L單元生物工程及技術(shù)

1、HLLYBQ整理 供“高中試卷網(wǎng)（）” 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)與發(fā)酵工程的應(yīng)用42014·廣東卷 下列敘述錯(cuò)誤的是()A酵母菌在無(wú)氧條件下利用葡萄汁產(chǎn)生酒精B醋酸菌在無(wú)氧條件下利用乙醇產(chǎn)生醋酸C泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸發(fā)酵D腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶4B解析 酵母菌是異養(yǎng)兼性厭氧型生物，在無(wú)氧條件下利用葡萄汁可產(chǎn)生酒精和二氧化碳，A項(xiàng)正確。用醋酸菌釀醋時(shí)需要持續(xù)通氣，即利用醋酸菌的有氧呼吸，不是無(wú)氧呼吸，B項(xiàng)錯(cuò)誤。泡菜腌制原理是利用乳酸菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乳酸，C項(xiàng)正確。 腐乳制作利用了青霉、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物通過(guò)產(chǎn)

2、生的蛋白酶和脂肪酶起作用，D項(xiàng)正確。242014·江蘇卷 (多選)某同學(xué)設(shè)計(jì)了如圖所示的發(fā)酵裝置，下列有關(guān)敘述正確的是()A該裝置可阻止空氣進(jìn)入，用于果酒發(fā)酵B該裝置便于果酒發(fā)酵中產(chǎn)生的氣體排出C去除彎管中的水，該裝置可滿足果醋發(fā)酵時(shí)底層發(fā)酵液中大量醋酸菌的呼吸D去除彎管中的水后，該裝置與巴斯德的鵝頸瓶作用相似24ABD解析 圖示彎管的水可以有效地阻止外來(lái)空氣和雜菌，制造出密閉空間用于果酒發(fā)酵，A項(xiàng)正確。圖示導(dǎo)管插在液面之外可用于排出發(fā)酵過(guò)程產(chǎn)生的氣體，B項(xiàng)正確。醋酸菌為好氧菌，彎管去除水后有適量氣體進(jìn)入，利于醋酸菌在液體中上層發(fā)酵，底層液體中缺氧不利于醋酸菌發(fā)酵，C項(xiàng)錯(cuò)誤。彎管去除

3、水后有適量氣體彎曲進(jìn)入，類似巴斯德的鵝頸瓶作用，既能導(dǎo)氣又能防止雜菌污染，D項(xiàng)正確。302014·海南卷 生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐已知泡菜中亞硝酸鹽含量與泡制時(shí)間有關(guān)。為了測(cè)定不同泡制天數(shù)泡菜中亞硝酸鹽的含量，某同學(xué)設(shè)計(jì)了一個(gè)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)材料、試劑及用具包括：刻度移液管、比色管、不同濃度的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液、亞硝酸鹽的顯色劑、不同泡制天數(shù)的泡菜濾液等。回答相關(guān)問(wèn)題：(1)請(qǐng)完善下列實(shí)驗(yàn)步驟。標(biāo)準(zhǔn)管的制備：用_和顯色劑制成顏色深淺不同的系列標(biāo)準(zhǔn)管。樣品管的制備：用刻度移液管分別吸取一定量的_，加到不同的比色管中，然后在各個(gè)比色管中加入等量的顯色劑進(jìn)行顯色，得到樣品管。將每個(gè)_分別與系列標(biāo)準(zhǔn)

4、管進(jìn)行比較，找出與樣品管顏色深淺_的標(biāo)準(zhǔn)管，該管中亞硝酸鈉含量即代表樣品管中亞硝酸鹽含量，記錄各樣品管亞硝酸鹽的含量。(2)下圖表示的是泡菜中_趨勢(shì)。(3)泡菜制作過(guò)程中產(chǎn)酸的細(xì)菌主要是_(填“醋酸桿菌”或“乳酸菌”)。30(1)亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 不同泡制天數(shù)的泡菜濾液樣品管最相近(其他合理答案也可)(2)亞硝酸鹽含量隨泡制時(shí)間的變化(其他合理答案也可)(3)乳酸菌解析 (1)在亞硝酸鹽的含量測(cè)定中，可利用亞硝酸鹽與顯色劑發(fā)生顏色反應(yīng)，根據(jù)顏色的深淺可確定亞硝酸鹽含量的多少。用不同濃度的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液與顯色劑可制成顏色深淺不同的系列標(biāo)準(zhǔn)管，不同顏色深淺對(duì)應(yīng)的亞硝酸鈉濃度是已知的；用不同泡制天

5、數(shù)的泡菜濾液與顯色劑反應(yīng)，制備一系列的樣品管，將樣品管的顏色與標(biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行顏色比對(duì)，找到與樣品管顏色深淺最接近的標(biāo)準(zhǔn)管，所對(duì)應(yīng)的亞硝酸鈉濃度即可代表樣品管中的亞硝酸鹽含量。(2)圖示曲線橫軸為時(shí)間，縱軸為亞硝酸鹽含量，則該曲線表示泡菜中亞硝酸鹽含量隨發(fā)酵時(shí)間的變化趨勢(shì)。(3)泡菜制作的原理是乳酸發(fā)酵，產(chǎn)酸的細(xì)菌主要是乳酸菌。 微生物的類型、營(yíng)養(yǎng)和代謝102014·四川卷 有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖甲、乙所示。甲乙(1)微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、_四類，該實(shí)

