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文檔簡(jiǎn)介
1、蘆薈中蘆薈苷的提取分離1概述1.1 蘆薈的藥用價(jià)值及意義蘆薈,為百合科多年生肉質(zhì)草本植物,原產(chǎn)非洲,現(xiàn)在我國(guó)廣西、廣東、云南、海南等地均有栽培。蘆薈品種繁多,其中美國(guó)翠葉蘆薈,又稱庫(kù)拉索蘆薈,是蘆薈家族中最具藥用和美容功效的品種?,F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明蘆薈具有多方面藥理作用,在臨床上的應(yīng)用也取得了很好的療效,特別是對(duì)蘆薈含有的蒽醌類物質(zhì)、多糖類物質(zhì)在提高人體免疫力,防治腫瘤、艾滋病等基礎(chǔ)及應(yīng)用研究中已取得突破性進(jìn)展,可被認(rèn)為是一種安全、有效、易用的優(yōu)良天然藥物資源。國(guó)內(nèi)外的一些研究也同樣表明蘆薈中蒽醌類和蘆薈多糖類物質(zhì)作為蘆薈中的主要成分,的確具有抗胃潰瘍、抗腫瘤、抗衰老、抗病毒、增強(qiáng)免疫功能、護(hù)膚
2、美容等功效。1.2 蘆薈苷提取分離的研究現(xiàn)狀及展望目前,國(guó)內(nèi)上市的蘆薈系列產(chǎn)品逐漸增多,如飲料、保健品、藥品、美容化妝品等早已走進(jìn)千家萬(wàn)戶。蘆薈之所以能夠治療多種疾病,受到醫(yī)學(xué)界的高度重視,這與蘆薈的化學(xué)成分有關(guān)。蘆薈的組成成分十分復(fù)雜,到目前為止,被測(cè)知的各種化學(xué)成分已超過(guò)160種。但根據(jù)現(xiàn)代研究表明,蘆薈的主要化學(xué)成分可以分為:蒽醌類化合物、糖類、氨基酸和各種有機(jī)酸、維生素、酶(多肽)、礦物質(zhì)。蘆薈苷是蒽醌類化合物中最基本的成分之一。隨著對(duì)蘆薈功能研究的日益深入,對(duì)蘆薈苷的認(rèn)識(shí)有了進(jìn)一步的進(jìn)展,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)蘆薈生物活性物質(zhì)的提取及藥理作用亦有了更深入的了解。研究表明蘆薈在乙醇、氯仿、苯、水的
3、提取物中,乙醇提取物的活性最強(qiáng),且同種溶劑提取物蘆薈的干燥葉比新鮮葉活性強(qiáng)。從蘆薈葉提取有活性化學(xué)物質(zhì)如蘆薈苷,蘆薈大黃素等的過(guò)程分為如下步驟:提取含可溶性物質(zhì)的蘆薈原汁;將蘆薈提取液的pH值調(diào)至33.5;向蘆薈原汁中加入水溶性、低脂族極性溶劑,如甲醇、乙醇、丙醇以沉淀有效化學(xué)物質(zhì),得到多相溶液;除去多相溶液中的水溶性、低脂族極性溶劑及可溶性物質(zhì)以分離獲取沉淀狀態(tài)的有活性化學(xué)物質(zhì);干燥沉淀有活性的化學(xué)物質(zhì)。蘆薈作為一種古老的藥用植物,我們應(yīng)該把傳統(tǒng)的中醫(yī)理論和蘆薈現(xiàn)代的研究成果結(jié)合起來(lái),利用高科技手段,研制高效產(chǎn)品。在美國(guó),從事蘆薈種植、加工、制造、銷售的大公司有10多家,開(kāi)發(fā)出的蘆薈產(chǎn)品約有
4、1500種,年銷售額達(dá)20多億美元。我國(guó)雖然在宋代就有蘆薈入藥的記載,但研究與開(kāi)發(fā)利用遠(yuǎn)不及國(guó)外。且我國(guó)是個(gè)消費(fèi)大國(guó),如果能把蘆薈開(kāi)發(fā)產(chǎn)業(yè)化,必將帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)效益。因此,我國(guó)應(yīng)該加快蘆薈藥用新產(chǎn)品、蘆薈保健食品和蘆薈美容化妝品的研究與開(kāi)發(fā),以合理利用我國(guó)的蘆薈資源,發(fā)展以科學(xué)技術(shù)為背景的蘆薈加工產(chǎn)業(yè)。本研究通過(guò)化學(xué)和物理的方法,從鮮蘆薈和蘆薈粉中提取較純的蘆薈苷,對(duì)其進(jìn)行定性分析和研究。通過(guò)傳統(tǒng)的方法與總結(jié)得來(lái)新方法進(jìn)行比較,討論哪種方法更為有效,可行。通過(guò)對(duì)不同材料提取的產(chǎn)物進(jìn)行有效分析比較,總結(jié)哪種原材料更為經(jīng)濟(jì)。為蘆薈中類似或其他藥用成分的提取提供參考的依據(jù)。另一方面,通過(guò)對(duì)蘆薈薄層培
