微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理SOP

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院醫(yī)院感染管理科文件名稱：微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理SOP文件編號：ZS-IC-SOP-swaq持有部門：臨床微生物實(shí)驗(yàn)室，醫(yī)院感染管理科制訂者：周昭彥審核者：胡必杰核準(zhǔn)者：胡必杰制訂日期：2007年5月28日審核日期：2007年5月29日核準(zhǔn)日期：2007年5月29日執(zhí)行日期：2007年6月 1日版次：Ver 01文件頁數(shù)：共7頁文件性質(zhì)： 普通 限制（僅限本院范圍，未經(jīng)授權(quán)，不得復(fù)制）目錄1.前言2.實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)程 2.1.進(jìn)入規(guī)定2.2.個(gè)人防護(hù)2.3.實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)3.實(shí)驗(yàn)室安全操作3.1.標(biāo)本的安全操作3.2.實(shí)驗(yàn)室的基本安全操作3.3.實(shí)

2、驗(yàn)室的其他安全操作4.實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和儀器4.1.生物安全柜4.2.離心機(jī)4.3.組織研磨器4.4.冰箱與冰柜的維護(hù)和使用5.實(shí)驗(yàn)室意外事件或事故處理5.1.生物危害物溢出的處理5.2.刺傷、切割傷或擦傷5.3.經(jīng)胃腸道攝入潛在感染性物質(zhì)6.實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理6.1.培養(yǎng)基、組織、體液等廢棄物處理6.2.銳器盒處理7.參考文獻(xiàn)8.負(fù)責(zé)人及聯(lián)系電話1.前言由于新的感染性病原體的不斷涌現(xiàn)，抗生素的耐藥性問題日益嚴(yán)重，新的診斷和治療技術(shù)的應(yīng)用，以及生物恐怖的潛在危險(xiǎn)，提高實(shí)驗(yàn)室的生物安全再一次成為人們的關(guān)注點(diǎn)。臨床微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員面臨著職業(yè)暴露于感染性病原體的危險(xiǎn)。其中，最危險(xiǎn)的操作是標(biāo)本的處理和接種

3、。由于人員感染后處于亞臨床表現(xiàn)或?qū)嶒?yàn)室管理層沒有上報(bào)，實(shí)驗(yàn)室獲得性感染的實(shí)際發(fā)生率可能比已知的多得多。采用適當(dāng)?shù)纳锇踩雷o(hù)可以將感染的危險(xiǎn)性降至最低。生物安全防護(hù)包括安全設(shè)備、個(gè)體防護(hù)裝置和措施，實(shí)驗(yàn)室的特殊設(shè)計(jì)和建筑要求，嚴(yán)格的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序及規(guī)程。其中，規(guī)范的微生物學(xué)操作技術(shù)是實(shí)驗(yàn)室生物安全的基礎(chǔ)，專門的實(shí)驗(yàn)設(shè)備僅僅是一種補(bǔ)充，絕不能替代正確的操作規(guī)范。根據(jù)有關(guān)規(guī)定，中山醫(yī)院臨床微生物實(shí)驗(yàn)室屬于二級生物安全水平實(shí)驗(yàn)室。2.實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)程2.1.進(jìn)入規(guī)定2.1.1.在實(shí)驗(yàn)室入口處貼生物危害警告標(biāo)志，見上圖。注明臨床微生物、級生物安全水平、負(fù)責(zé)人高曉東，電話；2.1.2.未經(jīng)

4、許可，非工作人員不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。外來合作者、進(jìn)修和學(xué)習(xí)人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前必須經(jīng)過部門負(fù)責(zé)人（胡必杰）的批準(zhǔn)；2.1.3.實(shí)驗(yàn)室總門應(yīng)保持關(guān)閉狀態(tài)；2.1.4.與實(shí)驗(yàn)室工作無關(guān)的動物不得帶入實(shí)驗(yàn)室。2.2.個(gè)人防護(hù)2.2.1.工作服：在實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)，必須穿著工作服；2.2.2.手套：在進(jìn)行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料的操作時(shí)，應(yīng)戴上合適的手套。脫手套后必須洗手。用過的一次性手套應(yīng)丟入感染性廢物袋內(nèi)（貼有生物危險(xiǎn)級標(biāo)志的黃色垃圾袋）；2.2.3.洗手：在處理完感染性材料后，以及在離開實(shí)驗(yàn)室前，都必須洗手。手要完全抹上皂液，搓洗至少10 秒鐘，紙巾擦干；2.2.4.其