6、驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_。(2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和_，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成_保存?zhèn)溆谩?3)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是_。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有_。(4)為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過(guò)濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是_，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？_。10(1)氮源和無(wú)機(jī)鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長(zhǎng)繁殖(2)細(xì)胞分裂素母液(3)接種環(huán)接種環(huán)灼燒后未冷卻

7、；劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)不合理，缺少空白對(duì)照解析 本題考查微生物的培養(yǎng)和分離及植物的組織培養(yǎng)。(1)微生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽四類；選擇培養(yǎng)基是允許特定種類微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，碳源為微生物需要的四類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)中的一種，缺少時(shí)，微生物不能生長(zhǎng)和繁殖，而只以苯磺隆作為唯一碳源，只有能利用苯磺隆的微生物才能正常生長(zhǎng)和繁殖。(2)植物激素中的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素；植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，在實(shí)驗(yàn)室一般配制成母液，在4 條件下保存?zhèn)溆谩?3)平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上連

8、續(xù)劃線接種的方法；第二劃線區(qū)域的第一條線上無(wú)菌落，產(chǎn)生的失誤可能是劃線時(shí)接種環(huán)灼燒未冷卻，菌種被殺死，或者是劃線時(shí)未從第一區(qū)域的末端開(kāi)始，接種環(huán)未接觸到菌種。(4)從圖示可知，加入了蛋白酶后測(cè)定苯磺隆降解率，而蛋白酶專一性分解蛋白質(zhì)，可推知該實(shí)驗(yàn)作出的假設(shè)是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)；實(shí)驗(yàn)需要空白對(duì)照，來(lái)確定加入蛋白酶后對(duì)苯磺隆降解情況的影響。302014·江蘇卷 為了獲得­胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開(kāi)展了產(chǎn)­胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是_；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應(yīng)該_。(2)為了篩選出酵母菌

9、，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是_。(3)上圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是_。(填序號(hào))安全閥、放氣閥、壓力表 放氣閥、安全閥、壓力表安全閥、放氣閥、溫度表 放氣閥、安全閥、溫度表(4)為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見(jiàn)菌生長(zhǎng)，最可能的原因是_。(5)為增加­胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細(xì)胞時(shí)，添加石英砂的目的是_；研磨時(shí)_(填“需要”或“不需要”)添加CaCO3，理由是_。30(1)干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌) 用牛皮紙(報(bào)紙)包扎器皿(2)抑制細(xì)菌(放線菌)生長(zhǎng)(3)(4)接種環(huán)溫度過(guò)高，菌被殺死

10、(5)有助于研磨充分不需要­胡蘿卜素較耐酸解析 (1)培養(yǎng)皿常用的滅菌方法是干熱滅菌和濕熱滅菌，在滅菌前應(yīng)用牛皮紙(報(bào)紙)包扎器皿，滅菌結(jié)束后，牛皮紙能阻止空氣中的微生物再次污染玻璃器皿。(2)青霉素是廣譜性抗生素，能有效殺死細(xì)菌和放線菌，可選擇性培養(yǎng)真菌。(3)對(duì)照高壓滅菌鍋的構(gòu)造，圖示中甲是安全閥，乙是放氣閥，丙是壓力表。(4)接種前接種環(huán)應(yīng)灼燒滅菌后取樣，一塊平板的各劃線區(qū)均未見(jiàn)菌落說(shuō)明可能是接種環(huán)溫度過(guò)高，菌被殺死，接種環(huán)未能把活菌取至平板培養(yǎng)基上。(5)研磨細(xì)胞時(shí)添加石英砂有利于細(xì)胞研磨得更加充分；由于­胡蘿卜素耐酸不易被破壞，故無(wú)需添加CaCO3。 微生物的培養(yǎng)

11、與應(yīng)用42014·全國(guó)卷 某同學(xué)在三種條件下培養(yǎng)大腸桿菌，這三種條件是：以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不斷補(bǔ)充培養(yǎng)基，及時(shí)去除代謝產(chǎn)物以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基，不補(bǔ)充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物以葡萄糖和乳糖為碳源的培養(yǎng)基，不補(bǔ)充培養(yǎng)基，不去除代謝產(chǎn)物根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果繪制的一段時(shí)間內(nèi)菌體數(shù)的對(duì)數(shù)隨時(shí)間變化的趨勢(shì)圖如下：甲乙丙假設(shè)三種培養(yǎng)基中初始總糖量相等，則三種條件依次對(duì)應(yīng)的趨勢(shì)圖是()A甲、乙、丙B乙、丙、甲C丙、甲、乙 D丙、乙、甲4C解析 本題考查微生物生長(zhǎng)的有關(guān)知識(shí)。屬于比較理想的培養(yǎng)條件，因此菌體數(shù)增長(zhǎng)的趨勢(shì)近似于“J”型曲線，即丙曲線；條件下，隨著葡萄糖的不斷減少，有害代謝產(chǎn)物的不斷積累，

