糖類(lèi)脂肪蛋白質(zhì)的鑒定

1、實(shí)驗(yàn)：生物組織中可溶性還原糖、生物組織中可溶性還原糖、 脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定（一）生物組織中可溶性還原糖的鑒定（一）生物組織中可溶性還原糖的鑒定1.1.實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 當(dāng)質(zhì)量濃度為當(dāng)質(zhì)量濃度為0.10.1g/mLg/mL的氫氧化鈉溶液的氫氧化鈉溶液與質(zhì)量濃度為與質(zhì)量濃度為0.050.05g/mLg/mL的硫酸銅溶液混合的硫酸銅溶液混合后，立即生成淡藍(lán)色的后，立即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)Cu(OH)2 2懸濁液。懸濁液。 Cu(OH)Cu(OH)2 2與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖共熱，能夠生成磚紅色的還原糖共熱，能夠生成磚紅色的CuCu2

2、2O O沉淀。沉淀。因此，利用該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶因此，利用該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶性還原糖。性還原糖。RRCHOCHO+2Cu(OH)+2Cu(OH)2 2RRCOOHCOOH+ +CuCu2 2O O+2H+2H2 2O O2.2.實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)，還原糖做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)，還原糖的含量、生物組織有無(wú)色素是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)的含量、生物組織有無(wú)色素是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其觀察的最重要因素。果及其觀察的最重要因素。 因此要選用可溶性因此要選用可溶性還原糖含量高還原糖含量高、白色或近于白色白色或近于白色的植物組織，其中以的植物組織，其中以蘋(píng)果、梨蘋(píng)果、梨最好，也可用白

3、蘿卜替代。最好，也可用白蘿卜替代。3.3.試劑配制試劑配制 甲液（甲液（0.10.1g/mLg/mL的氫氧化鈉溶液）的氫氧化鈉溶液）斐林試劑斐林試劑 乙液（乙液（0.05g/mL的硫酸銅溶液）的硫酸銅溶液）甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，切不可分開(kāi)滴加，或者久置后切不可分開(kāi)滴加，或者久置后才用。才用。4.4.實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟（1 1）制備組織樣液（教師制備）制備組織樣液（教師制備）（2 2）鑒定樣液）鑒定樣液先在試管中加入2mL組織樣液再加入2mL剛配制的斐林試劑水浴煮沸2分鐘注意觀察整注意觀察整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，溶液顏中，溶液顏色的變色的變化！化?。ǘ┥锝M織

4、中脂肪的鑒定（二）生物組織中脂肪的鑒定1.1.實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 蘇丹蘇丹是可以對(duì)脂肪染色的試劑，是可以對(duì)脂肪染色的試劑，因此，當(dāng)含有大量油滴的植物細(xì)胞用蘇因此，當(dāng)含有大量油滴的植物細(xì)胞用蘇丹丹染色后，在顯微鏡下可以看到細(xì)胞染色后，在顯微鏡下可以看到細(xì)胞內(nèi)橘黃色的顆粒。內(nèi)橘黃色的顆粒。2.2.實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)時(shí)，所用材料一要脂肪含做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)時(shí)，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生種子符合該實(shí)驗(yàn)的要求。種子符合該實(shí)驗(yàn)的要求。 將花生種子經(jīng)過(guò)將花生種子經(jīng)過(guò)3-43-4小時(shí)的浸泡使其變軟，小時(shí)的浸泡使其變軟，有利于切

5、成薄片；但浸泡時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)，否有利于切成薄片；但浸泡時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)，否則切片時(shí)易碎裂，切不成薄片。則切片時(shí)易碎裂，切不成薄片。3.3.試劑配制試劑配制 蘇丹蘇丹溶液：將溶液：將0.1g0.1g蘇丹蘇丹干粉溶于干粉溶于100100mLmL體積分?jǐn)?shù)為體積分?jǐn)?shù)為95%95%的酒精溶液中，待全部的酒精溶液中，待全部溶解后即成。溶解后即成。4.4.實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟（1 1）切片制作）切片制作去掉花生種皮去掉花生種皮用左手的三個(gè)手指夾住花生的一片用左手的三個(gè)手指夾住花生的一片子葉，使花生子葉高于手指之上（子葉，使花生子葉高于手指之上（為為什么？什么？）。右手持刀片，將子葉削去）。右手持刀片，將子葉削去一

