免疫學(xué)作業(yè)-食品的免疫學(xué)檢測(cè)方法

1、食品的免疫學(xué)檢測(cè)方法免疫學(xué)檢測(cè)方法是應(yīng)用免疫學(xué)理論設(shè)計(jì)的一系列測(cè)定抗原、抗體、免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)方法,其基本原理是抗原抗體反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。隨著學(xué)科間的相互滲透，免疫學(xué)涉及的范圍不斷擴(kuò)大，新的免疫學(xué)檢測(cè)方法層出不窮。免疫學(xué)方法的應(yīng)用范圍亦在日益擴(kuò)大，不僅成為多種臨床疾病診斷的重要方法，也為眾多學(xué)科的研究提供了方便。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)是食品檢測(cè)技術(shù)中的一個(gè)重要組成部分，特別是三大免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)、酶免疫技術(shù)和放射免疫技術(shù)在食品檢測(cè)中得到了廣泛應(yīng)用。利用免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)可檢測(cè)細(xì)菌、病毒、真菌、各種毒素、寄生蟲等，還可用于蛋白質(zhì)、激素、其他生

2、理活性物質(zhì)、藥物殘留、抗生素等的檢測(cè)，其檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)，特別是單克隆抗體的發(fā)展，使得免疫檢測(cè)方法特異性更強(qiáng)，結(jié)果更準(zhǔn)確。一、 免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)是一種將免疫反應(yīng)的特異性與熒光標(biāo)記分子的可見性結(jié)合起來的方法。在一定條件下，用化學(xué)方法將熒光物質(zhì) （熒光素）與抗體結(jié)合，但不影響抗體與抗原結(jié)合的活性，與相應(yīng)抗原結(jié)合后，在熒光顯微鏡下觀察抗原的存在與部位，可定位，亦可用熒光計(jì)定量。但熒光標(biāo)記信號(hào)較弱，因而檢測(cè)靈敏度不是很高。免疫熒光分析(Immuno Fluorescence Assay,IFA)始創(chuàng)于20世紀(jì)40年代初，1942年Cons等首次報(bào)道用異硫氰酸熒光素標(biāo)記抗體

3、，檢查小鼠組織切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗體，但此種熒光素標(biāo)記物的性能較差，未能推廣應(yīng)用。20世紀(jì)50年代，Riggs等合成性能較為優(yōu)良的異硫氰酸熒光素。Mashall等對(duì)熒光抗體的標(biāo)記方法又進(jìn)行了改進(jìn)，從而使得免疫熒光技術(shù)逐漸推廣應(yīng)用。免疫熒光技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用上主要有直接法和間接法。直接法是在檢測(cè)樣品上直接滴加已知特異性熒光標(biāo)記的抗血清,經(jīng)洗滌后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。免疫熒光直接法可清楚地觀察抗原并用于定位標(biāo)記觀察。間接法是在檢測(cè)樣品上滴加已知的細(xì)菌特異性抗體,待作用后經(jīng)洗滌,再加入熒光標(biāo)記的第二抗體。1底物標(biāo)記熒光測(cè)定法底物標(biāo)記熒光測(cè)定法(SLFIA)使用一種酶的底物標(biāo)記待測(cè)物，底物本身無

4、熒光，在受到相應(yīng)酶的催化時(shí)能轉(zhuǎn)變?yōu)闊晒馕?，?dāng)標(biāo)記底物與抗體結(jié)合產(chǎn)生的空間位阻阻礙了酶與標(biāo)記底物間的接觸，樣品中的待測(cè)物通過競(jìng)爭(zhēng)作用使游離的酶標(biāo)結(jié)合物或熒光強(qiáng)度增加。2熒光偏振免疫測(cè)定法使用偏振光作為激發(fā)光時(shí)，視分子的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，發(fā)射的熒光可能是振動(dòng)方向隨機(jī)化的普通熒光，或是只在某一平面振動(dòng)的偏振熒光(ploarized fluorescence)。在反應(yīng)液中，游離的標(biāo)記物分子體積小，在布朗運(yùn)動(dòng)中轉(zhuǎn)動(dòng)速度快，受偏振光照射后產(chǎn)生的熒光偏振方向被分散，不能產(chǎn)生偏振光，只發(fā)射普通熒光；與抗體結(jié)合的標(biāo)記物分子體積增大，布朗運(yùn)動(dòng)速度減慢，甚至不能轉(zhuǎn)動(dòng)而形成定向排列，所以受偏振光激發(fā)后能產(chǎn)生偏振熒光，樣品中的