12、活菌數(shù)會(huì)出現(xiàn)下降趨勢(shì)，與甲曲線相符；在以葡萄糖和乳糖為碳源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌，開(kāi)始時(shí)大腸桿菌只能利用葡萄糖而不能利用乳糖，只有當(dāng)葡萄糖被消耗完畢以后，大腸桿菌才開(kāi)始利用乳糖，與乙曲線相符，故C項(xiàng)正確。39 2014·新課標(biāo)全國(guó)卷 生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐 植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解。回答下列問(wèn)題：(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將_分解成_。(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成_色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_。(3)為從富

13、含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見(jiàn)下表)：酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙注：“”表示有，“”表示無(wú)。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_；培養(yǎng)基乙_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_。39(1)纖維二糖葡萄糖(2)紅透明圈(3)不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌解析 (1)纖維素酶是一種復(fù)合酶，該酶是由C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶3種組分組成，前兩種酶可將纖維素分解為纖

14、維二糖，葡萄糖苷酶可將纖維二糖分解為葡萄糖。(2)剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物便無(wú)法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。我們可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。(3)生物適應(yīng)一定環(huán)境，環(huán)境對(duì)生物具有選擇作用，只有在纖維素含量豐富的環(huán)境中纖維素分解菌才會(huì)發(fā)揮作用。纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基。纖維素分解菌鑒別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，要分離和鑒別纖維素分解菌，都需要以纖維素為主要碳源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基乙不具有選擇的作用。392014·新課標(biāo)全國(guó)卷 生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量

15、，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作。回答下列問(wèn)題：(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白干板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是_；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)。(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)_滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線。這樣做的目的是_。(3)示意圖A和B中，_表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。AB(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基

16、中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中_的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)的利用率。39(1)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8×107(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落(3)B(4)溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)解析 (1)為了確定培養(yǎng)基的滅菌是否合格，微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一般會(huì)設(shè)置空白對(duì)照：隨機(jī)取若干滅菌后的不接種的培養(yǎng)基在相同條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落生成，若無(wú)菌落生成說(shuō)明滅菌合格；利用平板菌落計(jì)數(shù)法的計(jì)算公式估算水樣中的活菌數(shù)： ×M(×稀釋倍

17、數(shù))×1003.8×107/L。(2)接種時(shí)接種環(huán)需要灼燒滅菌；在第二次及以后每次劃線時(shí)，總是從上一次的末端開(kāi)始劃線，這樣做的目的是通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌體的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個(gè)菌落。(3)由題圖可知，B圖菌落分布相對(duì)均勻，應(yīng)為稀釋涂布平板法接種的結(jié)果。(4)振蕩培養(yǎng)可以增加液體培養(yǎng)基的氧氣含量，促進(jìn)好氧型微生物的生長(zhǎng)，另外振蕩培養(yǎng)還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。102014·四川卷 有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖甲、

18、乙所示。甲乙(1)微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、_四類，該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_。(2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和_，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成_保存?zhèn)溆谩?3)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是_。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有_。(4)為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過(guò)濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是_，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？_。10(1)氮源和無(wú)機(jī)鹽只有能利用苯磺

19、隆的微生物能正常生長(zhǎng)繁殖(2)細(xì)胞分裂素母液(3)接種環(huán)接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)不合理，缺少空白對(duì)照解析 本題考查微生物的培養(yǎng)和分離及植物的組織培養(yǎng)。(1)微生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽四類；選擇培養(yǎng)基是允許特定種類微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，碳源為微生物需要的四類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)中的一種，缺少時(shí)，微生物不能生長(zhǎng)和繁殖，而只以苯磺隆作為唯一碳源，只有能利用苯磺隆的微生物才能正常生長(zhǎng)和繁殖。(2)植物激素中的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素；植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，在實(shí)驗(yàn)室一般配制

20、成母液，在4 條件下保存?zhèn)溆谩?3)平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上連續(xù)劃線接種的方法；第二劃線區(qū)域的第一條線上無(wú)菌落，產(chǎn)生的失誤可能是劃線時(shí)接種環(huán)灼燒未冷卻，菌種被殺死，或者是劃線時(shí)未從第一區(qū)域的末端開(kāi)始，接種環(huán)未接觸到菌種。(4)從圖示可知，加入了蛋白酶后測(cè)定苯磺隆降解率，而蛋白酶專一性分解蛋白質(zhì)，可推知該實(shí)驗(yàn)作出的假設(shè)是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)；實(shí)驗(yàn)需要空白對(duì)照，來(lái)確定加入蛋白酶后對(duì)苯磺隆降解情況的影響。172014·浙江卷 下面是關(guān)于固定化酶和細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題。請(qǐng)回答：(1)某興趣小組欲利用固定化酶進(jìn)行酶解淀粉的實(shí)驗(yàn)，分組見(jiàn)下表。組別固定化酶柱長(zhǎng)度(cm)淀粉溶

