食品微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

1、內(nèi)容 食品微生物檢驗(yàn)質(zhì)量控制概述 食品微生物檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)量控制 食品微生物檢驗(yàn)的室間質(zhì)量控制 食品微生物檢驗(yàn)質(zhì)量控制概述 一、質(zhì)量控制相關(guān)定義 質(zhì)量控制：滿足質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動。 質(zhì)量保證：為了滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求 ，制定相應(yīng)的計(jì)劃并實(shí)施所進(jìn)行的一系列系統(tǒng)活動 質(zhì)量手冊：是描述質(zhì)量系統(tǒng)元素的文件或文件的集合。 二、食品微生物檢驗(yàn)質(zhì)量控制概念 質(zhì)量控制是食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室為了保證檢驗(yàn)結(jié)果實(shí)事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系。 三、食品微生物檢驗(yàn)質(zhì)量控制目的 食品微生物學(xué)的質(zhì)量控制是保證食源性致病菌的培養(yǎng)、分離、鑒定及血清學(xué)試驗(yàn)等的準(zhǔn)確性，避免因操作變化導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果錯誤。 四、質(zhì)量控制分

2、類 分為室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價兩個組成部分 室內(nèi)質(zhì)量控制：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部采取的以對比分析、跟蹤以及對實(shí)驗(yàn)室工作的連續(xù)性控制計(jì)劃。 室間質(zhì)量評價：通過互相校準(zhǔn)和/或檢驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)室的操作和結(jié)果所進(jìn)行的評價。 五、質(zhì)量控制內(nèi)容 室內(nèi)質(zhì)量控制 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部 質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ) 室間質(zhì)量評價 外部組織或機(jī)構(gòu) 質(zhì)量評價 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 室內(nèi)質(zhì)量控制 室內(nèi)質(zhì)量控制 一、對檢驗(yàn)人員的要求 二、操作手冊 三、檢測環(huán)境要求 四、設(shè)備/儀器要求 五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測 六、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控 八、檢驗(yàn)過程的質(zhì)量控制 九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存 十、實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù) 一、對檢驗(yàn)人員的要求 相

3、應(yīng)崗位的人員，應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力，相應(yīng)的技術(shù)能力證明（證書及證件）。 微生物檢驗(yàn)室應(yīng)有相應(yīng)技術(shù)能力的人負(fù)責(zé)室內(nèi)的技術(shù)工作，并設(shè)立質(zhì)量監(jiān)督員。 一、對檢驗(yàn)人員的要求 高度的主觀判斷力 個人的技能、經(jīng)驗(yàn) 細(xì)菌學(xué)的專業(yè)水平 二、操作手冊 各級人員的職責(zé)和權(quán)限 實(shí)驗(yàn)室安全措施 樣品采集和處理指南 培養(yǎng)基和試劑的配制方法 .等等 三、檢測環(huán)境要求-房屋要求 房屋要求：足夠?qū)挸?、通風(fēng)、有良好的照明。 房屋內(nèi)墻面及地等應(yīng)采用易于清潔的材料。 房間的設(shè)置應(yīng)根據(jù)工作內(nèi)容加以分用，設(shè)立專用房間。 三、檢測環(huán)境要求-環(huán)境設(shè)施要求 專用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室） 特殊環(huán)境的微生物指標(biāo)控制與記錄（無菌室等）

4、 專用工作室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和定期的檢測校準(zhǔn)程序。（潔凈室等） 特殊環(huán)境中的專用設(shè)施質(zhì)量控制應(yīng)符合有關(guān)要求（凈化工作臺） 三、檢測環(huán)境要求 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)室要求布局合理，操作區(qū)域與辦公區(qū)域分開。洗滌室、 培養(yǎng)室、消毒間、無菌室應(yīng)分開。無菌室要設(shè)有套間或緩沖間。微生物檢驗(yàn)室應(yīng)備有自動或腳踩式洗手池和固定的消毒設(shè)施。 三、檢測環(huán)境要求 微生物檢驗(yàn)室應(yīng)制定合理、完善的衛(wèi)生管理制度，采用濕式保潔，定期對操作環(huán)境進(jìn)行消毒。對廢棄物，應(yīng)投入指定的容器內(nèi)，經(jīng)無害化處理后方可排放，以防某些病原微生物傳播。 三、檢測環(huán)境要求 需在無菌條件下工作的區(qū)域應(yīng)以明確標(biāo)識并能有效地控制、監(jiān)測和記錄。每天記錄環(huán)境檢測報(bào)告，

