醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、WORD格式醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)專業(yè)資料整理WORD格式*交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室專業(yè)資料整理WORD格式1專業(yè)資料整理WORD格式第一次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 2.實(shí)驗(yàn)室規(guī)那么實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 3.細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察技術(shù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 4.染色標(biāo)本的制備革藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課是該專業(yè)課程的重要組成局部， 指導(dǎo)學(xué)生上好實(shí)驗(yàn)課是教學(xué)過程中的重要環(huán)節(jié)，學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)課的目的是：1. 使學(xué)生加深理解并穩(wěn)固理論知識(shí)，學(xué)習(xí)和掌握有關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)，為以后的醫(yī)學(xué)專業(yè)課學(xué)習(xí)打好根底：2. 在實(shí)驗(yàn)中，培養(yǎng)學(xué)生觀察、思考和分析問題的能力，主動(dòng)參與實(shí)驗(yàn)的動(dòng)手能力及獨(dú)立工作的能力。 訓(xùn)練學(xué)生嚴(yán)

2、格的科學(xué)作風(fēng)、 嚴(yán)肅白的科學(xué)態(tài)度和嚴(yán)密的工作方法。3. 培養(yǎng)學(xué)生在集體工作環(huán)境中互幫互讓，團(tuán)結(jié)協(xié)作，共同完成好實(shí)驗(yàn)的精神品德。為了到達(dá)上述目的，提高實(shí)驗(yàn)課的教學(xué)效果，特提出以下要求：1. 實(shí)驗(yàn)課前做好預(yù)習(xí)， 明確本次實(shí)驗(yàn)課的內(nèi)容及其原理、 方法及本卷須知；2. 實(shí)驗(yàn)中要仔細(xì)認(rèn)真，注意分工與協(xié)作，操作實(shí)驗(yàn)要按操作步驟進(jìn)展。學(xué)會(huì)正確操作手法、準(zhǔn)確記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 示教實(shí)驗(yàn)要注意觀察， 并記錄好相關(guān)內(nèi)容；3. 詳細(xì)討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提倡同學(xué)之間互幫互學(xué)，并嚴(yán)密聯(lián)系理論課內(nèi)容。要注意不管實(shí)驗(yàn)結(jié)果與理論符合與否， 都有討論的價(jià)值， 并分析其原因， 有可能的話還應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)；4. 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)那么，在微生物學(xué)

3、實(shí)驗(yàn)課上，要樹立“有菌觀點(diǎn)，嚴(yán)格掌握和不斷完善無菌操作技術(shù)。專業(yè)資料整理WORD格式2專業(yè)資料整理WORD格式實(shí)驗(yàn)室規(guī)那么一、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室須穿工作服、 戴工作帽。除必要的書籍文具外， 其它個(gè)人物品一律不得帶入實(shí)驗(yàn)室。二、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)， 制止飲食、吸煙及與學(xué)習(xí)無關(guān)的其它活動(dòng)， 不得大聲喧嘩或嘻戲。三、未經(jīng)教師許可， 不得擅自搬動(dòng)實(shí)驗(yàn)器材及示教物品， 不準(zhǔn)隨意擺弄和旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)儀器上的開關(guān)及旋扭等。四、按照實(shí)驗(yàn)要求， 在教師的指導(dǎo)下， 主動(dòng)安排要進(jìn)展的實(shí)驗(yàn)， 認(rèn)真進(jìn)展實(shí)驗(yàn)操作，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，爭(zhēng)取順利地完成實(shí)驗(yàn)。五、實(shí)驗(yàn)中使用完畢的器材和試劑， 必須放回規(guī)定的位置。 廢棄物必須按規(guī)定進(jìn)展處理或歸放于

4、指定的容器內(nèi)，不能隨便亂丟亂放。六、實(shí)驗(yàn)中萬一有菌液打翻、 有菌材料污染桌面或衣物、 割破手指等意外情況，應(yīng)及時(shí)報(bào)告教師進(jìn)展處理，切勿自作主X不按規(guī)定處理。七、保護(hù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一切設(shè)備、 掛圖、儀器。注意節(jié)約使用消耗材料及藥品試劑，注意用電平安及節(jié)約水電。八、實(shí)驗(yàn)完畢， 要清理桌面， 將實(shí)驗(yàn)器材放回原處。 值日同學(xué)要搞好實(shí)驗(yàn)室的清潔衛(wèi)生， 保持室內(nèi)整齊， 離開實(shí)驗(yàn)室前要關(guān)好門窗、 水、電，并將手洗干凈。九、未經(jīng)許可，不得將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)任何物品帶出實(shí)驗(yàn)室。專業(yè)資料整理WORD格式3專業(yè)資料整理WORD格式實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察技術(shù)將細(xì)菌培養(yǎng)物或含菌標(biāo)本材料制備的染色標(biāo)本片，置顯微鏡油鏡頭下，可以觀察到細(xì)菌

5、的形狀、 大小、構(gòu)造、排列及染色特性等， 了解這些特征有助于鑒別各種細(xì)菌。一、顯微鏡油鏡頭的使用與保護(hù)【使用原理】用油鏡觀察標(biāo)本、 是在使用高倍鏡的根底上， 采用同玻璃折光率相似的油狀物如香柏油、液體石臘等，滴加在標(biāo)本與油鏡頭中間， 以防止光線散射，提高顯微鏡的清晰度和分辨能力。使觀察物象更加清楚明了?！静僮鞣椒ā?. 調(diào)試：翻開電源，先采用低倍鏡，使視野到達(dá)清晰光亮。2. 加油：雙手向上轉(zhuǎn)動(dòng)粗螺旋，使鏡筒上升，將標(biāo)本片固定于載物臺(tái)上，使染色面對(duì)準(zhǔn)集光器央，加鏡油于標(biāo)本面，調(diào)換油鏡頭對(duì)準(zhǔn)標(biāo)本面。3. 調(diào)焦點(diǎn)：用左手向下輕轉(zhuǎn)粗螺旋，使鏡筒下降，同時(shí)眼睛從右側(cè)觀察下降程度， 待鏡頭入油后接觸上玻片