21、液的流速(mL·min1)甲100.3乙100.5丙150.3丁150.5將吸附了­淀粉酶的石英砂裝入柱中后，需用蒸餾水充分洗滌固定化酶柱，以除去_。按上表分組，將配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液進(jìn)行KI­I2檢測(cè)。若流出液呈紅色，表明有_生成；若各組呈現(xiàn)的顏色有顯著差異，則流出液中淀粉水解產(chǎn)物濃度最高的是_組。(2)下列關(guān)于上述固定化酶實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是()A固定化酶柱長(zhǎng)度和淀粉溶液流速?zèng)Q定了酶柱中酶的含量B淀粉溶液流速過(guò)快會(huì)導(dǎo)致流出液中含有淀粉C各組實(shí)驗(yàn)所用的淀粉溶液濃度應(yīng)相同D淀粉溶液的pH對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響(3)現(xiàn)有一份污水樣品，某

22、興趣小組欲檢測(cè)其中的細(xì)菌數(shù)，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。將一定量的污水樣品進(jìn)行濃度梯度稀釋。取適量不同稀釋度的稀釋液，用_法分別接種于固體平面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)。該實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意，接種前，從盛有_的容器中將玻璃刮刀取出，放在酒精燈火焰上灼燒，冷卻后待用；分組時(shí)，需用_作為對(duì)照。(4)在上述細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)計(jì)數(shù)的是接種了()A各個(gè)稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)B合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)C各個(gè)稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)D合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)17(1)未吸附的­淀粉酶糊精丙(2)A(3)涂布分離70%酒精未接種的培養(yǎng)基(4)D解析 (1)用蒸餾水洗滌固定化酶柱的目的是

23、洗掉未吸附的­淀粉酶，防止產(chǎn)物中混有酶等物質(zhì)；淀粉的產(chǎn)物可以是糊精，可以用KI­I2檢測(cè)，呈現(xiàn)的顏色是紅色；根據(jù)表格分析4組實(shí)驗(yàn)，如果反應(yīng)時(shí)間越充分，則反應(yīng)就越充分，流出物中糊精的含量就越高，因丙組的固定化酶柱長(zhǎng)度最長(zhǎng)，淀粉溶液的流速也越低，所以它的流出物中糊精的含量最高。(2)酶柱長(zhǎng)度和流速?zèng)Q定了反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短，A項(xiàng)錯(cuò)誤。流速過(guò)快則反應(yīng)不夠充分，則流出液中含有淀粉，B項(xiàng)正確。實(shí)驗(yàn)的自變量是酶柱長(zhǎng)度和流速，所以每組實(shí)驗(yàn)的淀粉濃度應(yīng)相同，C項(xiàng)正確。pH大小會(huì)影響酶的活性，所以對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)有影響，D項(xiàng)正確。(3)要檢測(cè)污水中的細(xì)菌數(shù)，可采用稀釋涂布分離法進(jìn)行操作，操作過(guò)程需注意

24、消毒和滅菌處理，實(shí)驗(yàn)中需要設(shè)計(jì)一個(gè)空白對(duì)照。(4)計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)的是合理處理的稀釋樣品，計(jì)算其培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，不是細(xì)菌數(shù)。302014·江蘇卷 為了獲得­胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開(kāi)展了產(chǎn)­胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是_；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應(yīng)該_。(2)為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是_。(3)上圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是_。(填序號(hào))安全閥、放氣閥、壓力表 放氣閥、安全閥、壓力表安全閥、放氣閥、溫度表 放氣閥、安全閥、溫度表(4)為了將分離到的菌株純化

25、，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見(jiàn)菌生長(zhǎng)，最可能的原因是_。(5)為增加­胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細(xì)胞時(shí)，添加石英砂的目的是_；研磨時(shí)_(填“需要”或“不需要”)添加CaCO3，理由是_。30(1)干熱滅菌和濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌) 用牛皮紙(報(bào)紙)包扎器皿(2)抑制細(xì)菌(放線菌)生長(zhǎng)(3)(4)接種環(huán)溫度過(guò)高，菌被殺死(5)有助于研磨充分不需要­胡蘿卜素較耐酸解析 (1)培養(yǎng)皿常用的滅菌方法是干熱滅菌和濕熱滅菌，在滅菌前應(yīng)用牛皮紙(報(bào)紙)包扎器皿，滅菌結(jié)束后，牛皮紙能阻止空氣中的微生物再次污染玻璃器皿。(2)青霉素是廣譜性抗生素，能有效殺

