細(xì)菌典型生理生化鑒定技術(shù)

1、整理ppt細(xì)菌典型生理生化鑒定技術(shù)細(xì)菌典型生理生化鑒定技術(shù)整理ppt第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌的生化試驗(yàn)細(xì)菌的生化試驗(yàn)整理ppt一、概述一、概述 （一）、什么是生化試驗(yàn)（一）、什么是生化試驗(yàn)? 指通過利用生物化學(xué)的方法來測(cè)定微指通過利用生物化學(xué)的方法來測(cè)定微生物的代謝產(chǎn)物、代謝方式和條件等來鑒生物的代謝產(chǎn)物、代謝方式和條件等來鑒別細(xì)菌的類別、屬種的試驗(yàn)。別細(xì)菌的類別、屬種的試驗(yàn)。整理ppt（二）檢驗(yàn)細(xì)菌的生化試驗(yàn)范圍（二）檢驗(yàn)細(xì)菌的生化試驗(yàn)范圍1、糖（醇）類代謝試驗(yàn)、糖（醇）類代謝試驗(yàn)2、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)3、有機(jī)酸鹽和銨鹽的利用試驗(yàn)、有機(jī)酸鹽和銨鹽的利用試驗(yàn)4、呼吸酶類試

2、驗(yàn)、呼吸酶類試驗(yàn)5、毒性酶類試驗(yàn)、毒性酶類試驗(yàn)整理ppt（三）生化試驗(yàn)的方法（三）生化試驗(yàn)的方法在培養(yǎng)物中加入某種底物與指示劑在培養(yǎng)物中加入某種底物與指示劑,經(jīng)接種、經(jīng)接種、培養(yǎng)后培養(yǎng)后,觀察培養(yǎng)基的觀察培養(yǎng)基的pH值變化。值變化。在培養(yǎng)物中加入試劑，觀察它們同細(xì)菌代謝在培養(yǎng)物中加入試劑，觀察它們同細(xì)菌代謝產(chǎn)物所生成的顏色反應(yīng)。產(chǎn)物所生成的顏色反應(yīng)。根據(jù)酶作用的反應(yīng)特性，測(cè)定酶的存在。根據(jù)酶作用的反應(yīng)特性，測(cè)定酶的存在。根據(jù)細(xì)菌對(duì)理化條件和藥品的敏感性，觀察根據(jù)細(xì)菌對(duì)理化條件和藥品的敏感性，觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。整理ppt（四）生化試驗(yàn)的注意事項(xiàng)（四）生化試驗(yàn)的注意事項(xiàng)1、待檢菌

3、應(yīng)是新鮮培養(yǎng)物。培養(yǎng)、待檢菌應(yīng)是新鮮培養(yǎng)物。培養(yǎng)1824h。2、待檢菌應(yīng)是純種培養(yǎng)物。、待檢菌應(yīng)是純種培養(yǎng)物。3、遵守觀察反應(yīng)的時(shí)間。觀察結(jié)果的時(shí)間，、遵守觀察反應(yīng)的時(shí)間。觀察結(jié)果的時(shí)間，多為多為24或或48小時(shí)。小時(shí)。4、應(yīng)做必要的對(duì)照試驗(yàn)、應(yīng)做必要的對(duì)照試驗(yàn)。5、提高陽性檢出率，至少挑取、提高陽性檢出率，至少挑取23待檢的疑似待檢的疑似菌落分別進(jìn)行試驗(yàn)。菌落分別進(jìn)行試驗(yàn)。整理ppt二、糖醇類代謝試驗(yàn)二、糖醇類代謝試驗(yàn)（一）糖醇類發(fā)酵試驗(yàn)（一）糖醇類發(fā)酵試驗(yàn)（二）葡萄糖氧化發(fā)酵（二）葡萄糖氧化發(fā)酵（O/F）試驗(yàn)）試驗(yàn) （三）（三）V-P試驗(yàn)試驗(yàn)（四）甲基紅（四）甲基紅（Methyl Red）

4、試驗(yàn)）試驗(yàn) MR（五）七葉苷水解試驗(yàn)（五）七葉苷水解試驗(yàn)（六）甘油品紅試驗(yàn)（六）甘油品紅試驗(yàn)整理ppt（一）（一） 糖醇類發(fā)酵試驗(yàn)糖醇類發(fā)酵試驗(yàn) 原理：不同的細(xì)菌對(duì)各種糖醇的分解能力及所原理：不同的細(xì)菌對(duì)各種糖醇的分解能力及所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物各不同，有的能分解多種糖醇，產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物各不同，有的能分解多種糖醇，有的只能分解有的只能分解12種糖醇種糖醇 ，有的分解糖醇能產(chǎn)，有的分解糖醇能產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的分解糖醇只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，根據(jù)這酸產(chǎn)氣，有的分解糖醇只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，根據(jù)這些特點(diǎn)，可鑒別細(xì)菌。些特點(diǎn)，可鑒別細(xì)菌。整理ppt1、常用的糖醇、常用的糖醇單糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖單糖：葡萄糖、

5、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖雙糖：乳糖、蔗糖、麥芽糖雙糖：乳糖、蔗糖、麥芽糖三糖：棉子糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇類：甘露醇、山梨醇、肌醇、衛(wèi)茅醇醇類：甘露醇、山梨醇、肌醇、衛(wèi)茅醇整理ppt2、試驗(yàn)方法：、試驗(yàn)方法： 用接種針或環(huán)移取純培養(yǎng)物少許，接用接種針或環(huán)移取純培養(yǎng)物少許，接種于糖發(fā)酵管中，若為半固體培養(yǎng)基，種于糖發(fā)酵管中，若為半固體培養(yǎng)基，則用接種針作穿刺接種。置則用接種針作穿刺接種。置361.0 培養(yǎng)培養(yǎng)13天，每天觀察結(jié)果。天，每天觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察和記錄、結(jié)果觀察和記錄記錄：記錄： 產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，陽性，以產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，陽性，以“+”表示表

6、示 產(chǎn)酸產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣， 陽性，以陽性，以“ ”表示表示 不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，陰性，以不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，陰性，以“-”表示表示整理ppt氣泡導(dǎo)管氣泡氣泡陽性陽性陰性培養(yǎng)基變?yōu)辄S色培養(yǎng)基未變色、無氣泡產(chǎn)生整理ppt（二）葡萄糖氧化發(fā)酵（二）葡萄糖氧化發(fā)酵（O/F）試驗(yàn)）試驗(yàn)1、原理：、原理： 細(xì)菌對(duì)葡萄糖的分解，分為氧化型和發(fā)酵型。細(xì)菌對(duì)葡萄糖的分解，分為氧化型和發(fā)酵型。 氧化型細(xì)菌氧化型細(xì)菌在有氧的條件下才能分解葡萄糖，無氧的在有氧的條件下才能分解葡萄糖，無氧的條件下不能分解葡萄糖；條件下不能分解葡萄糖；發(fā)酵型細(xì)菌發(fā)酵型細(xì)菌在有氧無氧條件下均可分解葡萄糖；在有氧無氧條件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的細(xì)菌稱