5、他防護(hù)：當(dāng)有可能受到噴濺物污染、碰撞或人工紫外線輻射的傷害時(shí)，必須戴合適的安全眼鏡；2.2.5.不得穿著實(shí)驗(yàn)室工作服離開實(shí)驗(yàn)室；2.2.6.不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾的鞋子；2.2.7.禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡；2.2.8.禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域內(nèi)儲存食品和飲料；2.2.9.在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用過的工作服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。2.3.實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)2.3.1.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔整齊，嚴(yán)禁擺放和實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品；2.3.2.每天工作結(jié)束之后，必須用愛爾施牌消毒片(成分：三氯異氰尿酸，每片含有效氯500mg，按每片 1000ml水比例進(jìn)行溶解)消毒工作臺面。用75%酒精消毒生物

6、安全柜臺面?；钚晕镔|(zhì)濺出后要隨時(shí)消毒，消毒劑為愛爾施（1片/1000ml），嚴(yán)重污染時(shí)(血液等標(biāo)本的污染)，將6片愛爾施溶于1000ml水（3000ppm）用以消毒；2.3.3.所有受到污染的材料、標(biāo)本和培養(yǎng)物應(yīng)廢棄于感染性廢物袋內(nèi)，而生活垃圾應(yīng)棄于黑色垃圾袋，不能混淆。需要清潔再利用的材料，必須先經(jīng)高壓滅菌處理；2.3.4.需要帶出實(shí)驗(yàn)室的手寫文件必須保證在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)沒有受到污染。3.實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)3.1.標(biāo)本的安全操作3.1.1.標(biāo)本容器：標(biāo)本用防漏的有蓋的塑料容器盛裝，容器上貼標(biāo)簽?；?yàn)單不能卷在容器外面，而是要分開放置；3.1.2.標(biāo)本接收：在實(shí)驗(yàn)室專門的接收窗口接收標(biāo)本；3.1.3.打

7、開包裝：容器要在生物安全柜內(nèi)打開，并準(zhǔn)備好愛爾施消毒劑。容器有破碎或標(biāo)本泄漏時(shí)，根據(jù)標(biāo)本拒收SOP予以拒收，并填寫拒收單。3.2.實(shí)驗(yàn)室的基本安全操作所有標(biāo)本在生物安全柜內(nèi)操作，要盡量減少氣溶膠和微小液滴形成。在工作臺面放置一塊浸有愛爾施消毒液的紗布，使用后按感染性廢棄物處理。表1.實(shí)驗(yàn)室的基本安全操作感染性物質(zhì)傳播途徑材料和操作目標(biāo)正確的操作經(jīng)呼吸道吸入接種針和環(huán)避免被接種物灑落微生物接種環(huán)的直徑為23mm完全封閉，長度小于6cm 以減小抖動接種標(biāo)本避免產(chǎn)生氣溶膠電子加熱器消毒接種環(huán)不在培養(yǎng)基上冷卻接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線避免病原體濺起輕輕劃線標(biāo)本涂片避免產(chǎn)生氣溶膠不直接倒在玻片上痰液涂片干燥避

8、免產(chǎn)生氣溶膠不用明火燒移液管避免產(chǎn)生氣溶膠不能反復(fù)吹吸混合含有感染性物質(zhì)的溶液不需要排出最后一滴液體經(jīng)消化道攝入移液管避免經(jīng)口攝入嚴(yán)禁用口吸移液管實(shí)驗(yàn)材料避免經(jīng)口攝入嚴(yán)禁將實(shí)驗(yàn)材料置于口內(nèi)嚴(yán)禁舔標(biāo)簽不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)飲食和儲存食品，嘴里不應(yīng)有筆或口香糖等物品皮膚和眼睛接觸戴手套避免接觸感染性物質(zhì)操作時(shí)應(yīng)戴一次性手套，避免觸摸口、眼及面部銳器損傷皮下注射針頭避免意外注入感染性物質(zhì)減少使用注射器和針頭用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽、從注射器取下，禁止用手直接操作注射器不能用于移液針頭、玻片以及破碎的玻璃避免意外受傷丟棄在銳器盒中血培養(yǎng)瓶避免銳器損傷針刺入瓶時(shí)注意安全3.3.實(shí)驗(yàn)室的其他安全操

9、作3.3.1.血清分離Ø 操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)眼鏡；Ø 血液和血清應(yīng)當(dāng)小心吸取，而不能傾倒。嚴(yán)禁用口吸移液管；Ø 移液管使用后應(yīng)完全浸入愛爾施中浸泡30min。然后高壓滅菌（121 1-1.5bar 20min）,清洗消毒后備用；Ø 帶有血凝塊等的廢棄標(biāo)本管，在加蓋后放入感染性廢物袋在內(nèi)高壓滅菌；Ø 備愛爾施消毒劑清除噴濺和溢出標(biāo)本。3.3.2.裝有凍干感染性物質(zhì)安瓿的開啟Ø 在生物安全柜內(nèi)操作；Ø 首先用75酒精清潔安瓿外表面；Ø 如果管內(nèi)有棉花或纖維塞，可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡；Ø 用

