針刺足三里對胃粘膜損傷模型穴區(qū)活組織間液影響的研究

1、針刺足三里對胃粘膜損傷模型穴區(qū)活組織間液影響的研究顧星湖南中醫(yī)藥大學(xué) （410007）E-mail：摘 要：目的：觀察針刺足三里對經(jīng)穴局部體液的影響。方法：采用無水乙醇灌胃的造模方法，復(fù)制了胃粘膜損傷兔模型，分別取穴“足三里”、“手三里”、“環(huán)跳”、“委中”及非穴點，另設(shè)空白平行對照，運用雙針灌流、細(xì)針吸取方法，觀察了經(jīng)穴局部鈣鈉氯鉀離子及腺苷三磷酸酶、一氧化氮合酶。結(jié)果：與非穴點比較，造模前后“足三里”、“環(huán)跳”、“委中”局部鈣鈉氯鉀離子變化存在差異；“手三里”差異無統(tǒng)計學(xué)意義；ATP酶在造模前后組間含量總體差異無統(tǒng)計學(xué)意義;一氧化氮合酶造模前后各組均存在差異。結(jié)論：針刺調(diào)節(jié)鈣鈉氯鉀離子經(jīng)穴

2、局部的體液平衡，促進(jìn)局部一氧化氮合成增強，是經(jīng)穴-臟腑相關(guān)效應(yīng)產(chǎn)生的機(jī)理之一。關(guān)鍵詞：足三里/針刺; 胃粘膜損傷; 細(xì)針吸取; 體液平衡1. 引言近年來由于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等邊緣學(xué)科不斷取得進(jìn)展，使得人們有可能從更為細(xì)微的水平來認(rèn)識機(jī)體結(jié)構(gòu)和功能活動發(fā)生、調(diào)控等變化規(guī)律，并為經(jīng)絡(luò)實質(zhì)的研究提供了科學(xué)的手段1。穴位作為針刺部位的同時，也是疾病的診斷點和刺激點。故探討穴位局部的內(nèi)環(huán)境和功能對闡明經(jīng)絡(luò)實質(zhì)有著重要的作用。從現(xiàn)有文獻(xiàn)來看，多數(shù)傾向于針刺對神經(jīng)節(jié)、大腦皮層、內(nèi)臟、血液等大范圍變化的研究，而對局部的體液平衡研究相比之下為之少。因此探討針刺局部與臟腑相關(guān)的機(jī)理亦是一項有待于補充的基礎(chǔ)性

3、工作。2. 材料與方法2.1動物來源、分組、造模方法采用新西蘭純種兔60只，體重1.8Kg2.2Kg，月齡3個月4個月，雌雄各半，由湖南中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供(清潔級)，每只分籠圈養(yǎng)。分組：將60只家兔隨機(jī)分為六組,每組10只：“足三里”組, 簡稱A組,下同;“手三里”對照組, B組;“環(huán)跳”對照組,C組;“委中”對照組,D組;非經(jīng)非穴組,E組;空 白 組,F組。手、足三里的對照，試圖探討陽明同名經(jīng)之異同；足三里與環(huán)跳、委中的對照，試圖觀察同一神經(jīng)節(jié)段的足三陽經(jīng)（陽明、太陽、少陽）之異同。空白組采取耳緣靜脈血平行對照。造模方法：AE組禁食40小時后，按體重2.35ml/Kg 計算無水乙醇量灌

4、胃，造成胃粘膜損傷模型。F組禁食40小時后，按2.35ml/Kg蒸餾水灌胃。方法學(xué)評價：灌胃 2小時后處死動物，剖腹取胃，將胃在自來水龍頭下，用毛筆輕輕刷盡胃粘膜的粘液，置于盛有生理鹽水的彎盤中，用鑷子展平，在放大鏡下，參考即<1mm長度的潰瘍或出血點記l分；12mm記2分；23mmGuth法2進(jìn)行潰瘍指數(shù)計分，十記3分；34mm記4分；45mm或5mm以上記5分。寬度大于2mm×2。根據(jù)導(dǎo)師課 - 1 -十十題組所做的研究工作表明3.4，乙醇灌胃后，未經(jīng)針刺的模型組損傷指數(shù)記分最高，未經(jīng)造模的空白組損傷指數(shù)記分最低，兩者間差異有非常顯著性意義。表l 無水乙醇灌胃對家兔胃粘膜損