6、， 用眼觀目鏡， 反轉(zhuǎn)粗螺旋，使鏡筒慢慢上升，待看到模糊物象時(shí)， 改用細(xì)螺旋上下調(diào)節(jié)， 使物像到達(dá)完全清晰為宜 一般轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)前后半圈。4. 觀察：觀察時(shí)只使用細(xì)調(diào)。需改換視野時(shí)，右手操縱推進(jìn)器，左手轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)螺旋，做到配合自如。并養(yǎng)成左眼觀察，右眼繪圖的習(xí)慣。【油鏡頭的保護(hù)】油鏡頭使用完結(jié)后， 必須用擦鏡紙滴加少量二甲苯將油擦洗干凈 二甲苯用量宜少，以免鏡片間粘膠溶解。下降集光器，半接物鏡轉(zhuǎn)成“八字，再下降鏡筒，輕觸鏡臺(tái)外表，雙手平持顯微放入鏡箱， 防止直射日光，置于枯燥處，以防受潮?！颈揪眄氈?. 使用直筒顯微鏡觀察標(biāo)本時(shí)，必須兩眼同時(shí)睜開，訓(xùn)練使用左眼觀察，右眼繪圖。如用油鏡頭觀察，勿將鏡

7、身歪斜，防止鏡油流出片面。2. 觀察染色標(biāo)本時(shí)，光線宜強(qiáng)，可上升集光器，開大光圈。觀察不染專業(yè)資料整理WORD格式4專業(yè)資料整理WORD格式色標(biāo)本時(shí)，光源宜弱，可下降集光器，縮小光圈。3. 使用完畢，一定擦去鏡油。二、細(xì)菌不染色標(biāo)本不染色的細(xì)菌和標(biāo)本鏡檢， 雖可觀察細(xì)菌在自然生活狀態(tài)下的大小、 形態(tài)、活動(dòng)等，但主要用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力。一懸滴法【材料】1. 細(xì)菌：枯草桿菌 812小時(shí)肉湯培養(yǎng)物。2. 凹玻片，蓋玻片，凡士林等?！痉椒ā?. 取凹玻片一X，于凹窩周圍涂少許凡士林見圖 1。圖1 懸滴法2. 用接種環(huán)沾取枯草桿菌 812小時(shí)培養(yǎng)物，置于蓋玻片中央。3. 反轉(zhuǎn)凹玻片，使凹窩對(duì)準(zhǔn)蓋玻片中央

8、，蓋于其上，輕壓后，迅速翻轉(zhuǎn)玻片，使蓋破片面向上。4. 標(biāo)本片置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用弱光線，低倍鏡找物象，再改換高倍鏡觀察，密切注意，勿壓破蓋玻片。5. 觀察：細(xì)菌在鏡下為灰色半透明體，并呈現(xiàn)真運(yùn)動(dòng)，如在明亮的海洋中，深入淺出游來動(dòng)去。二壓滴法用途同懸滴法?！静牧稀?. 細(xì)菌：枯草桿菌 812小時(shí)肉湯培養(yǎng)物。專業(yè)資料整理WORD格式5專業(yè)資料整理WORD格式2. 載物玻片：蓋玻片等?！痉椒ā?. 取無油污物玻片 1X。2. 用接種環(huán)沾取枯草桿菌 812小時(shí)肉湯培養(yǎng)物置于載物玻片中央。3. 加蓋玻片于菌液外表，觀察方法同懸滴法。三、細(xì)菌染色標(biāo)本片的制備操作由于細(xì)菌個(gè)體微小， 根本上無色透明，

9、故將其用適當(dāng)染料染色觀察， 方能顯示它的形態(tài)、大小、構(gòu)造及染色特性等，在細(xì)菌和鑒別上有重要意義?！静牧稀?. 葡萄球菌 大腸桿菌 1824小時(shí)普通瓊脂斜面培養(yǎng)物。2. 革蘭染色液。3. 生理鹽水，載物玻片，接種環(huán)等?！痉椒ā恳患?xì)菌涂片的制作1. 涂片：取清潔無油污載物玻片一X，接種環(huán)沾取生理鹽水 12環(huán)置于玻片中央，再將接種環(huán)火焰滅菌待冷后， 沾取葡萄球菌或大腸桿菌菌苔少許， 混于生理鹽水中，輕輕涂成均勻薄膜。2. 枯燥：室溫自然枯燥，也可將涂面向上，遠(yuǎn)離火焰上方微加溫枯燥切勿加熱過度，以防將標(biāo)本燒枯。3. 固定：標(biāo)本枯燥后，通過酒精燈火焰三次約 23秒鐘，以殺死細(xì)菌并使之固定于玻片上。4.

10、染色：可根據(jù)不同的染色要求，用相應(yīng)染色液進(jìn)展染色。二革蘭染色法：涂片的制備方法同前，革蘭染色方法可分為四步。1. 初染：于涂抹面上滴加結(jié)晶紫染液數(shù)滴，覆蓋整個(gè)涂面，室溫作用一分鐘。用自來水輕輕沖洗，甩干水分。2. 媒染：滴加魯戈碘液，室溫作用一分鐘，自來水沖洗，甩干水分。3. 脫色：將載物玻片浸于 95%酒精缸中，上下提取，邊提邊看，見涂面無色素下流為止約 30秒鐘。自來水沖洗，甩干水分。4. 復(fù)染：加稀釋復(fù)紅染液染 30秒鐘，自來水沖洗，吸水紙吸干玻片水分。5. 加油鏡檢：染色片待干后，于油鏡下，調(diào)強(qiáng)光視野觀察，呈紫色的為革專業(yè)資料整理WORD格式6專業(yè)資料整理WORD格式蘭陽性菌，呈紅色的

11、為革蘭陰性菌。三美蘭染色法【方法】將涂片固定滴加美蘭染液于玻片上，染 12分鐘，水洗、待干、鏡檢?！窘Y(jié)果】此法為單染色法， 菌體和細(xì)胞均染成藍(lán)色。 常用于腦膜炎球菌及白喉?xiàng)U菌等細(xì)菌染色。四、細(xì)菌根本形態(tài)和特殊構(gòu)造觀察一根本形態(tài)示教1. 球形：葡萄球菌革蘭染色標(biāo)本片菌體正園形，染成蘭紫色，呈現(xiàn)葡萄串狀排列。 G+球菌。2. 桿形：大腸桿菌革蘭染色標(biāo)本片菌體短桿狀，染成紅色，呈分散排列。 G-桿菌。3. 螺形：霍亂弧菌革蘭染色標(biāo)本片菌體弧形， 染成紅色，呈分散排列。G-弧菌。二特殊構(gòu)造示教1. 鞭毛：傷寒桿菌鞭毛染色片菌體較粗大桿狀，染成蘭灰色，單個(gè)或成堆存在，周圍可見到波浪狀彎曲、較長(zhǎng)、呈蘭灰色

