公開課動物細(xì)胞培養(yǎng)

1、動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞培養(yǎng)、 動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞融合、 單克隆抗體單克隆抗體思考：思考：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)、 植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交強(qiáng)調(diào)：強(qiáng)調(diào)：動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。 燒傷病人的治療通常燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對于大進(jìn)行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學(xué)們

2、想皮膚很有限，請同學(xué)們想一想如何來治療該病人？一想如何來治療該病人？ 取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng), ,獲得獲得足量的細(xì)胞后再移植足量的細(xì)胞后再移植學(xué)習(xí)目標(biāo)：學(xué)習(xí)目標(biāo)：【知識能力知識能力】 1 1、動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用、動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用 2 2、應(yīng)用細(xì)胞的基礎(chǔ)知識，分析細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)、應(yīng)用細(xì)胞的基礎(chǔ)知識，分析細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)【情感態(tài)度與價值觀情感態(tài)度與價值觀】 1 1、討論細(xì)胞工程技術(shù)的社會意義、討論細(xì)胞工程技術(shù)的社會意義 2 2、認(rèn)同細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)理論研究與技術(shù)開發(fā)之間的關(guān)系、認(rèn)同細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)理論研究與技術(shù)開發(fā)之間的關(guān)系一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物

3、細(xì)胞培養(yǎng) 概念：概念：從動物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分從動物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些散成單個細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和繁殖。細(xì)胞生長和繁殖。 一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)原理：原理：是細(xì)胞增殖是細(xì)胞增殖 （有絲分裂）（有絲分裂） 一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)閱讀閱讀P53-55“哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)”并思考：并思考： 1、 動物細(xì)胞生長特點(diǎn)是什么？動物細(xì)胞生長特點(diǎn)是什么？ 2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？ 3、為

4、什么要對取出的動物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞、為什么要對取出的動物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？分散？ 4、用胰蛋白酶對動物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間、用胰蛋白酶對動物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？胰蛋白酶真的不會把細(xì)胞消化的物質(zhì)主要是什么？胰蛋白酶真的不會把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？掉嗎？為什么？ 5、動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件有哪些？、動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件有哪些？ 6、簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程、簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程1、動、動物細(xì)胞生長物細(xì)胞生長特點(diǎn)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁：細(xì)胞貼壁： 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。稱為細(xì)胞貼壁。要求：要求： 培養(yǎng)瓶或

5、培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。易于貼附。 接觸抑制：接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個單層，此時細(xì)裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個單層，此時細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。增加。50代以后代以后失去接觸抑制失去接觸抑制接觸抑制接觸抑制動物細(xì)胞生長動物細(xì)胞生長特點(diǎn)特點(diǎn)部分細(xì)胞突變，獲得部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少，向發(fā)展，糖蛋白減少，失去接觸抑制（如腫失去接觸抑制（如腫瘤細(xì)胞）。瘤細(xì)胞）

6、。接觸抑制接觸抑制2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們的細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，分裂旺的細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，容易培養(yǎng)。盛，容易培養(yǎng)。一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)3、為什么要對取出的動物組織進(jìn)行處理，、為什么要對取出的動物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？使細(xì)胞分散？ 分散的單個細(xì)胞容易攝取所需的營養(yǎng)，排出分散的單個細(xì)胞容易攝取所需的營養(yǎng)，排出代謝廢物。代謝廢物。一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)4、用胰蛋白酶對動物組織

7、進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)、用胰蛋白酶對動物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？胞間的物質(zhì)主要是什么？胰蛋白酶真的不會把胰蛋白酶真的不會把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？細(xì)胞消化掉嗎？為什么？ 細(xì)胞間的物質(zhì)主要是細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)（膠原纖維）。蛋白質(zhì)（膠原纖維）。一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白外，胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白外，長時間的作用也會消化細(xì)胞膜蛋白，對長時間的作用也會消化細(xì)胞膜蛋白，對細(xì)胞有損傷作用，因此細(xì)胞有損傷作用，因此必須控制好胰蛋必須控制好胰蛋白酶的消化時間。白酶的消化時間。 5、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件1 1、無菌、無毒的環(huán)境、無菌、