5、養(yǎng)的探索性實(shí)驗(yàn)的研究,使對(duì)蘆薈中含有的藥用成分的提取提供更新或更有效的方法。2 材料與方法2.1 材料庫(kù)拉索蘆薈(Aloe.barbadensis)(購(gòu)于武漢市虎泉花卉市場(chǎng))蘆薈粉(購(gòu)于,面膜用)2.2 儀器及試劑DZ-1A型真空干燥箱(天津市泰斯特儀器XX公司)XS-402熒光顯微鏡;WD-9413BI!膠成像分析儀;KQ3200g聲波清洗器;甲醇、乙醇、乙酸乙酯、異丁醇均為分析純。2.3 方法蘆薈苷的提取方法一。預(yù)處理取庫(kù)拉索蘆薈葉片若干,洗凈,切片風(fēng)干,粉碎,取粉末3g,用5%昔酸酸化,于表面皿中風(fēng)干,除去多余水分。市售蘆薈粉則直接取3g。將稱取的蘆薈粉末,用三氯甲烷回流提取2h,振搖,
6、趁熱過(guò)濾,得濾渣。待慮渣中的三氯甲烷揮干后,將殘?jiān)糜谒魇教崛∑髌渲?,?5%4h,趁熱過(guò)濾,用95%乙醇洗滌3次,所得濾液合并。向?yàn)V液中緩慢加入5%M氧化鉀溶液,同時(shí)調(diào)節(jié)pH值至910,靜置30min后過(guò)濾,用95%&醇洗滌沉淀3次,合并慮液,置真空干燥箱中,以0.8MPa,6070C,減壓濃縮至干,得總蒽醌苷的鉀鹽。再加入95%乙醇,使沉淀懸浮于乙醇中,緩慢加入冰醋酸,調(diào)節(jié)pH值至中性,水浴加熱,趁熱抽濾,濾液濃縮,濃縮液加醋酸鉛試液,振搖混勻,待沉淀不再繼續(xù)出現(xiàn),過(guò)濾,沉淀以蒸餾水洗滌3次,過(guò)濾,所得濾液用1%氫氧化鈉調(diào)pH值至中性,重結(jié)晶,冰浴濾過(guò),所得晶體為蘆薈音。蘆薈音的提
7、取方法二。取新鮮的蘆薈葉片若干,洗凈。榨取汁液(黃色)200go市售蘆薈粉則稱取50g粉末,力口300ml水溶解,過(guò)濾,取濾液(棕色)200g。分別置于1L蒸餾瓶中35減壓濃縮蒸發(fā)約75%的水分,加入600ml乙酸乙酯萃取3次,萃取溫度保持在5560,每次30min。棄去有機(jī)相,水相合并后4555減壓濃縮,濃縮物為棕黃色固體,蘆薈苷含量約為45%50%。將濃縮物溶于640ml異丁醇,溫度保持在70。溶液冷卻至5析晶,持續(xù)4h。布氏漏斗濾出晶體,20ml異丁醇洗滌,干燥后即得蘆薈苷。Borntragers反應(yīng)。分別取從自制蘆薈粉和市售蘆薈粉中提得的蘆薈苷晶體以及蘆薈苷對(duì)照品,加入10%硫酸溶液5
8、mL,置水浴上加熱210min,放冷后,加乙醴2mL振搖,靜置后分別取醴層溶液,加入5%M氧化鈉水溶液1mL,振搖,比較兩相顏色。硼砂反應(yīng)。取提取的蘆薈音粉末0.2g,加純化水20ml,振搖,濾過(guò),取濾液5ml加硼砂0.2g,加熱使溶解,取溶液數(shù)滴,加純化水30ml,搖勻,置紫外光燈(365nm)下觀察。薄層色譜。稱取提取的蘆薈音粉末0.2g,加甲醇20ml,置水浴上加熱至沸,振搖數(shù)分鐘,濾過(guò),濾液作為供試品溶液。另取蘆薈苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各5皿,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯一甲醇水(100:1