12、的鞭毛。2莢膜：肺炎雙球菌莢膜染色片視野背景為紅色，其中可見到染色呈深紅色，矛頭狀菌體，縱向成雙排列， 菌體周圍有未染上顏色的空白區(qū)， 即莢膜。3. 芽胞：破傷風(fēng)梭菌芽胞染色片菌體為細(xì)長(zhǎng)桿狀，頂端有染成紅色、并大于菌體的球狀物即芽胞，呈“鼓槌狀，其他散亂分布的紅色球體，為菌體脫落的成熟芽胞。"附錄"革蘭 Gram染液的配制1. 結(jié)晶紫染液將 1份結(jié)晶紫酒精飽和液與 4份1%草酸銨水溶液混合即成 14克結(jié)晶紫加95%酒精 100毫升即為酒精飽和溶液。2. 魯戈 Lugol 碘液碘 1克碘化鉀 2克蒸餾水 300毫升專業(yè)資料整理WORD格式7專業(yè)資料整理WORD格式3. 稀釋復(fù)

13、紅液1份鹼性復(fù)紅飽和液鹼性復(fù)紅 3.2克溶于 95%酒精 100毫升中。即為鹼性復(fù)紅飽和溶液加 9份5%石炭酸水溶液，先配成石炭酸復(fù)紅染液抗酸染色用，取 1份石炭酸復(fù)紅染液加 9份蒸餾水即為稀釋復(fù)紅染液。第二次實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1；細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)操作實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 2；細(xì)菌的生化反響檢測(cè)示教實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 3：播放錄象"細(xì)菌感染的檢查方法和防治原那么"實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)給細(xì)菌提供適宜的條件， 細(xì)菌即可以生長(zhǎng)繁殖， 形成具有一定特征的培養(yǎng)物，學(xué)習(xí)細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)可以純化細(xì)菌， 了解細(xì)菌的生長(zhǎng)特征， 并能進(jìn)一步檢測(cè)細(xì)菌生化反響、 變異性，制備細(xì)菌抗原， 深入進(jìn)展分子生物學(xué)工作等。了解細(xì)菌的培養(yǎng)特征也

14、有助于鑒別細(xì)菌。細(xì)菌培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基是用人工方法將適合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的各種營養(yǎng)物配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)，以供細(xì)菌培養(yǎng)使用。一般培養(yǎng)基的主要成份為蛋白質(zhì)、糖類、鹽類、水分等。另外還有一些營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌， 還必須參加血液或血清、 雞蛋、維生素等其他營養(yǎng)物質(zhì)。 有時(shí)為了鑒別或抑制某些細(xì)菌， 那么可參加各種專用基質(zhì) 如某種糖類、氨基酸等，指示劑，染料等。由于對(duì)培養(yǎng)基的使用目的不同，故在培養(yǎng)基的選擇上有所不同。 按其物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、 固體培養(yǎng)基、 半固體培養(yǎng)基。按其成分和用途可分為普通培養(yǎng)基， 鑒別培養(yǎng)基， 選擇培養(yǎng)基和專用培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基需參加小試管、中試管、三角瓶、平皿等內(nèi)使用。培養(yǎng)基的種

15、類很多，但一般制備原那么有三條：1. 足夠和適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)成份。 籍以滿足細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的要求， 獲得典型細(xì)菌培養(yǎng)物，到達(dá)研究細(xì)菌的形態(tài)，生化反響，抗原構(gòu)造及致病力等方面的目的。2. 適宜的酸鹼度。 培養(yǎng)基的酸鹼度直接影響細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。 一般細(xì)菌最適宜 PH為7.27.6。測(cè)定的方法常用普通比色法或精細(xì) PH試紙來測(cè)定見附錄。專業(yè)資料整理WORD格式8專業(yè)資料整理WORD格式3. 絕對(duì)無菌。培養(yǎng)基務(wù)必進(jìn)展除菌處理，由于培養(yǎng)基所含成份不同，除菌的方法也不同。如普通培養(yǎng)基常用高壓蒸氣滅菌法。一、常用培養(yǎng)基的制備一普通肉湯培養(yǎng)基【材料】1. 新鮮牛肉或牛肉膏，蛋白胨，氯化鈉，瓊脂，蒸餾水。2. 酚紅指標(biāo)

16、劑，比色架及標(biāo)準(zhǔn)比色管或精細(xì) PH試紙。3. 漏斗，量筒，三角燒瓶，試管等?！痉椒ā?. 稱取去脂去腱絞碎的鮮牛肉 500克，浸于 1000毫升蒸餾水中， 冰箱過夜，次日煮沸 30分鐘，紗布過濾，蒸餾水補(bǔ)足其量，也可用牛肉膏 3克加蒸餾水 1000毫升加熱溶化，即為肉浸液。2. 取肉浸液 1000毫，氯化鈉 5克，蛋白胨 10克混合加熱溶化。3. 調(diào)整 PH為 7.6，用濾紙過濾分裝于中試管或三角燒瓶?jī)?nèi)，塞緊棉塞?！居猛尽抗└着囵B(yǎng)基用，營養(yǎng)比肉膏湯好，一般營養(yǎng)要求不高的菌均可生長(zhǎng)。二普通瓊脂培養(yǎng)基瓊脂是石花菜等海藻類提取的膠體物質(zhì)， 其化學(xué)成份主要是多糖。 當(dāng)溫度到達(dá) 98以上可溶解于水，

17、45以下那么凝固。瓊脂對(duì)細(xì)菌一般無營養(yǎng)作用 除自然界中極少數(shù)菌可利用瓊脂之外，純屬賦形劑。便于人們制做斜面、平板、高層等不同類型的固體培養(yǎng)基。【材料與方法】普通肉湯培養(yǎng)基 100毫升，參加瓊脂 23克，加熱溶化，用蒸餾水補(bǔ)足失去水分，調(diào)整 PH為7.6后分裝中試管、平皿等器皿，高壓蒸氣 15磅滅菌 20分鐘，可制成普通瓊脂斜面和普通瓊脂平板?！居猛尽抗┮话慵?xì)菌培養(yǎng)用，并可作無糖基培養(yǎng)基。三半固體培養(yǎng)基【材料與方法】取普通肉湯培養(yǎng)基 100毫升，參加瓊脂 0.50.7克，加熱溶化。調(diào)整 PH為7.6，分裝于小試管內(nèi)，每管 15毫升，高壓蒸氣磅滅菌 20分鐘，待冷后放入 4冰箱專業(yè)資料整理WORD