7、為產(chǎn)堿型。不分解葡萄糖的細(xì)菌稱為產(chǎn)堿型。根據(jù)糖管的色澤變化可鑒別細(xì)菌。根據(jù)糖管的色澤變化可鑒別細(xì)菌。整理ppt2、方法、方法 取待檢菌，以穿刺法接種于兩管葡萄糖取待檢菌，以穿刺法接種于兩管葡萄糖半固體培養(yǎng)基上，在其中一管加入一層半固體培養(yǎng)基上，在其中一管加入一層（約（約1cm）滅菌的液體石蠟以隔絕空氣，）滅菌的液體石蠟以隔絕空氣，在在37培養(yǎng)培養(yǎng)24h天，每天觀察結(jié)果。天，每天觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄封油管封油管未封油管未封油管發(fā)酵型發(fā)酵型 產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)酸（黃色）氧化型氧化型 不產(chǎn)酸（綠色）不產(chǎn)酸（綠色）產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)堿型產(chǎn)堿

8、型 不產(chǎn)酸（綠色）不產(chǎn)酸（綠色）不產(chǎn)酸（綠色）不產(chǎn)酸（綠色）整理ppt（三）（三） V-P試驗(yàn)試驗(yàn)1、原理：、原理：某些細(xì)菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，某些細(xì)菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸經(jīng)縮合、脫羧生成乙酰甲基甲醇，后丙酮酸經(jīng)縮合、脫羧生成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中的氧氧化為雙乙者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中的氧氧化為雙乙酰，在酰，在-萘酚和肌酸的催化作用下，雙乙酰萘酚和肌酸的催化作用下，雙乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱VP（+）反應(yīng)。）反應(yīng)。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法（1）奧梅拉（）奧梅拉（OMeara）法）法（2）貝立脫（）貝立脫（B

9、arritt）氏法）氏法（3）快速法）快速法整理ppt（）奧梅拉法：（）奧梅拉法： 將試驗(yàn)菌接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨將試驗(yàn)菌接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，于水培養(yǎng)基，于361 培養(yǎng)培養(yǎng)48h， 每每1mL培養(yǎng)液加奧梅拉培養(yǎng)液加奧梅拉OMeara試劑試劑0.1mL，搖，搖動(dòng)試管動(dòng)試管12min，靜置于，靜置于37恒溫箱恒溫箱4h ，或在或在4850 水浴放置水浴放置2h后判定結(jié)果。后判定結(jié)果。整理ppt（2）貝立脫法：）貝立脫法： 將試驗(yàn)菌接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培將試驗(yàn)菌接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，于養(yǎng)基，于361培養(yǎng)培養(yǎng)2天，每天，每2mL培養(yǎng)液先加培養(yǎng)液先加入入6%a-萘酚純酒

10、精溶液萘酚純酒精溶液1mL，再加，再加40%氫氧氫氧化鉀水溶液化鉀水溶液0.4mL，搖動(dòng)，搖動(dòng)25min，陽性菌常立，陽性菌常立即呈現(xiàn)紅色，若無紅色出現(xiàn)，靜置于室溫或即呈現(xiàn)紅色，若無紅色出現(xiàn)，靜置于室溫或361 培養(yǎng)培養(yǎng) 4h ，如顯現(xiàn)紅色為陽性，呈黃，如顯現(xiàn)紅色為陽性，呈黃色或有類似銅色者，可判定為陰性。色或有類似銅色者，可判定為陰性。整理ppt（3）快速法：）快速法： 將將0.5%肌酸溶液肌酸溶液2滴放于小試管中，挑取產(chǎn)滴放于小試管中，挑取產(chǎn)酸反應(yīng)的三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)物一接種環(huán)，酸反應(yīng)的三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)物一接種環(huán)，乳化接種于其中，加入乳化接種于其中，加入5%-萘酚萘酚3滴，滴，40%氫氧

11、化鈉水溶液氫氧化鈉水溶液2滴，振動(dòng)后放置滴，振動(dòng)后放置5min，判定，判定結(jié)果。不產(chǎn)酸的培養(yǎng)物不能使用。結(jié)果。不產(chǎn)酸的培養(yǎng)物不能使用。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄（1）發(fā)酵管出現(xiàn)紅色者，為陽性，）發(fā)酵管出現(xiàn)紅色者，為陽性， 記記V-P+（2）發(fā)酵管為黃色或銅綠色者，為陰）發(fā)酵管為黃色或銅綠色者，為陰性，記性，記 V-P-整理ppt（四）甲基紅試驗(yàn)（四）甲基紅試驗(yàn)（MR）1、原理、原理細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸后，由于代謝細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸后，由于代謝的途徑不同，有的細(xì)菌可使丙酮酸轉(zhuǎn)化生成乳酸、的途徑不同，有的細(xì)菌可使丙酮酸轉(zhuǎn)化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，使培

12、養(yǎng)基琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，使培養(yǎng)基pH值下降至值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅色，以下，使甲基紅指示劑變紅色，為甲基紅試驗(yàn)陽性為甲基紅試驗(yàn)陽性 ；有的細(xì)菌使丙酮酸脫羧后形；有的細(xì)菌使丙酮酸脫羧后形成酮、醇類中性產(chǎn)物，培養(yǎng)液成酮、醇類中性產(chǎn)物，培養(yǎng)液pH5.4，甲基紅指，甲基紅指示劑呈桔黃色，為甲基紅試驗(yàn)陰性。示劑呈桔黃色，為甲基紅試驗(yàn)陰性。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 挑取新鮮的待試培養(yǎng)物少許，接種于磷挑取新鮮的待試培養(yǎng)物少許，接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，于酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，于361 或或30 （以（以30 較好）培養(yǎng)較好）培養(yǎng)35天，從第天，從第48h

13、起，起，每日取培養(yǎng)液每日取培養(yǎng)液1mL，加入甲基紅指示劑，加入甲基紅指示劑12滴，滴，立即觀察結(jié)果。立即觀察結(jié)果。整理pptMR-VP試驗(yàn)原理及照片V-P整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄（1）呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈淡紅色）呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈淡紅色為弱陽性，記為弱陽性，記MR+；（2）呈橘黃色或黃色為陰性，記）呈橘黃色或黃色為陰性，記MR-，迄，迄至發(fā)現(xiàn)陰性并培養(yǎng)至第至發(fā)現(xiàn)陰性并培養(yǎng)至第5天仍為陰性，天仍為陰性，即可判定結(jié)果。即可判定結(jié)果。整理pptMR+MR-整理ppt（五）（五） 七葉苷水解試驗(yàn)七葉苷水解試驗(yàn)、原理：、原理：七葉苷被細(xì)菌分解后，生成七葉苷被細(xì)菌分解后，