26、死細(xì)菌和放線菌，可選擇性培養(yǎng)真菌。(3)對(duì)照高壓滅菌鍋的構(gòu)造，圖示中甲是安全閥，乙是放氣閥，丙是壓力表。(4)接種前接種環(huán)應(yīng)灼燒滅菌后取樣，一塊平板的各劃線區(qū)均未見(jiàn)菌落說(shuō)明可能是接種環(huán)溫度過(guò)高，菌被殺死，接種環(huán)未能把活菌取至平板培養(yǎng)基上。(5)研磨細(xì)胞時(shí)添加石英砂有利于細(xì)胞研磨得更加充分；由于­胡蘿卜素耐酸不易被破壞，故無(wú)需添加CaCO3。 酶的應(yīng)用182014·江蘇卷 下列關(guān)于加酶洗衣粉的敘述，正確的是()A高溫易使酶失活，因此冷水洗滌去污效果應(yīng)該比溫水好B洗衣粉中表面活性劑對(duì)堿性蛋白酶活性有一定的促進(jìn)作用C在pH低于7.0的自來(lái)水中，堿性蛋白酶依然能起作用D洗衣粉中酶主

27、要是通過(guò)快速分解溶在水里的污漬發(fā)揮作用18C解析 酶在適宜溫度下活性更好，所以溫水洗滌效果比冷水好，A項(xiàng)錯(cuò)誤。洗衣粉中表面活性劑具有乳化、起泡或消泡以及增溶、分散、洗滌、防腐、抗靜電等作用，對(duì)于酶的活性沒(méi)有促進(jìn)作用，B項(xiàng)錯(cuò)誤。堿性蛋白酶適宜pH是在堿性范圍，自來(lái)水pH低于7.0時(shí)酶活性下降但依然能發(fā)揮作用，C項(xiàng)正確。洗衣粉中酶的作用是使難溶的大分子污漬快速分解為小分子可溶性物質(zhì)從而達(dá)到去漬效果，D項(xiàng)錯(cuò)誤。82014·天津卷 嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的­葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開(kāi)展了以下試驗(yàn)：.利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶(1)PCR

28、擴(kuò)增bglB基因時(shí)，選用_基因組DNA作模板。(2)下圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識(shí)別序列。為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入_和_不同限制酶的識(shí)別序列。注：圖中限制酶的識(shí)別序列及切割形成的黏性末端均不相同(3)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)開(kāi)。.溫度對(duì)BglB酶活性的影響(4)據(jù)圖1、2可知，80 保溫30分鐘后，BglB酶會(huì)_；為高效利用BglB酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好控制在_(單選)。A50 B60 C70 D80 圖1溫度對(duì)BglB酶活性的影響圖2BglB酶的熱穩(wěn)定性

29、注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時(shí)間后通過(guò)其活性的保持程度來(lái)反映的.利用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性在PCR擴(kuò)增bglB基因的過(guò)程中，加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過(guò)篩選，可獲得能表達(dá)出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。(5)與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌相比，上述育種技術(shù)獲取熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR過(guò)程中_(多選)。A僅針對(duì)bglB基因進(jìn)行誘變BbglB基因產(chǎn)生了定向突變CbglB基因可快速累積突變DbglB基因突變不會(huì)導(dǎo)致酶的氨基酸數(shù)目改變8(1)嗜熱土壤芽胞桿菌(2)Nde BamH(3)轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶(

30、4)失活B(5)A、C解析 (1)bglB基因存在于嗜熱土壤芽胞桿菌基因組中，故應(yīng)以該菌的基因組DNA為模板進(jìn)行基因擴(kuò)增。(2)目的基因與質(zhì)粒進(jìn)行重組時(shí)，需將目的基因插入到啟動(dòng)子和終止子之間，且應(yīng)靠近啟動(dòng)子和終止子，結(jié)合示意圖可知，應(yīng)在擴(kuò)增的bglB基因兩端分別引入Nde和BamH兩種限制酶的識(shí)別序列。(3)該基因表達(dá)載體中含有bglB基因，可表達(dá)產(chǎn)生­葡萄糖苷酶，其可分解纖維素，這樣大腸桿菌就獲得了分解纖維素的能力。(4)由圖2可知，BglB酶在80 保溫30分鐘后，就會(huì)失活；由圖1可知，當(dāng)溫度為6070 時(shí)，酶活性較高，而由圖2可知70 時(shí)保溫30分鐘，酶活性開(kāi)始減弱，而60 保

31、溫30分鐘后酶活性基本不發(fā)生變化，由此可知為高效利用BglB酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好應(yīng)控制在60 ，故選B。(5)在bglB基因擴(kuò)增過(guò)程中加入誘變劑進(jìn)行誘變處理，相比于誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌，針對(duì)性更強(qiáng)；基因突變是不定向的；由于PCR過(guò)程基因擴(kuò)增即DNA復(fù)制快速進(jìn)行，發(fā)生突變后可進(jìn)行快速積累，進(jìn)而便于篩選；基因突變可能導(dǎo)致氨基酸數(shù)目的改變，如突變后的密碼子變?yōu)榻K止密碼子，可導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成提前終止，進(jìn)而導(dǎo)致氨基酸數(shù)目變少。172014·浙江卷 下面是關(guān)于固定化酶和細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題。請(qǐng)回答：(1)某興趣小組欲利用固定化酶進(jìn)行酶解淀粉的實(shí)驗(yàn)，分組見(jiàn)下表。組別固定化酶柱長(zhǎng)度(cm