5、待測(cè)物的量越大，偏振熒光的強(qiáng)度越高。1.熒光淬滅免疫測(cè)定法熒光淬滅免疫測(cè)定法(Fluoresecent QuenchingImmunoassay)的原理是當(dāng)熒光標(biāo)記物與抗體結(jié)合后發(fā)生熒光淬滅。熒光猝滅的機(jī)制尚不清楚，熒光淬滅可能與標(biāo)記物與抗體結(jié)合后導(dǎo)致電子振動(dòng)狀態(tài)的改變有關(guān)。3熒光增強(qiáng)免疫測(cè)定法熒光增強(qiáng)免疫測(cè)定法(Fluoresecent EnhancementImmunoassay)的原理與熒光淬滅增強(qiáng)免疫測(cè)定法相似，不同的是標(biāo)記物與抗體結(jié)合后熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。二、酶免疫檢測(cè)技術(shù)酶免疫檢測(cè)技術(shù)是20世紀(jì)60年代在熒光和組織化學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，最初用酶代表熒光素標(biāo)記抗體作為生物組織中

6、抗原的鑒定和定位。隨后發(fā)展為用于鑒定免疫擴(kuò)散及免疫電泳板上的沉淀線。到1971年，Engrall等用堿性磷酸酶標(biāo)記抗原或抗體，建立了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，這一技術(shù)因其高度的準(zhǔn)確性、特異性、應(yīng)用范圍廣、檢測(cè)速度快以及費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，是目前食品檢測(cè)中令人矚目的有發(fā)展前途的一種新技術(shù)。酶免疫技術(shù)發(fā)展迅猛，種類繁多，酶免疫技術(shù)分為酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測(cè)定技術(shù)，酶免疫測(cè)定技術(shù)又分為均相免疫測(cè)定技術(shù)和異相免疫測(cè)定技術(shù)，異相免疫測(cè)定技術(shù)又分為固相免疫測(cè)定技術(shù)和液相免疫測(cè)定技術(shù)。固相免疫測(cè)定法的代表技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA

7、）。它食品安全檢驗(yàn)中最為廣泛應(yīng)用的方法之一。ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種高靈敏度的檢測(cè)技術(shù)。ELISA技術(shù)結(jié)合了免疫熒光法和放射免疫測(cè)定法兩種技術(shù)的優(yōu)點(diǎn),具有可定量、反應(yīng)靈敏準(zhǔn)確、標(biāo)記物穩(wěn)定、適用范圍寬、結(jié)果判斷客觀、簡(jiǎn)便完全、檢測(cè)速度快以及費(fèi)用低等特點(diǎn),且同時(shí)可進(jìn)行上千份樣品的分析。但ELISA的分類至今尚無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。隨著該技術(shù)在檢測(cè)分析領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用,有些學(xué)者根據(jù)有關(guān)的文獻(xiàn)及試劑的來源、標(biāo)本的情況和檢測(cè)的具體條件,提出以下幾種常用的測(cè)定方法:(a)測(cè)定抗體的間接法;(b)測(cè)定抗原的雙抗體夾心法;(c)測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法;(

8、d)測(cè)IgM抗體的捕獲法;(e)ABS(avidin biotin system)-ELISA法;(f)PCR-ELISA法;(g)斑點(diǎn)免疫酶結(jié)合試驗(yàn)(DIA)等。ELISA分析與其它方法相比,有以下優(yōu)勢(shì):高特異性;高靈敏性,檢測(cè)范圍在ng和pg水平;準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好;一次性可處理大量樣品,適宜于用定性試驗(yàn)進(jìn)行篩選;易于推廣到基層。ELISA分析也存在著一些缺陷,比如:不能同時(shí)分析多種成分;對(duì)試劑的選擇性高；對(duì)結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)。但如果與其它檢測(cè)手段聯(lián)合使用，如GC、HPLC,既可增加檢測(cè)的靈敏度又可降低交叉反應(yīng)，還可進(jìn)行更準(zhǔn)確的定量。三、放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)(Radi