5、傷指數(shù)的影響(x±s)組 別 n 胃 粘 膜 損 傷 指 數(shù) （記分法）A 10 20.20±7.28*F 10 7.80±4.59*2. 2穴位定取足三里、手三里、委中參照現(xiàn)代中獸醫(yī)學(xué)大全定位方法5 。四元梯度往復(fù)柱塞微型泵;半自動生化光譜儀,DC640型核酸蛋白分析儀;徠卡顯微鏡,攝像CCD,彩色圖像顯微分析系統(tǒng);鈣、鈉、氯、鉀、ATP酶測試盒均購自南京建成生物工程研究所出品。IGF-1原位雜交檢測試劑盒購自武漢博士德生物公司。2.4 主要實驗過程：采用5.5號一次性使用靜脈注射針兩支，針孔截面上下排列，用什錦銼修平圓柱面，使兩針平面接觸無縫。用直徑1mm的細(xì)

6、銅線扎緊兩針管上端，兩針則上下并列粘連一體，套上輸液管，用灌流液50ml沖洗輸液管、針頭后，浸泡于75%乙醇中備用。將實驗兔四肢懸空固定，用彎剪分別剪去“足三里”等穴區(qū)直徑3cm范圍的兔毛，用75%乙醇擦拭局部皮膚，待干后即可進(jìn)針。取25mm長的毫針直刺各穴及非穴點0.5cm1.5cm。各組間分別于針刺前1h 、針刺后1h;造模前1h、造模后1h灌流5min,樣本于4離心，12000r/min×15min。取上清液保存于-86超低溫冰箱，待全部樣本收集完成后，按前述各試劑盒“操作步驟”進(jìn)行檢測。實驗中各組數(shù)據(jù)先進(jìn)行方差齊性檢驗，在方差齊時采用單因素方差分析，若各總體均數(shù)有差別，進(jìn)行S

7、NK檢驗，采用SPSS10.0版軟件處理。實驗結(jié)果均以x±s表示。3. 結(jié)果3.1 針刺足三里對胃粘膜損傷家兔穴區(qū)鈣鈉氯鉀離子的影響- 2 -表2穴區(qū)組織灌流液鈣離子濃度的比較 (x±s, mmol/L)組 別 n 針刺前 針刺后 造模前 造模后A 10 0.41±0.085 0.42±0.082* 0.42±0.082 0.45±0.158*C 10 0.42±0.112 0.44±0.125* 0.44±0.125 0.47±0.148*D 10 0.28±0.116 0.34&#

8、177;0.136* 0.34±0.136 0.42±0.151*從表2結(jié)果提示：針刺前后、造模前后經(jīng)穴及非穴點的鈣離子呈逐步增高趨勢。針刺前后、造模后A、C、D組與E組比較有顯著性差異（P<0.05）。B、E組在針刺前后、造模前后差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。說明家兔足三陽經(jīng)“足三里”、 “環(huán)跳”、“委中”穴鈣離子濃度在正常生理或病理狀態(tài)下均高于“手三里”、非穴點，但較空白F組靜脈血鈣濃度為低。機(jī)體內(nèi)絕大部分以骨鹽形式存在于骨和牙中，其余存在于各種軟組織中，體液中的鈣有三種存在方式：蛋白結(jié)合鈣，主要與白蛋白結(jié)合；可擴(kuò)散結(jié)合鈣，如檸檬酸鈣、乳酸鈣等；游離鈣，即鈣離子（Ca2+）

9、。本文工作以檢測游離鈣為主。表3.穴區(qū)組織灌流液鈉離子濃度的比較 (x±s,mmol/L)組 別 n 針刺前 針刺后 造模前 造模后A 10 31.56±11.77 38.78±11.76* 38.78±11.76 44.55±12.76*C 10 36.32±12.94 36.46±14.57* 36.46±14.57 40.53±17.50*D 10 34.40±11.55 37.44±12.15* 37.44±12.15 39.48±14.40*從表3結(jié)果提示