10、75酒精浸泡的紗布將安瓿包起來以保護(hù)雙手，然后手持安瓿從標(biāo)記的銼痕處打開；Ø 將頂部小心移去，放入銳器盒內(nèi)；Ø 如果塞子仍然在安瓿上，用消毒鑷子除去，棄于感染性廢物袋內(nèi)；Ø 緩慢向安瓿中加入營養(yǎng)肉湯以重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。4.實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和儀器4.1.生物安全柜（Class，ESCO）4.1.1.操作步驟Ø 開啟電源和內(nèi)外風(fēng)扇；Ø 在機(jī)器預(yù)熱時(shí)將所有必需的物品置于安全柜內(nèi)；Ø 準(zhǔn)備一塊浸有75%酒精的沙布；Ø 開始工作前及完成工作后，讓安全柜工作5min 來完成“凈化”過程；Ø 手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約

11、一分鐘，以使安全柜調(diào)整完畢才開始對物品進(jìn)行處理；Ø 接種環(huán)滅菌時(shí)，用電子加熱器，而不應(yīng)使用明火；Ø 在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，生物安全柜里的所有物品都應(yīng)清除表面污染，標(biāo)本和培養(yǎng)基移出安全柜；Ø 每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用75%酒精擦拭工作臺面、四壁及玻璃的內(nèi)外側(cè)等部位來清除污染；Ø 有標(biāo)本溢出等污染時(shí)，用愛爾施消毒，然后用水再次進(jìn)行擦拭。4.1.2.注意事項(xiàng)Ø 每次開始實(shí)驗(yàn)之前將所需物品置于安全柜內(nèi)，以盡可能減少雙臂進(jìn)出次數(shù)；Ø 雙臂應(yīng)該垂直地緩慢進(jìn)出前面的開口；Ø 盡量減少操作者身后的人員活動；Ø 生物安全柜在使用中不能打開玻璃觀察

12、擋板；Ø 在生物安全柜內(nèi)操作時(shí)，不能進(jìn)行文字工作；Ø 級生物安全柜前面的進(jìn)氣格柵不能被紙、儀器設(shè)備或其他物品阻擋；Ø 所有物品應(yīng)盡可能地放在靠近工作臺后緣的位置，但不阻擋后部格柵；Ø 可產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備（如混勻器、離心機(jī)等）應(yīng)靠近安全柜的后部放置；Ø 生物危害性廢棄物袋放在安全柜內(nèi)右側(cè)，袋中放入愛爾施消毒劑；Ø 房間中有人時(shí)要關(guān)閉紫外燈，以保護(hù)眼睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害；Ø 安全柜一直維持運(yùn)行狀態(tài)（8小時(shí)工作期間），不能反復(fù)開關(guān)；Ø 當(dāng)氣流警報(bào)響起時(shí)，立刻停止工作，并報(bào)告生物安全負(fù)責(zé)人（高曉東）。4.2.

13、低溫超速離心機(jī)（AllegraTMX-12R，BECKMAN COULTER）4.2.1.按照操作手冊操作離心機(jī)；4.2.2.正確放置十字軸和離心桶；4.2.3.在使用前檢查離心管和盛放離心標(biāo)本的容器是否破損；4.2.4.用于離心的試管和標(biāo)本容器應(yīng)當(dāng)牢固蓋緊；4.2.5.離心桶的裝載、平衡必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行；4.2.6.離心桶和十字軸按重量配對，并在裝載離心管后正確平衡；4.2.7.離心管不能裝得過滿，液面距離心管口留出一定空間，否則會導(dǎo)致漏液；4.2.8.空離心管用蒸餾水來平衡；4.2.9.每次使用后，要用75酒精清除離心桶、轉(zhuǎn)子和離心機(jī)腔的污染；4.2.10.每天檢查離心機(jī)轉(zhuǎn)子部位的腔

14、壁是否被污染或弄臟，離心轉(zhuǎn)子和離心桶是否有腐蝕或細(xì)微裂痕。4.3.組織研磨器4.3.1.戴上手套并用含75酒精的紗布包住玻璃研磨器；4.3.2.在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行組織研磨器的打開和操作。4.4.冰箱與冰柜的維護(hù)和使用4.4.1.冰箱和低溫冰箱通常每半年除霜和清潔，如有特殊情況應(yīng)立即除霜和清理，清理出在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品。清理時(shí)應(yīng)戴厚橡膠手套并進(jìn)行面部防護(hù)；4.4.2.儲存在冰箱內(nèi)的所有容器清楚地標(biāo)明內(nèi)裝物品的名稱、儲存日期和儲存者的姓名。未標(biāo)明的或廢舊物品應(yīng)高壓滅菌后丟棄；4.4.3.由微生物室組長（周春妹）保存一份凍存物品的清單；4.4.4.冰箱內(nèi)不能放置易燃溶液。5.實(shí)驗(yàn)室意

