食品微生物實驗室的基本要求與管理

1、食品微生物實驗室的基本要求與管理GB4789.1總則：3.1環(huán)境n3.1.1實驗室環(huán)境應(yīng)不影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。n3.1.2實驗室的工作區(qū)域應(yīng)與辦公室區(qū)域明顯分開。n3.1.3實驗室工作區(qū)域面積和總體布局應(yīng)能滿足從事檢測工作需求，實驗室布局應(yīng)采用單方向工作流程，避免交叉污染。n3.1.4實驗室內(nèi)溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等應(yīng)符合工作要求。n3.1.5一般樣品檢測應(yīng)在潔凈區(qū)域(包括超凈工作臺或潔凈實驗室)進(jìn)行，潔凈區(qū)域的應(yīng)有明顯標(biāo)示。n3.1.6病原微生物分離鑒定工作應(yīng)在二級生物安全實驗室(Biosafety level 2 BSL-2) 進(jìn)行。潔凈實驗室與BSL-2實驗室的區(qū)別n百級潔凈實

2、驗室只針對實驗環(huán)境提出潔凈要求，不提供對人員或環(huán)境的生物安全保護(hù)。(超凈工作臺不能替代生物安全柜)。n普通的食品微生物實驗(不進(jìn)行病原微生物分離與鑒定)只要求在潔凈實驗室進(jìn)行。n進(jìn)行病原微生物分離與鑒定必須在BLS-2實驗室中進(jìn)行。什么是生物安全實驗室？n是通過規(guī)范的實驗室設(shè)計建造、實驗設(shè)備的配置、個人防護(hù)裝備的使用（硬件）、嚴(yán)格遵從標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序和管理規(guī)程等（軟件）：確保操作生物危險因子的工作人員不受實驗對象的傷害；確保周圍環(huán)境不受其污染；確保實驗因子保持原有本性所采取綜合措施的實驗室。生物安全防護(hù)的基本原則(三要素)n安全設(shè)備、個體防護(hù)裝置和措施 。n實驗室的特殊設(shè)計和建設(shè)要求 。n嚴(yán)格

3、的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序和規(guī)程目標(biāo)確保實驗室工作人員不受實驗對象侵染， 確保周圍環(huán)境不受其污染的目的。 生物安全實驗室設(shè)施的基本要求n必須為實驗室安全運(yùn)行、清潔和維護(hù)提供足夠的空間。n實驗室的墻壁、天花板和地面應(yīng)光整、易清潔、防滲漏并耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地板應(yīng)防滑。n實驗臺面應(yīng)防水，并可耐消毒劑、酸、堿、有機(jī)溶劑和中等熱度的作用。 n應(yīng)保證實驗室內(nèi)所有活動的照明，避免不必要的反光和閃光。n實驗室器具應(yīng)堅實耐用，在實驗臺、生物 安全柜和其它設(shè)備之間及其下面要保證有足夠的空間以便進(jìn)行清潔。n應(yīng)當(dāng)有足夠的儲存空間。n應(yīng)當(dāng)有足夠的儲存空間擺放隨時使用的物品 (試劑、氣體等)。n在實驗室工作區(qū)外

4、應(yīng)當(dāng)有存放外衣和私人物品的設(shè)施。還應(yīng)當(dāng)有供長期使用的存儲空間。 n每個實驗室都應(yīng)有洗手池，并最好安裝在出口處，盡可能用自來水(要有防止嚼齒動物和節(jié)肢動物侵?jǐn)_的裝置)。n實驗室的門應(yīng)有可視窗，并達(dá)到適當(dāng)?shù)姆阑鸬燃?，最好能自動關(guān)閉。n二級生物安全水平時，應(yīng)在靠近實驗室的位置配備高壓滅菌器或其它清除污染的工具。n安全系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)包括消防、應(yīng)急供電、應(yīng)急淋浴及洗眼設(shè)施。n應(yīng)當(dāng)考慮設(shè)置機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，以使空氣向內(nèi)單向流動。如果沒有機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，實驗室窗戶應(yīng)當(dāng)能夠打開，同時安裝防蟲紗窗。 n在實驗室內(nèi)應(yīng)有基本生物安全設(shè)備：生物安全柜(一級或二級）、移液助器、乳膠手套等百級潔凈實驗室與BSL-2實驗室的區(qū)別n百級

