子將蠟片(光滑面朝下輕放在載玻片上,再把載玻片放在水浴鍋蓋上(溫度為45左右,蠟片受熱后慢慢展平。待完全展平后,用解剖針將切片位置撥正,將其放在45左右恒溫箱內(nèi)烤干。1.7脫蠟、復(fù)水將烤干的切片依次放入二甲苯(I 二甲苯(II ,各級(jí)5min ,以溶去切片上的石蠟。復(fù)水是將脫蠟后的切片經(jīng)各級(jí)濃度酒精逐漸下降到水的過(guò)程,即將二甲苯(中取出的切片按照1/2二甲苯+1/2純酒精無(wú)水酒精95%酒精85%酒精70%酒精50%酒精的順序,各級(jí)中停留5min ,進(jìn)行復(fù)水。1.8染色配制番紅、固綠染液。番紅染液:0.5g 番紅+100m

10、L 50%酒精;固綠染液:0.5g 固綠+100mL 95%酒精。將切片在番紅染液中染色24h ,然后用50%酒精洗去染料,再轉(zhuǎn)到70%酒精85%酒精95%酒精中,各級(jí)5min 。繼而進(jìn)入固綠染液中染色110min ,然后用95%酒精將染液沖洗干凈。1.9脫水、透明和封片切片依次入95%酒精無(wú)水酒精(I 無(wú)水酒精(,各級(jí)中停留5min ,進(jìn)行脫水。然后切片依次入1/2二甲苯+1/2純酒精二甲苯(I 二甲苯(中透明,各級(jí)停留5min 。完成上述過(guò)程后,就可用加拿大樹(shù)膠制成永久封片。2結(jié)果與分析經(jīng)過(guò)“1.3”至“1.9”一系列過(guò)程制得的永久制片,其組織完整,細(xì)胞界限清楚,切片干凈,表皮被番紅染成紅

11、色,葉肉細(xì)胞被染成綠色。經(jīng)過(guò)石蠟切片并顯微鏡觀察所得結(jié)果如圖13(見(jiàn)封3所示。2.1含羞草葉片表面顯微結(jié)構(gòu)由圖1可知(見(jiàn)封3:圖1,含羞草葉片表面上有形狀不同的塊狀隆起,隆起上有細(xì)絲狀毛樣結(jié)構(gòu),下表皮上的塊狀隆起較上表皮的多。表皮上的短柄腺毛較少,腺柄單細(xì)胞,腺頭34個(gè)細(xì)胞,有的腺毛似由小管樣毛組成,而且長(zhǎng)短不一,下粗上細(xì)。還有一些管樣腺毛似乎有節(jié),似竹節(jié)狀。摧測(cè)這些腺樣體可能會(huì)分泌與運(yùn)動(dòng)相關(guān)的物質(zhì)。2.2含羞草葉片石蠟切片橫切、縱切圖析通過(guò)葉片橫切(封3:圖2和縱切(封3:圖3發(fā)現(xiàn),含羞草葉片的導(dǎo)管非常發(fā)達(dá),有利于水分和無(wú)機(jī)鹽的迅速傳遞。于是可以推測(cè),當(dāng)含羞草受到刺激時(shí),便分泌一種物質(zhì),這種

12、物質(zhì)沿著導(dǎo)管迅速傳遞給活細(xì)胞,引起細(xì)胞的興奮,導(dǎo)致葉片下垂。后續(xù)研究將繼續(xù)通過(guò)對(duì)葉枕、葉柄進(jìn)行解剖結(jié)構(gòu)分析,以找到引起含羞草運(yùn)動(dòng)的原理。3結(jié)論因含羞草一碰即合并,因此該研究只是得到含羞草葉片合并時(shí)的解剖結(jié)構(gòu)。今后可通過(guò)一系列方法得到含羞草葉片張開(kāi)時(shí)的解剖結(jié)構(gòu),然后將兩者比較,觀察其結(jié)構(gòu)的變化,從而在解剖學(xué)上進(jìn)一步解釋含羞草的運(yùn)動(dòng)機(jī)理。參考文獻(xiàn):1陳寧.含羞草應(yīng)激現(xiàn)象的觀察J.中學(xué)生物學(xué),2006,22(12:43.2吳洋博,鞏江,倪士峰,等.含羞草藥學(xué)研究進(jìn)展J.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(15:7874-7875.3王萃華.含羞草掃描電鏡觀察J.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).1992:7-73.4王金

13、平.白頭翁花的石蠟切片制作J.信陽(yáng)師范學(xué)院學(xué)報(bào),2008,21(4:475.5賀學(xué)禮,朱建楚.生物顯微技術(shù)M.西北農(nóng)業(yè)大學(xué)基礎(chǔ)科學(xué)系,1998.6汪花菊.利用含羞草進(jìn)行系列生物探究活動(dòng)J.中學(xué)生物學(xué),2007,23(1:30.7李素坤,張秋芝,郝玉蘭,等.玉米成熟期莖稈石蠟切片方法的研究J.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(8:3935-3937.8劉桂芝.石蠟切片標(biāo)本的制作過(guò)程J.通化師范學(xué)院學(xué)報(bào),2004,25(11:90.9馮國(guó)祿.爬山虎的形態(tài)解剖結(jié)構(gòu)觀察D.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.10楊捷頻.常規(guī)石蠟切片方法的改良J.生物學(xué)雜志,2006,23(1:45-46.11張國(guó)秀,張彥麗,張家玲.

14、旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)的改進(jìn)及植物實(shí)驗(yàn)材料J.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(4:1669-1670.責(zé)任編輯:高曉余文著作獎(jiǎng)?？梢钥闯?對(duì)科研崗位的專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行了比較全面的激勵(lì)制度設(shè)計(jì)。而管理崗位的激勵(lì)形式非常單一,基本上只有崗位津貼一項(xiàng)激勵(lì)措施。而事業(yè)單位的管理崗位相對(duì)較少,提供給管理人員的晉升機(jī)會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于科研崗位提供給科研人員的專業(yè)職務(wù)晉升機(jī)會(huì)。這樣就使在管理崗位工作的人員,經(jīng)濟(jì)上看不如科研崗位實(shí)惠,政治上又不利于個(gè)人成長(zhǎng)的。長(zhǎng)此以往,會(huì)使已經(jīng)在管理崗位的人員不能安心本職工作,工作上出工不出力或少出力,使新參加工作的人員不愿意到管理崗位工作。這樣的形勢(shì)非常不利于管理人才隊(duì)伍建設(shè)。一個(gè)組織,如果沒(méi)有一支素質(zhì)優(yōu)良、充滿活力的管理人員隊(duì)伍,同樣會(huì)影響到整個(gè)組織的全面、協(xié)調(diào)、可持續(xù)發(fā)展。激勵(lì)能使人的潛力得到最大限度的發(fā)揮。事實(shí)上,在正確的激勵(lì)工作中,需要的是各種理論的融會(huì)貫通。激勵(lì)既是組織成員個(gè)人努力、取得成績(jī)、得到獎(jiǎng)勵(lì)、達(dá)到個(gè)人目標(biāo)的過(guò)程,也是激勵(lì)理論正確運(yùn)用、選擇的過(guò)程,這表明了激勵(lì)工作充滿科學(xué)性與藝術(shù)性,決不