9、oImmunoassay，RIA)是一種以放射性同位素作為標(biāo)記物，將同位素分析的靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性這兩大特點(diǎn)結(jié)合起來的檢測(cè)技術(shù)。是由Yalow和Berson于1960年創(chuàng)建的標(biāo)記免疫分析技術(shù)。由于標(biāo)記物放射性核素的檢測(cè)靈敏性，本法靈敏度高，測(cè)定準(zhǔn)確性良好，特別適應(yīng)于蛋白質(zhì)、激素和多肽的精確定量測(cè)定。但需特殊儀器及防護(hù)措施，并受同位素半衰期的限制。RIA測(cè)定就是應(yīng)用放射性物質(zhì)代替ELISA中的標(biāo)記酶作為抗原或抗體耦聯(lián)物，在食品安全檢測(cè)中最常見的同位素是3H和14C。1981年，放射免疫分析法(RIA)首先用于檢測(cè)人的血液和萵苣葉片上的對(duì)硫磷殘留量,檢測(cè)限為1020 ng/mL，檢測(cè)水中

10、的殘留量可達(dá)4 ng/mL。1978年，Charm在RIA技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展了放射免疫檢測(cè)技術(shù)(RRA)，放射免疫檢測(cè)在快速檢測(cè)方面最成功的是Charm6600/7600抗生素快速檢測(cè)系統(tǒng)。該系統(tǒng)就是利用專一受體來識(shí)別結(jié)合于同一類抗生素族中的母環(huán)以便最快速同時(shí)檢測(cè)同一抗生素族在樣品中的殘留情況。目前，Charm7600檢測(cè)系統(tǒng)就內(nèi)酰胺類、氯霉素類、四環(huán)素類、磺胺類、氨唑西林及堿性磷酸酶這六項(xiàng)檢測(cè)以被FDA認(rèn)可。1986年，Evrard P.等對(duì)牛尿提取、濃縮后，利用放射免疫法(RIA)對(duì)其中殘留的諾龍進(jìn)行了檢測(cè)，其靈敏度是6 pg/mL，IC50值為59 pg/mL。通過對(duì)免疫原的設(shè)計(jì)，使得這種

11、方法對(duì)其代謝產(chǎn)物19-NA、19-NE等也有較高的交叉反應(yīng)，具有較高的檢出率。放射免疫技術(shù)由于可以避免假陽性，適宜于陽性率較低的大量樣品檢測(cè)，對(duì)水產(chǎn)品、肉類產(chǎn)品、果疏產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)中廣泛應(yīng)用。還可檢測(cè)經(jīng)食品傳播的細(xì)菌及毒素、真菌及毒素、病毒和寄生蟲及小分子物質(zhì)和大分子物質(zhì)。四、免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)又叫Rosa.Tests法，是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物,應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)中的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金(Colloidal gold)是由氯金酸(HAuCl4)水溶液在還原劑作用下,聚合成特定大小的金顆粒,顆粒之間因靜電作用形成一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),也稱金溶膠(goldsol

12、)。其特點(diǎn)是根據(jù)需要可制備大小不同的金顆粒(直徑在1150nm之間)顏色呈桔紅色到紫紅色，具有高電子密度、介電特性和催化作用，能與多種生物大分子結(jié)合，且不影響其生物活性。1962年Feldherr第一次介紹了膠體金可作為一種電子顯微鏡水平的示蹤標(biāo)記物。Faulk（1971）把膠體金引入免疫化學(xué)，這一年被公認(rèn)是免疫膠體金技術(shù)誕生的一年。近年來，研究人員根據(jù)膠體金的物化性質(zhì)進(jìn)一步拓展基于金標(biāo)記的生物檢測(cè)技術(shù)及膠體金在其他生物學(xué)方面的應(yīng)用。該技術(shù)當(dāng)前主要用于在牛奶中檢測(cè)抗生素，可在10min內(nèi)快速檢測(cè)牛奶中的抗生素，利用該技術(shù)可檢測(cè)的抗生素種類有六種，內(nèi)酰胺、四環(huán)素、磺胺二甲嘧啶、恩諾沙星和黃曲霉毒

