煙草種子霜霉病檢疫規(guī)程

1、UDC 633.71:632.913B 35 GB/T 156991995 煙草種子霜霉病檢疫規(guī)程Rules for tobacco seed (blue mold) quarantine 1995-08-28 發(fā)布1996-03-01 實施 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)煙草種子霜霉病檢疫規(guī)程 GB/T 156991995 Rules for tobacco seed (blue mold) quarantine國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局1995-08-28批準(zhǔn)1996-03-01 實施1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了煙草種子檢疫對象、程序和方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種入境煙草種子的檢疫。2術(shù)語2.1檢疫：為預(yù)防

2、危險性煙草病蟲害傳播蔓延采取的一種措施。2.2煙草霜霉病tobacco blue moldPeronospora tabacina Adam和Peronospora nicotianae Speg，異名Peronospora hyosymi f. Sptabacina.又稱藍(lán)霉病，是煙草上一種毀滅性病害。現(xiàn)已蔓延至歐洲、美洲、澳洲，目前我國尚無該病發(fā)生，因此做為對外檢疫對象。3檢疫程序3.1取樣對一批種子總件數(shù)按比例抽查取樣。在取樣時，按對角線五點、棋盤式或分層取樣，每點取樣1020g（旅客攜帶和國際郵包郵寄的少量煙草種子，取樣多少視具體情況而定）。取樣要盡量做到有代表性，將取的各點樣品均勻抽

3、取平均樣品。3.2孢子囊和孢子梗檢疫3.2.1檢驗方法洗滌檢驗法。3.2.2原理利用振蕩的方法，使粘附在種子上的分生孢子和分生孢子梗分散到水中。3.2.3儀器設(shè)備離心機、顯微鏡、載玻片、振蕩器、三角瓶。3.2.4試劑蒸餾水。3.2.5步驟取煙種5g，放入三角瓶中，加一定量蒸餾水浸泡0.5h后，再加蒸餾水劇烈振蕩5min（也可放在振蕩器上振蕩）。將洗液注入離心管，以1 000r/min的速度離心5min，傾去大部分上清液，每個離心管再加入少量蒸餾水，使沉淀重懸浮，取懸浮液制片，用400500倍顯微鏡檢查，每個載玻片查10個視野（見圖1），每個樣品檢查510個載玻片，檢查有無樹枝狀孢子囊梗和對生的

4、孢子囊，孢子囊大約（1318）m16m29m。3.3卵孢子檢驗3.3.1檢驗方法乳酚油透明法。3.3.2原理乳酚油加苯胺藍(lán)是真菌標(biāo)準(zhǔn)的浮載劑。苯胺藍(lán)是堿性染料，可染真菌的原生質(zhì)，而不染細(xì)胞壁，因此可以分辨清楚很難看清的真菌孢子。3.3.3儀器設(shè)備顯微鏡、燒杯、電爐、水浴鍋3.3.4試劑 苯胺藍(lán)、苯酚、甘油、乳酚油、蒸餾水。3.3.5步驟取混合樣品煙草種子5g，置于燒杯中用乳酚油煮沸1530min，煮至煙草種子透明，但尚不至于消解為止。加苯胺藍(lán)（棉藍(lán)）染色后用乳酚油作浮載劑，然后鏡檢。每個樣品查20個載玻片乳酚油的配方：苯酚結(jié)晶（水浴加熱溶化）20mL，乳酸20ml，甘油40 mL，蒸餾水20

5、mL。3.3.6檢驗結(jié)果的統(tǒng)計統(tǒng)計孢子數(shù)量時，用血球計數(shù)器，觀察80個小格，用其平均數(shù)4000 000，就是每毫升懸浮液孢子的數(shù)量。3.4種子檢驗3.4.1檢驗方法萌芽檢驗。3.4.2儀器設(shè)備及試劑滅菌鍋、溫箱、培養(yǎng)皿、濾紙、次氯酸鈉、無菌水。3.4.3步驟取混合樣品種子100粒，重復(fù)4次。取直徑10cm的無菌柏氏培養(yǎng)皿或塑料培養(yǎng)皿4個，每個培養(yǎng)皿放入三層吸足無菌水的吸水紙，將100粒種子均勻排列在吸足水的紙上，蓋上培養(yǎng)皿，保持濕度。然后放入1520溫箱內(nèi)培養(yǎng)，經(jīng)47d觀察幼苗上是否有煙草霜霉病菌浸染的跡象。若檢查種子內(nèi)部是否有病菌時，則將種子浸入1%次氯酸鈉溶液10min，然后置于無菌濾紙上