14、生成葡萄糖和七葉素，七葉素與葡萄糖和七葉素，七葉素與Fe2+結(jié)合，結(jié)合，生成黑色化合物，使培養(yǎng)基呈黑色，生成黑色化合物，使培養(yǎng)基呈黑色，以此鑒別細(xì)菌。以此鑒別細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 將待試純培養(yǎng)物少許，接種于七葉苷將待試純培養(yǎng)物少許，接種于七葉苷培養(yǎng)基，于培養(yǎng)基，于361 培養(yǎng)培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果。觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄（1）培養(yǎng)基變?yōu)楹谏蜃睾谏?，為陽）培養(yǎng)基變?yōu)楹谏蜃睾谏撸瑸殛栃?，記錄為性，記錄?+（2）培養(yǎng)基不變色者，為陰性，記錄為）培養(yǎng)基不變色者，為陰性，記錄為 -整理ppt（六）（六） 甘油品紅試驗(yàn)甘油品紅試驗(yàn)1、原理：、原理：

15、 某些細(xì)菌可分解甘油成為丙酮酸，并進(jìn)一步某些細(xì)菌可分解甘油成為丙酮酸，并進(jìn)一步脫羧生成乙醛，乙醛與無色品紅生成醌式化合脫羧生成乙醛，乙醛與無色品紅生成醌式化合物，呈深紫紅色，以此鑒別細(xì)菌。物，呈深紫紅色，以此鑒別細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 取待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物，接種于取待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物，接種于甘油品紅肉湯培養(yǎng)基中，于甘油品紅肉湯培養(yǎng)基中，于361 培培養(yǎng)養(yǎng)8天天,并用未接種的培養(yǎng)基在相同條件并用未接種的培養(yǎng)基在相同條件下培養(yǎng)作為陰性對(duì)照，觀察結(jié)果。下培養(yǎng)作為陰性對(duì)照，觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄（1）出現(xiàn)紫色或紫紅色者）出現(xiàn)紫色或紫紅色者,為陽性，記

16、錄為陽性，記錄為為+；（2）與對(duì)照管顏色相同者）與對(duì)照管顏色相同者,為陰性，記錄為陰性，記錄為為-整理ppt（六）（六） 甘油品紅試驗(yàn)甘油品紅試驗(yàn)1、原理：、原理： 某些細(xì)菌可分解甘油成為丙酮酸，并進(jìn)一步某些細(xì)菌可分解甘油成為丙酮酸，并進(jìn)一步脫羧生成乙醛，乙醛與無色品紅生成醌式化合脫羧生成乙醛，乙醛與無色品紅生成醌式化合物，呈深紫紅色，以此鑒別細(xì)菌。物，呈深紫紅色，以此鑒別細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法：、試驗(yàn)方法： 取待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物，接種于取待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物，接種于甘油品紅肉湯培養(yǎng)基中，于甘油品紅肉湯培養(yǎng)基中，于361 培培養(yǎng)養(yǎng)8天天,并用未接種的培養(yǎng)基在相同條件并用未接種的培養(yǎng)基在

17、相同條件下培養(yǎng)作為陰性對(duì)照，觀察結(jié)果。下培養(yǎng)作為陰性對(duì)照，觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄（1）出現(xiàn)紫色或紫紅色者）出現(xiàn)紫色或紫紅色者,為陽性，記錄為陽性，記錄為為+；（2）與對(duì)照管顏色相同者）與對(duì)照管顏色相同者,為陰性，記錄為陰性，記錄為為-整理ppt（一）靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)（一）靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)（二）（二）H2S試驗(yàn)試驗(yàn)（三）尿素酶試驗(yàn)（三）尿素酶試驗(yàn)（四）氨基酸脫羧酶試驗(yàn)（四）氨基酸脫羧酶試驗(yàn)（五）苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)（五）苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)（六）明膠（六）明膠（Gelatin）液化試驗(yàn)）液化試驗(yàn)三、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)三、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)整理ppt（一）（

18、一） 靛基質(zhì)試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)1、原理：某些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋、原理：某些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚）。白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚）。吲哚與對(duì)二甲氨基苯甲醛結(jié)合，可形成紅吲哚與對(duì)二甲氨基苯甲醛結(jié)合，可形成紅色化合物，即玫瑰吲哚，以此鑒別細(xì)菌。色化合物，即玫瑰吲哚，以此鑒別細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法：、試驗(yàn)方法：所用試劑所用試劑:（1）柯凡克）柯凡克(Kovacs)試劑試劑;（2）歐）歐波試劑波試劑整理ppt 將待檢菌小量接種于培養(yǎng)基中，于將待檢菌小量接種于培養(yǎng)基中，于361 培養(yǎng)培養(yǎng)2448h時(shí)后，加入柯凡克試劑數(shù)滴，時(shí)后，加入柯凡克試劑數(shù)滴，輕搖試

19、管，呈紅色者為陽性。輕搖試管，呈紅色者為陽性。 或沿試管壁緩慢加入歐或沿試管壁緩慢加入歐-波試劑約波試劑約0.5mL覆蓋液面，兩液接觸處呈現(xiàn)玫瑰紅色者，為覆蓋液面，兩液接觸處呈現(xiàn)玫瑰紅色者，為陽性反應(yīng)，無紅色者為陰性反應(yīng)。陽性反應(yīng)，無紅色者為陰性反應(yīng)。整理ppt靛基質(zhì)試驗(yàn)原理及照片靛基質(zhì)試驗(yàn)原理及照片 靛基質(zhì)+整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄呈現(xiàn)玫瑰紅色，為陽性反應(yīng)，記+無紅色者，為陰性反應(yīng)，記-整理ppt（二）（二） 硫化氫（硫化氫（H2S）試驗(yàn)）試驗(yàn)1、原理：、原理： 某些細(xì)菌可分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸或某些細(xì)菌可分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸或含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛鹽或

20、含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽可生成黑色沉淀物鐵鹽可生成黑色沉淀物PbS或或FeS，以此鑒別，以此鑒別細(xì)菌。細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法：、試驗(yàn)方法： 挑取待檢菌，用穿刺接種法接種于三挑取待檢菌，用穿刺接種法接種于三糖鐵培養(yǎng)上，于糖鐵培養(yǎng)上，于361培養(yǎng)培養(yǎng)2448h，觀，觀察結(jié)果。察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 培養(yǎng)基底部呈黑色，為陽性，記培養(yǎng)基底部呈黑色，為陽性，記+ 培養(yǎng)基底部無黑色，為陰性，記培養(yǎng)基底部無黑色，為陰性，記-整理ppt（三）（三） 尿素酶試驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn)1、原理：、原理： 某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解產(chǎn)生