13、素，可檢測(cè)的內(nèi)酰胺藥物有氨芐青霉素、阿莫西林、鄰氯青霉素頭孢噻呋、頭孢霉素和青霉素G等。免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)結(jié)果直觀、操作簡(jiǎn)單，在食品安全檢測(cè)中有廣闊的應(yīng)用前景。膠體金免疫層析技術(shù)相對(duì)于其他的檢測(cè)方法有其固有的優(yōu)點(diǎn)：低聚合：金標(biāo)液中單態(tài)的占85%以上，沒有三個(gè)以上的聚合高清晰度：由于金粒的不連續(xù)性、抗體/結(jié)合蛋白質(zhì)緊密吸附于表面，抗原定位非常清晰；保存期限長(zhǎng)。膠體金免疫層析技術(shù)也有其缺點(diǎn)：操作過程要求嚴(yán)格，器皿要求相當(dāng)潔凈；保藏時(shí)要求干燥環(huán)境；交叉反應(yīng)。五、單克隆抗體技術(shù)1975年，Kohler和Milstein發(fā)現(xiàn)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞和綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合，形成了雜交細(xì)胞即可產(chǎn)生抗體

14、，又可無限增殖，從而創(chuàng)立了單克隆抗體雜交瘤技術(shù)。這一技術(shù)為醫(yī)學(xué)和生物學(xué)基礎(chǔ)研究開創(chuàng)了新紀(jì)元，是免疫學(xué)領(lǐng)域的重大突破。單克隆抗體在食品檢測(cè)中最大的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，不易出現(xiàn)假陽性。在食品檢測(cè)中有廣泛的應(yīng)用前景。目前人們已制備出各種經(jīng)食品傳播和引起食物中毒的細(xì)菌及毒素、真菌及毒素、病毒、寄生蟲、農(nóng)藥、獸藥、激素等的單克隆抗體并建立的檢測(cè)方法。Shirazid等采用戊二醛，青霉素化反應(yīng)等不同的免疫原合成方法，免疫小鼠，篩選出單克隆抗體檢測(cè)牛奶和畜產(chǎn)品中-內(nèi)酰胺類抗生素殘留，最低檢測(cè)限度為2.55 ng/mL。吳建祥用與細(xì)胞色素C交聯(lián)的氨芐青霉素(Amp-Cy)免疫的BALB/c鼠脾細(xì)胞與SP2/0鼠骨

15、髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)篩選、克隆，獲得3株能穩(wěn)定傳代并分泌抗青霉素的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，間接競(jìng)爭(zhēng)酶附試驗(yàn)(CI-ELISA)顯示，3株單克隆抗體對(duì)青霉素類和先鋒霉素類抗生素有特異性反應(yīng)，而對(duì)鏈霉素、卡那霉素、氯霉素、土霉素、四環(huán)素、新霉素其他抗生素沒有交叉反應(yīng)，可用于青霉素類抗生素殘留的檢測(cè)。磺胺二甲嘧啶和克倫特羅(瘦肉精)這兩種藥物被歐美各國和我國列為獸藥殘留控制重點(diǎn)，國內(nèi)研究出了用于動(dòng)物性食品中磺胺二甲嘧啶檢測(cè)的單克隆抗體試劑盒和克倫特羅殘留檢測(cè)的多克隆試劑盒。這兩種試劑盒具有特異性強(qiáng)、儀器化程度低、樣品前處理簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短，在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用前景廣闊，填補(bǔ)了國內(nèi)空白。單克隆抗體檢測(cè)技術(shù)可在