5、并經(jīng)常進(jìn)行空氣落菌實(shí)驗(yàn)：定期對無菌室進(jìn)行室內(nèi)環(huán)境消毒。 三、檢測環(huán)境要求-環(huán)境設(shè)施的相關(guān)技術(shù)指標(biāo) 凈化室、凈化工作區(qū)域、潔凈環(huán)境按國家及部頒標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測。 空氣潔凈度指標(biāo)： 檢測頻率及檢測方法。一次/月；空氣細(xì)菌檢測（沉降法）。 四、設(shè)備/儀器要求-總則 滿足開展相關(guān)檢測項(xiàng)目的要求。 制定相關(guān)設(shè)備/儀器的作業(yè)指導(dǎo)書。 設(shè)備/儀器需進(jìn)行檢定校準(zhǔn)。 設(shè)備/儀器的運(yùn)行狀況記錄。 維修后設(shè)備/儀器的再校準(zhǔn)或檢查，應(yīng)具有完整的檢查記錄。 溫度計(jì) 實(shí)驗(yàn)室必須要有工作溫度計(jì)和參照溫度計(jì)。 工作溫度計(jì)：用于日常溫度檢查。 參照溫度計(jì)：用于校正工作的溫度計(jì)。 溫度計(jì)運(yùn)行檢查：一般可采用一次/半年的運(yùn)行檢查。 日

6、常檢查、校準(zhǔn)檢查、運(yùn)行檢查等都應(yīng)做好相應(yīng)的記錄。 培養(yǎng)箱、水浴箱和冰箱的溫度控制 培養(yǎng)箱的溫差要求，一般顯示值與實(shí)測值相差不大于±1，箱體內(nèi)各點(diǎn)溫差（內(nèi)部的溫度均衡性）以及溫度波動同樣不大于±1。 溫度監(jiān)控方法：可將工作溫度計(jì)置甘油中，放入待測箱體內(nèi)，觀察工作溫度計(jì)的溫度，最好1-2次/天監(jiān)控并記錄。 高壓滅菌鍋的溫度控制（一） 高壓滅菌鍋；可用生物指示菌法（常用）、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計(jì)等方法進(jìn)行檢測。 生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。 高壓滅菌鍋由專人操作，并做好作業(yè)記錄。 高壓滅菌鍋使用時，內(nèi)置物品不能太多，單位體積內(nèi)的內(nèi)容物（每瓶內(nèi)的培養(yǎng)基）不能太

7、多。 高壓滅菌鍋的溫度控制（二） 高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和121±2。 高壓滅菌鍋校準(zhǔn)周期一般在半年。 干燥滅菌箱溫度控制 干燥滅菌箱的溫度校準(zhǔn)：用參考溫度計(jì)進(jìn)行溫度測試。 干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5 或180 ±5 。 干燥滅菌箱校準(zhǔn)周期一般為一年。 培養(yǎng)基配制用蒸餾水的控制 按設(shè)備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。 檢測要求：西歐標(biāo)準(zhǔn)為微生物檢驗(yàn)用蒸餾水的特定電導(dǎo)率0.5ms/m；細(xì)菌數(shù)50cfu/ml。我們?nèi)粘Ｓ玫臉?biāo)準(zhǔn) 為 10ms/m。 檢測頻率：1次/每月。 蒸餾水定點(diǎn)供應(yīng)，并做好相應(yīng)的質(zhì)量控制及記錄。 天平的管理

