肝素的效價測定

1、肝素的效價測定 講解人：謝文軍肝素的簡單介紹 肝素首先從肝臟發(fā)現(xiàn)而得名，它也存在于肺、血管壁、腸粘膜等組織中，是動物體內(nèi)一種天然抗凝血物質(zhì)。天然存在于肥大細(xì)胞，現(xiàn)在主要從牛肺或豬小腸黏膜提取。 肝素是一種抗凝劑，是由二種多糖交替連接而成的多聚體，在體內(nèi)外都有抗凝血作用。臨床上主要用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手術(shù)、心臟導(dǎo)管檢查、體外循環(huán)、血液透析等。隨著藥理學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)的進(jìn)展，肝素的應(yīng)用不斷擴(kuò)大。肝素的效價測定簡介 肝素的效價測定采用生物檢定法（利用藥物對生物體的作用以測定其效價或生物活性的一種方法），比較肝素標(biāo)準(zhǔn)品S與供試品T延長新鮮兔血或兔、豬血漿凝結(jié)時間的作用，以測定供試品的效價，

2、是根據(jù)對數(shù)劑量與血凝時間的對數(shù)呈線性關(guān)系而設(shè)計的。肝素的效價測定步驟 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置精密稱取肝素標(biāo)準(zhǔn)品適量，按標(biāo)示效價加滅菌水溶解，使成每毫升含100單位的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，48保存。 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的配置精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液，按高、中、低劑量組（ds3、ds2、ds1 ）用0.9%氯化鈉溶液配成三種濃度的稀釋液，相鄰兩濃度的比值（r)應(yīng)相等；調(diào)節(jié)劑量使低劑量組各管的平均凝結(jié)時間較不加肝素的對照組明顯延長。高劑量組各管的平均凝結(jié)時間，用新鮮兔血者以不超過60min為宜，其稀釋一般可配成每毫升含肝素25單位，r為1:0.7左右;用血漿者以不超過30min為宜，其稀釋一般可配成每毫升含肝素0.51

3、.5單位，r為1:0.85左右。 供試溶液與稀釋液的配置按供試品的標(biāo)示量貨估計效價（AT )照標(biāo)準(zhǔn)溶液與稀釋液的配置法配成高、中、低（dt3、dt2、dt1）三種濃度的稀釋液。相鄰兩濃度之比值（r）應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)稀釋溶液相等，供試品與標(biāo)準(zhǔn)品各劑量組的凝結(jié)時間應(yīng)相近。 血漿的制備迅速收集兔或豬血置預(yù)先放有8%枸櫞酸鈉溶液（別名：檸檬酸鈉，具有抗凝血作用）的容器中，枸櫞酸納液與血液容積之比為1:1.9，邊收集邊輕輕搖晃，混勻，離心約20min，立即分出血漿，分成若干份裝于適宜容器內(nèi)，低溫凍結(jié)貯存，臨用時置370.5水浴中融化，用兩層紗布濾過（主要是濾掉未融化的冰渣），使用過程中在48放置。 效價檢定新鮮

4、兔血：取管徑均勻（0.8cm*3.8cm）、清潔干燥的小試管若干支，每管加入一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)或供試稀釋液0.1ml，每種濃度不得少于3管，并標(biāo)上A3 、B3 、C3 、A2 、以示區(qū)別，各試管的支數(shù)相等。取剛抽出的兔血適量，分別注入小試管內(nèi)，每管0.9ml，立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡，并開始計算時間，將小試管置370.5恒溫水浴中，從采血時起至小試管放入水浴的時間不得超過3min，注意觀察和記錄各管的血凝血的時間。血漿：取上述規(guī)格的小試管若干支，分別加入血漿一定量，置370.5恒溫水浴中預(yù)熱510min后，依次每管加入一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)或供試稀釋液及1%氯化鈣液（每種濃度不得少于3管，各濃度的試管支數(shù)相等），血漿、肝素稀釋液和氯化鈣液的加入量分別為0.5ml、0.4ml和0.1ml，加入氯化鈣溶液后立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