21、氨，氨使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使培養(yǎng)基產(chǎn)生氨，氨使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使培養(yǎng)基中的酚紅指示劑呈粉紅色，培養(yǎng)基由黃色中的酚紅指示劑呈粉紅色，培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色，為陽性。以此鑒別細(xì)菌。變?yōu)榧t色，為陽性。以此鑒別細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法：、試驗(yàn)方法： 挑取大量培養(yǎng)挑取大量培養(yǎng)1824h的待試菌，濃密涂布接的待試菌，濃密涂布接種于尿素瓊脂斜面上，不要到達(dá)底部，留底部種于尿素瓊脂斜面上，不要到達(dá)底部，留底部作變色對(duì)照。培養(yǎng)作變色對(duì)照。培養(yǎng)2、4和和24h分別觀察一次結(jié)果，分別觀察一次結(jié)果，培養(yǎng)基變?yōu)榉奂t色為陽性，顏色不變者為陰性。培養(yǎng)基變?yōu)榉奂t色為陽性，顏色不變者為陰性。如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至

22、4天，作最終判定。天，作最終判定。整理ppt尿素酶試驗(yàn)圖尿素酶試驗(yàn)圖 陽性整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 培養(yǎng)基變呈粉紅色，為陽性，記培養(yǎng)基變呈粉紅色，為陽性，記 + 培養(yǎng)基顏色不變，為陰性，記培養(yǎng)基顏色不變，為陰性，記 -整理ppt（四）（四） 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)氨基酸脫羧酶試驗(yàn)1、原理： 某些細(xì)菌能產(chǎn)生氨基酸脫羧酶某些細(xì)菌能產(chǎn)生氨基酸脫羧酶, 可使賴氨酸、可使賴氨酸、鳥氨酸生產(chǎn)脫羧作用鳥氨酸生產(chǎn)脫羧作用, 生成胺類物質(zhì)和生成胺類物質(zhì)和CO2。胺類物質(zhì)使培養(yǎng)基呈堿性變紫色，為陽性胺類物質(zhì)使培養(yǎng)基呈堿性變紫色，為陽性, 如如呈黃色為陰性，以此鑒別細(xì)菌。呈黃色為陰性，以此鑒別細(xì)菌。整

23、理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 取待檢菌，分別接種于含有氨基酸的培取待檢菌，分別接種于含有氨基酸的培養(yǎng)基內(nèi)和不含氨基酸的對(duì)照培養(yǎng)基內(nèi)，在養(yǎng)基內(nèi)和不含氨基酸的對(duì)照培養(yǎng)基內(nèi)，在361 培養(yǎng)培養(yǎng)14天，每天觀察結(jié)果。天，每天觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 試驗(yàn)管呈紫色，對(duì)照管呈黃色，為陽性，試驗(yàn)管呈紫色，對(duì)照管呈黃色，為陽性，記記 + 試驗(yàn)管、對(duì)照管都呈黃色，為陰性，記試驗(yàn)管、對(duì)照管都呈黃色，為陰性，記-整理ppt試試驗(yàn)驗(yàn)管管對(duì)照管陽性+陰性-對(duì)照管變黃試試驗(yàn)驗(yàn)管管變變黃黃整理ppt陽性反應(yīng)試驗(yàn)管顏色變化過程陽性反應(yīng)試驗(yàn)管顏色變化過程紫色紫色黃色黃色紫色紫色原理：原理： 對(duì)照

24、管呈黃色，說明有細(xì)菌生長(zhǎng)。在培養(yǎng)對(duì)照管呈黃色，說明有細(xì)菌生長(zhǎng)。在培養(yǎng)的早期（的早期（1012h），細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸使培），細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸使培養(yǎng)液養(yǎng)液pH下降，指示劑溴甲酚紫由紫色變?yōu)辄S下降，指示劑溴甲酚紫由紫色變?yōu)辄S色，以后由于氨基酸脫羧生成胺，色，以后由于氨基酸脫羧生成胺，pH又回升又回升至堿性，指示劑顯紫色。至堿性，指示劑顯紫色。整理ppt陽性反應(yīng)試驗(yàn)管顏色變化過陽性反應(yīng)試驗(yàn)管顏色變化過程：程：紫色紫色黃色黃色紫色紫色整理ppt（五）（五） 苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)1、原理：、原理： 某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙

25、酮酸，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸與氯化鐵作用生成綠色化合苯丙酮酸與氯化鐵作用生成綠色化合物，以此鑒別細(xì)菌。物，以此鑒別細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 從待檢菌瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，從待檢菌瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，接種于苯丙氨酸培養(yǎng)基上，在接種于苯丙氨酸培養(yǎng)基上，在361 培養(yǎng)培養(yǎng)1824h后，加入氯化鐵溶液后，加入氯化鐵溶液45滴，滴，轉(zhuǎn)動(dòng)試管，使試劑與菌苔表面充分接轉(zhuǎn)動(dòng)試管，使試劑與菌苔表面充分接觸，立即觀察結(jié)果。觸，立即觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄 試驗(yàn)管立即出現(xiàn)綠色，為陽性，記 + 無色為陰性，記 -。整理ppt加氯化鐵試劑出現(xiàn)綠色+整理ppt（六

26、）（六） 明膠液化試驗(yàn)明膠液化試驗(yàn)1、原理、原理 有些細(xì)菌具有明膠酶（亦稱類蛋白水解有些細(xì)菌具有明膠酶（亦稱類蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步將酶），能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步將多肽水解為氨基酸，明膠失去凝膠性質(zhì)，使多肽水解為氨基酸，明膠失去凝膠性質(zhì)，使培養(yǎng)基由固態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)。培養(yǎng)基由固態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 挑取培養(yǎng)挑取培養(yǎng)1824h的待試菌，以較大量穿刺的待試菌，以較大量穿刺接種于明膠高層約接種于明膠高層約2/3深度。于深度。于2022培養(yǎng)培養(yǎng)714天。明膠高層亦可培養(yǎng)于天。明膠高層亦可培養(yǎng)于361。另。另取一支未接種的培養(yǎng)基一同培養(yǎng)作對(duì)照，每取一支未接

27、種的培養(yǎng)基一同培養(yǎng)作對(duì)照，每天取出兩支試管，放入冰箱放置天取出兩支試管，放入冰箱放置2030min后，后，再觀察結(jié)果。再觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 明膠液化，為陽性，+。 明膠凝固，為陰性，-。整理ppt四、四、 有機(jī)酸鹽和銨鹽的利用試驗(yàn)有機(jī)酸鹽和銨鹽的利用試驗(yàn) 檸檬酸鹽利用試驗(yàn) 丙二酸鹽利用試驗(yàn)整理ppt（一）（一） 枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)1、原理：、原理： 某些細(xì)菌能利用檸檬酸鹽作為唯一某些細(xì)菌能利用檸檬酸鹽作為唯一碳源，分解枸櫞碳源，分解枸櫞(檸檬檸檬)酸鹽生成碳酸鹽；酸鹽生成碳酸鹽；同時(shí)分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨，使培養(yǎng)同時(shí)分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨，使培