8、天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。 天平要有使用記錄。 天平作為計(jì)量儀器是列入國家強(qiáng)制檢定的范圍，一般1次/年進(jìn)行檢定。 容積的控制（一） 保證高壓滅菌后的稀釋劑滿足標(biāo)準(zhǔn)用量。 采取稱中法來測定蒸發(fā)量，體積100ml的稀釋劑起重量為101g。高壓結(jié)束體積偏差不得超過1%。 采取先高壓后定量分裝，可避免因高壓造成的體積誤差。 對保存的定量液體應(yīng)在使用時，注意補(bǔ)充容積。 容積的控制（二） 吸管的控制：通過小計(jì)量容器校準(zhǔn)后使用。 小計(jì)量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校準(zhǔn)周期一般為1-2次/一年。 小計(jì)量容器日常使用檢查可每周進(jìn)行一次，包括容器的完整性，并做好相應(yīng)的記錄。 pH計(jì) pH

9、計(jì)使用前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)。 緩沖液使用有效期：PH4.00 約1年 PH7.00 約6個月 pH9.00 約6個月 pH計(jì)的維護(hù)：電極外表的定期清洗； 電極敏感性檢測及極性恢復(fù)。 凈化工作臺的控制 水平流凈化工作臺工作區(qū)域，要求潔凈度為100級?？諝獬两?0min，細(xì)菌數(shù)1個/皿。垂直流凈化工作臺，細(xì)菌數(shù)0.49個/皿. 凈化工作臺運(yùn)行檢查頻次：1次/月，采用細(xì)菌沉降檢測。 凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進(jìn)行粒子與細(xì)菌沉降檢測。 紫外線燈的控制 檢測方法：儀器測試法和生物測試法。 前者是通過專用儀器檢測紫外燈管發(fā)射的紫外光強(qiáng)度。國家消毒技術(shù)規(guī)范中表明在距離照射源1米處，要求其

10、強(qiáng)度為90 lx。 生物測試法：采用一定的菌培養(yǎng)物，經(jīng)一定比例稀釋，菌量控制在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射2min，同時設(shè)置普通光源的對照組，置37培養(yǎng)48h，計(jì)算其殺滅率，要求殺滅率達(dá)99%。 顯微鏡的控制 顯微鏡應(yīng)有作業(yè)指導(dǎo)書，日常維護(hù)記錄及自校記錄。 顯微鏡應(yīng)置于無振動、避免灰塵、防潮等要求的環(huán)境。 其它微生物檢測專用儀器的控制 細(xì)菌鑒定儀、酶標(biāo)儀等設(shè)備，工作中常用陽性對照檢測其功能的正常性。 儀器的檢定則按檢定或自校作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行。 儀器的使用登記、校準(zhǔn)計(jì)劃、校準(zhǔn)記錄等文件存檔。 儀器專人使用，操作者應(yīng)持證上崗。 五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測 高壓滅菌器：定期監(jiān)測（

11、每月一次） 生物指示劑：嗜熱脂肪芽孢桿菌 化學(xué)指示劑：變色的指示帶 培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱： 每日早、晚兩次溫度觀測，繪制溫度曲線圖 五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測 厭氧培養(yǎng)裝置： 化學(xué)標(biāo)記： 美藍(lán) 生物學(xué)指標(biāo)：銅綠假單胞菌 CO2培養(yǎng)箱 ： 每天檢查箱內(nèi)的CO2含量 五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測 生物安全柜： 定期更換濾網(wǎng)，紫外線每3月檢查1次 微生物鑒定儀 及時更新軟件 每批號鑒定卡用標(biāo)準(zhǔn)菌株測定 五、儀器設(shè)備的功能監(jiān)測 六、培養(yǎng)基質(zhì)量控制 培養(yǎng)基的有效性試驗(yàn) 每一批新制或新購的培養(yǎng)基，使用前均須取標(biāo)準(zhǔn)菌株試驗(yàn). 培養(yǎng)基的試驗(yàn)結(jié)果需要加以記錄，項(xiàng)目包括試驗(yàn)日期、試驗(yàn)結(jié)果以及實(shí)驗(yàn)者的簽名等。 培養(yǎng)基質(zhì)量控制

