急性皮膚刺激試驗(yàn)

1、急性皮膚刺激試驗(yàn)1 目的確定化學(xué)品對哺乳動(dòng)物皮膚局部是否有刺激作用及程度， 為制定化學(xué)品對皮膚的保護(hù)措施 提供依據(jù)。2 制定依據(jù)化妝品衛(wèi)生規(guī)范( 2007 版)。3 試驗(yàn)方法3.1 受試樣品處理液體受試物一般不需稀釋，可直接使用原液。 若受試物為固體，應(yīng)將其研磨成細(xì)粉狀， 并用 水或其它無刺激性溶劑充分濕潤， 以保證受試物與皮膚有良好的接觸。 使用其它溶劑， 應(yīng)考 慮到該溶劑對受試物皮膚刺激性的影響。 需稀釋后使用的產(chǎn)品， 先進(jìn)行產(chǎn)品原型的皮膚刺激 性/ 腐蝕性試驗(yàn)，如果試驗(yàn)結(jié)果顯示中度以上刺激性，可按使用濃度為受試物再進(jìn)行皮膚刺 激性 /腐蝕性試驗(yàn)。受試物為強(qiáng)酸或強(qiáng)堿(pH值w 2或11.5

2、 )，可以不再進(jìn)行皮膚刺激試驗(yàn)。此外，若已知 受試物有很強(qiáng)的經(jīng)皮吸收毒性， 經(jīng)皮 LD50 小于 200 mg/kg 體重或在急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)中受試 物劑量為 2000 mg/kg 體重仍未出現(xiàn)皮膚刺激性作用，也無需進(jìn)行急性皮膚刺激性試驗(yàn)。3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)環(huán)境 多種哺乳動(dòng)物均可被選為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，首選白色家兔。應(yīng)使用成年、健康、皮膚無損傷的動(dòng)物，雌性和雄性均可，但雌性動(dòng)物應(yīng)是未孕和未曾產(chǎn)仔的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反應(yīng)則需增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)單籠飼養(yǎng)， 試驗(yàn)前動(dòng)物要在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房 環(huán)境中至少適應(yīng) 3d 時(shí)間。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房應(yīng)符合國家相應(yīng)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不

3、限制。3.3 急性皮膚刺激性試驗(yàn)步驟3.3.1試驗(yàn)前約24h,將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)毛剪掉，不可損傷表皮，去毛范圍左、右各約 3cmX3cm。332 取受試物約0.5mL ( g)直接涂在皮膚上，然后用二層紗布( 2.5cm X2.5cm )和一層玻 璃紙或類似物覆蓋， 再用無刺激性膠布和繃帶加以固定。 另一側(cè)皮膚作為對照。 采用封閉試 驗(yàn)，敷用時(shí)間為4h。對化妝品產(chǎn)品而言， 可根據(jù)人的實(shí)際使用和產(chǎn)品類型， 延長或縮短敷用 時(shí)間。對用后沖洗的化妝品產(chǎn)品，僅采用 2h 敷用試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)束后用溫水或無刺激性溶劑清除殘留受試物。如懷疑受試物可能引起嚴(yán)重刺激或腐蝕作用，可采取分段試驗(yàn)，將三個(gè)涂布受試物

4、的紗布塊同時(shí)或先后敷貼在一只家兔背部脫毛區(qū)皮膚上，分別于涂敷后3min、60min和4h取下一塊紗布，皮膚涂敷部位在任一時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)腐蝕作用，即可停止試驗(yàn)。333于清除受試物后的1、24、48和72h觀察涂抹部位皮膚反應(yīng)，按表1進(jìn)行皮膚反應(yīng)評分，以受試動(dòng)物積分的平均值進(jìn)行綜合評價(jià)，根據(jù)24、48和72 h各觀察時(shí)點(diǎn)最高積分均值，按表2判定皮膚刺激強(qiáng)度。3.3.4 觀察時(shí)間的確定應(yīng)足以觀察到可逆或不可逆刺激作用的全過程，一般不超過14d。3.4多次皮膚刺激性試驗(yàn)步驟3.4.1試驗(yàn)前將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去毛范圍各為3cmx 3cm,涂抹面積2.5cm x 2.5cm。3.4.2 取受試物

5、約0.5mL（g）涂抹在一側(cè)皮膚上，當(dāng)受試物使用無刺激性溶劑配制時(shí)，另一 側(cè)涂溶劑作為對照，每天涂抹1次，連續(xù)涂抹14d。從第二天開始，每次涂抹前應(yīng)剪毛，用水或無刺激性溶劑清除殘留受試物。一小時(shí)后觀察結(jié)果，按表1評分，對照區(qū)和試驗(yàn)區(qū)同樣處理。3.4.3結(jié)果評價(jià)：按下列公式計(jì)算每天每只動(dòng)物平均積分，以表2判定皮膚刺激強(qiáng)度。毎天每只動(dòng)物平均積分二藝紅斑和水腫積分受試動(dòng)物數(shù)表1皮膚刺激反應(yīng)評分皮膚反應(yīng)評分無紅斑0輕微紅斑1紅斑和焦痂形成明顯紅斑2中等程度到重度程度紅斑3嚴(yán)重紅斑（紫紅色）至輕微焦痂形成4水腫形成無水腫0微水腫（勉強(qiáng)可見）1輕度水腫（皮膚隆起輪廓清晰）2中度水腫（皮膚隆起約 1mm3重

6、度水腫（皮膚隆超過1mm范圍擴(kuò)大）4最高積分8分84試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)以表格形式總結(jié)，包括如下內(nèi)容：（1）受試物名稱、理化性狀、配制方法和用量。必要時(shí)說明受試物的pH值；（2 ）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、品系、性別、體重和來源（注明合格證號和動(dòng)物級別）；（3）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來源、室溫、相對濕度、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房合格證號；（4）每個(gè)動(dòng)物在每一觀察時(shí)點(diǎn)的皮膚刺激反應(yīng)積分；（5）具體描述除刺激性以外的其它毒性作用；（6）結(jié)論。5試驗(yàn)結(jié)果的解釋急性皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果從動(dòng)物外推到人的可靠性很有限。白色家兔在大多數(shù)情況下對有刺激性或腐蝕性的物質(zhì)較人類敏感。若用其它品系動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)也得到類似結(jié)果，則會(huì)增加從動(dòng)物外推到人的可靠性。試驗(yàn)中使用封閉式接觸是一種超常的實(shí)驗(yàn)室條件下的試驗(yàn)，在人類實(shí)際使用化妝品過程中很少存在這種接觸方式。表2皮膚刺激強(qiáng)度分級積分均值強(qiáng)度分級0 < 0.5無刺激性0.5-< 2.0輕度刺激性2.02 < 6.0中等刺激性6.0-< 8.0強(qiáng)刺激性表3對家兔急性皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果動(dòng)性體1h24h48h72h物別重樣品對照樣品對照樣品對照樣品對照編k紅水總紅水總紅水總紅水總紅水總紅水總紅水總紅水總號g斑腫分斑腫分斑腫分斑腫分斑腫分斑腫分斑腫分斑腫分1總積分均值刺激強(qiáng)度分級表4對家兔多次皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果涂抹天數(shù)動(dòng)物數(shù)（只）刺激反應(yīng)積分樣品對照紅斑水腫總分紅斑