第十章中藥制劑分析中新方法與新技術(shù) ppt課件

1、第十章第十章 中藥制劑分析中中藥制劑分析中新方法與新技術(shù)新方法與新技術(shù) 1 現(xiàn)代色譜技術(shù)現(xiàn)代色譜技術(shù)v頂空氣相色譜法液上氣相色譜法、頂空氣相色譜法液上氣相色譜法、頂空分析法頂空分析法v 對(duì)樣品基質(zhì)上方的氣體成分進(jìn)展對(duì)樣品基質(zhì)上方的氣體成分進(jìn)展GC分析來(lái)測(cè)定這些組分在原樣品分析來(lái)測(cè)定這些組分在原樣品中的含量中的含量v頂空氣相色譜的分類頂空氣相色譜的分類v靜態(tài)頂空靜態(tài)頂空GCv動(dòng)態(tài)頂空動(dòng)態(tài)頂空GC 1 現(xiàn)代色譜技術(shù)現(xiàn)代色譜技術(shù)v頂空氣相色譜法頂空氣相色譜法v主要特點(diǎn)主要特點(diǎn)v樣品前處置簡(jiǎn)單樣品前處置簡(jiǎn)單v檢測(cè)限低檢測(cè)限低v可分析含量低、組成復(fù)雜的樣品可分析含量低、組成復(fù)雜的樣品v適用于易揮發(fā)或易分

2、解或無(wú)法直接進(jìn)樣適用于易揮發(fā)或易分解或無(wú)法直接進(jìn)樣分析的液體或固體樣品的分析分析的液體或固體樣品的分析 1 現(xiàn)代色譜技術(shù)現(xiàn)代色譜技術(shù)v頂空氣相色譜法頂空氣相色譜法v運(yùn)用實(shí)例運(yùn)用實(shí)例靜態(tài)頂空靜態(tài)頂空GC(GC(內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法) )測(cè)定血液中乙醇含量測(cè)定血液中乙醇含量對(duì)照品溶液的制備對(duì)照品溶液的制備 將將10g/l10g/l的乙醇貯藏液稀釋的乙醇貯藏液稀釋1010倍，精細(xì)汲取此倍，精細(xì)汲取此液液1ml1ml置于置于10ml10ml頂空樣品瓶中，同時(shí)精細(xì)加頂空樣品瓶中，同時(shí)精細(xì)加1ml1ml內(nèi)標(biāo)溶液內(nèi)標(biāo)溶液0.25%0.25%的正丙醇水溶液，迅速密封，即得。的正丙醇水溶液，迅速密封，即得。樣品制備樣品

3、制備 精細(xì)汲取精細(xì)汲取1ml1ml充分混勻的血樣轉(zhuǎn)移至充分混勻的血樣轉(zhuǎn)移至10ml10ml頂空樣品瓶中，頂空樣品瓶中，同時(shí)精細(xì)加同時(shí)精細(xì)加1ml1ml內(nèi)標(biāo)溶液內(nèi)標(biāo)溶液0.25%0.25%的正丙醇水溶液，迅速密封，的正丙醇水溶液，迅速密封，即得。即得。 色譜條件色譜條件 略略頂空分析條件頂空分析條件 平衡溫度為平衡溫度為5050，平衡時(shí)間為，平衡時(shí)間為1010分鐘快速攪拌下，分鐘快速攪拌下，閥、保送管及定量管溫度為閥、保送管及定量管溫度為8080，加壓為，加壓為13.8kPa13.8kPa，加壓時(shí)間、充，加壓時(shí)間、充樣時(shí)間和壓力平衡時(shí)間均為樣時(shí)間和壓力平衡時(shí)間均為0.150.15分鐘，定量管為分