12、 培養(yǎng)基的量： 平板培養(yǎng)基的厚度一般為3mm (90mm平皿+15-20ml培養(yǎng)基） 斜面不超過試管的2/3 常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （一） 檢驗(yàn)項(xiàng)目與方法：物理、化學(xué)及生物學(xué)指標(biāo)鑒定 A：感官測定，檢查其顏色與透明度，培養(yǎng)基應(yīng)澄清，無渾濁。 B：PH測定，按各種培養(yǎng)基要求的PH±0.2。 C：生物學(xué)指標(biāo)檢定，無菌實(shí)驗(yàn)、被檢培養(yǎng)基相應(yīng)細(xì)菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。 常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （一） 無菌試驗(yàn)： 每批配好的培養(yǎng)基須進(jìn)行無菌試驗(yàn) 隨機(jī)選取5%-10%的量，如果配制大量的培養(yǎng)基，則任意選取10個平板或管裝培養(yǎng)基，35溫度下過夜培養(yǎng)，證明無菌生長為合格 常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

13、 （二） 生長率測試：適用于液體和固體培養(yǎng)基：將菌培養(yǎng)液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，同時以新鮮配制的國標(biāo)培養(yǎng)基進(jìn)行對照。 常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 （三） 菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的國標(biāo)培養(yǎng)基無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 常用培養(yǎng)基檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌株 常用培養(yǎng)基檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌株 培養(yǎng)基保存環(huán)境 制成的培養(yǎng)基保存環(huán)境為4冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存， 干燥培養(yǎng)基干粉含有活性物質(zhì)或遇熱易分解的物質(zhì)應(yīng)仔細(xì)查看存放條件，多數(shù)也須放在2-8 條件保存。 含有高濃度膽鹽的培養(yǎng)基存放于10-15 。 培養(yǎng)基配制的質(zhì)量控制 培養(yǎng)基的制作過程必須統(tǒng)一

14、 培養(yǎng)基或添加劑的劑量、pH值、高溫滅菌的時間或溫度，都需遵照規(guī)定 培養(yǎng)基名稱、本批配制量、配方、配制日期和配制人員姓名都必須詳細(xì)記錄 培養(yǎng)基制備控制程序 培養(yǎng)基配制所用的儀器設(shè)備必須經(jīng)過相應(yīng)的鑒定 。 配制培養(yǎng)基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的。 培養(yǎng)基的配制程序（一） 不同的培養(yǎng)基配制時注意各類成分的用途。 對于干燥培養(yǎng)基配制，同樣需要進(jìn)行PH測驗(yàn)。 培養(yǎng)基的配制程序（二） 配制好的培養(yǎng)基（尤其是糖發(fā)酵管）不宜久放。因?yàn)榕囵B(yǎng)基吸收空氣中的二氧化碳，會使培養(yǎng)基變酸，從而影響細(xì)菌的生長。 培養(yǎng)基中 的抑制劑及指示劑一定要精確稱量。 七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控 染色液的質(zhì)量控制 染色液要

15、標(biāo)明配制或購入日期，選用適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)菌株作陽性及陰性對照鑒定。 革蘭氏染色用金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌制備濃菌懸液進(jìn)行質(zhì)量控制，每次質(zhì)控與標(biāo)本檢測同步進(jìn)行。 七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控 各種染色液的監(jiān)控菌株 染色液 陽性對照菌 陰性對照菌 監(jiān)控頻度 革蘭染色液 金黃色葡萄球菌 大腸埃希菌 每天 抗酸染色液 結(jié)核分枝桿菌 每次 異染顆粒染色液 白喉棒狀桿菌 每次 莢膜染色液 肺炎克雷伯菌 每批 鞭毛染色液 普通變形桿菌 福氏志賀菌 每次 七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控 試劑的質(zhì)量控制 各類試劑，在配制或購入后均應(yīng)進(jìn)行“有效”試驗(yàn)，用已知陽性及陰性菌株進(jìn)行試驗(yàn) 試劑須根據(jù)標(biāo)示配制，適當(dāng)儲存 對較