28、養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍(lán)由基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍(lán)由淡綠轉(zhuǎn)為深藍(lán)色，為陽性。淡綠轉(zhuǎn)為深藍(lán)色，為陽性。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 挑取待檢菌，在西蒙檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜挑取待檢菌，在西蒙檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面上密集劃線接種，在面上密集劃線接種，在361 培養(yǎng)培養(yǎng)14天，每天觀察結(jié)果。天，每天觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 斜面有菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基斜面變?yōu)樗{(lán)斜面有菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基斜面變?yōu)樗{(lán)色或深藍(lán)色，為陽性，記色或深藍(lán)色，為陽性，記+； 無菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基斜面仍為綠色者，無菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基斜面仍為綠色者，為陰性，記為陰性，記-整理ppt檸檬酸鹽試驗(yàn)原理及斜面照

29、片 陽性+整理ppt（二）（二） 丙二酸鹽利用試驗(yàn)丙二酸鹽利用試驗(yàn)1.原理原理: 某些細(xì)菌可以利用培養(yǎng)基中的丙二酸鹽某些細(xì)菌可以利用培養(yǎng)基中的丙二酸鹽作為唯一碳源作為唯一碳源,丙二酸鹽被分解成碳酸鈉丙二酸鹽被分解成碳酸鈉,使使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性培養(yǎng)基變?yōu)閴A性,培養(yǎng)基由草綠色變成藍(lán)色，培養(yǎng)基由草綠色變成藍(lán)色，為陽性，以此鑒別細(xì)菌。為陽性，以此鑒別細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 取待檢菌新鮮純培養(yǎng)物，接種于取待檢菌新鮮純培養(yǎng)物，接種于丙二酸鈉培養(yǎng)基上，于丙二酸鈉培養(yǎng)基上，于361 培養(yǎng)培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 培養(yǎng)基由草綠色變成藍(lán)色培養(yǎng)基由

30、草綠色變成藍(lán)色,為陽性為陽性,記記+; 培養(yǎng)基無顏色變化培養(yǎng)基無顏色變化,為陰性為陰性,記記-整理ppt五、五、 呼吸酶類試驗(yàn)呼吸酶類試驗(yàn)F氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)F過氧化氫酶試驗(yàn)過氧化氫酶試驗(yàn)F硝酸鹽還原試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn)F氰化鉀試驗(yàn)氰化鉀試驗(yàn)整理ppt（一）（一） 氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)1.原理原理: 氧化酶使細(xì)胞色素氧化酶使細(xì)胞色素C氧化后，氧化氧化后，氧化型細(xì)胞色素型細(xì)胞色素C再使鹽酸二甲基對(duì)苯二胺再使鹽酸二甲基對(duì)苯二胺氧化，使生成玫瑰紅色到暗紫色的醌類氧化，使生成玫瑰紅色到暗紫色的醌類化合物化合物,再和再和-萘酚結(jié)合萘酚結(jié)合,生成吲哚酚藍(lán)生成吲哚酚藍(lán),呈藍(lán)色反應(yīng)，為陽性。呈藍(lán)色反應(yīng)，為陽性

31、。整理ppt試劑 1% -萘酚萘酚-乙醇液乙醇液 1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺鹽酸二甲基對(duì)苯二胺整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 用滴管直接滴加用滴管直接滴加1%鹽酸二甲基對(duì)苯二鹽酸二甲基對(duì)苯二胺試劑胺試劑12滴在培養(yǎng)物上滴在培養(yǎng)物上,再加入再加入1% -萘酚萘酚-乙醇液乙醇液12滴滴, 在在30秒內(nèi)判定試驗(yàn)秒內(nèi)判定試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 在在30秒內(nèi)呈藍(lán)色反應(yīng)秒內(nèi)呈藍(lán)色反應(yīng),為陽性為陽性,記記 + 不變色或?yàn)榧t色者不變色或?yàn)榧t色者,為陰性為陰性,記記 -整理ppt成藍(lán)色為+不變色或?yàn)榧t色為不變色或?yàn)榧t色為-整理ppt（二）（二） 過氧化氫酶試驗(yàn)過氧化氫酶試驗(yàn)原

32、理：原理： 某些細(xì)菌可分泌過氧化氫酶，加入過某些細(xì)菌可分泌過氧化氫酶，加入過氧化氫后，可將過氧化氫分解生成水和氧化氫后，可將過氧化氫分解生成水和氧氣，產(chǎn)生氣泡，即為陽性反應(yīng)。氧氣，產(chǎn)生氣泡，即為陽性反應(yīng)。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 挑取固體培養(yǎng)基上的新鮮菌落一環(huán)，置于潔挑取固體培養(yǎng)基上的新鮮菌落一環(huán)，置于潔凈玻片上（或試管），滴加凈玻片上（或試管），滴加3%過氧化氫液過氧化氫液數(shù)滴，或在瓊脂斜面培養(yǎng)物上直接滴加過氧數(shù)滴，或在瓊脂斜面培養(yǎng)物上直接滴加過氧化氫液，立即觀察結(jié)果?；瘹湟?，立即觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 產(chǎn)生氣泡者，為陽性，記產(chǎn)生氣泡者，為陽性，記+

33、不產(chǎn)生氣泡者，為陰性，記不產(chǎn)生氣泡者，為陰性，記-整理ppt（三）硝酸鹽還原試驗(yàn)（三）硝酸鹽還原試驗(yàn)1、原理：某些細(xì)菌具有還原硝酸鹽的能力，、原理：某些細(xì)菌具有還原硝酸鹽的能力，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，在酸性條件下，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，在酸性條件下，亞硝酸鹽可生成亞硝酸，亞硝酸與對(duì)氨基苯亞硝酸鹽可生成亞硝酸，亞硝酸與對(duì)氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再與與-萘胺作用，生成紅色的化合物，呈紅色萘胺作用，生成紅色的化合物，呈紅色反應(yīng)，為陽性反應(yīng)。反應(yīng)，為陽性反應(yīng)。整理ppt試劑 A、對(duì)氨基苯磺酸試劑、對(duì)氨基苯磺酸試劑 B、-萘胺試劑萘胺試劑整

34、理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 取待檢菌新鮮純培養(yǎng)物，在硝酸鹽培養(yǎng)取待檢菌新鮮純培養(yǎng)物，在硝酸鹽培養(yǎng)基上接種，在基上接種，在361 培養(yǎng)培養(yǎng)14天，每天，每天取天取2mL培養(yǎng)液培養(yǎng)液,加入加入A、B試劑的等量試劑的等量混合物各二滴混勻，立即觀察結(jié)果?；旌衔锔鞫位靹颍⒓从^察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 呈現(xiàn)紅色，為陽性，記呈現(xiàn)紅色，為陽性，記+ 若無紅色出現(xiàn)，為陰性，記若無紅色出現(xiàn)，為陰性，記-整理ppt（四）（四） 氰化鉀試驗(yàn)氰化鉀試驗(yàn)1.原理：原理： 氰化鉀是細(xì)菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑氰化鉀是細(xì)菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑,可與可與呼吸酶作用使酶失去活性呼吸酶作用使酶失去活性,