5、潔凈實驗室的潔凈度要求：百級潔凈實驗室的潔凈度要求：空氣潔凈等級空氣潔凈等級 含塵濃度含塵濃度 含菌濃度含菌濃度 塵粒粒徑塵粒粒徑(m) (m) 塵粒數(shù)塵粒數(shù)（個（個mm3 3 ） 沉降菌沉降菌(cm(cm碟碟0.5h0.5h） 浮游菌浮游菌( (個個mm3 3) ) 100100級級 0.5 0.5 3,500 3,500 1 1 5 5 5 5 0 0 1000010000級級 0.5 0.5 350,000 350,000 3 3 1001005 5 2,000 2,000 100000100000級級 0.5 0.5 3,500,000 3,500,000 10105005005 5

6、20,000 20,000 大于大于100000100000( (相當(dāng)于相當(dāng)于300000300000級級) ) 0.5 0.5 10000000 10000000 5 5 61800 61800 BSL-2實驗室的主要技術(shù)指標(biāo)級別級別潔凈潔凈度級度級別別最小換最小換氣次數(shù)氣次數(shù)( (次次/h)/h)與室外方向上與室外方向上相鄰相通房間相鄰相通房間的最小負(fù)壓差的最小負(fù)壓差(Pa)(Pa)溫度溫度相對濕相對濕度度%噪聲噪聲dB(A)dB(A)最低照最低照度度lx lx一級一級_ _可開窗可開窗_ _1828182870706060200200二級二級_ _可開窗可開窗_ /p>

7、030706060300300三級三級7 7或或8 81515或或1212-10-1015251525306030606060350350四級四級7 7或或8 81515或或1212-10-1018241824306030606060350350二級生物安全防護(hù)水平(BSL2） n二級生物安全防護(hù)水平是指實驗室的操作、安全設(shè)備、和設(shè)施適用于操作我國的第三類（少量二類）危害的致病微生物。n二級生物安全防護(hù)水平適合于從未知病原的人身上取血、體液和組織的檢測和研究（可能含有高致病微生物）。 BSL2：實驗室設(shè)施(二級屏障) BSL-2實驗室生物安全標(biāo)識生物安全標(biāo)識生物安全柜注意乳膠手套的使用風(fēng)淋室食

8、品微生物無菌室的基本要求及管理 n無菌室的基本建設(shè)要求根據(jù)本實驗室所涉及的生物安全等級，無菌室的設(shè)計應(yīng)符合GB 50364(生物安全實驗室建筑技術(shù))和GB 19489(生物安全通用要求)的相關(guān)要求。無菌室大小應(yīng)滿足檢驗工作的需要。內(nèi)墻為淺色，墻面和地面應(yīng)光滑，墻面與地面、天花板連接處應(yīng)呈凹弧形，無縫隙，無死角，易于清潔與消毒。無菌入口處應(yīng)開設(shè)緩沖間，緩沖間內(nèi)應(yīng)安裝非手動式形關(guān)的洗手盆，并可有毛巾。緩沖間應(yīng)有足夠的面積以保證操作人員更換工作服和鞋帽。無菌室內(nèi)工作臺的高度約80cm，工作臺應(yīng)保持水平。工作臺面應(yīng)無滲漏，耐腐蝕，易于清潔、消毒。無菌室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻，工作臺面的光照度應(yīng)不低于540l

9、x。無菌室內(nèi)應(yīng)具備適當(dāng)?shù)耐L(fēng)和溫度調(diào)節(jié)條件。無菌室的推薦溫度為20，相對濕度為40%60%。緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置達(dá)到空氣消毒效果的紫外燈或其它適宜的消毒裝置。n無菌室的管理無菌室在使用前和使用后應(yīng)進(jìn)行有效的消毒，消毒方法參見附錄D。無菌室的消毒效果應(yīng)至少每兩周驗證一次。應(yīng)制定清潔、消毒、滅菌、使用和應(yīng)急處理程序。應(yīng)建立環(huán)境監(jiān)測結(jié)果，并歸檔保存。不符合規(guī)定時應(yīng)立即停止使用。微生物實驗室消毒處理方法n無菌室紫外線消毒在室溫2025時，220V30W紫外燈垂直1.0m處的253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度應(yīng)70W/cm2，低于此值時應(yīng)更換。紫外線消毒時，無菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔干燥。在無人條件下，可采取紫外

