豚鼠耳蝸灌注的流速安全閾.docx

1、推罟可313:om豚鼠耳蝸灌注的流速安全閾等為明:涂林根高志宏王正4TRZG4,3災'頃摘91行全耳蛆入工外淋巴海注，觀察不同湛注速度對蜥內(nèi)電位的影響，井作耳蝸連續(xù)切片，觀察內(nèi)耳結料的形態(tài)變化,灌注速度分別為:5pl/min.50Ml/min,1001/min,250.1/min,500;il/min當漁注速度為100/J/min時可使蜥內(nèi)電位下降，但停演后電位可恢復.而灌注速度進一步提高為250/min以上后.蝸內(nèi)電位即出現(xiàn)不可逆的F降,在童注速度分別為3/min，50Ml/min和100祖/min時，連續(xù)切片觀察未發(fā)現(xiàn)畀常.在250Ml/min組中有1耳發(fā)現(xiàn)有前庭膜Ml陷.在SOO

2、pl/minM中發(fā)現(xiàn)3耳有前麻膜塌陷或破裂.人工外淋巴灌注速度不宜過快，在豚鼠耳所作試驗提示，流速以不超過100祖/min為宜.關ifl耳蝸(Cochlea)(Guineapig)動物，實驗(Animals,laboratory)Thesafeflowrateofartificialperilympf§7*perfusioninguineapigcochleaSongWeiming,XuLingen,GanZhihong,WangZhengminABSTRACTTheperilymphaticspaceofguineapigcochleawasperfusedwithavariety

3、ofphysiologicartificialperilymphwhichdifferentedtntheperfusiveflowrate.Theendocochlearpotential(EP)wasrecordedtoindicatetheeffectsoftheparfusiveflowratesonthecochlearfunction.Theperfusiveflowratesweredividedinto5groups:5pl/mtn,50pl/minf100l/minf250pJ/niinand500pJ/min.Inthegroupsof5試/minand50/d/minth

4、erewasnosignificantchangeofEPthroughouttheperiodofperfusion.Whentheperfusiveflowratewas100/d/min,atransitorydeclineofEPwasfoundduringtheperfusiveperiod.Whentheperfusiveflowrateswere250pd/minand500/xJ/nun>theEPweredecreasedmarkedlyanddidnotreturntothenormallevelafterthestopofperfusion.Formorpholog

5、icstudy*inthegroupswhichtheperfusiveflowratesreached250祖/min.4of10earswerefoundthattheReissner'smembranewascollapsedandruptured.Itwassuggestedthattheflowrateofperilymphaticperfusionshouldnotexceed100d/min.ThemethodsofartificialperilymphaticperfusionandrecordingofEPweredescribedindetail.ChineseAr

6、chOtolaryngolHeadNeckSurg»1996$3(5)：313316FromtheDepartmentofOtolaryngology,EENTHospitalofShanghaiMedicalUniverisyttShanghai200031(Dr.SongWeiming)J毒性藥物等有害因素滯留在內(nèi)耳環(huán)境中此外-200031±WK科大學眼耳鼻股科醫(yī)院內(nèi)耳器官與周圍組織存在多種屏障，血迷路屏障，腦脊液迷路屏障和中耳迷路屏障，這些屏障對內(nèi)耳器官具有保護作用,但也可使耳還可能使治療藥物不能進入迷路而難以發(fā)揮作用口。采用人工淋巴灌注的方法有可能突破內(nèi)耳迷路屏障，

7、對外淋巴腔進行灌注.清除有害的毒性藥物和代謝產(chǎn)物，并可使治療藥物直接進入內(nèi)耳，取得其它療法不能獲得的治療效果。在入耳蝸進行入工外淋巴灌注有兩個主要的問題，一是術后外淋巴漏和迷路纖維化的危險,二是量換速度的安全界限。前一間題由于耳顯嫩外科技術的不斷改進和發(fā)展巳得到解決至于量換速度，速度過高會導致內(nèi)耳損害，而速度過低使手術費時過長，同時流速過小也達不到外淋巴腔海洗的目的。本文通過在豚鼠耳蝸底轉鼓階和前庭階鉆孔，進行全耳蝸入工外淋巴灌注，觀察不同置換速度對蝸內(nèi)電位的影響，并作耳蝸連續(xù)切片，觀察內(nèi)耳結構的形態(tài)變化。探索了進行耳蝸人工外淋巴灌注的方法，并提出豚鼠耳蝸人工外淋巴灌注流速的安全閾。1材料與方

8、法1.1動物及實驗設備?；ㄉ嗍?5只，體重300500g,雌雄兼用，鼓膜及外耳道無病變，耳廓反射靈敏。微電極放大器（中科院上海生理所FW-4B）,微端注射機（浙江醫(yī)科大學醫(yī)學實驗儀器廠W50型）。1.2手術及實驗操作。動物麻醉后行氣管切開，保證實驗過程中呼吸通暢。腳側進路顯露聽泡.暴ar耳蝸。在耳蝸底轉的鼓階和前庭階分別鉆孔作為人工外淋巴灌注的進液孔和出液孔。灌注時灌注液經(jīng)鼓階而進，繞蝸孔由前庭階而出.在聽泡底部放吸引針頭，以免液體積聚而影響蝸內(nèi)電位的記錄。灌注速度分5組，分別為：5同/min、50尸1/min、100勘/min、250/xl/min、500M/min.灌注時間均為30min