16、穩(wěn)定的試劑如靛基質(zhì)試劑應(yīng)在配制時及每周予以檢測，凡不穩(wěn)定的試劑每天使用時均應(yīng)檢測，合格后才能使用 七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控 七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控 診斷血清的質(zhì)量控制 購入的沙門菌屬、志賀菌屬、致病性大腸桿菌的診斷血清必須立即記錄其購入日期、觀察透明度、色彩有無變化和是否有沉淀物，然后置4冰箱保存 使用前應(yīng)注意檢查診斷血清的批號、有效期，如發(fā)現(xiàn)渾濁或有絮狀沉淀物時，很可能系污染所致，不能再繼續(xù)使用 七、試劑、染色液及抗血清的質(zhì)控 診斷血清的質(zhì)量控制 使用前應(yīng)以陽性及陰性菌株進(jìn)行檢測，觀察其效價及特異性 不得將診斷血清置室溫保存,各種診斷血清均應(yīng)置冰箱中4保存 每月用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行一

17、次測定 八、檢驗(yàn)過程的質(zhì)量控制 檢測質(zhì)量保證 定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和次級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（參考物質(zhì)）進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制。 參加實(shí)驗(yàn)室間的比對或能力驗(yàn)證 利用相同或不同方法進(jìn)行重復(fù)檢測 對留存的樣品進(jìn)行再檢測。 重復(fù)計(jì)數(shù)要求 菌落計(jì)數(shù)精密度控制直接計(jì)數(shù)，選擇同一標(biāo)本，要求檢驗(yàn)人員進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。 自身同一平皿重復(fù)計(jì)數(shù)誤差應(yīng)小于7.7% 實(shí)驗(yàn)人員之間同一平皿重復(fù)計(jì)數(shù)誤差±18 .2% 自身同一梯度平行加樣兩皿間相對誤差小于7.7% 實(shí)驗(yàn)人員之間同一梯度計(jì)數(shù)誤差±18 .2% 不同梯度間菌落計(jì)數(shù)最終誤差小于7.7% 菌種鑒定質(zhì)控 菌種鑒定質(zhì)控要求，對所給的微生物菌種，按有關(guān)的方法及指標(biāo)進(jìn)行生

18、化、血清等方面的鑒定。 鑒定質(zhì)量評價：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；具體操作技術(shù)是否熟練，結(jié)果報(bào)告是否正確。 內(nèi)部質(zhì)量控制的推薦頻率 菌落計(jì)數(shù)精密度控制： 1次/3月； 菌種鑒定控制： 1次/半年或1年 九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存 標(biāo)準(zhǔn)菌株要求 必須是形態(tài)、染色反應(yīng)、生理生化及血清學(xué)特性典型而穩(wěn)定的菌株 實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好，極少發(fā)生變異 國際社會認(rèn)可 來源于專門機(jī)構(gòu) 九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存 標(biāo)準(zhǔn)菌株來源 美國典型菌種保藏中心ATCC 衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心 國家醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏中心 九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存 標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存方法 冷凍干燥法： 最理想的保存方法，不改變菌種性狀，保存時間長 手續(xù)繁瑣，需專門的冷凍干燥設(shè)備 菌種保存中心均采用此法 九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存 標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存方法 冰凍保存法： 此法較簡單，將細(xì)菌混懸于脫纖維羊血或脫脂牛奶中，置液氮或-20冰箱保存 但細(xì)菌經(jīng)多次轉(zhuǎn)種，性狀可能發(fā)生變異 九、標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存 標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存方法 培養(yǎng)基保存法：最簡易方便的方法，適用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室 （1）普通瓊脂斜面保存法：適于一般細(xì)菌的保存，置4冰箱可保存1個月。 （2）血瓊脂斜面保存法：適于鏈球菌，可半月轉(zhuǎn)種一次。 （3）半固體穿刺法：穿刺培養(yǎng)基并加液體