18、格式9專業(yè)資料整理WORD格式備用?！居猛尽勘４嬉话憔N用，并可觀察細(xì)菌的動(dòng)力及生化反響。四血液瓊脂培養(yǎng)基【材料與方法】將高壓滅菌后普通瓊脂培養(yǎng)基。冷至45 50時(shí)以無菌手續(xù)操作參加5%10%血液人或動(dòng)物脫纖維無菌血液?？芍瞥裳桨搴脱泵妗！居猛尽抗I養(yǎng)要求較高的細(xì)菌別離培養(yǎng)用，亦可觀察細(xì)菌的溶血特征。二、細(xì)菌接種技術(shù)及生長(zhǎng)表現(xiàn)由于細(xì)菌感染而致病的各種標(biāo)本及帶菌者所需檢查的各種標(biāo)本， 往往并非單一的細(xì)菌， 而混有其它非致病菌 人體正常菌群 。因此當(dāng)對(duì)此標(biāo)本須作出細(xì)菌鑒定時(shí)，就必須從標(biāo)本中別離出致病菌，稱為 細(xì)菌別離培養(yǎng)技術(shù) 。另外，對(duì)已得到可疑病菌進(jìn)展細(xì)菌鑒定及菌種保存等培養(yǎng)，稱為 純培養(yǎng)接

19、種技術(shù) 。一平板劃線接種法又稱別離培養(yǎng)法平板別離劃線的方法較多， 其中以分區(qū)劃線法與曲線劃線法較為常用。 其目的都要使細(xì)菌呈現(xiàn)單個(gè)菌落生長(zhǎng)，便于同雜菌菌落鑒別。現(xiàn)只介紹分區(qū)劃線法?！静牧稀?. 細(xì)菌：大腸桿菌、葡萄球菌 1824小時(shí)普通瓊脂斜面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：普通瓊脂平板。3. 酒精燈，接種環(huán)等。【方法】1. 右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，待涼后，挑取大腸桿菌或葡萄球菌培養(yǎng)物少許。2. 左手斜持瓊脂平板， 皿蓋留在桌上， 于火焰近處將菌涂于瓊脂平板上端，來回劃線，涂成薄膜約占平板總外表積的 1/10，劃線時(shí)接種環(huán)與平板外表成3040o角，輕輕接觸，以腕力在平板外表行輕快地滑移動(dòng)作，接種環(huán)不應(yīng)

20、劃破培養(yǎng)基外表。3. 燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留細(xì)菌，待冷是否冷卻，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸，假設(shè)瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試，從薄膜處取菌作連續(xù)平行劃線 見圖 3，約占平板外表 1/5左右，再次燒灼接種環(huán)，等三次平行劃線以同樣方專業(yè)資料整理WORD格式10專業(yè)資料整理WORD格式法作第四次，第五次劃線，將平板外表劃完。4. 劃線完畢，蓋上平皿蓋，底面向上，用標(biāo)簽或臘筆注明菌名檢驗(yàn)，接種者班級(jí)，*，組別等，置 37孵育培養(yǎng) 24小時(shí)后觀察結(jié)果見圖 4。二純培養(yǎng)細(xì)菌接種法1. 斜面培養(yǎng)基接種法：用于培養(yǎng)，保存菌種及其它實(shí)驗(yàn)用?！静牧稀?大腸桿菌，葡萄球菌 1824小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2普通瓊脂斜面培

21、養(yǎng)基。3接種環(huán)，接種針，酒精燈等?！痉椒ā?取一支斜面培養(yǎng)基及一支純菌種管，并排傾斜放在左手四指中拇指壓住并以手掌支住兩試管底部。右手將白金環(huán)于火焰上滅菌、冷卻。并拔起兩試管的棉塞。勿放置桌上，如棉塞太緊時(shí)應(yīng)預(yù)先松動(dòng)。（ 2試管口部于火焰上往返通過 23次滅菌，將滅菌白金環(huán)伸入有菌試管中，取少量細(xì)菌一般應(yīng)從斜面底部沾取，然后小心移至準(zhǔn)備接種的試管中。（ 3接種方法是自管底向上連續(xù)平劃線，假設(shè)以保存菌為目的時(shí)可自管底上劃一粗直線即可。（ 4取出接種環(huán)，將試管上部再經(jīng)火焰滅菌，塞好棉塞，接種環(huán)滅菌后放回原處。（ 5假設(shè)自平皿培養(yǎng)物中取菌時(shí)，只應(yīng)沾取一個(gè)單個(gè)菌落。（ 6接種菌應(yīng)作好標(biāo)記，標(biāo)明菌種名稱

22、，日期等，置 37溫箱中培養(yǎng)，次日觀察結(jié)果。2. 液體培養(yǎng)基接種法：用于增菌及鑒定細(xì)菌生長(zhǎng)特點(diǎn)，如外表生長(zhǎng)，沉淀生長(zhǎng)，均勻混濁生長(zhǎng)等。專業(yè)資料整理WORD格式11專業(yè)資料整理WORD格式【材料與方法】操作技術(shù)根本與上法一樣， 只是接種時(shí)應(yīng)將沾菌之接種環(huán)沿接近液體外表之管內(nèi)壁輕輕摩擦 勿用力振蕩 使細(xì)菌混入培養(yǎng)基內(nèi)， 置 37溫箱中培養(yǎng)，次日觀察結(jié)果。3. 半固體培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)法用于保存菌種及間接觀察細(xì)菌之動(dòng)力無動(dòng)力之細(xì)菌僅沿穿刺線生長(zhǎng)，清晰可見；有動(dòng)力的細(xì)菌使培養(yǎng)基呈現(xiàn)混濁樣，穿刺線甚至難以看出。用無菌操作技術(shù)， 滅菌穿刺針沾取細(xì)菌后， 垂直刺入半固體培養(yǎng)基中央直達(dá)近管底處，再沿原穿刺線抽出即

23、可，置37溫箱培養(yǎng)，次日觀察結(jié)果。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 2； 實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌的生化反響檢測(cè) 示教不同細(xì)菌由于所含的酶系統(tǒng)不完全一樣， 因而對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的分解能力及代謝產(chǎn)物亦不一致，據(jù)此，可用以鑒別細(xì)菌的種類。一、單糖發(fā)酵試驗(yàn)【原理】單糖發(fā)酵是將葡萄糖， 乳糖或麥芽糖等分別參加蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)，使其最終濃度為 0.751。并參加一定量酚紅指示劑及小倒管，制成單糖發(fā)酵管，接種細(xì)菌經(jīng) 37培養(yǎng) 1824小時(shí)，假設(shè)能分解糖產(chǎn)酸那么酚紅指示劑由紅變黃，假設(shè)能分解甲酸有 C02和 H2等氣體形成，小倒管內(nèi)那么聚集有氣泡； 不分解，那么指示劑不變色?！静牧稀?菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌1824小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2培養(yǎng)基：葡萄

