Agilent1260高效液相色譜儀操作規(guī)程

1、Agilent1260高效液相色譜儀操作規(guī)程1 開(kāi)機(jī)前準(zhǔn)備1.1 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求配制流動(dòng)相，須經(jīng)0.45小礴膜過(guò)濾，之后再進(jìn)行脫氣處理， 使用前必須用超聲波振蕩l0-15min， 按無(wú)機(jī)相和有機(jī)相分開(kāi)別裝入溶劑瓶A （裝有洗鹽裝置，最好固定盛放無(wú)機(jī)鹽水相）、B 中；對(duì)照品和樣品溶液進(jìn)樣前要經(jīng)0.45小礴膜過(guò)濾。1.2 若流動(dòng)相中含有緩沖鹽，則必須以每分鐘23滴的速度虹吸10% 的異丙醇水沖洗seal-wash,以防有鹽結(jié)晶在泵頭產(chǎn)生而損壞泵頭。2 開(kāi)機(jī)2.1 打開(kāi)電源，打開(kāi)計(jì)算機(jī)，進(jìn)入Windows 系統(tǒng)，從上到下依次打開(kāi)各模塊電源。2.2 待各模塊自檢完成后，雙擊桌面上的“儀器 1 聯(lián)機(jī)”圖標(biāo)

2、，將自動(dòng)進(jìn)入化學(xué)工作站畫面。2.3 從“視圖”菜單中選擇“方法和運(yùn)行控制”畫面 ,也可單擊工作站畫面左側(cè)的“方法和運(yùn)行控制”項(xiàng)，進(jìn)入方法和運(yùn)行控制窗口。2.4 打開(kāi)Purge閥（逆時(shí)針），右擊“泵”圖標(biāo)出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單單擊“設(shè)定泵”選項(xiàng)進(jìn)入泵編輯畫面。2.5 設(shè) “流量” 逐步增大流速至5ml/min ， A 通道設(shè)到100%， 單擊 “確定” 。2.6 單擊“泵”圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊“泵控制“選項(xiàng)選中“開(kāi)”單擊“確定”則系統(tǒng)開(kāi)始Purge,直到管路內(nèi)由溶劑瓶A到泵入口無(wú)氣泡為止；切換B 通道（ B 通道設(shè)到100%）繼續(xù)Purge直到所有通道管路內(nèi)均無(wú)氣泡為止。10Bar，則應(yīng)更換排

3、氣閥內(nèi)濾芯/過(guò)濾白頭。）2.7 將泵的流量設(shè)到0.5ml/min,若使用雙泵則應(yīng)設(shè)定溶劑配比，如A=80%, B=20%;關(guān)閉排氣閥（順時(shí)針）；再將流量設(shè)到0.8ml/min， 2 分鐘后設(shè)定至方法所需流速，沖洗色譜柱20-30min。2.8 單擊泵下面的瓶圖標(biāo)，輸入溶劑瓶A、 B 內(nèi)流動(dòng)相的實(shí)際體積（為保護(hù)泵和色譜柱，請(qǐng)按實(shí)際體積輸入）和停泵的體積單擊“確定”，如果各溶劑瓶溶劑體積小于停泵體積，泵將自動(dòng)停止。2.9 把緩沖液（用于柱子過(guò)渡的，與流動(dòng)相等比例的乙腈/水、甲醇/水或10%的水溶液）換成流動(dòng)相，排氣后，逐步增加至所需流速，待柱壓基本穩(wěn)定后，打開(kāi)檢測(cè)器等，監(jiān)視基線。3 數(shù)據(jù)采集3.1

4、 采集方法編輯3.1.1 編輯完整方法：從“方法 ”菜單中選擇“編輯完整方法 ”項(xiàng)，選中除“數(shù)據(jù)分析”外的三項(xiàng)，單擊“確定”進(jìn)入下一畫面。3.1.2 方法信息：在“方法注釋”欄中加入（如方法的用途等） ，單擊“確定”進(jìn)入下一畫面。3.1.3 泵參數(shù)設(shè)定：在“流速”處輸入方法所需流量（如1ml/min） ；默認(rèn)為A為100%,如需二元高壓，在“溶劑 B”處輸入所需比例，則溶劑 A=100-B ，也可“插入”一行“時(shí)間表”編輯二元梯度；在“壓力限”處輸入柱子的最大耐高壓（建議設(shè)定200bar） 以保護(hù)柱子,單擊“確定”進(jìn)入下一畫面 。3.1.4 VWD 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定：在“波長(zhǎng)”下方的空白處輸入所

5、需的檢測(cè)波長(zhǎng)，如254nm;在“峰寬（響應(yīng)時(shí)間）”下方點(diǎn)擊下拉式三角框, 選擇合適的響應(yīng)時(shí)間（如>0.1min （2s） ；如有特殊要求，也可在“時(shí)間表”中可以“插入”一行輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)（如 1min 波長(zhǎng) =300nm） ，點(diǎn)擊“確定”。3.1.5 在“運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表”中選中“數(shù)據(jù)采集”選項(xiàng)，單擊“確定”。3.1.6 單擊“方法”菜單選中“方法另存為”輸入方法名，單擊“確定” 。3.1.7 從“視圖”菜單中選中“在線信號(hào)”,選中“信號(hào)窗口1” ,然后單擊“改變”鈕 ,將所要查看的信號(hào)移到右邊框中,單擊“確定”。3.1.8 進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定：在進(jìn)樣模式中輸入“進(jìn)樣量"xx”,