10、線消毒，作用時間應(yīng)30min，室內(nèi)濕度20或40、相對濕度60%時，應(yīng)適當(dāng)延長照射時間。用紫外線消毒物品表面時，應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射，且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量。人員在關(guān)閉紫外燈后至少30min方可入內(nèi)操作。按照ISO18953的規(guī)定，評價紫外線的消毒與殺菌效果。n無菌室臭氧消毒封閉無菌室內(nèi)，無人條件下，采用20mg/m3濃度的臭氧，作用時間應(yīng)30min。消毒后臭氧濃度0.2mg/m3時方可入內(nèi)操作。按照GB/T18202的規(guī)定，檢測室內(nèi)臭氧濃度。n無菌室空氣滅菌效果驗證方法(沉降法)在消毒處理后與開展檢驗活動之前期間采樣。取樣位點(diǎn)的選擇應(yīng)基于人員流量情況和做試驗的頻率。一般情況下，無

11、菌室面積30m2時，從所設(shè)定的一條對角線上選取3點(diǎn)，即中心1點(diǎn)，兩端各距墻1m處各取1點(diǎn)；無菌室面積 30m2時，選取東、西、南、北、中5點(diǎn)，其中東點(diǎn)、西點(diǎn)、南點(diǎn)、北點(diǎn)均距墻1m。無菌室無菌室(30m2)無菌室(30m2)無菌室( 30m2)采樣點(diǎn)設(shè)置圖 在所選位點(diǎn)，將平板計數(shù)瓊脂平板(90mm)或置于距地面80cm，開蓋暴露15min，然后，置36 1的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h 1h。如果檢測某目標(biāo)霉菌或細(xì)菌，則可用選擇性瓊脂平板(如PDA、PALCAM等) 。確定平板上的菌落數(shù)，如大于所設(shè)定的風(fēng)險值，應(yīng)分析原因，并采取適當(dāng)措施。n培養(yǎng)基與試劑的消毒與滅菌培養(yǎng)基通常應(yīng)采用高壓溫?zé)釡缇ǎ?21滅

12、菌15min，特殊培養(yǎng)基按使用者的特殊要求進(jìn)行滅菌(如含糖培養(yǎng)基，115 滅菌20min)。部分培養(yǎng)基(如嗜鹽瓊脂培養(yǎng)基、膽硫乳培養(yǎng)基等)，只能煮沸滅菌。對熱敏感的培養(yǎng)基或添加物質(zhì)，應(yīng)采用膜過濾的方法過濾除菌。即用型培養(yǎng)基不需滅菌，應(yīng)參見相關(guān)國際標(biāo)準(zhǔn)或供應(yīng)商使用說明書，直接使用。n器具與設(shè)備的消毒滅菌 溫?zé)釡缇翰捎酶邏簻缇鳎?121滅菌20min，適用于玻璃器皿、移液器吸頭、塑料瓶等。按照GB15981的規(guī)定，評價高壓滅菌器的殺菌效果。干燥滅菌：采用干燥箱滅菌，160，滅菌2h，適用于玻璃器皿和不銹鋼器具等。 液體消毒劑消毒：使用適當(dāng)濃度自配或商業(yè)液體消毒劑對工作臺面、器具或設(shè)備表面進(jìn)行消

13、毒?？砂凑誈B15981的規(guī)定，評價自配或商業(yè)液體消毒劑的消毒效果。可按照ISO18953的規(guī)定，監(jiān)測工作臺面、器具或設(shè)備表面的消毒效果。n實驗室廢棄物的處理對于培養(yǎng)物及其污染的物品(如培養(yǎng)基、測試條、生物鑒定管、血清學(xué)鑒定用玻片、用過的移液器吸頭、細(xì)菌培養(yǎng)皿、注射器等)，應(yīng)使用適當(dāng)濃度的自配或商業(yè)液體消毒劑對其處理一定時間，或121高壓滅菌至少30min，或其他有效處理措施。將處理物倒入特殊標(biāo)志的垃圾袋內(nèi)，直接送到指定地點(diǎn)。部分消毒劑的特性消消毒毒劑劑抗活性抗活性被滅活被滅活毒性毒性真真菌菌細(xì)菌細(xì)菌分分枝枝桿桿菌菌孢孢子子親親脂脂病病毒毒 非非親親脂脂病病毒毒蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)天天然然物物質(zhì)質(zhì)合合成成物物質(zhì)質(zhì)硬水硬水去去垢垢劑劑皮皮膚膚眼眼睛睛肺肺G+G+G_G_次次氯氯酸酸鹽鹽+ + + + + + + + + +C C+ + + +乙乙醇醇- -+ + + +- -+ +V V+ + + + +- -+ +甲甲醛醛+ + + + +a+a+ + + + + +