4、鐘，定量管為1.0ml1.0ml。 1 現(xiàn)代色譜技術(shù)現(xiàn)代色譜技術(shù)v超高效液相色譜超高效液相色譜UPLC，Ultra Performance Liquid Chromatographyv主要特點(diǎn)主要特點(diǎn)v固定相固定相v雙三乙氧基硅乙烷在硅膠中構(gòu)成橋式乙基基團(tuán)雙三乙氧基硅乙烷在硅膠中構(gòu)成橋式乙基基團(tuán)v顆粒粒度小，僅為顆粒粒度小，僅為1.7mv耐壓，顆粒度分布范圍很窄耐壓，顆粒度分布范圍很窄v裝柱裝柱v檢測(cè)器檢測(cè)器v呼應(yīng)快呼應(yīng)快v樣品池樣品池10mm的光程與普通的光程與普通HPLC一樣而體積一樣而體積只需只需500nL普通普通HPLC的的20分之一分之一 v優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)v更高的分析速度，更好分別效果和更

5、高的靈敏度，速更高的分析速度，更好分別效果和更高的靈敏度，速度、靈敏度及分別度，分別是度、靈敏度及分別度，分別是HPLC的的9倍、倍、 1.7倍及倍及3倍倍 1 現(xiàn)代色譜技術(shù)現(xiàn)代色譜技術(shù)v超臨界流體色譜超臨界流體色譜SFC, supercritical fluid chromatographyv以超臨界流體低黏度、高密度以及較高的以超臨界流體低黏度、高密度以及較高的分散系數(shù)作為流動(dòng)相。分散系數(shù)作為流動(dòng)相。v對(duì)對(duì)GC及及HPLC的檢測(cè)器均可兼容運(yùn)用的檢測(cè)器均可兼容運(yùn)用v適用于分析適用于分析GC難以處置的高沸點(diǎn)、不揮發(fā)性難以處置的高沸點(diǎn)、不揮發(fā)性樣品樣品v分別速度較分別速度較HPLC，分別效果更好

6、。，分別效果更好。v運(yùn)用實(shí)例運(yùn)用實(shí)例v超臨界流體色譜法測(cè)定懷牛膝制劑中齊墩果超臨界流體色譜法測(cè)定懷牛膝制劑中齊墩果酸的含量酸的含量 1 現(xiàn)代色譜技術(shù)現(xiàn)代色譜技術(shù)v色譜聯(lián)用技術(shù)色譜聯(lián)用技術(shù)v多維色譜多維色譜v如：二維薄層色譜等如：二維薄層色譜等v氣相色譜氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)v氣相色譜氣相色譜-紅外光譜聯(lián)用技術(shù)紅外光譜聯(lián)用技術(shù)v液相色譜液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) 2 高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳(HPCE,high performance capillary electrophoresis)v電泳電泳: : 在電解質(zhì)溶液中，位于電場(chǎng)中的帶電離在電解質(zhì)溶液中，位于電場(chǎng)中的帶電離

7、子在電場(chǎng)力的作用下，以不同的速度向其所帶子在電場(chǎng)力的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反的電極方向遷移的景象。電荷相反的電極方向遷移的景象。v 由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷移由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷移速率不同，可實(shí)現(xiàn)分別。速率不同，可實(shí)現(xiàn)分別。v19371937年年 Tiselius ( Tiselius (瑞典瑞典) ) 利用自在溶液電泳利用自在溶液電泳將人血清提取的蛋白質(zhì)混合液分別出白蛋白和將人血清提取的蛋白質(zhì)混合液分別出白蛋白和、球蛋白球蛋白v19811981年年 Jorgenson Jorgenson 和和 Luckas Luckas 開(kāi)展了高效毛開(kāi)展了高效毛細(xì)管電

8、泳分別分析技術(shù)細(xì)管電泳分別分析技術(shù) ( (運(yùn)用運(yùn)用75m75m內(nèi)徑石英內(nèi)徑石英毛細(xì)管和采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓毛細(xì)管和采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓) )， 2 高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳 各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為：各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為： + =電滲流電滲流 + +ef 陽(yáng)離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致陽(yáng)離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致 - =電滲流電滲流 - -ef 陰離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流相反陰離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流相反 0 =電滲流電滲流 中性粒子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致中性粒子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致 可一次完成陽(yáng)離子、陰離子、中性粒子的分別可一次完成陽(yáng)離子、陰離子、中性粒子的分別v分別原理