16、10 min內(nèi)快速檢測(cè)有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類、有機(jī)氯類、擬除蟲菊酯類及激素類的殘留量為農(nóng)產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)安全提供技術(shù)支持。英國建立了自動(dòng)肉制品中的沙門氏菌的單克隆抗體檢測(cè)方法，人們還制出了單核增生性李特氏桿菌的單抗，用單抗ELISA檢測(cè)該菌。乳中氯霉素的單克隆抗體檢測(cè)技術(shù)也被建立。食品儲(chǔ)藏過程中會(huì)受到霉菌污染，現(xiàn)已從青霉、毛霉等霉菌中提取耐熱性抗原制成單克隆抗體用ELISA方法可檢出加熱和未加熱食品中的霉菌。六、免疫印跡技術(shù)(Western blotting)Western blotting是檢測(cè)特異性目的蛋白質(zhì)的定性方法,它可確定一個(gè)樣品中是否含有低于或超過預(yù)定限值水平的目的蛋白質(zhì),特別用于不溶性

17、蛋白質(zhì)的分析。其原理是先通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)區(qū)分樣品中不同的組分,并轉(zhuǎn)移至固相支持物(如硝酸纖維膜),再加入相應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),最后加入標(biāo)記二抗進(jìn)行雜交、顯色,檢測(cè)樣品中是否含目的蛋白成分。免疫印跡(Western blotting)法分三個(gè)步驟:第一,聚丙烯酞胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。將蛋白質(zhì)抗原按分子大小和所帶電荷的不同分成不同的區(qū)帶。第二,電轉(zhuǎn)移。目的是將凝膠中己分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上。第三,酶免疫定位,該步的意義是將前兩步中已分離,但肉眼不能見到的抗原帶顯示出來。將印有蛋白抗原條帶的硝酸纖維素膜依次與特異性抗體和酶標(biāo)記的第二抗體反應(yīng)后,再與

18、能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物作用,最終使區(qū)帶染色。免疫印跡法結(jié)合了凝膠電泳的高分辨率和固相免疫測(cè)定的特異敏感等特點(diǎn),具有高靈敏度與高特異性的優(yōu)點(diǎn)。特別是對(duì)于那些不溶于去污劑裂解液的抗原,或者是難以標(biāo)記、容易降解的抗原,均可采用該方法進(jìn)行分析。但此法也存在一些不足之處,如難以定量、操作較繁瑣、花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)和不能同時(shí)檢測(cè)大量樣品等,這些缺點(diǎn)限制了其在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)上的應(yīng)用。目前廣泛應(yīng)用于酵母和真菌的檢測(cè)中。七、免疫PCR法多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)又稱體外核酸擴(kuò)增技術(shù)，免疫PCR是利用抗原抗體反應(yīng)的特異性和PCR擴(kuò)增反應(yīng)的極高靈敏性而建立的一種微量檢

19、測(cè)技術(shù)。其基本原理和常規(guī)標(biāo)記免疫技術(shù)相似,只不過免疫PCR中所用的抗原或抗體標(biāo)記物為DNA,在固相免疫結(jié)合反應(yīng)完成后,再通過PCR技術(shù)對(duì)標(biāo)記DNA進(jìn)行擴(kuò)增,最后通過檢測(cè)PCR產(chǎn)物對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性或定量分析。在理論上免疫PCR可以檢測(cè)到一個(gè)分子抗原,因此免疫PCR特別適用于檢測(cè)一些含量特別少的抗原分子。目前已有用免疫PCR技術(shù)檢測(cè)抗HBC抗體、抗HAV抗體和抗HCV抗體等報(bào)道,均表明免疫PCR法靈敏度明顯高于ELISA。在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)中,傳統(tǒng)的免疫檢測(cè)方法其靈敏度均有限,若將免疫PCR技術(shù)應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)中,將大大提高其靈敏度。當(dāng)然,免疫PCR技術(shù)目前尚處于研究階段,其配套試劑尚缺乏,