32、)淀粉溶液的流速(mL·min1)甲100.3乙100.5丙150.3丁150.5將吸附了­淀粉酶的石英砂裝入柱中后，需用蒸餾水充分洗滌固定化酶柱，以除去_。按上表分組，將配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液進(jìn)行KI­I2檢測(cè)。若流出液呈紅色，表明有_生成；若各組呈現(xiàn)的顏色有顯著差異，則流出液中淀粉水解產(chǎn)物濃度最高的是_組。(2)下列關(guān)于上述固定化酶實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是()A固定化酶柱長(zhǎng)度和淀粉溶液流速?zèng)Q定了酶柱中酶的含量B淀粉溶液流速過(guò)快會(huì)導(dǎo)致流出液中含有淀粉C各組實(shí)驗(yàn)所用的淀粉溶液濃度應(yīng)相同D淀粉溶液的pH對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響(3)現(xiàn)有一份污水

33、樣品，某興趣小組欲檢測(cè)其中的細(xì)菌數(shù)，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。將一定量的污水樣品進(jìn)行濃度梯度稀釋。取適量不同稀釋度的稀釋液，用_法分別接種于固體平面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)。該實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意，接種前，從盛有_的容器中將玻璃刮刀取出，放在酒精燈火焰上灼燒，冷卻后待用；分組時(shí)，需用_作為對(duì)照。(4)在上述細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)計(jì)數(shù)的是接種了()A各個(gè)稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)B合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)C各個(gè)稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)D合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)17(1)未吸附的­淀粉酶糊精丙(2)A(3)涂布分離70%酒精未接種的培養(yǎng)基(4)D解析 (1)用蒸餾水洗滌固定化酶柱

34、的目的是洗掉未吸附的­淀粉酶，防止產(chǎn)物中混有酶等物質(zhì)；淀粉的產(chǎn)物可以是糊精，可以用KI­I2檢測(cè)，呈現(xiàn)的顏色是紅色；根據(jù)表格分析4組實(shí)驗(yàn)，如果反應(yīng)時(shí)間越充分，則反應(yīng)就越充分，流出物中糊精的含量就越高，因丙組的固定化酶柱長(zhǎng)度最長(zhǎng)，淀粉溶液的流速也越低，所以它的流出物中糊精的含量最高。(2)酶柱長(zhǎng)度和流速?zèng)Q定了反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短，A項(xiàng)錯(cuò)誤。流速過(guò)快則反應(yīng)不夠充分，則流出液中含有淀粉，B項(xiàng)正確。實(shí)驗(yàn)的自變量是酶柱長(zhǎng)度和流速，所以每組實(shí)驗(yàn)的淀粉濃度應(yīng)相同，C項(xiàng)正確。pH大小會(huì)影響酶的活性，所以對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)有影響，D項(xiàng)正確。(3)要檢測(cè)污水中的細(xì)菌數(shù)，可采用稀釋涂布分離法進(jìn)行操作，操作過(guò)

35、程需注意消毒和滅菌處理，實(shí)驗(yàn)中需要設(shè)計(jì)一個(gè)空白對(duì)照。(4)計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)的是合理處理的稀釋樣品，計(jì)算其培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，不是細(xì)菌數(shù)。 DNA的粗提取及蛋白質(zhì)提取技術(shù)162014·江蘇卷 下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)敘述，錯(cuò)誤的是()A酵母和菜花均可作為提取DNA的材料BDNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸餾水C向雞血細(xì)胞液中加蒸餾水?dāng)嚢瑁梢?jiàn)玻棒上有白色絮狀物DDNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱，冷卻后變藍(lán)16C解析 酵母和菜花都含DNA物質(zhì)，都可用來(lái)提取DNA，A項(xiàng)正確。DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最小，所以DNA在2 mol/L的NaCl溶液或

36、者蒸餾水中都能溶解，B項(xiàng)正確。雞血細(xì)胞加水?dāng)嚢?，?xì)胞吸水漲破釋放出DNA，DNA存在于溶液中，C項(xiàng)錯(cuò)誤。DNA與二苯胺在沸水浴條件下反應(yīng)，冷卻后變藍(lán)，D項(xiàng)正確。 植物有效成分的提取42014·四川卷 下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)方法或檢測(cè)試劑的敘述，正確的是()A用改良苯酚品紅染色觀察低溫誘導(dǎo)的植物染色體數(shù)目變化B用健那綠和吡羅紅染色觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布C用紙層析法提取菠菜綠葉中的色素和鑒定胡蘿卜素提取粗品D用標(biāo)志重捕法調(diào)查田鼠種群密度及農(nóng)田土壤小動(dòng)物的豐富度4A解析 改良苯酚品紅染液是觀察細(xì)胞分裂時(shí)染色體形態(tài)的優(yōu)良染色劑，可用于染色體數(shù)目的觀察，A項(xiàng)正確。健那綠是活細(xì)胞中線粒體染色的專