9、分別原理v 電場(chǎng)作用下，電場(chǎng)作用下，毛細(xì)管柱中出毛細(xì)管柱中出現(xiàn)：電泳景象現(xiàn)：電泳景象和電滲流景象。和電滲流景象。v 2 高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳v儀器安裝儀器安裝v電壓：電壓：0 030KV30KV。v分別柱不涂敷任何分別柱不涂敷任何固定液，固定液，v紫外或激光誘導(dǎo)熒紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器光檢測(cè)器v可檢測(cè)到：可檢測(cè)到：10-1910-1910-21mol/L10-21mol/L 2 高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳v主要特點(diǎn)主要特點(diǎn)v優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)v高分辨率：實(shí)際塔板數(shù)高達(dá)數(shù)百萬(wàn)塊，高分辨率：實(shí)際塔板數(shù)高達(dá)數(shù)百萬(wàn)塊，甚至數(shù)千萬(wàn)塊。甚至數(shù)千萬(wàn)塊。v高靈敏度：可檢測(cè)出低至高靈敏度：可檢測(cè)出低至10-2

10、1mol/L10-21mol/L濃濃度的物質(zhì)。度的物質(zhì)。v高分析速度：可在高分析速度：可在3 3分鐘內(nèi)分別分鐘內(nèi)分別3030種陰離種陰離子；子；1.71.7分鐘分別分鐘分別1919種陽(yáng)離子種陽(yáng)離子;4;4分鐘可分分鐘可分別別1010種蛋白質(zhì)種蛋白質(zhì). .v試樣用量少：僅需幾試樣用量少：僅需幾nLnL10-9L10-9L的試樣的試樣v儀器簡(jiǎn)單，操作本錢(qián)低：分析一個(gè)試樣儀器簡(jiǎn)單，操作本錢(qián)低：分析一個(gè)試樣僅需幾毫升流動(dòng)液僅需幾毫升流動(dòng)液 2 高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳v常見(jiàn)的毛細(xì)管電泳方式常見(jiàn)的毛細(xì)管電泳方式v毛細(xì)管區(qū)帶電泳毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)(CZE)v毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(

11、MECC)(MECC)v膠束作為假固定相的電動(dòng)色譜膠束作為假固定相的電動(dòng)色譜v毛細(xì)管凝膠電泳毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)(CGE)v凝膠作為支持物，起分子篩的作用凝膠作為支持物，起分子篩的作用v毛細(xì)管等電聚焦電泳毛細(xì)管等電聚焦電泳(CIEF)(CIEF)v用于蛋白質(zhì)、多肽等兩性物質(zhì)的分別用于蛋白質(zhì)、多肽等兩性物質(zhì)的分別v毛細(xì)管等速電泳毛細(xì)管等速電泳(CITP)(CITP) 2 高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳v運(yùn)用運(yùn)用v離子分析離子分析v藥物分析藥物分析v手性化合物分析手性化合物分析v氨基酸分析氨基酸分析v核酸分析及核酸分析及DNA測(cè)序測(cè)序vHPCE在中藥制劑分析中的運(yùn)用在中藥制劑分析中的運(yùn)用v生物堿

12、的測(cè)定、動(dòng)物類藥材的鑒別、指生物堿的測(cè)定、動(dòng)物類藥材的鑒別、指紋圖譜紋圖譜高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定心舒口服液中腺苷、蘆丁和高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定心舒口服液中腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量阿魏酸的含量對(duì)照品溶液對(duì)照品溶液 略略供試品溶液的配制取心舒口服液供試品溶液的配制取心舒口服液10 mL，加熱濃，加熱濃縮至約縮至約1 mL，加，加60 %甲醇定容甲醇定容10 mL，冰箱放置過(guò)，冰箱放置過(guò)夜，經(jīng)夜，經(jīng)0. 45 mm濾膜濾過(guò)備用。濾膜濾過(guò)備用。電泳條件以熔融石英毛細(xì)管電泳條件以熔融石英毛細(xì)管( 50 mm 66 . 5 cm，有效分別長(zhǎng)度有效分別長(zhǎng)度58 cm) 為分別通道，以為分別通道，以105 mmo