35、抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng),但有的細(xì)菌在一定濃度的氰化鉀存在時(shí)仍但有的細(xì)菌在一定濃度的氰化鉀存在時(shí)仍能生長(zhǎng)能生長(zhǎng),以此鑒別細(xì)菌以此鑒別細(xì)菌.整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 取培養(yǎng)取培養(yǎng)2024h的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液或的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液或菌落菌落1環(huán)，接種至對(duì)照培養(yǎng)基及氰化鉀培環(huán)，接種至對(duì)照培養(yǎng)基及氰化鉀培養(yǎng)基內(nèi)，立即以橡膠塞塞緊，養(yǎng)基內(nèi)，立即以橡膠塞塞緊，361 培養(yǎng)培養(yǎng)24 48h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 對(duì)照管有菌生長(zhǎng)，試驗(yàn)管有菌生長(zhǎng)對(duì)照管有菌生長(zhǎng)，試驗(yàn)管有菌生長(zhǎng)為陽性，記為陽性，記+。 對(duì)照管有菌生長(zhǎng)，試驗(yàn)管無菌生長(zhǎng)對(duì)照管有菌生長(zhǎng)，試驗(yàn)管無菌生長(zhǎng)

36、為陰性。記為陰性。記-。整理ppt 六、毒性酶類試驗(yàn)六、毒性酶類試驗(yàn)F溶血試驗(yàn)溶血試驗(yàn)F鏈激酶試驗(yàn)鏈激酶試驗(yàn)F卵磷脂酶試驗(yàn)卵磷脂酶試驗(yàn)F血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)整理ppt（一）（一） 溶血試驗(yàn)溶血試驗(yàn)1、原理：、原理： 某些細(xì)菌在代謝過程中能產(chǎn)生溶血素，可某些細(xì)菌在代謝過程中能產(chǎn)生溶血素，可使人或動(dòng)物的紅細(xì)胞發(fā)生溶解，不同的細(xì)使人或動(dòng)物的紅細(xì)胞發(fā)生溶解，不同的細(xì)菌有不同的溶血反應(yīng)，借此可鑒別細(xì)菌。菌有不同的溶血反應(yīng)，借此可鑒別細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 平板法平板法 試管法試管法整理ppt平板法平板法 將培養(yǎng)物接種于血平板培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)物接種于血平板培養(yǎng)基上，361 培養(yǎng)培養(yǎng)

37、24 48h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。整理ppt溶血試驗(yàn)的溶血類型及現(xiàn)象溶血試驗(yàn)的溶血類型及現(xiàn)象（1） （甲型）溶血（甲型）溶血: 菌落周圍出現(xiàn)較窄的半菌落周圍出現(xiàn)較窄的半透明的草綠色溶血環(huán)。透明的草綠色溶血環(huán)。（2） （乙型）溶血（乙型）溶血: 菌落周圍出現(xiàn)較寬的菌落周圍出現(xiàn)較寬的透明溶血環(huán)。透明溶血環(huán)。（3）（-丙型）溶血丙型）溶血: 菌落周圍無溶血環(huán)。菌落周圍無溶血環(huán)。整理ppt甲型（-）溶血乙型（-）溶血丙型（-）溶血整理ppt試管法 將待檢菌培養(yǎng)液與等量的將待檢菌培養(yǎng)液與等量的2%羊血球混合，羊血球混合，在在361 培養(yǎng)培養(yǎng)16 18h，觀察結(jié)果。如溶，觀察結(jié)果。如溶血，培養(yǎng)液可出現(xiàn)透

38、明狀。血，培養(yǎng)液可出現(xiàn)透明狀。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 有溶血現(xiàn)象，為陽性，記有溶血現(xiàn)象，為陽性，記+； 無溶血現(xiàn)象，為陰性，記無溶血現(xiàn)象，為陰性，記 -整理ppt（二）（二） 鏈激酶試驗(yàn)鏈激酶試驗(yàn)1、原理：、原理： A群鏈球菌群能產(chǎn)生鏈激酶，該酶能使血液群鏈球菌群能產(chǎn)生鏈激酶，該酶能使血液中的纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，而后溶中的纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，而后溶解纖維蛋白，使血凝塊溶解解纖維蛋白，使血凝塊溶解 ,為陽性反應(yīng)。為陽性反應(yīng)。 此試驗(yàn)用于測(cè)定鏈球菌的致病性。陽性反此試驗(yàn)用于測(cè)定鏈球菌的致病性。陽性反應(yīng)具有致病性。應(yīng)具有致病性。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法

39、吸取草酸鉀血漿吸取草酸鉀血漿0.2 mL(0.01 g草酸鉀加草酸鉀加5 mL兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液)，加入加入0.8 mL生理鹽水，混勻后，再加入待檢菌生理鹽水，混勻后，再加入待檢菌36下培養(yǎng)下培養(yǎng)18-24h肉湯培養(yǎng)物肉湯培養(yǎng)物0.5 mL和和0.25氯氯化鈣化鈣0.25 mL，混勻，放，混勻，放37水浴中，水浴中，2 min觀觀察一次。察一次。整理ppt 待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化時(shí)待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化時(shí)間。如間。如2 h內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置24 h后觀察。后觀察。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的同時(shí)用肉浸液

40、肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈激酶陽性的菌株做陽性對(duì)照。鏈激酶陽性的菌株做陽性對(duì)照。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄 如凝塊全部溶化如凝塊全部溶化,為陽性為陽性+， 凝塊凝塊24 h仍不溶化仍不溶化,為陰性為陰性-整理ppt（三）卵磷脂酶試驗(yàn)（三）卵磷脂酶試驗(yàn)1、原理：、原理： 某些微生物能產(chǎn)生卵磷脂酶，在鈣離子存某些微生物能產(chǎn)生卵磷脂酶，在鈣離子存在時(shí)，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油在時(shí)，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸膽堿，在卵黃瓊脂平板上菌酯和水溶性磷酸膽堿，在卵黃瓊脂平板上菌落周圍形成不透明的乳濁環(huán)或混濁白環(huán)，或落周圍形成不透明的乳濁環(huán)或混濁白環(huán)，或使血清、卵黃