6、層，形成平面。一層，形成平面。刀口向內(nèi)，與花生斷面平行，以均勻的動(dòng)作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意注意要整個(gè)臂部用力，而不要腕部用力。要整個(gè)臂部用力，而不要腕部用力。）如此連續(xù)動(dòng)作，切下一些薄片。（2 2）染色）染色 用毛筆將最用毛筆將最 薄的幾片材料移至潔凈的載玻片的薄的幾片材料移至潔凈的載玻片的中央中央滴蘇丹滴蘇丹溶液溶液2-32-3滴于花生子葉薄片上滴于花生子葉薄片上2-2-1min1min后，吸去染液后，吸去染液滴滴50%50%的酒精洗去浮色的酒精洗去浮色吸去吸去多余酒精多余酒精再滴再滴1-21-2滴蒸餾水滴蒸餾水蓋上蓋玻片，制成蓋上蓋玻片，制成臨時(shí)裝片。臨時(shí)裝片。（3 3

7、）鏡檢鑒定）鏡檢鑒定 在低倍鏡下觀察，找到花生子葉切片的在低倍鏡下觀察，找到花生子葉切片的最薄處（最薄處（），移至視野），移至視野的中心的中心換用高倍鏡觀察，調(diào)焦至最清晰。換用高倍鏡觀察，調(diào)焦至最清晰。可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)橘黃色橘黃色的圓形小顆粒，這就是的圓形小顆粒，這就是脂肪滴（油滴）。脂肪滴（油滴）。若發(fā)現(xiàn)觀察物外圍也有許若發(fā)現(xiàn)觀察物外圍也有許多橘黃色小顆粒，則是脂肪跑了出來(lái)多橘黃色小顆粒，則是脂肪跑了出來(lái)。若用物理方法如何鑒定脂肪的存在若用物理方法如何鑒定脂肪的存在? ?烘烤種子后烘烤種子后, ,把子葉放在白紙上用手指把子葉放在白紙上用手指擠壓擠壓, ,白紙上會(huì)出現(xiàn)透明的油跡白紙上會(huì)

8、出現(xiàn)透明的油跡, ,說(shuō)明子說(shuō)明子葉含有脂肪。葉含有脂肪。 （三）生物組織中蛋白質(zhì)的鑒定（三）生物組織中蛋白質(zhì)的鑒定1 1 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 在堿性溶液（在堿性溶液（NaOHNaOH）中，雙縮脲）中，雙縮脲（H H2 2NOC-NH-CONHNOC-NH-CONH2 2）能與）能與Cu Cu 2+2+作用，作用，形成紫色的絡(luò)合物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙形成紫色的絡(luò)合物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。縮脲反應(yīng)。 由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此，蛋白質(zhì)都可脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此，蛋白質(zhì)都可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。3.3.試劑配制試劑配

9、制 A A液（液（0.10.1g/mLg/mL的氫氧化鈉溶液）的氫氧化鈉溶液）雙縮脲試劑雙縮脲試劑 B B液（液（0.010.01g/mLg/mL的硫酸銅溶液）的硫酸銅溶液）2.2.實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，一般選用蛋白質(zhì)做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，一般選用蛋白質(zhì)含量較高的大豆含量較高的大豆(可用豆?jié){替代）或雞蛋清?？捎枚?jié){替代）或雞蛋清。4.4.實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)步驟：（1 1）制備生物組織樣液（教師制備）制備生物組織樣液（教師制備）（2 2）鑒定）鑒定先加2mL組織樣液再加2mL雙縮脲試劑A液加3-4滴雙縮脲試劑B液注意：在鑒定蛋白質(zhì)時(shí)要分別滴加兩種試注意：在鑒定蛋白質(zhì)時(shí)要分別滴加兩種試劑，并且硫酸銅只能加劑，并且硫酸銅只能加3434滴，不能過(guò)量滴，不能過(guò)量如過(guò)量，如過(guò)量，CuSOCuSO4 4在堿性溶液中生成大量藍(lán)色在堿性溶液中生成大量藍(lán)色CuCu（OHOH）2 2沉淀，遮蓋了紫色。沉淀，遮蓋了紫色。鑒定蛋清組織中存在蛋白質(zhì)時(shí)，要充分稀釋。鑒定蛋清組織中存在蛋白質(zhì)時(shí)，要充分稀釋。如稀釋不夠，與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng)后，會(huì)粘固在如稀釋不夠，與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng)后，會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不易