13、l/L硼砂液為運(yùn)轉(zhuǎn)緩沖液，壓力進(jìn)樣硼砂液為運(yùn)轉(zhuǎn)緩沖液，壓力進(jìn)樣50 mpa，6 s，毛，毛細(xì)管柱溫度為細(xì)管柱溫度為20 ，運(yùn)轉(zhuǎn)電壓為，運(yùn)轉(zhuǎn)電壓為0 30 min : 24 kV，30 60 min : 28 kV，檢測(cè)波長(zhǎng)為，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，毛細(xì)管柱運(yùn)用前以毛細(xì)管柱運(yùn)用前以0.1 mol/L 氫氧化鈉溶液、注射用氫氧化鈉溶液、注射用水和運(yùn)轉(zhuǎn)緩沖液依次沖洗水和運(yùn)轉(zhuǎn)緩沖液依次沖洗5 ,5 ,8 min，每次電泳后，每次電泳后以運(yùn)轉(zhuǎn)緩沖液沖洗以運(yùn)轉(zhuǎn)緩沖液沖洗8 min 。在此條件下，同時(shí)測(cè)定。在此條件下，同時(shí)測(cè)定腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量。腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量。隋印等隋印等. 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)

14、雜志中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志. 2019, 25(3):232-234 3 原子吸收光譜原子吸收光譜AAS,atom absorption spectrometryv任務(wù)原理任務(wù)原理v1 1各種元素的原子構(gòu)造和外層電子排布各種元素的原子構(gòu)造和外層電子排布不同，不同，v 基態(tài)基態(tài)第一激發(fā)態(tài)第一激發(fā)態(tài): : v 躍遷吸收能量不同躍遷吸收能量不同具有具有特征性特征性v 2 2各種元素的基態(tài)各種元素的基態(tài)第一激發(fā)態(tài)第一激發(fā)態(tài)v 最易發(fā)生，吸收最強(qiáng)，最靈最易發(fā)生，吸收最強(qiáng)，最靈敏線。特征譜線敏線。特征譜線( (共振線共振線) )。v 3 3利用待測(cè)元素的原子蒸氣中基利用待測(cè)元素的原子蒸氣中基態(tài)原子與共振線吸收之

15、間的關(guān)系來(lái)定量態(tài)原子與共振線吸收之間的關(guān)系來(lái)定量分析。分析。 3 原子吸收光譜原子吸收光譜v任務(wù)原理任務(wù)原理 3 原子吸收光譜原子吸收光譜v原子吸收光譜儀原子吸收光譜儀v銳線光源銳線光源空心陰空心陰極燈極燈 3 原子吸收光譜原子吸收光譜v原子吸收光譜儀原子吸收光譜儀v原子化系統(tǒng)原子化系統(tǒng)將試樣中離子轉(zhuǎn)變成原子蒸氣。將試樣中離子轉(zhuǎn)變成原子蒸氣。v原子化方法原子化方法v火焰法火焰法v無(wú)火焰法無(wú)火焰法電熱高溫石墨管，激光電熱高溫石墨管，激光v冷原子化法冷原子化法v單色器色散元件棱鏡、光柵，凹凸鏡、單色器色散元件棱鏡、光柵，凹凸鏡、狹縫等狹縫等v檢測(cè)系統(tǒng)光電池、光電倍增管、光敏晶體管檢測(cè)系統(tǒng)光電池、光