6、默認(rèn)為20屋?！皹?biāo)準(zhǔn)進(jìn)針”只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無(wú)洗針功能?！搬樓逑春筮M(jìn)樣”可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置為xx,此方式針從樣品瓶抽完樣品后會(huì)在洗瓶中洗針。進(jìn)樣器進(jìn)樣程序參數(shù)設(shè)定：選中使用進(jìn)樣程序，在“函數(shù)”中添加相應(yīng)函 數(shù)即可按程序進(jìn)樣。3.1.9 TCC僉測(cè)器參數(shù)設(shè)定：在“溫度”左側(cè)下面的方框內(nèi)輸入所需溫度，并選中它，右側(cè)選中“與左側(cè)相同”使柱溫箱的溫度左右一 致。3.2 運(yùn)行方法3.2.1 單針進(jìn)樣3.2.1.1 選擇“單針進(jìn)樣”圖標(biāo)。3.2.1.2 從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“樣品信息”選項(xiàng)，輸入“操作者名稱” ，數(shù)據(jù)存儲(chǔ)目錄路徑中的子目錄，子目錄即為數(shù)據(jù)圖譜存儲(chǔ)的文件夾， 輸入后， 鼠標(biāo)

7、點(diǎn)擊其他地方，會(huì)自動(dòng)彈出“ E：不存在，要?jiǎng)?chuàng)建它嗎？”單擊“確定”。 “數(shù)據(jù)文件”中選擇“手動(dòng)”或“前綴/ 計(jì)數(shù)器” 。 （區(qū)別 : “手動(dòng)” - 每次做樣之前必須給出新名字, 否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉； “前綴 /計(jì)數(shù)器” 在 “前綴” 框中輸入前綴，如 20120505,在“計(jì)數(shù)器”框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位, 儀器會(huì)自動(dòng)命名如20120505000001、20120505000002等等。 ） “樣品位置”填寫進(jìn)樣瓶的位置。3.2.1.3 點(diǎn)擊畫面中的“開(kāi)始”運(yùn)行方法，中間停止采樣點(diǎn)“結(jié)束”。3.2.2序列進(jìn)樣3.2.2.1 “序列”下“序列參數(shù)”，設(shè)置同單針進(jìn)樣，樣品位置不填。3.2.

8、2.2 “序列”下選擇“序列表”，在表格中可進(jìn)行“插入”、 “剪切”“復(fù)制” “粘貼” “追加行”等操作，表格中必須填寫“樣品瓶” “樣品名稱” “方法名稱” “進(jìn)樣次數(shù)” “數(shù)據(jù)文件” “進(jìn)樣量”等信息，其他信息可選擇編輯。編輯完成后，單擊“確定”。在“序列菜單中選擇“序列模板另存為”為新建序列命名。3.2.2.3 在“儀器”菜單中選擇“運(yùn)行序列”運(yùn)行當(dāng)前序列。停止采集數(shù)據(jù)選擇“儀器”菜單中“停止運(yùn)行/進(jìn)樣/序列”?；蛘咄瑔吾樳M(jìn)樣的方法。4 數(shù)據(jù)分析方法編輯4.1 從“視圖”菜單中單擊“數(shù)據(jù)分析”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。1.2 從 “文件” 菜單選擇 “調(diào)用信號(hào)”選中所做的數(shù)據(jù)文件，單擊 “確定”

9、 ，也可直接雙擊打開(kāi)。1.3 做譜圖優(yōu)化：從“圖形”菜單中選擇“信號(hào)選項(xiàng)”，再?gòu)摹胺秶敝羞x擇“自動(dòng)量程”及合適的顯示時(shí)間單擊“確定”或選擇“自定義量程”調(diào)整 ,反復(fù)進(jìn)行直到圖的比例合適為止。1.4 積分優(yōu)化1.4.1 從“積分”中選擇“自動(dòng)積分”, 若積分結(jié)果不理想,再?gòu)牟藛沃羞x“積分事件”選項(xiàng)，選擇合適的“斜率靈敏度”、 “峰寬” 、 “最小峰面積” 、 “最小峰高”。1.4.2 從“積分”菜單中選擇“積分”選項(xiàng)，則數(shù)據(jù)被積分。1.4.3 如積分結(jié)果還不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)直到滿意為止。1.4.4 單擊左邊“保存并退出”圖標(biāo)將積分參數(shù)存入當(dāng)前方法中。5 打印報(bào)告5.1 從“報(bào)告”菜單

10、中選擇“設(shè)定報(bào)告”選項(xiàng)。5.2 單擊“定量結(jié)果”框中“定量”右側(cè)的黑三角選中所采用的報(bào)告方法（如面積外標(biāo)法等），單擊“確定”。5.3 從“報(bào)告”菜單中選擇“打印”則報(bào)告打印結(jié)果將顯示在屏幕上，如想輸出到打印機(jī)，則單擊“報(bào)告”底部的“打印”鈕即可。6 關(guān)機(jī)6.1 關(guān)機(jī)前， 用95%水沖洗柱子和系統(tǒng)0.5-1 小時(shí)， 流量 0.5-l.0ml/min，再用100%有機(jī)溶劑沖0.5小時(shí)，然后關(guān)閉系統(tǒng)。6.2 退出化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)（用 shutdown關(guān)）。6.3 關(guān)掉主機(jī)電源開(kāi)關(guān)。7 注意事項(xiàng)7.1 氘燈是易耗品，應(yīng)最后開(kāi)燈，不分析樣品即關(guān)燈。7.2 流動(dòng)相使用前必須用微孔濾膜過(guò)濾，不使用多日存放的蒸餾水（易長(zhǎng)菌） 。7.3 流速突然突然變大或變小會(huì)導(dǎo)致柱壓的突然改變，時(shí)間久了柱子填料會(huì)坍