20、所以應(yīng)用的還不多,在報(bào)道的幾種方法中均是用一些已知的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行試驗(yàn)。因此,探索免疫PCR最佳反應(yīng)條件,簡(jiǎn)化步驟,實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)于其推廣應(yīng)用至關(guān)重要。八、發(fā)光免疫測(cè)定法(CLIA)發(fā)光免疫測(cè)定法常用魯米諾(Luminol)、異魯米諾(Isolumi-nol)及其衍生物進(jìn)行標(biāo)記。這些環(huán)肼類化合物在堿性條件下可被氧化產(chǎn)生3-胺基苯二甲酸鹽和430 nm的發(fā)射光。在魯米諾的芳氨基上進(jìn)行烴鏈取代后產(chǎn)光性能增強(qiáng)，但若置換芳氨基則發(fā)光被破壞。另外丫叮酯也用于發(fā)光標(biāo)記。化學(xué)發(fā)光免疫分析是將靈敏的化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光體系與特異的抗原抗體免疫測(cè)定結(jié)合于一體的檢測(cè)技術(shù)，化學(xué)發(fā)光免疫分析包含兩個(gè)部分,即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)

21、發(fā)光分析系統(tǒng)?；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化,形成一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體,當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí),同時(shí)發(fā)射出光子(hM),利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器測(cè)量光量子產(chǎn)額。免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)(在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體)直接標(biāo)記在抗原(化學(xué)發(fā)光免疫分析)或抗體(免疫化學(xué)發(fā)光分析)上,或酶作用于發(fā)光底物。CLIA操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、測(cè)定速度快。但CLIA產(chǎn)光物質(zhì)發(fā)光時(shí)間極短(數(shù)秒鐘)，測(cè)定誤差較大。與ELISA檢測(cè)方法相比，化學(xué)發(fā)光更靈敏，更為準(zhǔn)確但化學(xué)發(fā)光需要借助發(fā)光儀。九、免疫層析技術(shù)免疫層析(immunochromatography,IC)是20世紀(jì)80

22、年代初發(fā)展起來的快速免疫分析技術(shù),它將免疫學(xué)原理和層析原理相結(jié)合,借助毛細(xì)管的作用,樣品在條狀纖維制成的膜上泳動(dòng),其中的待測(cè)物與膜上一定區(qū)域的配體結(jié)合,通過酶促顯色反應(yīng)或直接使用著色標(biāo)記物,在短時(shí)間(20min內(nèi))便可得到直觀的結(jié)果。免疫層析按其原理可分為兩類,一類以酶促反應(yīng)顯色為基礎(chǔ),以顯色高度來定量;另一類則使用著色標(biāo)記物如乳膠顆粒、膠體硒、膠體金以及脂質(zhì)體等。層析時(shí),標(biāo)記物與待測(cè)物被相應(yīng)的配體捕獲而凝集顯色,以纖維膜上顯色條的有無或多少來定性或定量。 利用免疫層析原理開發(fā)出的各種食品微生物檢測(cè)試紙條具有很好的應(yīng)用價(jià)值。十、其他免疫檢測(cè)技術(shù)隨著轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品種類的不斷增加以及轉(zhuǎn)基因監(jiān)測(cè)制度的日

23、漸完善,過去所建立的免疫學(xué)檢測(cè)方法可能難以適應(yīng)未來的發(fā)展需要,一些靈敏度更高、容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的檢測(cè)方法可能是今后轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品免疫學(xué)檢測(cè)的研究方向。1脂質(zhì)體免疫測(cè)定法(LIA)脂質(zhì)體免疫測(cè)定法是一種較新的免疫測(cè)定技術(shù)，脂質(zhì)體是由磷脂或由其他類脂分子在水相中自發(fā)形成的一種密閉的雙分子單層或多層囊泡，脂質(zhì)體表面還可以連接抗原或抗體分子。這種生物模擬膜在形成過程中能包裹水及其中的溶質(zhì)(染料或酶)，膜的穩(wěn)定性可隨免疫反應(yīng)有規(guī)律變化。根據(jù)釋放出的標(biāo)記物的量進(jìn)行測(cè)定，所以LIA具有很高的信號(hào)放大作用。目前LIA主要存在脂質(zhì)體的穩(wěn)定性和非特異性溶解問題。2克隆酶給予體免疫測(cè)定法(CEDIA)克隆酶給予體免疫測(cè)定法是一種新型均