37、一性染料，B項(xiàng)錯(cuò)誤。紙層析法可用來(lái)分離色素，而不能提取色素，C項(xiàng)錯(cuò)誤。土壤小動(dòng)物由于個(gè)體小，活動(dòng)力強(qiáng)，不宜用標(biāo)志重捕法，常用取樣器取樣的方法進(jìn)行采集、調(diào)查，D項(xiàng)錯(cuò)誤。 基因工程與蛋白質(zhì)工程42014·天津卷 為達(dá)到相應(yīng)目的，必須通過(guò)分子檢測(cè)的是()A攜帶鏈霉素抗性基因受體菌的篩選B產(chǎn)生抗人白細(xì)胞介素­8抗體的雜交瘤細(xì)胞的篩選C轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉植株抗蟲(chóng)效果的鑒定D21三體綜合征的診斷4B解析 可通過(guò)將受體菌接種在含鏈霉素的培養(yǎng)基中篩選攜帶鏈霉素抗性基因的受體菌，A項(xiàng)錯(cuò)誤?？谷税准?xì)胞介素­8抗體的雜交瘤細(xì)胞應(yīng)通過(guò)抗原抗體雜交技術(shù)篩選產(chǎn)生，B項(xiàng)正確。在棉花田中人工放入害蟲(chóng)可

38、檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的抗蟲(chóng)效果，C項(xiàng)錯(cuò)誤?？衫蔑@微鏡檢測(cè)21三體綜合征患者的染色體組成，D項(xiàng)錯(cuò)誤。42014·重慶卷 如圖是利用基因工程培育抗蟲(chóng)植物的示意圖。以下相關(guān)敘述，正確的是()A的構(gòu)建需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA聚合酶參與B侵染植物細(xì)胞后，重組Ti質(zhì)粒整合到的染色體上C的染色體上若含抗蟲(chóng)基因，則就表現(xiàn)出抗蟲(chóng)性狀D只要表現(xiàn)出抗蟲(chóng)性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異4D解析 構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，而不需要DNA聚合酶，A項(xiàng)錯(cuò)誤。含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞后，重組Ti質(zhì)粒的T­DNA整合到受體細(xì)胞的染色體上，而不是重組Ti質(zhì)粒整合到受體細(xì)胞的染色

39、體上，B項(xiàng)錯(cuò)誤。導(dǎo)入受體細(xì)胞的目的基因表達(dá)后，轉(zhuǎn)基因植株方能表現(xiàn)出相應(yīng)性狀，若目的基因在受體細(xì)胞中不表達(dá)，轉(zhuǎn)基因植株則不能表現(xiàn)出相應(yīng)性狀，C項(xiàng)錯(cuò)誤?；蚬こ虒?dǎo)致的生物變異是可遺傳變異， D項(xiàng)正確。252014·廣東卷 (雙選)利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)羧酸酯酶(CarE)制劑的流程如圖所示，下列敘述正確的是()A過(guò)程需使用逆轉(zhuǎn)錄酶B過(guò)程需使用解旋酶和PCR獲取目的基因C過(guò)程使用的感受態(tài)細(xì)胞可用NaCl溶液制備D過(guò)程可利用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞25AD解析 過(guò)程是以mRNA為模板合成DNA的過(guò)程，即逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化，A項(xiàng)正確。過(guò)程表示利用PCR擴(kuò)增目的基因

40、，在PCR過(guò)程中不需要解旋酶解旋，通過(guò)控制溫度來(lái)達(dá)到解旋的目的，B項(xiàng)錯(cuò)誤。利用氯化鈣處理大腸桿菌，使之成為感受態(tài)細(xì)胞，C項(xiàng)錯(cuò)誤。檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的染色體DNA中，可以采用DNA分子雜交技術(shù)，D項(xiàng)正確。232014·江蘇卷 (多選)下列關(guān)于基因工程技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是()A切割質(zhì)粒的限制性核酸內(nèi)切酶均特異性地識(shí)別6個(gè)核苷酸序列BPCR反應(yīng)中溫度的周期性改變是為了DNA聚合酶催化不同的反應(yīng)C載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標(biāo)記基因D抗蟲(chóng)基因即使成功地插入到植物細(xì)胞染色體上也未必能正常表達(dá)23ABC解析 限制酶的識(shí)別序列不都是6個(gè)核苷酸，比如基因工程中的BamH 酶識(shí)

41、別序列為GATC，A項(xiàng)錯(cuò)誤。PCR中溫度的改變過(guò)程是：雙鏈DNA在95 變性解旋，5055 退火使引物與DNA單鏈結(jié)合；6575 是耐熱性DNA聚合酶的適宜溫度，用于子鏈的延伸，B項(xiàng)錯(cuò)誤。質(zhì)粒常用抗生素抗性基因作為標(biāo)記基因，C項(xiàng)錯(cuò)誤。抗蟲(chóng)基因即使成功插入到植物細(xì)胞內(nèi)，也可能由于基因選擇性表達(dá)或者細(xì)胞內(nèi)基因的互作等其他原因而不能正常表達(dá)，D項(xiàng)正確。8、2014·天津卷 嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的­葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開(kāi)展了以下試驗(yàn)：.利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶(1)PCR擴(kuò)增bglB基因時(shí)，選用_基因組DNA作模板。(2)下圖為