24、糖發(fā)酵管，乳糖發(fā)酵管等?！痉椒ā?將傷寒桿菌，大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內(nèi)。2置 37孵箱培養(yǎng) 1824小時(shí)。3觀察結(jié)果：由于一些細(xì)菌能分解某種糖類產(chǎn)酸，所以培養(yǎng)基中PH下降到7.0以下，在酚紅指示劑的顯示下，培養(yǎng)基顏色由紅變黃。產(chǎn)酸者以“ +表示，如果同時(shí)產(chǎn)生氣體， 那么培養(yǎng)基中小倒管內(nèi)有氣泡出現(xiàn)， 此乃產(chǎn)酸又產(chǎn)氣， 以“專業(yè)資料整理WORD格式12專業(yè)資料整理WORD格式表示，不分解，那么指示劑不變色，用“- 表示?！窘Y(jié)果】傷寒桿菌大腸桿菌葡萄糖+乳 糖-二、 V-P(Voges-Proskauer)試驗(yàn)【原理】有些細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌， 分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸， 丙酮酸

25、脫羧， 生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中被氧化為二乙酰， 再與培養(yǎng)基內(nèi)胍基結(jié)合， 生成紅色化合物，V P試驗(yàn)陽性?！静牧稀?菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌1824小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。3試劑： V-P試劑 40氫氧化鉀水溶液 (內(nèi)含 0.3肌酸 )和 6% -奈酚酒精溶液 ?！痉椒ā?. 分別接種大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌于兩支葡萄糖蛋白胨水中。2. 置37培養(yǎng) 48小時(shí)后，取出分別參加 KOH1ml 和-奈酚溶液 1ml ,搖勻，靜置試管架上 515分鐘。3. 觀察結(jié)果：培養(yǎng)液變?yōu)榧t色為陽性，不變色為陰性。【結(jié)果】大腸桿菌： - ；產(chǎn)氣桿菌： +三、甲基紅 M 、R試驗(yàn)【原理】

26、某些細(xì)菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，繼而分解為甲酸、 乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基 PH值降至 4.5以下，參加甲基紅指示劑呈紅色，此為陽性反響；假設(shè)產(chǎn)酸量少或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為醇、醛、氣體和水等， 那么培養(yǎng)基的酸堿度仍在 PH 6.2以上，參加甲基紅指示劑呈現(xiàn)黃色，為陰性反響。【材料】專業(yè)資料整理WORD格式13專業(yè)資料整理WORD格式1. 菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌 1824小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。3. 試劑：甲基紅試劑。【方法】1. 分別將大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。2. 置37培養(yǎng) 23天取出，分別滴加甲基紅試劑 23滴，混勻，觀

27、察結(jié)果?！窘Y(jié)果】大腸桿菌： +，產(chǎn)氣桿菌： - 。四、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)【原理】枸櫞酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基， 其中枸櫞酸鈉為唯一碳源， 磷酸二氫銨為唯一氮源。一般細(xì)菌能利用磷酸二氫銨作為氮源， 但不一定能分解枸櫞酸鹽取得碳源。因此，根據(jù)可否利用枸櫞酸鹽來鑒別細(xì)菌， 如產(chǎn)氣桿菌可利用枸櫞鹽作為碳源，細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，形成菌苔，分解枸櫞酸鹽生成堿性碳酸鹽，使培養(yǎng)基PH上升到 7.0以上，由綠色變?yōu)樯钐m色，為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽性；而大腸桿菌那么不能分解枸櫞酸鹽，得不到碳源， 不能生長(zhǎng)，無菌苔形成， 培養(yǎng)基顏色不發(fā)生變化，為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陰性。【材料】1. 菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌 1824小時(shí)瓊脂斜

28、面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：枸櫞酸鹽斜面?！痉椒ā?. 分別將大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌接種于兩支枸櫞酸鹽斜面培養(yǎng)基。2. 置37恒溫培養(yǎng) 24小時(shí)后觀察結(jié)果。【結(jié)果】產(chǎn)氣桿菌： +有菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基變色大腸桿菌： - 無菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基不變色五、靛基質(zhì) Indol 試驗(yàn)【原理】某些細(xì)菌如大腸桿菌， 變形桿菌等具有色氨酸酶， 能分解蛋白胨水培養(yǎng)基中的色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)無色吲哚，再與歐立希試劑對(duì)二甲基氨基苯甲醛專業(yè)資料整理WORD格式14專業(yè)資料整理WORD格式反響，形成紅色化合物玫瑰吲哚，即為陽性反響。【材料】1. 菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌 1824小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基。3.

29、試劑，歐立希 Ehrlich 試劑對(duì)二甲基氨基苯甲醛【方法】1. 分別將大腸桿菌，傷寒桿菌接種于兩支蛋白胨水培養(yǎng)基中。2. 置37培養(yǎng) 23天后，每管沿管壁各加歐立希試劑 0.51ml于培養(yǎng)液面上，待 1-2分鐘后觀察結(jié)果：在交界面出現(xiàn)玫瑰紅色環(huán)即為吲哚試驗(yàn)陽性，無紅色環(huán)即為陰性?！窘Y(jié)果】大腸桿菌： + ；傷寒桿菌： - 。六、硫化氫 H 2S產(chǎn)生試驗(yàn)【原理】某些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸 如胱氨酸、 半胱氨酸，生成硫化氫。硫化氫遇到培養(yǎng)基中的鉛鹽醋酸鉛或鐵鹽硫酸亞鐵，那么形成黑褐色硫化鉛或硫化亞鐵沉淀物。 培養(yǎng)基內(nèi)含有復(fù)原劑硫代硫酸鈉， 使形成的硫化氫不再氧化?！静牧稀?. 菌種：大腸桿