41、液變混濁，以此鑒別細(xì)菌。使血清、卵黃液變混濁，以此鑒別細(xì)菌。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法（1）卵黃平板法：）卵黃平板法： A法：法： 將待檢菌培養(yǎng)物劃線接種或點(diǎn)種于卵黃瓊脂將待檢菌培養(yǎng)物劃線接種或點(diǎn)種于卵黃瓊脂平板上，平板上，361 培養(yǎng)培養(yǎng)3 6h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。 整理ppt菌落白色混濁環(huán)，整理pptB 法：法： 先用卵黃磷脂酶抗血清將平板涂一半，置于先用卵黃磷脂酶抗血清將平板涂一半，置于36 待干后，將待檢菌接種于未涂抗血清的一半卵黃待干后，將待檢菌接種于未涂抗血清的一半卵黃瓊脂平板上，再轉(zhuǎn)劃已涂過抗血清的一半，瓊脂平板上，再轉(zhuǎn)劃已涂過抗血清的一半，361 厭氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)24

42、 48h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。 在未涂抗血清的一半平板上，菌落周圍形成較在未涂抗血清的一半平板上，菌落周圍形成較大的不透明乳白色混濁區(qū)，在涂抗血清的一半平板大的不透明乳白色混濁區(qū)，在涂抗血清的一半平板上，菌落周圍無不透明混濁區(qū)，為陽性。上，菌落周圍無不透明混濁區(qū)，為陽性。 兩邊均無不透明區(qū)，為陰性。兩邊均無不透明區(qū)，為陰性。整理ppt菌落周圍無混濁白環(huán)菌落周圍有混濁白環(huán)乳糖卵黃瓊脂平板,借以確定該菌可否產(chǎn)生卵磷脂酶。卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相應(yīng)抗血清所抑制，整理ppt（2）卵黃鹽水法）卵黃鹽水法 將庖肉培養(yǎng)基培養(yǎng)物經(jīng)除菌過濾，收集濾將庖肉培養(yǎng)基培養(yǎng)物經(jīng)除菌過濾，收集濾液。在兩支滅菌試管內(nèi)

43、，每管加入液。在兩支滅菌試管內(nèi)，每管加入1%卵黃鹽卵黃鹽水水0.4mL,在一管中加入濾液在一管中加入濾液0.2mL，另一管加，另一管加入生理鹽水入生理鹽水0.2mL作對(duì)照。在作對(duì)照。在36 水浴中，水浴中，經(jīng)經(jīng)2h、 4h、 8h、 24h觀察結(jié)果。觀察結(jié)果。 管底發(fā)生混濁沉淀，對(duì)照管無沉淀者，為管底發(fā)生混濁沉淀，對(duì)照管無沉淀者，為陽性。陽性。整理ppt3、結(jié)果觀察與記錄、結(jié)果觀察與記錄菌落周圍形成較大的不透明區(qū)，為陽性。菌落周圍形成較大的不透明區(qū)，為陽性。兩邊均無不透明區(qū)，為陰性。兩邊均無不透明區(qū)，為陰性。管底發(fā)生混濁沉淀，對(duì)照管無沉淀者，為陽性管底發(fā)生混濁沉淀，對(duì)照管無沉淀者，為陽性兩管無

44、沉淀者，為陰性。兩管無沉淀者，為陰性。整理ppt（四）（四） 血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)1、原理：致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，、原理：致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，附著在細(xì)菌的表面，形成凝塊；或作用于血附著在細(xì)菌的表面，形成凝塊；或作用于血漿凝固酶原，使它成為血漿凝固酶，從而使?jié){凝固酶原，使它成為血漿凝固酶，從而使抗凝的血漿發(fā)生凝固現(xiàn)象抗凝的血漿發(fā)生凝固現(xiàn)象,為陽性。為陽性。整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法（1）玻片法：）玻片法： 取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水

45、，另一端滴加一滴兔（人）血漿，挑取菌落分別與生理鹽一端滴加一滴兔（人）血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，水和血漿混合，5 min內(nèi)內(nèi),如血漿內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀如血漿內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁，則為陽性凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁，則為陽性;如兩者呈均如兩者呈均勻混濁，無凝固則為陰性。勻混濁，無凝固則為陰性。整理ppt有凝塊均勻混濁血漿生理鹽水血漿凝固酶試驗(yàn)整理ppt陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)不凝固少量、零散凝固明顯的塊狀凝固巨大塊凝固完全凝固，倒置不流動(dòng)整理ppt金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實(shí)驗(yàn) 整理ppt3、試管法的結(jié)果觀察與記錄、試管法的結(jié)果觀察與記錄

46、空白對(duì)照管的血漿流動(dòng)自如，陽性對(duì)照管空白對(duì)照管的血漿流動(dòng)自如，陽性對(duì)照管血漿凝固，試驗(yàn)管血漿凝固者為陽性；血漿凝固，試驗(yàn)管血漿凝固者為陽性； 均無凝固則為陰性。均無凝固則為陰性。整理ppt三糖鐵（三糖鐵（TSI）試驗(yàn)）試驗(yàn)整理ppt1、三糖鐵試驗(yàn)的原理、三糖鐵試驗(yàn)的原理 如果細(xì)菌可利用乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)如果細(xì)菌可利用乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，培養(yǎng)基全部變黃；如果只可以利用葡萄糖，葡氣，培養(yǎng)基全部變黃；如果只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)的少量酸，因接觸空氣而氧化，

47、加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面最后為紅基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面最后為紅色，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，仍色，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，仍保持黃色。保持黃色。 如果細(xì)菌又能分解含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，如果細(xì)菌又能分解含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，培養(yǎng)基底部變黑。培養(yǎng)基底部變黑。 整理ppt制好的培養(yǎng)基對(duì)照管斜面紅色，底面黃色培養(yǎng)基全黃色斜面、底部黃色，并產(chǎn)生H2S斜面紅色，底部黃色，產(chǎn)生H2S底面黃色，并產(chǎn)生CO2整理ppt2、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)方法 以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培養(yǎng)物，穿刺接種并涂布于斜面，置養(yǎng)物，

48、穿刺接種并涂布于斜面，置361培養(yǎng)培養(yǎng)1824h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。整理ppt下面照片所示2-3-4，可能是大腸桿菌、沙門氏菌還是志賀氏菌？ 2志賀氏菌志賀氏菌3沙門氏菌沙門氏菌4大腸桿菌大腸桿菌整理ppt第二節(jié)第二節(jié) 血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)反應(yīng)：血清學(xué)反應(yīng)：指相應(yīng)的抗原與抗體在體指相應(yīng)的抗原與抗體在體外一定條件下作用，所出現(xiàn)肉眼可見的外一定條件下作用，所出現(xiàn)肉眼可見的沉淀、凝集現(xiàn)象。沉淀、凝集現(xiàn)象。整理ppt一、抗原與抗體一、抗原與抗體整理ppt（一）抗原（一）抗原1、抗原的概念、抗原的概念 抗原抗原(Ag)：是指凡能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)：是指凡能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，并能與應(yīng)答