8、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2 2、營養(yǎng)、營養(yǎng)（葡萄糖葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動物血清動物血清等。）等。）3 3、溫度和、溫度和PHPH 36.5+ 36.5+（- -）0.50.5度度, 7.2-7.4, 7.2-7.44 4、氣體環(huán)境：、氣體環(huán)境： O O2 2和和COCO2 2（95%95%空氣和空氣和5% CO5% CO2 2 ）保證細(xì)胞順利的生長增殖一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)6、過程：過程：動物胚胎或幼齡動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官物的組織、器官細(xì)胞懸

9、浮液細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代細(xì)胞代細(xì)胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)50代細(xì)胞代細(xì)胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株無限傳代無限傳代細(xì)胞系細(xì)胞系單個細(xì)胞單個細(xì)胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)未改變未改變遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)已改變已改變（分解彈性纖維）（分解彈性纖維）從機(jī)體取出后立即培從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。一般培養(yǎng)的一般培養(yǎng)的第第1 1代細(xì)代細(xì)胞與傳胞與傳1010代以內(nèi)的細(xì)代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培

10、養(yǎng)，中繼續(xù)培養(yǎng)，一般一般培培養(yǎng)的第養(yǎng)的第1111代細(xì)胞與傳代細(xì)胞與傳4040代或代或5050代代稱為傳代稱為傳代培養(yǎng)。培養(yǎng)。植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原理原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖培養(yǎng)基狀態(tài)培養(yǎng)基狀態(tài) 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有培養(yǎng)基特有成分成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素 葡萄糖葡萄糖 動物血清動物血清培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果植物體植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株無病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分獲得細(xì)胞或細(xì)胞分

11、泌蛋白泌蛋白細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 動物血清動物血清植物體植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系快速繁殖、快速繁殖、培育無病毒植株培育無病毒植株獲得細(xì)胞獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白或細(xì)胞分泌蛋白 1.用動、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下用動、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是列敘述正確的是 A都需用培養(yǎng)箱都需用培養(yǎng)箱 B都須用液體培養(yǎng)基都須用液體培養(yǎng)基 C都要在無菌條件下進(jìn)行都要在無菌條件下進(jìn)行 D都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性C鞏固練習(xí)鞏固練習(xí)： 2、下列屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培

12、養(yǎng)主要、下列屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)主要區(qū)別的是區(qū)別的是 A.培養(yǎng)基成分不同培養(yǎng)基成分不同 B.動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行 C.動物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能動物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能 D.動物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培動物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株養(yǎng)成植株A 3、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是A.動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合 B.單克隆抗體單克隆抗體 C.胚胎移植胚胎移植 D.動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)D 4、細(xì)胞株的特點(diǎn)是、細(xì)胞株的特點(diǎn)是A遺傳物質(zhì)沒有改變，可以無限傳代遺傳物質(zhì)沒有改變，可

13、以無限傳代B遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，不可無限傳代遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，不可無限傳代C遺傳物質(zhì)沒有改變，不可無限傳代遺傳物質(zhì)沒有改變，不可無限傳代D遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，且有癌變特點(diǎn)，可以遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，且有癌變特點(diǎn)，可以無限傳代無限傳代 5、在動物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)、在動物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為: A原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) C細(xì)胞株細(xì)胞株 D細(xì)胞系細(xì)胞系CD6 6、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要胎或出

14、生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞原因是這樣的組織細(xì)胞 A.A.容易產(chǎn)生各種變異容易產(chǎn)生各種變異 B B.具有更強(qiáng)的全能性具有更強(qiáng)的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D.分裂增殖的能力強(qiáng)分裂增殖的能力強(qiáng)D回答下列有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：回答下列有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的問題： 在動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂在動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面生長到細(xì)胞表面 時，細(xì)胞會停止分時，細(xì)胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的 。此時，。此時，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是 ，要使貼壁的細(xì)，要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是是 。 隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分