30、菌，傷塞桿菌 1824小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：醋酸鉛培養(yǎng)基。【方法】1. 分別以半固體穿刺接種法將大腸桿菌，傷寒桿菌穿刺接種地兩支醋酸鉛培養(yǎng)基內(nèi)。2. 置37培養(yǎng) 48-72小時(shí) 2-3天。3. 觀察結(jié)果：取出后對(duì)光觀察，假設(shè)沿穿刺線有黑褐色沉淀物，即表示該菌能產(chǎn)生硫化氫 H2S，否那么反之?！窘Y(jié)果】大腸桿菌： - 無黑色沉淀線生成傷寒桿菌： +有黑色沉淀線生成專業(yè)資料整理WORD格式15專業(yè)資料整理WORD格式七、尿素分解試驗(yàn)【原理】某些細(xì)菌如變形桿菌， 具有尿素分解酶， 能分解尿素而產(chǎn)生氨， 氨溶于水變成氫氧化銨，使培養(yǎng)基變堿而呈紅色即為陽性?！静牧稀?. 菌種：變形桿菌，傷寒桿

31、菌 18-24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基。【方法】1. 分別以斜面接種法將變形桿菌， 傷寒桿菌接種于兩支尿素斜面培養(yǎng)基上。2. 置37培養(yǎng) 18-24小時(shí)。3. 取出觀察結(jié)果，培養(yǎng)基變?yōu)榧t色，即尿素分解試驗(yàn)陽性，假設(shè)不變色，即為尿素分解試驗(yàn)陰性?！窘Y(jié)果】變形桿菌： + ；傷寒桿菌： - 。八、氧化酶試驗(yàn)【原理】某些細(xì)菌如奈瑟菌和綠膿桿菌， 具有氧化酶靛基酚氧化酶 ，能將氧化酶試劑鹽酸二甲基對(duì)苯二胺或四甲基對(duì)苯二胺 氧化成紅色的醌類化合物， 即為氧化酶試驗(yàn)陽性?！静牧稀?. 菌種：淋球菌或腦膜炎球菌， 白色葡萄球菌 18-24小時(shí)巧克力斜面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：巧克力平板。3.

32、 試劑： 0.5-1%鹽酸對(duì)二甲基苯胺或鹽酸二甲基對(duì)苯二胺或鹽酸對(duì)氨基二甲苯胺水溶液?！痉椒ā?. 將腦膜炎球菌或淋球菌，白色葡萄球菌分別接種于巧克力平板；2. 置37培養(yǎng) 24小時(shí)后取出；3. 滴加新鮮配制的 0.5-1%鹽酸對(duì)二甲基苯胺水溶液于固體培養(yǎng)基上；4. 觀察結(jié)果：加試劑后，假設(shè)菌落出現(xiàn)紅色深紅色紫黑色變化均為陽性；反之陰性。專業(yè)資料整理WORD格式16專業(yè)資料整理WORD格式【結(jié)果】腦膜炎球菌和淋球菌： + ；白色葡萄球菌： - ?！颈揪眄氈?. 此項(xiàng)試驗(yàn)應(yīng)防止含鐵物質(zhì)，因遇鐵會(huì)出現(xiàn)假陽性。2. 試劑在空氣中易氧化，故應(yīng)新鮮配制。冰箱保存使用不超過兩周。3. 假設(shè)要?jiǎng)e離培養(yǎng)腦膜

33、炎球菌，應(yīng)在菌落變成紫黑色之前立即轉(zhuǎn)種。否那么細(xì)菌容易死亡。"附錄"1V-P試驗(yàn)劑的配制甲液：-萘酚6g95%灑精100ml乙液： KOH40g肌酸 0.3g蒸餾水100ml2甲基紅試劑的配制甲基紅 0.04g95%酒精 60ml蒸餾水40ml先使甲基紅溶解于酒精中，再參加蒸餾水，混合，搖勻即成。3歐立希 Ehrlich 試劑的配制對(duì)位二甲基氨基苯甲醛4g95%酒精380ml濃硫酸或濃鹽酸 80ml三種成分混合即成，瓶口要嚴(yán)密，以免揮發(fā)。4蛋白胨水培養(yǎng)基的制備成分：蛋白胨 10g氯化鈉 5g蒸餾水 1000ml制法：1先用少量蒸餾水將蛋白胨和氯化鈉相混合溶解,再加足蒸餾水量

34、。2調(diào)節(jié) pH至7.6、用濾紙過濾。3分裝中試管，每管約 3-4ml，加塞滅菌后備用。用途：供吲哚試驗(yàn)用5單糖發(fā)酵管的制備成分：蛋白胨水培養(yǎng)基100ml0.2%酚紅1ml所需糖葡萄糖或乳糖0.75-1g專業(yè)資料整理WORD格式17專業(yè)資料整理WORD格式制法：1將上述成分溶化，混勻分裝于內(nèi)含有倒置小玻璃管的小試管中，每管約 2ml，加塞。2小倒管排氣，滅菌 8-10磅， 20-30分鐘，貯存?zhèn)溆谩Ｓ猛荆汗﹩翁前l(fā)酵試驗(yàn)用。附注： 0.2%酚紅配制法酚紅 phenol red 0.2g1/10N苛性鈉 NaOH 8ml蒸餾水 92ml將酚紅入研缽徐徐參加苛性鈉研磨，再補(bǔ)足蒸餾水即成。假設(shè)需長(zhǎng)時(shí)間保

35、存，可高壓滅菌后貯存?zhèn)溆谩?葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物成分：蛋白胨 5g葡萄糖 5g制法：（ 1將上述成分溶解于蒸餾水中。（ 2調(diào)節(jié) pH至7.6，用濾紙過濾除渣。（ 3分裝中試管，每管約 3-4ml，滅菌后備用。用途：供甲基紅及 V-P試驗(yàn)用。7枸櫞酸鹽斜面培養(yǎng)基的制備成分：磷酸二氫銨 0.1g磷酸氫二鉀 0.1g硫酸鎂 0.02g枸櫞酸鈉 0.23g氯化鈉 0.5g瓊脂 2g蒸餾水 100ml0.5%溴麝香草酚藍(lán)酒精溶液 2ml制法：（ 1先將上述各種鹽類溶解于蒸餾水中，使其完全溶解。（ 2矯正 pH至6.8，然后參加瓊脂和指標(biāo)劑。（ 3搖勻，脫脂棉過濾，分裝中試管，每管約 3-5ml 。（ 4

36、滅菌后置成斜面?zhèn)溆美浜鬄榫G色用途：供枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)用。8醋酸鉛培養(yǎng)基的制備專業(yè)資料整理WORD格式18專業(yè)資料整理WORD格式成分： 2%肉湯瓊脂 200ml硫代硫酸鈉 0.05g醋酸鉛 10g蒸餾水 100ml制法：（ 1先將 10g醋酸鉛參加 100ml蒸餾水中融化，間歇滅菌或低壓菌后備用 10%醋酸鉛溶液。（ 2加熱溶化 2%肉湯瓊脂 200ml，參加硫代硫酸鈉 0.05g，混合后高壓滅菌。3從高壓滅菌鍋取出， 待冷卻至 45左右時(shí)。無菌操作參加無菌的 10%醋酸鉛溶液 1毫升，搖勻。4分裝小試管，每管約 2ml ，直立待冷凝后備用。用途：供硫代氫生成試驗(yàn)用。說明：醋酸鉛與硫代硫酸鈉不