9、7:13)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10氫氧化鉀甲醇溶液,置紫外光燈(365nm)下視檢。3 結(jié)果分析3.1 提取結(jié)果對(duì)自制蘆薈粉和市售蘆薈粉均用兩種提取分離蘆薈苷。第一種方法由于最終提取的量比較少,重結(jié)晶,冰浴濾過(guò)后得到的少量晶體。而第二種方法相對(duì)獲得的晶體量較多。自制蘆薈粉所提取的蘆薈苷為片層狀亮棕色晶體,而市售蘆薈粉提取物為顆粒狀暗棕色晶體,所獲蘆薈苷晶體量相當(dāng)。3.280 rntragers反應(yīng)通過(guò)進(jìn)行Borntragers反應(yīng),并與對(duì)照相品比較,兩種方法提取的蘆薈苷晶體的Borntragers反應(yīng)均呈現(xiàn)醚層由黃色褪為無(wú)色,水層顯紅色。3.281 硼砂反應(yīng)兩種材料中提取的蘆薈音在
10、紫外光燈(365 nm)下觀察,均顯綠色熒光。綠色熒光物即為硼砂反應(yīng)后的蘆薈苷(硼砂反應(yīng)的載玻片和蓋玻片經(jīng)過(guò)稀鹽酸處理,并浸泡在75%乙醇中??杀苊馔饨鐭晒馕镔|(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾)。自制蘆薈粉和市售蘆薈粉所提取的蘆薈苷硼砂反應(yīng)均有較為明顯的熒光效應(yīng)。硼砂反應(yīng)的綠色熒光物有的呈顆粒狀,有的呈半月型,形態(tài)各異。3.282 薄層色譜供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。同時(shí),將市售蘆薈粉和鮮蘆薈的蘆薈苷提取物進(jìn)行薄層色譜實(shí)驗(yàn)作為初步對(duì)比(圖1)。均測(cè)得色斑中心至點(diǎn)樣中心的距離為9.3cm,溶劑前沿至點(diǎn)樣中心的距離為11.8cm。由此算得RF值為0.7881。從薄層色譜圖中可以看出
11、,市售蘆薈粉和新鮮蘆薈提取出來(lái)的蘆薈苷制作的供試品,均得出了較為明顯的條帶。由資料顯示,蘆薈苷在與顯色劑10氫氧化鉀甲醇溶液反應(yīng)后,在紫外光燈(365nm)下顯暗黃色熒光斑點(diǎn)。即最遠(yuǎn)端的暗黃色條帶,為蘆薈苷顯示出來(lái)的熒光。4 結(jié)論本研究中,采用兩種不同的方法對(duì)鮮蘆薈和市售蘆薈粉進(jìn)行了蘆薈苷有效成分的提取,通過(guò)比較提取物的產(chǎn)量、質(zhì)量及鑒別實(shí)驗(yàn)結(jié)果,分析兩種方法的優(yōu)劣。第一種方法的操作比較復(fù)雜。首先,實(shí)驗(yàn)步驟較多,回流和索式提取相對(duì)費(fèi)時(shí)費(fèi)力,各步驟加入的試劑種類也相對(duì)較多,在后續(xù)的操作過(guò)程中,加入醋酸鉛試液對(duì)其他非有效成分進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)時(shí),容易把重金屬鉛離子帶入到溶液中,造成安全問(wèn)題。在工業(yè)生產(chǎn)中,凡是有鉛離子帶入的,后續(xù)操作中必須脫鉛。在本實(shí)驗(yàn)中,脫鉛操作需用到H2s氣體,該氣體有劇毒,考慮到脫鉛與否,對(duì)提取分離及鑒別實(shí)驗(yàn)并沒(méi)大的影響,所以并未采用。其次,通過(guò)此法提取的產(chǎn)物,數(shù)量有限,只能在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行小規(guī)模的提取,用于研究。不適合需求較大的生產(chǎn)。最終得到的蘆薈苷晶體,由于數(shù)量有限,只能用于Borntragers反應(yīng)。但由反應(yīng)現(xiàn)象可以看出,現(xiàn)象比較明顯,說(shuō)明最終產(chǎn)物中的蘆薈苷含量還是比較高的。第二種方法操作相對(duì)簡(jiǎn)便,提取中所帶入的試劑品種也較小。該方法兩次需要進(jìn)行減壓濃縮,濃縮過(guò)程需要耗費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間。此方法最主要的優(yōu)點(diǎn)是分離提取出來(lái)的量比較多。不過(guò)硼砂反應(yīng)的現(xiàn)象不如Borntr
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