15、外事件或事故處理工作人員在操作過程中發(fā)生意外，如針刺和切傷、皮膚污染、感染性標(biāo)本濺及體表和口鼻眼內(nèi)等視為安全事故。出現(xiàn)生物危害物的溢出、事故以及明顯或可能暴露于高傳染性物質(zhì)時(shí)，必須向部門負(fù)責(zé)人主任（胡必杰）報(bào)告。實(shí)驗(yàn)室保存這些事件或事故的書面報(bào)告。生物危害物的溢出是指具有高度傳染性或危害性的感染性物質(zhì)（如結(jié)核分枝桿菌）的明顯溢出（如標(biāo)本打翻或離心管破裂）。5.1. 生物危害物的溢出處理5.1.1.潛在危害性氣溶膠的釋放（在生物安全柜以外）Ø 所有人員必須立即撤離相關(guān)區(qū)域；Ø 立即報(bào)告部門負(fù)責(zé)人；Ø 為了使氣溶膠排出和使較大的粒子沉降，在1 h 內(nèi)嚴(yán)禁人員入內(nèi)；&#

16、216; 門口張貼“禁止進(jìn)入”的標(biāo)志，過了相應(yīng)時(shí)間后，在生物安全負(fù)責(zé)人（高曉東）的指導(dǎo)下來清除污染；生物危害物溢出清除程序：1) 戴手套、口罩，穿防護(hù)服，必要時(shí)進(jìn)行臉和眼睛防護(hù)；2) 用布覆蓋并吸收溢出物；3) 向布上傾倒愛爾施消毒劑（6片溶于1000ml水），并覆蓋周圍區(qū)域；4) 使用消毒劑時(shí)，從溢出區(qū)域的外圍開始，朝向中心進(jìn)行處理；5) 作用60min后，將布以及污染材料清理掉。如果含有碎玻璃或其他銳器，玻璃碎片應(yīng)用鑷子清理，使用簸箕來收集處理過的物品，并將它們置于銳器盒中以待處理；6) 再次用消毒劑擦拭污染區(qū)域（如有必要，重復(fù)第25步）；7) 污染材料及用于清理的布和抹布放入感染性廢物袋

17、內(nèi)；8) 如果用簸箕清理破碎物，應(yīng)當(dāng)將其放在消毒液內(nèi)浸泡；9) 如果實(shí)驗(yàn)表格或其他打印或手寫材料被污染，應(yīng)將這些信息復(fù)制，并將原件置于感染性廢物袋內(nèi)；10) 在成功消毒后，報(bào)告部門負(fù)責(zé)人目前溢出區(qū)域的清除污染工作已經(jīng)完成。5.1.2.潛在危害性氣溶膠的釋放（在生物安全柜內(nèi)）Ø 在安全柜處于工作狀態(tài)下立即進(jìn)行清理；Ø 使用愛爾施消毒劑（1000ml/6片），并在處理過程中盡可能減少氣溶膠的生成，作用60min，再用水擦拭干凈；Ø 所有接觸溢出物品的材料都要用75%酒精消毒和或高壓滅菌。5.1.3.未裝可封閉離心桶的離心機(jī)內(nèi)盛有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂Ø

18、; 關(guān)閉機(jī)器電源，讓機(jī)器密閉30min使氣溶膠沉積；Ø 通知生物安全負(fù)責(zé)人（高曉東）；Ø 戴厚橡膠手套操作；Ø 破碎的離心管、離心桶、十字軸和轉(zhuǎn)子都放在75%酒精內(nèi)；Ø 未破損的帶蓋離心管應(yīng)放在另一個(gè)有75%酒精的容器中，然后回收；Ø 離心機(jī)內(nèi)腔用75%酒精擦拭；Ø 清理時(shí)所使用的全部材料都按感染性廢棄物處理，放入感染性廢物袋內(nèi)。5.2.刺傷、切割傷或擦傷5.2.1.受傷人員用流水清洗雙手和受傷部位；5.2.2.使用碘伏進(jìn)行皮膚消毒，必要時(shí)去門急診進(jìn)行相應(yīng)處理；5.2.3.記錄受傷原因和相關(guān)的微生物，并應(yīng)保留完整的醫(yī)療記錄。5.3.經(jīng)胃腸道攝入潛在感染性物質(zhì)5.3.1.受害人脫下