37、宜久然。9尿素培養(yǎng)基的制備成分： 蛋白胨 1g氯化鈉 5g葡萄糖 1g蒸餾水 900ml瓊脂 1520g0.1%酚紅12ml20%尿素水溶液無菌 100ml制法： 1除尿素、瓊脂和酚紅外，其余成分溶于水中，加熱溶化，矯正 pH至6.86.9。2參加瓊脂和酚紅， 810磅10分鐘滅菌。3冷卻至 60后參加無菌尿素溶液，搖勻。4分裝中試管無菌，每管34ml，置成斜面?zhèn)溆?。用途：供尿素分解試?yàn)用。說明： 1尿素不耐熱，也不能久存，只能用濾器除菌。2無菌尿素溶液制備：稱取尿素20g，混合于 100ml蒸餾水中，充分搖勻，用 G6濾菌器過濾除菌，以到達(dá)無菌的目的。10巧克力色瓊脂平板的制備成分：肉湯瓊脂

38、 100ml無菌脫纖維羊或兔血 10ml。制法：1將肉湯瓊脂加熱溶化，趁熱參加脫纖維血，搖勻。專業(yè)資料整理WORD格式19專業(yè)資料整理WORD格式2傾注平板，待冷卻成巧克力色，備用。用途：用于培養(yǎng)腦膜炎雙球菌或淋球菌。說明：加血一定要趁熱加。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 3：播放錄象"細(xì)菌感染的檢查方法和防治原那么"專業(yè)資料整理WORD格式20專業(yè)資料整理WORD格式第三次實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)四細(xì)菌分布及外界因素對(duì)細(xì)菌影響的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 1課堂上全部操作；2次日預(yù)約看結(jié)果一、自然沉降法檢查空氣中的細(xì)菌【材料】普通瓊脂平板?！痉椒ā咳∑胀ō傊桨逡粋€(gè)， 翻開皿蓋，讓培養(yǎng)基直接暴露于空氣中， 置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上或

39、需要測(cè)定的地方 1530分鐘。蓋上皿蓋，用記號(hào)筆或蠟筆注明放置地點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)日期和實(shí)驗(yàn)者班級(jí)、*等，放入 37溫箱培養(yǎng) 1824小時(shí)，觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況和數(shù)量。并分析其意義。二、傾注法檢查水中的細(xì)菌【材料與方法】1. 用無菌吸管吸取勝 0.5ml水樣參加肉湯培養(yǎng)基中。2. 另取一支未接種的肉湯管做對(duì)照，與上管一起置于37溫箱培養(yǎng)1824小時(shí)，觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果】對(duì)照管應(yīng)透明清亮， 試驗(yàn)管變混濁， 說明水樣中有活菌存在。 并可通過比濁法估計(jì)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖后的數(shù)量。三、人體體表及各種物品外表的細(xì)菌檢查 拭子法和涂抹法【材料】普通瓊脂平板?！痉椒ā咳∑胀ō傊桨逡粋€(gè)，在平板底面用記號(hào)筆或蠟筆將平板分成假設(shè)干

40、等份，于每份培養(yǎng)基外表分別用手指、衣物、書本、筆等輕輕涂抹不要擦破培養(yǎng)基。也可用無菌生理鹽水擦洗衣物等，用無菌棉拭子涂于培養(yǎng)基外表，蓋上皿蓋 ,分別標(biāo)記清楚。 置37溫箱培養(yǎng) 1824小時(shí)觀察結(jié)果。 觀察各種物品中細(xì)菌的數(shù)量及類別，并分析其意義。專業(yè)資料整理WORD格式21專業(yè)資料整理WORD格式【本卷須知】本實(shí)驗(yàn)檢出的除細(xì)菌外，尚可能有真菌、放線菌等，請(qǐng)注意加以區(qū)別。四、人咽喉部位的細(xì)菌檢查【材料】血液瓊脂平板?！痉椒ā?. 咳碟法取血液瓊脂平板一個(gè)，翻開皿蓋，將培養(yǎng)基面置于口腔前約 10厘米處，用力咳嗽數(shù)次讓飛沫落在培養(yǎng)基外表，然后蓋上皿蓋，注明被檢查者*、實(shí)驗(yàn)日期等。置 37培養(yǎng) 182

41、4小時(shí)觀察結(jié)果。觀察細(xì)菌的數(shù)量、種類等，注意是否有溶血環(huán)，并分析其意義。2. 試子法用無菌棉簽涂取扁桃腺兩旁的分泌物， 在血瓊脂平板外表涂布成線， 然后改用接種環(huán)，作分區(qū)劃線接種，置 37培養(yǎng) 1824小時(shí)觀察結(jié)果。觀察細(xì)菌的數(shù)量、種類等。注意是否有溶血環(huán)，并分析其意義。五、化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響化學(xué)消毒劑的殺菌試驗(yàn)【材料】1. 菌種：葡萄球菌 1824小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：普通瓊脂平板。3. 化學(xué)消毒劑： 5%石炭酸、 2%碘酒、 70%酒精、 0.1%升汞。4. 其他：直徑 0.6cm無菌圓形濾紙片、小鑷子、接種環(huán)等?！痉椒ā?. 將瓊脂平板分為四等分，并在其底面做標(biāo)記。2. 用

42、接種環(huán)取葡萄球菌瓊脂斜面培養(yǎng)物，密涂于整個(gè)瓊脂培養(yǎng)基外表。3. 用小鑷子夾取無菌小濾紙片，分別蘸取上述消毒劑消毒劑不宜蘸得過多，防止外流。平貼于各相應(yīng)分區(qū)的中央，蓋上皿蓋，標(biāo)明日期和試驗(yàn)者。4. 置37培養(yǎng) 1824小時(shí)后觀察各種化學(xué)消毒劑的殺菌作用。 紙片周圍無細(xì)菌生長(zhǎng)的區(qū)域， 稱為抑菌圈， 分別測(cè)量四種消毒劑抑菌圈的直徑， 以毫米為單位記錄之。六、細(xì)菌的藥物敏感試驗(yàn)【材料】專業(yè)資料整理WORD格式22專業(yè)資料整理WORD格式1. 菌種：大腸桿菌，葡萄球菌 1824小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：普通瓊脂平板。3. 分別含各種抗生素的直徑 0.6cm的圓形紙片青霉素、鏈霉素、紅霉素、慶大霉

