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1、人血白蛋白中辛酸鈉含量測定氣相色譜法1 試劑1.1氯仿(A.R)1.2辛酸(CP 標準液用氯仿配成 10mg/ml 溶液。1.3庚酸(CP 內(nèi)示液用氯仿酸成 10mg/ml 溶液。1.41.5mol/L 高氯酸溶液2 儀器2.1帶有積分儀及氫火焰檢測器的氣相色譜儀。2.2色譜柱色譜柱為內(nèi)徑 3mm 長 2m 的玻璃柱,內(nèi)裝涂有 10 燃乙二醇(20M 固定液的 ChromsorbVV 擔體。2.3儀器工作條件氣化室溫度 230C,柱溫 190C,載氣(純氮)流速 40ml/分鐘;樣品,標準液注入量為 2 卩 l2.4振蕩器3 操作3.1標準曲線的繪制取 1.2 項的辛酸標準液各 10、20、3
2、0、40 及 50 卩 I,分別與 30 卩 I.3 項的庚酸內(nèi)標液和 4ml 的氯仿組成 5 個標準管,混合 均勻后,在通風櫥中將氯仿?lián)]發(fā)至干,然后定量加入 0.1ml 氯仿溶解殘渣,上機測定。典型的色譜圖中內(nèi)標庚酸的保留值為9 分鐘左右,辛酸的保留值為 13 分鐘左右。分別以自動積分儀顯示 的各管樣品的辛酸和內(nèi)標庚酸的峰面積之比,對各管中所含辛酸加入量進行回歸統(tǒng)計,也可得到回歸方程。3.2樣品測定步驟取已知蛋白濃度樣品,用蒸餾水稀釋至5 癥白濃度,然后準確取 0.5ml,加入庚酸內(nèi)標液 30 卩 I , 1.5mol /L 高氯酸 0.2ml ,在振蕩器上混合均勻,然后加入氯仿4ml,加蓋,用振蕩器劇烈混合 1 分鐘,2800r/min 離心 10 分鐘。用濾紙卷條小心吸去上 層水,再用吸管小心吸出氯仿層,移入10ml 管子中,在通風櫥中待氯仿?lián)]發(fā)至干,精確加入 0.1ml 氯仿,溶解殘渣,上機測定。4 計算4.1根據(jù)樣品測定時所得的辛酸與內(nèi)標庚酸的峰面積比代入已得回歸方程,即得辛酸絕對含量。 白蛋白中辛酸量(mmol /g 蛋白)/144.22X0.5X樣品蛋白濃度X100 注:1. 辛酸量(mmo)
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