6、，培養(yǎng)檢查。3.4.4檢查結(jié)果的統(tǒng)計單皿發(fā)病率和平均發(fā)病率按式（1）、（2）計算：3.5分離培養(yǎng)檢驗3.5.1檢驗方法瓊脂培養(yǎng)檢驗。3.5.2步驟用適于植物水培的營養(yǎng)鹽類2.5g，瓊脂14g，蒸餾水100mL。用300mL的大口三角瓶，每瓶盛培養(yǎng)基80mL，用棉塞塞好，消毒后將培養(yǎng)基做成斜面。培養(yǎng)基凝固后，用表面消毒過的種子，在培養(yǎng)基斜面上每瓶加0.01g置于1520下，種子發(fā)芽后，觀察幼苗是否有煙草霜霉病菌侵染的跡象。3.5.3結(jié)果統(tǒng)計統(tǒng)計感染霜霉病的百分比，統(tǒng)計方法同3.4.4。3.6隔離試種3.6.1報檢引種入境之前，引種人應(yīng)持引種審批單，出口國的檢疫證書，貿(mào)易合同，向入境的口岸植檢機關(guān)

7、報檢（包括非正規(guī)渠道來的種子）。3.6.2供檢材料登記供檢材料由引種人（單位）送到隔離檢疫圃，交檢疫收件人登記。3.6.3初檢由檢疫人員在初檢室對送檢材料進行初步檢查。3.6.4檢疫圃試種初檢合格，可以進入檢疫圃的供檢材料，在檢疫溫室用消毒過的土和盆進行育苗盆栽。3.6.5隔離試種結(jié)果評定在溫室內(nèi)對供檢材料在生長期進行檢查，對檢查和檢測情況進行詳細(xì)登記，根據(jù)檢測情況作出評定。4檢疫檢驗后的評定及處理4.1入境的煙草種子經(jīng)檢疫未發(fā)現(xiàn)被檢對象則認(rèn)為合格。4.1.1發(fā)放檢疫放行通知單附錄A（補充件）經(jīng)檢疫后認(rèn)為合格的簽發(fā)檢疫放行通知單，或在貨運單上加蓋檢疫放行章。經(jīng)嚴(yán)格包裝，由專人送中國煙草總公司青

8、州煙草研究所隔離試種檢疫。4.1.2國內(nèi)試種經(jīng)隔離試種后未檢出被檢對象的，交送檢人（單位）在國內(nèi)試種。4.2檢疫不合格經(jīng)檢疫發(fā)現(xiàn)有檢疫對象者認(rèn)為不合格。4.2.1簽發(fā)檢疫處理通知單附錄B（補充件）檢疫不合格，發(fā)現(xiàn)有檢疫對象，而且在抽檢煙種中1的比例內(nèi)有檢疫對象，則應(yīng)在檢疫地原地銷毀。4.2.2銷毀被檢煙種若發(fā)現(xiàn)有檢疫對象，而且在抽檢煙種中1的比例內(nèi)有檢疫對象，則應(yīng)在檢疫地原地銷毀。4.2.3退回原地被檢煙種中有檢疫對象，有以下情況可退回原地，材料較有研究應(yīng)用價值，抽查煙種檢疫對象不超過1。4.2.4處理后隔離試種對少量引進有價值材料可用熱處理，處理后在檢疫溫室試種。干熱處理方法：干熱消毒，事先

9、將種子進行60，23h通風(fēng)，使種子充分干燥；種子薄攤成2cm以內(nèi)厚度，用干熱消毒器70干熱處理2d以上。處理后的種子在檢疫溫室用無菌土、盆試種，檢驗有無檢疫對象。將繁殖后的種子（應(yīng)是無菌的）交送檢人（單位），可在國內(nèi)試種。5發(fā)放檢疫證書入境煙草種子沒有發(fā)現(xiàn)檢疫對象時，簽發(fā)植物檢疫證書附錄C（補充件）；經(jīng)檢疫不符合貿(mào)易合同規(guī)定時，簽發(fā)檢驗證書附錄D（補充件），說明情況作為對外索賠證件，并制備保存該被檢煙種和檢疫對象的標(biāo)本，作為索賠的依據(jù)。6檢疫報告包括受檢日期、貨批號、數(shù)量及重量。檢疫結(jié)果：處理意見：檢疫員：檢疫單位：附加說明：本標(biāo)準(zhǔn)由國家煙草專賣局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國煙草標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由中國煙草總公司青州煙草研究所負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：佟道儒、石金開、蔣予恩、艾樹理、劉洪祥。(京)新登字XXX號中 華 人 民 共 和 國國 家 標(biāo) 準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)名稱GB/T XXXXX.XXXXXX*中 國 標(biāo) 準(zhǔn) 出 版 社 出 版北京復(fù)興門外三里河北