10、：A、C、D組針刺前后、造模前后與E組比較均有顯著性差異(P<0.05);B、E組針刺前后、造模前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明家兔足三陽經(jīng)“足三里”、 “環(huán)跳”、“委中”穴鈉離子濃度,在正常生理或病理狀態(tài)下均高于“手三里”、非穴點，但較F組空白靜脈血鈉濃度為低。- 3 -表4穴區(qū)組織灌流液氯離子濃度的比較 (x±s,mmol/L)組 別 n 針刺前 針刺后 造模前 造模后A 10 24.91±9.00 24.01±10.06 24.01±10.06 29.16±10.55*C 10 25.02±8.24 24.88±9.9

11、4 24.88±9.94 25.50±9.67*D 10 24.65±8.40 24.30±9.78 24.30±9.78 26.95±9.36*從表4結(jié)果提示：A、C、D組造模前后與E組比較均有顯著性差異(P<0.05);B、E組針刺前后、造模前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明家兔足三陽經(jīng)“足三里”、 “環(huán)跳”、“委中”穴氯離子濃度在正常生理或病理狀態(tài)下均高于“手三里”、非穴點，但較F組空白靜脈血氯濃度為低。與其鈉離子濃度成正相關(guān)。表5.穴區(qū)局部灌流液鉀離子濃度的比較 (x±s,mmol/L)組 別 n 針刺前 針刺后 造模

12、前 造模后A 10 0.72±0.26 0.67±0.25* 0.67±0.25 0.77±0.26*C 10 0.71±0.28 0.68±0.23* 0.68±0.23 0.76±0.26*D 10 0.68±0.24 0.64±0.27* 0.64±0.27 0.69±0.23*從表5結(jié)果提示：A、C、D組針刺前后、造模前后與E組比較均有顯著性差異(P<0.05);B、E組針刺前后、造模前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明家兔足三陽經(jīng)“足三里”、 “環(huán)跳”、“委中”穴鉀離子

13、濃度在正常生理或病理狀態(tài)下均高于“手三里”、非穴點，但較F組空白靜脈血鉀濃度為低。3.2 針刺足三里對胃粘膜損傷家兔穴區(qū)ATP酶、NOS的影響表6. 灌流液ATPase濃度的比較 (x±s, µmolPi/107RBC/hour,10-3)組 別 n 針刺前 針刺后 造模前 造模后- 4 -從表6中可以看出，針刺前后、造模前后各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。ATP酶濃度呈逐步降低的趨勢,說明經(jīng)穴及非穴點能量活動增加，ATP酶為加速合成ATP而大量消耗，導(dǎo)致含量降低。但各組間基本上為等量消耗，故差異無統(tǒng)計學(xué)意義。表7 穴區(qū)局部灌流液NOS濃度的比較 (x

14、7;s,U/ml)組 別 n 針刺前 針刺后 造模前 造模后A 10 2.86±1.31 1.65±1.41 1.65±1.41 1.14±0.93*B 10 2.41±0.93 2.59±0.98 2.59±0.98 1.98±0.61*C 10 2.29±0.74 1.00±0.95 1.00±0.95 1.29±1.29*D 10 2.08±1.11 1.82±0.98 1.82±0.98 1.74±0.90*從表7中可以看出，造

15、模后各穴區(qū)與非穴點差異有顯著性意義（P<0.05）。提示模后經(jīng)穴局部NOS活性呈逐步降低的趨勢,說明經(jīng)穴及非穴點能量活動增加，NOS為加速合成NO而大量消耗，導(dǎo)致含量降低。4. 結(jié)論4.1 針刺足三里在胃粘膜損傷家兔病理狀況下，經(jīng)穴局部鈣鈉氯鉀離子濃度在造模前后與非穴點比較均有差異（P<0.05）；針刺可提高局部體液中各離子濃度。4.2 針刺足三里在胃粘膜損傷家兔病理狀況下，經(jīng)穴局部ATP酶、NOS濃度在造模前后與非穴點比較均有差異；針刺可降低局部體液中兩種酶類的含量。4.3.足三陽經(jīng)同一神經(jīng)節(jié)段支配的足三里、環(huán)跳、委中三穴，在胃粘膜損傷家兔病理狀況下，經(jīng)穴局部體液平衡調(diào)節(jié)趨勢較為