9、。生理性人工外淋巴液參考Marcus"】的配方如下：NaCl125tnmol/L,KCl4mmol/L>NaHCO325mmol/L,NaH2PO40.51mmol/L»MgCi21«14mmol/L,CaClz1.3mmol/L,Glucose3mmol/LUrea2mmol/L,pH7.4.滲透壓300mmol/Lo灌注前先充氧。在耳蝸第二轉中階處骨壁鉆孔作為蝸內(nèi)電位記錄電極的入路。用尖徑為2pm左右的玻璃微電極作為引導電極，將Ag-AgO絲插于玻璃微電極管腔里150mmol/L的KC1溶液中,作為記錄電極。參考電極與頸部切口肌肉相聯(lián)。在顯微鏡下用微電極

10、操縱器將玻璃微電極尖端經(jīng)骨壁鉆孔向中階穿刺，在電極剛一接觸螺旋鈿帶時將系統(tǒng)調(diào)琴。微電極刺入蝸管后.立即引導到一個正的75mV左右直流電位。一般先觀察起始電位5min,然后開動做量注射機，分別以不同灌注速度對耳蝸外淋巴間隙進行海注，觀察不同灌注速度對蝸內(nèi)電位的影響.組織學觀察，灌注結束后，用中性福爾馬林固定耳蝸，作火棉膠包埋，沿耳蝸長軸行連續(xù)切片，片厚l"m,HE染色.光鏡下觀察蝸管形態(tài)變化.2結果2.1蝸內(nèi)電位的變化見附表。附衰實驗劫耳蝸濯注疽速不同蝌內(nèi)電位變化分組起始電位注30min停灌l(xiāng)Omin(pl/min)Cmv)<mv)(mv)575.875.475.25076.67

11、1.673.010077.842.270.225076.633.438.650076.06.05.0如上表所示，S/min及50pl.zmin時，灌注對蝸內(nèi)電位無明顯影響.當灌注速度為100試/min時可使蝸內(nèi)電位下降，但停灌后電位可恢復。而灌注速度進一步提高為250Hl/min以上后蝸內(nèi)電位即出現(xiàn)不可逆的下降（P<0.01）。2,2形態(tài)學觀察。在灌注速度分別為5/min、50田/min和lOOpl/min時.連續(xù)切片觀察未發(fā)現(xiàn)異常。在250/xl/min組中有一耳發(fā)現(xiàn)前庭膜埸陷。在500試/min組中發(fā)現(xiàn)有3耳有前庭膜塌陷或破裂（見附圖）.3討論設想對因使用耳毒性藥物而致聽力損害者進行

12、人工外淋巴量換，突破內(nèi)耳屏障，直接清315315附圖流速500試/分，顯示疆注液出口及前庭腰破裂洗此類患者的外淋巴腔而清除蓄積的耳毒性物質(zhì)，并灌注耳毒性藥物拮抗劑，有可能會對此類患者產(chǎn)生一些有益效果。Takada用含慶大零素的溶液進行外淋巴灌注，使豚鼠耳蝸微音器電位F降后，再用含鈣溶液行外淋巴腔海洗，可使消失的耳蝸微音電位重新恢復。外淋巴液作為螺旋器的內(nèi)環(huán)境，當其發(fā)生改變時將使耳蝸功能受到影響。作者為極登患者行電子耳蝸植入術中曾多次發(fā)現(xiàn)有些患者存在外淋巴液“枯竭”現(xiàn)象，打開這些患者的鼓階后，見其外淋巴液呈淺黃色且比正常的外淋巴液明顯稠厚，可以推測這些患者的外淋巴“枯竭”現(xiàn)象與聽力下降有一定關系

13、。Wak&no等8】曾報道在行人工外淋巴灌注時，當灌注液溶質(zhì)度大于372.6mmol/L時出現(xiàn)蝸內(nèi)電位下降，溶質(zhì)度越高.蝸內(nèi)電位下降越明顯。對于各種原因?qū)е峦饬馨鸵豪砘蛩匕l(fā)生改皮的患者進行人工生理性外淋巴灌洗，洗掉病理性外淋巴液，用符合內(nèi)耳器官生理需要的人工外淋巴液替代之，有可能使某些目前難以治療的疾肩成為可治之癥。當然要證明此方法的可行性.還需要作進步研究。本實驗用人工生理性外淋巴液對豚鼠耳蝸外淋巴腔以不同流速進行灌注,觀察蝸內(nèi)電位變化，并以耳蝸火棉膠包理連續(xù)切片觀察蝸內(nèi)結構的形態(tài)變化，用以推測人工外淋巴灌注的流速安全閾。結果發(fā)現(xiàn)當灌注速度達到100試/min,蝸內(nèi)電位即F降但停止

