血清心肌肌鈣蛋白Ⅰ檢測的方法比較

1、血清心肌肌鈣蛋白檢測的方法比較            【關(guān)鍵詞】  血清心肌肌鈣蛋白；檢測；比較    近年來，急性心肌梗死（AMI）已經(jīng)成為了一種臨床常見的急性多發(fā)病，它起病急，致死率高，所以要求臨床對其做出及時、正確的診斷，為挽救瀕死的心肌贏得寶貴的時間。在AMI的生化診斷方面，肌酸肌酶（CK）及其同工酶（CK-MB）是常用的指標(biāo)，但是CK-MB并非心臟所特有，在正常人骨骼中也有存在1。1987年英國Cummins等首先報

2、告用測定周圍血中心肌蛋白（CTN）濃度來診斷AMI1。同時，近期的研究表明心肌肌鈣蛋白（Cardiac  Troponin）是心肌特異的調(diào)節(jié)蛋白，其肌鈣蛋白在AMI釋放入血是心肌損傷的特異性標(biāo)志物，并具有靈敏度高，出現(xiàn)時間早，診斷窗口時間長等優(yōu)點，所以心肌肌鈣蛋白成為了診斷AMI的金指標(biāo)。    心肌肌鈣蛋白（CTnI）是心肌纖維上專有的收縮蛋白，它是肌鈣蛋白三個亞單位之一（，T，C），它和原肌球蛋白一起通過肌原纖維的肌絲與肌幼蛋白結(jié)合。CTnI有兩種形式，一種為游離的肌鈣蛋白，一種為與肌鈣蛋白C、T或同時與C、T結(jié)合而成的二聯(lián)或三聯(lián)復(fù)合物2。它們的生物

3、學(xué)作用是在鈣不參與的情況下抑制肌動蛋白與肌漿蛋白復(fù)合物的ATP酶的活性，由此來阻止纖維的收縮。    在急性心肌梗死中，肌鈣蛋白在胸痛發(fā)生36小時后即可檢測到，峰值大約出現(xiàn)在1216小時，并且在AMI后的49天內(nèi)保持升高狀態(tài)，而且在沒有接受溶栓治療的患者中，CTnI的峰值可延遲出現(xiàn)。1  材料和方法    目前，臨床應(yīng)用的檢測肌鈣蛋白的方法可分為兩類，即定性和定量兩種方法。    定性檢測CTnI的方法，采用的是高茲公司的CTnI快速測試板，其原理是免疫學(xué)上的雙抗體夾心法。血清加入樣本孔（S）后

4、，其中CTnI會和金標(biāo)抗體CTnI抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物，此復(fù)合物會因毛細(xì)管作用向上流動至測試區(qū)與那里的抗CTnI抗體反應(yīng)，如果CTnI濃度在1.0 ng/ml或更高，將在測試區(qū)（T）里形成一條紅色色帶。如果樣品中沒有CTnI，此測試區(qū)將會保持無色。    其次定量的方法。試驗所用的儀器為貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的ACCESS全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，使用的檢測試劑均由貝克曼庫爾特公司提供。Access  AccuTnI檢測采用的是雙位點酶免疫法檢測，即雙抗體夾心法。樣品、標(biāo)記了堿性磷酸酶的抗CTnI單抗（酶結(jié)合物）以及包被了抗CTnI另一位點單抗的

5、磁性顆粒被一起加入到反應(yīng)管中，樣品中的CTnI和固相在磁性顆粒表面的抗體及游離的酶結(jié)合物在不同的抗原位點上同時發(fā)生反應(yīng)，而后，孵育后的反應(yīng)管被傳送到磁性分離區(qū)域進(jìn)行多次沖洗，去除未和固相結(jié)合的其它成分，最后在反應(yīng)管中加入化學(xué)發(fā)光底物，已與固相結(jié)合的堿性磷酸酶會使該底物發(fā)出光子并被光電比色計所檢測，最后，對照儀器中所儲存的多點定標(biāo)曲線中所描述的光量子與標(biāo)準(zhǔn)品CTnI的對應(yīng)關(guān)系而計算出樣品中CTnI濃度，反應(yīng)產(chǎn)生的光子與樣品中的CTnI含量成正比。此方法具有高特異性、高靈敏性、高準(zhǔn)確性，高穩(wěn)定性等特點3。2  結(jié)果    試驗中，將357例CTnI的測定值分

6、為三組，第一組CTnI的測定值為00.4 ng/ml，第二組CTnI的測定值為0.41.0 ng/ml，第三組為CTnI的測定值為1.0100 ng/ml。其中第一組為219例，占總數(shù)的61%，第二組為109例，占總數(shù)的30%，第三組為29例，占總數(shù)的8%。在第二組的109例中，又用CTnI的定性檢測法進(jìn)行檢測，只有偶見的幾例在測試區(qū)出現(xiàn)了一條顏色極淡的紅色色帶，在對第三組的29例進(jìn)行定性檢測時，有25例在測試區(qū)出現(xiàn)了一條深紅色的色帶，表明了其測定結(jié)果為陽性。表1  357例CTnI不同檢測的方法比較（略）3  討論    CTnI的定性方法具

7、有方便，快捷的特點，而且對實驗室設(shè)備要求不高，很適合基層醫(yī)院的實驗室，但是由于定性方法有一定局限性，只有在CTnI的濃度高于1.0 ng/ml的時候，才能檢測出陽性結(jié)果。而CTnI的定量方法，卻可以很精確的測出血中的CTnI的濃度，它的測得值可以為0100 ng/ml，本實驗中的1例最高測得值曾達(dá)到55.9 ng/ml。Access的正常值介定為00.4 ng/ml，即當(dāng)測得值高于0.4 ng/ml時，結(jié)果就具有一定的臨床意義。而對于定性實驗來說，CTnI的濃度在0.41.0 ng/ml之間的結(jié)果，便成為了一段灰區(qū)，無法檢測到，這一部分占到了30%，這就說明將有30%的AMI患者有可能被漏診。

8、    由此可見,對于AMI的檢測,化學(xué)免疫發(fā)光的定量方法無疑是我們最好的選擇,但是它對儀器的要求很高,只有大型的醫(yī)療機構(gòu)才能滿足臨床的需要。    雖然，CTnI是診斷AMI的金指標(biāo)，也不能只憑它的升高來定診，臨床醫(yī)生還會結(jié)合其它的輔助檢查以及一些臨床癥狀來做出正確的判斷，特別是當(dāng)實驗室只能提供CTnI的定性結(jié)果時，不要被誤導(dǎo)，因為定性實驗陰性，并不能排除AMI的發(fā)生，所以不管是實驗室的工作人員，還是臨床醫(yī)生，都要在工作中多一份細(xì)心，以挽救更多患者的生命。    【參考文獻(xiàn)】  1

9、Robert H Christson. Cardiac troponin I measurement with the ACCESS immrnoassay system:analytical and clinical performance characteristicsJ. Clinical Chemistry，1998，44:1 52-56.2 Mao GD. Clinical laboratory investigation of the ACCESS CK-Mbprocedure and comparison to electrophoresis and Abbott ImxJ. Am J Clin Pathol，1996，106:112-7.3 JP Etievent. U