16、電倍增管、光敏晶體管 3 原子吸收光譜原子吸收光譜v優(yōu)缺陷優(yōu)缺陷v優(yōu)點(diǎn)：原子化程度高，試樣用量少優(yōu)點(diǎn)：原子化程度高，試樣用量少1 1100L100L，可測(cè)固體及粘稠試，可測(cè)固體及粘稠試樣，靈敏度高，檢測(cè)限樣，靈敏度高，檢測(cè)限10-12 g/L10-12 g/L。v缺陷：精細(xì)度差，測(cè)定速度慢，操作缺陷：精細(xì)度差，測(cè)定速度慢，操作不夠簡(jiǎn)便，安裝復(fù)雜。不夠簡(jiǎn)便，安裝復(fù)雜。 4 中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜 從整體上評(píng)價(jià)中藥的內(nèi)在質(zhì)量中藥指紋圖譜建立的原那么盡能夠多的覆蓋全貌特征明顯，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好方便操作與運(yùn)用 4 中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜v中藥化學(xué)指紋圖譜鑒別中藥化學(xué)指紋圖譜鑒別v規(guī)范圖譜的建立規(guī)

17、范圖譜的建立v中藥材的選擇中藥材的選擇v 選用經(jīng)種類鑒定的正品優(yōu)質(zhì)地道選用經(jīng)種類鑒定的正品優(yōu)質(zhì)地道藥材，確定圖譜的特征參數(shù)。另搜集多藥材，確定圖譜的特征參數(shù)。另搜集多產(chǎn)地，具充分代表性，符合藥用規(guī)格的產(chǎn)地，具充分代表性，符合藥用規(guī)格的樣品，對(duì)圖譜特征的重現(xiàn)性進(jìn)展調(diào)查。樣品，對(duì)圖譜特征的重現(xiàn)性進(jìn)展調(diào)查。隨之搜集一些易混淆或曾出現(xiàn)的偽品，隨之搜集一些易混淆或曾出現(xiàn)的偽品，以所確定的特征假設(shè)能加以區(qū)別和識(shí)別，以所確定的特征假設(shè)能加以區(qū)別和識(shí)別，那么更為理想。那么更為理想。v實(shí)驗(yàn)樣品的制備實(shí)驗(yàn)樣品的制備v 可根據(jù)藥材所含成分選定，盡能可根據(jù)藥材所含成分選定，盡能夠思索對(duì)不同成分的兼容性，通常用不夠思索

18、對(duì)不同成分的兼容性，通常用不同極性的溶劑同極性的溶劑2 23 3種，制成供試品，供種，制成供試品，供一組圖譜綜合鑒定運(yùn)用。一組圖譜綜合鑒定運(yùn)用。v 留意取樣代表性與均勻性。留意取樣代表性與均勻性。 4 中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜v中藥指紋圖譜鑒別中藥指紋圖譜鑒別v規(guī)范圖譜的建立規(guī)范圖譜的建立v檢測(cè)方法檢測(cè)方法v現(xiàn)代光譜紅外光譜，紫外光譜現(xiàn)代光譜紅外光譜，紫外光譜v色譜氣相色譜、薄層色譜、高效液相色譜氣相色譜、薄層色譜、高效液相色譜、毛細(xì)管電泳色譜、毛細(xì)管電泳v其它其它X X光衍射光衍射 4 中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜v中藥指紋圖譜鑒別中藥指紋圖譜鑒別v指紋圖譜的解析指紋圖譜的解析v研討指紋圖譜中特征信號(hào)的歸屬研討指紋圖譜中特征信號(hào)的歸屬v各指紋圖譜的相關(guān)性研討各指紋圖譜的相關(guān)性研討v直觀比較直觀比較v相對(duì)指數(shù)、重疊率、八強(qiáng)峰等量化數(shù)據(jù)相對(duì)指數(shù)、重疊率、八強(qiáng)峰等量化數(shù)據(jù)v計(jì)算機(jī)輔助中藥指紋圖譜類似度計(jì)算軟計(jì)算機(jī)輔助中藥指紋圖譜類似度計(jì)算軟件件 4 中藥指紋圖譜中藥指紋圖譜NoImage酸醇提取液中紫外吸收成分的HPL