43、素、卡那霉素、小鑷子等?！痉椒ā?. 取瓊脂平板兩個(gè)，每個(gè)平板分為五等份，并做相應(yīng)標(biāo)記。2. 用接種環(huán)分別密涂大腸桿菌及葡萄球菌于兩個(gè)瓊脂平板培養(yǎng)基外表。3. 用小鑷子以無菌操作技術(shù)先夾取一無菌不含抗生素的濾紙片平貼于平板中央，再分別夾取含抗生素的各種濾紙片平貼于各相應(yīng)區(qū)中央， 蓋上皿蓋。注明班級(jí)、*、日期等。4. 置37培養(yǎng) 1824小時(shí)，觀察各種抗生素的抑菌情況。5. 抑菌程度判定：抑菌程度的判定是依照濾紙片周圍細(xì)菌的生長(zhǎng)與抑菌圈直徑大小來判定。對(duì)藥物的敏感程度抑菌環(huán)直徑 mm不敏感無抑菌環(huán)輕度敏感<10中度敏感1015高度敏感>15"附錄"抗生素濾紙片的制

44、備方法1. 取直徑 0.6cm園形濾紙片，每 100片置于一小平皿中， 15磅滅菌 20分鐘，再置于烤箱 60100烘干。2. 取一定濃度的不同抗生素 見表 1分別注入裝有無菌濾紙片的小平皿內(nèi)，每 100片參加 1ml抗菌素，浸泡半小時(shí)后，再置 37溫箱中 23小時(shí)枯燥?？菰锖蟊４姹鋫溆?。有效期約一年左右。表1 常用幾種抗生素的濃度表專業(yè)資料整理WORD格式23專業(yè)資料整理WORD格式抗生素名稱濃度每毫升標(biāo)記字樣 /符號(hào)青霉素200青 P鏈霉素1mg鏈 S紅霉素1mg紅 E卡那霉素200卡 K慶大霉素40慶 G七、噬菌體的噬菌作用噬菌體 bacteriophage具有嚴(yán)格寄生性，對(duì)相應(yīng)的易感

45、細(xì)胞，具有高度的種特異性和型特異性。感染細(xì)胞后， 或者裂解宿主細(xì)胞， 或者處于溶原狀態(tài)。 可應(yīng)用噬菌體作細(xì)菌的鑒定、分型、檢查未知細(xì)菌和防治某些疾病。【材料與方法】1. 噬菌體的溶菌現(xiàn)象1取 4支肉湯管， 2支接種金黃色葡萄球菌，2支接種大腸桿菌。2將上述兩種菌肉湯管各取1支，分別參加金黃色葡萄球菌噬菌體肉湯液0.2ml。3將上述 4支肉湯管，置 37培養(yǎng) 612小時(shí)后觀察結(jié)果。2. 噬菌體的溶菌斑1取普通瓊脂平板 1只，分為 4等分，注明、。2用無菌棉簽在、處涂布接種痢疾桿菌，在處接種大腸桿菌，在處接種白色葡萄球菌。3在、處各加 1小滴痢疾桿菌噬菌體肉泌液，在處加 1滴肉湯。4置 37培養(yǎng)

46、1618小時(shí)后觀察結(jié)果。圖5噬菌體的溶菌斑專業(yè)資料整理WORD格式24專業(yè)資料整理WORD格式【結(jié)果】1. 溶菌現(xiàn)象 加有噬菌體的金黃色葡萄球菌肉湯管清亮，其余均混濁。2. 溶菌斑 如圖 5，在處的中央有一無菌生長(zhǎng)的空斑， 即溶菌斑或蝕斑，其余部位無此現(xiàn)象。八、紫外線的殺菌試驗(yàn)【原理】波長(zhǎng) 240nm280nm的紫外線，因與 DNA 吸收光譜一致，而具有明顯的殺菌作用。其機(jī)制是使細(xì)菌 DNA 鏈中兩個(gè)相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體， 從而破壞 DNA構(gòu)型，干擾其正常復(fù)制，導(dǎo)致細(xì)菌死亡?！静牧稀?. 菌種：大腸桿菌 1824小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2. 培養(yǎng)基：普通瓊脂平板。3. 無菌黑色圖案紙片，紫外線

47、燈，消毒液?！痉椒ā?. 用接種環(huán)取大腸桿菌瓊脂斜面培養(yǎng)物， 密涂于普通瓊脂平板培養(yǎng)基外表。2火焰滅菌小鑷子、待稍涼后，翻開平皿蓋，取無菌黑紙片一片平貼于涂有細(xì)菌的平板培養(yǎng)基外表中間。3. 將平板暴露于距紫外燈管 2030cm處，翻開紫外線燈照射 30分鐘。4. 照射完畢，無菌操作取出黑紙片，投入消毒液中，蓋上皿蓋，做標(biāo)記，注明日期，試驗(yàn)者等。5. 置37培養(yǎng) 1824小時(shí)，觀察培養(yǎng)基外表細(xì)菌生長(zhǎng)情況、并分析其結(jié)果?！窘Y(jié)果】黑紙片遮蓋處細(xì)菌生長(zhǎng)形成灰白色菌苔，形狀同黑紙片形狀。 直接暴露在紫外線燈下的培養(yǎng)基外表無生長(zhǎng)或僅有少量的細(xì)菌生長(zhǎng)，形成菌落?！緫?yīng)用】紫外線的殺菌力雖強(qiáng)， 但穿透力弱，故僅用于實(shí)驗(yàn)室、 手術(shù)室空氣及物體表面的消毒滅菌?！颈揪眄氈繗⒕ㄩL(zhǎng)的紫外線對(duì)人體皮膚，眼睛有損傷作用，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。專業(yè)資料整理WORD格式25專業(yè)資料整理WORD格式九、濾過除菌【原理】濾過是一種機(jī)械除菌法，主要用于一些不耐高溫液體的除菌，例如：血清、毒素、抗毒素、藥物等。但濾過不能除去病毒、支原體和 L型細(xì)菌。【材料】1. 待濾的血清肉湯燒瓶分裝、有菌。2. 肉湯管3. 濾器已滅菌和過濾裝置、無菌刻度吸管和試管等?！痉椒ā?.