14、灌注后蝸內(nèi)電位可恢復到起始電位水平。而當以500Pl/min的流速進行灌注時，蝸內(nèi)電位快速下降，且停止灌注后亦無明顯恢復。蝸內(nèi)電位與內(nèi)耳生理功能和病理過程有密切關系。血管紋上Na+/K+-ATPSI的分布對蝸內(nèi)電位形成和維持起主要作用。蝸內(nèi)電位不僅反映血管紋的功能狀態(tài)，也反映耳蝸環(huán)境穩(wěn)定狀況，是感受器電位和聽神經(jīng)動作電位產(chǎn)生的基礎。當進行人工外淋巴灌注時，將使蝸內(nèi)靜水壓升高蝸內(nèi)靜水壓達到一定程度后即可影響血管紋細胞的功能，而使蝸內(nèi)電位下降。流速過高還可使蝸內(nèi)結構遭到破壞，出現(xiàn)前庭膜破裂塌陷。當蝸管結構完整性被損害時，將使內(nèi)外淋巴液混合在一起而改變維持蝸內(nèi)電位所需的內(nèi)淋巴液高K+濃度狀態(tài)，而使蝸

15、內(nèi)電位K降。在灌注速度為100以/min時出現(xiàn)的蝸內(nèi)電位一過性F降即可能與耳蝸內(nèi)靜水壓暫時性升離有關。本實驗中當流速為500Pl/min時，5耳中有3耳觀察到前庭膜塌陷°Hara經(jīng)豚鼠圓窗膜穿刺，在1秒鐘內(nèi)吸取4同外淋巴液(相當于240Ml/min速度)，即刻行切片觀察，在22耳中發(fā)現(xiàn)2耳有Reissner's膜膨隆，7耳有Reissner'膜塌陷，其結果與本實驗結果相似。通過本實驗觀察.人工外淋巴灌注速度不宜過快，本實驗在豚鼠耳所作試驗提示，流速以不超過lOOjzl/min為宜。勇文獻BrummettRE.FoxKE.Aminoglycoside-inducedhe

16、aringlossinhuman.AntimicrobialAgentsandChemotherapy331797JuhnSK.Barriersystemsintheinnerear.ActaOto-laryngol,1988;(Suppl458)：791 SchindlerRA,GladstoneHB,ScottN.etal.EnhancedpreBervationoftheauditorynervefollowingcochlearperfusionwithnervegrowthfactor.AmJOtol.1995,16,304SheaJJ.SymposiunionMeniere5300

17、21南寧市廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院耳鼻咽喉科2 SheaJJ.SymposiunionMeniere530021南寧市廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院耳鼻咽喉科sdisease*June.1988. HarvardUnivKuglerandGhediniPublications,1989：464王正敏.耳顯微外科.上?？茖W技術文獻出版社.1989, 263285MarcusDCMarcusNYThalmannR.Changesincationcontentsofstriavasculariswithouabainandpotassiumfreeperfusion.HearRes*198114：1493 T

18、akadaA,SchachtJ.Calciumantagonismandreversibilityofgentamicin-inducedlossofcochlearmicrophonicsintheguineapig.HearRs.19828：179WakizonoStKomuneS,UemuraT.SusceptibilityottheendocochlearpotentialtopHandosmolaritychangesintheperilymphofthecochleaintheguineapig.EurArchOtorhinolaryagol>1990$247:974 Har

19、aM*NomuraYSaitoK.Histopathologicstudyoftheperilymph-suctionedlabyrinth.AnnOtolRhi-nolLaryngo!,1990j99：316（收稿1996-0213）咽側壁惡性血管內(nèi)皮瘤1例劉禱朱習平.患者女34歲.因陣發(fā)性喂部刺搞11年，咽昇物S2年余擬咽右側腫物性質(zhì)待查收入院.體查，一般情況可.咽部潮紅.右扁桃體窩后方見條索狀腫物，上至鼻咽部隆突，下達杓會厭曇，表面光滑.觸之軟,鼻及喉部未見異常.頸部無腫大淋巴結實驗室檢查：血沉31mm/hr,EB-VCA-IgA陰性.鼻咽部活檢：粘腆慢性炎癥.咽部腫物穿剌細胞學檢查：未見惡性依據(jù).X線胸片：雙藤未見實質(zhì)性病變.X線35部側位片：咽部腫物下界這第四殖椎體中份.入院診斷：咽右倆壁腫物性質(zhì)待查.于1992年6月3日在全麻下行氣管切開咽右側腫物摘除術術中見腫物上界達顱底,下界達杓會厭襄平面.基底較廣,質(zhì)軟，表面呈暗紅色.有數(shù)個小結察而介'陳惹.節(jié)突出,與周0!組縱連聯(lián)緊密，腫物