16、一致，參考文獻(xiàn)1蔡寶昌.基因技術(shù)在針灸研究中的應(yīng)用與展望.上海針灸雜志，2002;21(1):442Guth PH,et al.Topical Aspirin Plus Hcl Gastic Lesion in the Rat Gastrogenrology.1979;(76):883嚴(yán)潔，常小榮，劉建華，等.電針足陽明經(jīng)穴對家兔胃粘膜損傷防御性保護(hù)作用的研究,中國針灸，2001;21(6):3503514易受鄉(xiāng)，陽仁達(dá)，嚴(yán)潔，等.足陽明經(jīng)逐點動態(tài)刺激對大鼠胃粘膜損傷保護(hù)作用的實驗觀察,湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1996;16(4):535于船，陳子斌，等.現(xiàn)代中獸醫(yī)學(xué)大全.南寧:廣西科技出版社，20

17、00.3.第一版第一次印刷 :3984026 舒儀經(jīng)，等.細(xì)針吸取細(xì)胞病理學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社，2000.5.第一版第一次印刷：687王伯沄，李玉松，黃高升，等.病理學(xué)技術(shù).北京:人民衛(wèi)生出版社，2000.6.第一版第一次印刷 :1288 鄭思競，等.中國醫(yī)學(xué)百科全書·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)，上海:上?？萍汲霭嫔?，1998.12.一版一印 :6279陳主初主編，病理生理學(xué)，七年制醫(yī)藥教材第一版，北京：人民衛(wèi)生出版社，2001.8. :9710郭義，等.鈣離子是經(jīng)絡(luò)活動的關(guān)鍵因素之一.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，1998;4(7):49-5111費倫，承煥生.經(jīng)絡(luò)物質(zhì)基礎(chǔ)及功能特征的實驗探索與研究展望

18、.科學(xué)通報，1998;43(6):659-661 - 5 -12江秀秀，呂時銘,一氧化氮的抗感染作用研究進(jìn)展.中國實驗診斷學(xué).2002,6(1):49-5113 Gary Stix,賈冬婷譯.青睞一氧化氮.科學(xué)美國人（中文版），2002,(2):1514馮仁豐主編，實用醫(yī)學(xué)檢驗學(xué),上海:上海科技出版社，1996.12第一版,2000.4.第二印刷：7315 金伯泉主編,細(xì)胞與分子免疫學(xué),北京：世界圖書出版社,1995.3.:9716The,-P,Breviario,-F;Huber,-P;et al.Identification of a novel cadherin (vascular en

19、dothelial cadherin-2)locatedat intercellular junctions in endothelial cellsJ.J Biol Chem,1998;273(28):17565.17Clark EA,Srugge JS.Integrrins and signal transduction patthways:the roadtakenJ.Science,1996;268(5028):23318李忠仁,關(guān)于針灸研究與基因技術(shù)的思考.上海針灸雜志，2002,21(1):4419蔡寶昌,基因技術(shù)在針灸研究中的應(yīng)用與展望.上海針灸雜志，2002;21(1):442

20、0劉永全,整合素與信號轉(zhuǎn)導(dǎo),國外醫(yī)學(xué)·免疫分冊，2000;23(1):23-2421吳其夏，余應(yīng)年，盧健，等.新編病理生理學(xué),北京，中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，1999.9.第一版第一印刷:10422李忠仁,關(guān)于針灸研究與基因技術(shù)的思考.上海針灸雜志，2002;21(1):44The Study about Fluid Balance in Points of Gastric Mucosal Damage Rabbit by Acupuncture at Zusanli (ST36) PointsGu xingHunan University of Traditional Chinese

21、 MsdicineAbstractObjectives: observe the influence of body fluid in points by acupunture at zusanli points, in order to provide experimental basis for researching the modulator of stomach and correlation between meridian and zang-fu。Methods: we replicate rabbit model of gastric mucosal damage induce

22、d by perfusion of ethanol into stomach。They are divided into Zusanli points group, Shousanli points group, Huantiao points group, Weizhong points group, Nun-points group and compared with blank group, to observeNa+、Cl、K+ and ATPase、NOS、red blood cell morphology, gene expression of the changes of Ca2

23、+、grow factor in points, by instilling pure water into points with ambi-needle and using the fine needleNa+、K+、aspiration method。Results: compared with non-points, we certify that the density of Ca2+、Clis different significantly before and after model（P<0.05）; The difference in shousanli points is not significantly (P>0.05)。Through assay of contents in ATPase, we can cert