49、產(chǎn)生的抗體或致誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，并能與應(yīng)答產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異反應(yīng)的物質(zhì)。敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異反應(yīng)的物質(zhì)。整理ppt2、抗原的特性、抗原的特性免疫原性免疫原性反應(yīng)原性反應(yīng)原性整理ppt（二）抗體（二）抗體1、抗體：是指機(jī)體內(nèi)的淋巴系統(tǒng)細(xì)胞在抗原、抗體：是指機(jī)體內(nèi)的淋巴系統(tǒng)細(xì)胞在抗原物質(zhì)的激發(fā)下，所合成的一種具有特異性免物質(zhì)的激發(fā)下，所合成的一種具有特異性免疫功能的球蛋白疫功能的球蛋白(免疫球蛋白免疫球蛋白)。整理ppt整理ppt2、抗體的理化性質(zhì)、抗體的理化性質(zhì)（1）抗體是球蛋白）抗體是球蛋白 （2）免疫球蛋白）免疫球蛋白整理ppt兔血清電泳分離圖整理ppt經(jīng)對(duì)不同免疫血清的電泳分析，超

50、速離心分析和分子量測(cè)定等經(jīng)對(duì)不同免疫血清的電泳分析，超速離心分析和分子量測(cè)定等方法，發(fā)現(xiàn)大部分抗體活性存在于方法，發(fā)現(xiàn)大部分抗體活性存在于球蛋白內(nèi)，但有小部分抗體球蛋白內(nèi)，但有小部分抗體活性可存在于活性可存在于球蛋白內(nèi)。它們的離心常數(shù)分別為球蛋白內(nèi)。它們的離心常數(shù)分別為7S和平共處和平共處19S，分子量分別為，分子量分別為16萬和萬和90萬。因此它們分別被命名為萬。因此它們分別被命名為7S球球蛋白分子（蛋白分子（16萬）萬）19S2巨球蛋白分子巨球蛋白分子(2M,90萬萬)和和2A球蛋白球蛋白分子，所以從早期對(duì)抗體性質(zhì)的研究證明抗體不是由均質(zhì)性球分子，所以從早期對(duì)抗體性質(zhì)的研究證明抗體不是由均

51、質(zhì)性球蛋白組成，而是由異性球蛋白組成。蛋白組成，而是由異性球蛋白組成。整理ppt（三）抗原抗體反應(yīng)（三）抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)：是指抗原與相應(yīng)抗抗原抗體反應(yīng)：是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng) 整理ppt第一節(jié)第一節(jié) 抗原抗體反應(yīng)的原理抗原抗體反應(yīng)的原理 抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng): :指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。的特異性結(jié)合反應(yīng)。 物質(zhì)基礎(chǔ)物質(zhì)基礎(chǔ): : 抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補(bǔ)結(jié)合抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補(bǔ)結(jié)合 抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結(jié)合抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結(jié)合 抗原抗體之間

52、的結(jié)合力抗原抗體之間的結(jié)合力 親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體整理ppt靜電引力靜電引力（electrostatic forces）范德華引力范德華引力:作用最小作用最小（van der Waals interactions）氫鍵氫鍵:最具特異性最具特異性（hydrogen bond ）疏水作用力疏水作用力:作用最大作用最大 （hydrophobic interactions） 抗原抗體結(jié)合力示意圖抗原抗體結(jié)合力示意圖一、抗原抗體結(jié)合力一、抗原抗體結(jié)合力整理ppt抗體結(jié)合部位抗體結(jié)合部位與抗原表位之與抗原表位之間結(jié)合的強(qiáng)度間結(jié)合的強(qiáng)度親合力親合力( (avidity)抗原抗體親合力

53、示意圖抗原抗體親合力示意圖整理ppt抗體分子上一個(gè)抗抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的抗原決定簇之間相抗原決定簇之間相適應(yīng)而存在著的引適應(yīng)而存在著的引力，是抗原抗體間力，是抗原抗體間固有的結(jié)合力固有的結(jié)合力親和力親和力( (affinity)抗原抗體親和力示意圖抗原抗體親和力示意圖二、抗原抗體的親和力和親合力二、抗原抗體的親和力和親合力整理ppt 可見反應(yīng)可見反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物抗原抗體復(fù)合物 ( (疏水膠體疏水膠體) )電解質(zhì)電解質(zhì) 抗原抗原( (親水膠體親水膠體) ) 抗體抗體( (親水膠體親水膠體) ) + +三、三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體整理ppt第二

54、節(jié)第二節(jié) 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)特異性特異性 可逆性可逆性比例性比例性 階段性階段性整理ppt特異性：特異性：抗原與抗體抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性結(jié)合反應(yīng)的專一性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖分子基礎(chǔ)分子基礎(chǔ): :抗原表位與抗體抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性互補(bǔ)性一、特異性一、特異性整理ppt 整理ppt兩種不同的抗原兩種不同的抗原分子具有部分相分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)清發(fā)生反應(yīng)交叉反應(yīng)交叉反應(yīng)（cross reactions）抗原抗體交叉反

55、應(yīng)示意圖抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖整理ppt二、可逆性二、可逆性可逆性：可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性件下又可解離為游離抗原與抗體的特性 影響因素：影響因素： 抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親合力抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親合力親合力越高，結(jié)親合力越高，結(jié)合越牢固，越不易解離合越牢固，越不易解離 環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響pHpH、離子強(qiáng)度、離子強(qiáng)度 整理ppt前帶前帶(prezone)：抗體過量：抗體過量后帶后帶(postzone)：抗原過量：抗原過量等價(jià)帶等價(jià)帶(equivalence zone)(equival

56、ence zone)： 抗原抗體比例合適抗原抗體比例合適 抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖比例性：比例性：抗原與抗體發(fā)生抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系比關(guān)系三、比例性三、比例性整理ppt第一階段：特異性結(jié)合階段，反應(yīng)快，不可見第一階段：特異性結(jié)合階段，反應(yīng)快，不可見 第二階段：反應(yīng)可見階段，反應(yīng)慢，出現(xiàn)凝集、第二階段：反應(yīng)可見階段，反應(yīng)慢，出現(xiàn)凝集、 沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象 四、階段性四、階段性整理ppt第三節(jié)第三節(jié) 影響抗原抗體反應(yīng)的因素影響抗原抗體反應(yīng)的因素抗原、抗體反應(yīng)物的自身因素抗原、抗體反應(yīng)物的自身因素環(huán)境因素環(huán)境因素整理ppt一、反應(yīng)物自身因素一、反應(yīng)物自身因素抗原抗原: :理化性狀、表位種類和數(shù)目理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體抗體: :來源、特異性、親和性、效價(jià)來源、特異性、親和性、效價(jià)整理ppt電解質(zhì)電解質(zhì): : 生理鹽水或緩沖液生理鹽水或緩沖液酸堿度酸堿度: pH6pH9溫溫 度度: 1540，37最適最適二、環(huán)境因素二、環(huán)境因素整理ppt反應(yīng)類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷結(jié)果判斷凝集反應(yīng)凝集反應(yīng) 直接凝集試