42、質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識(shí)別序列。為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入_和_不同限制酶的識(shí)別序列。注：圖中限制酶的識(shí)別序列及切割形成的黏性末端均不相同(3)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)開(kāi)。.溫度對(duì)BglB酶活性的影響(4)據(jù)圖1、2可知，80 保溫30分鐘后，BglB酶會(huì)_；為高效利用BglB酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好控制在_(單選)。A50 B60 C70 D80 圖1溫度對(duì)BglB酶活性的影響圖2BglB酶的熱穩(wěn)定性注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時(shí)間后通過(guò)其活性

43、的保持程度來(lái)反映的.利用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性在PCR擴(kuò)增bglB基因的過(guò)程中，加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過(guò)篩選，可獲得能表達(dá)出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。(5)與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌相比，上述育種技術(shù)獲取熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR過(guò)程中_(多選)。A僅針對(duì)bglB基因進(jìn)行誘變BbglB基因產(chǎn)生了定向突變CbglB基因可快速累積突變DbglB基因突變不會(huì)導(dǎo)致酶的氨基酸數(shù)目改變8(1)嗜熱土壤芽胞桿菌(2)Nde BamH(3)轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶(4)失活B(5)A、C解析 (1)bglB基因存在于嗜熱土

44、壤芽胞桿菌基因組中，故應(yīng)以該菌的基因組DNA為模板進(jìn)行基因擴(kuò)增。(2)目的基因與質(zhì)粒進(jìn)行重組時(shí)，需將目的基因插入到啟動(dòng)子和終止子之間，且應(yīng)靠近啟動(dòng)子和終止子，結(jié)合示意圖可知，應(yīng)在擴(kuò)增的bglB基因兩端分別引入Nde和BamH兩種限制酶的識(shí)別序列。(3)該基因表達(dá)載體中含有bglB基因，可表達(dá)產(chǎn)生­葡萄糖苷酶，其可分解纖維素，這樣大腸桿菌就獲得了分解纖維素的能力。(4)由圖2可知，BglB酶在80 保溫30分鐘后，就會(huì)失活；由圖1可知，當(dāng)溫度為6070 時(shí)，酶活性較高，而由圖2可知70 時(shí)保溫30分鐘，酶活性開(kāi)始減弱，而60 保溫30分鐘后酶活性基本不發(fā)生變化，由此可知為高效利用Bgl

45、B酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好應(yīng)控制在60 ，故選B。(5)在bglB基因擴(kuò)增過(guò)程中加入誘變劑進(jìn)行誘變處理，相比于誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌，針對(duì)性更強(qiáng)；基因突變是不定向的；由于PCR過(guò)程基因擴(kuò)增即DNA復(fù)制快速進(jìn)行，發(fā)生突變后可進(jìn)行快速積累，進(jìn)而便于篩選；基因突變可能導(dǎo)致氨基酸數(shù)目的改變，如突變后的密碼子變?yōu)榻K止密碼子，可導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成提前終止，進(jìn)而導(dǎo)致氨基酸數(shù)目變少。402014·新課標(biāo)全國(guó)卷 生物選修3：現(xiàn)代生物科技專題植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列問(wèn)題：(1)理論上

46、，基因組文庫(kù)含有生物的_基因；而cDNA文庫(kù)中含有生物的_基因。(2)若要從植物甲中獲得耐旱基因，可首先建立該植物的基因組文庫(kù)，再?gòu)闹衉出所需的耐旱基因。(3)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌，并通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入植物_的體細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)一系列的過(guò)程得到再生植株。要確認(rèn)該耐旱基因是否在再生植株中正確表達(dá)，應(yīng)檢測(cè)此再生植株中該基因的_，如果檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，再在田間試驗(yàn)中檢測(cè)植株的_是否得到提高。(4)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為31時(shí)，則可推測(cè)該耐旱基因整合到了_(填“同源染色體的一條上”或“同源染色體的兩條上”)。40(1)全部部分(2)篩選(3)乙表達(dá)產(chǎn)物耐

47、旱性(4)同源染色體的一條上解析 (1)基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)，基因組文庫(kù)包含生物基因組的全部基因，cDNA文庫(kù)是以mRNA反轉(zhuǎn)錄后構(gòu)建的，只含有已經(jīng)表達(dá)的基因，即部分基因。(2)從基因文庫(kù)中獲取目的基因需要進(jìn)行篩選。(3)要提高植物乙的耐旱性，需要利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將耐旱基因?qū)胫参镆业捏w細(xì)胞中。要確認(rèn)目的基因是否表達(dá)，可檢測(cè)是否產(chǎn)生了目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，即耐旱的相關(guān)蛋白質(zhì)；也可以通過(guò)個(gè)體的表現(xiàn)型來(lái)檢測(cè)，即觀察檢測(cè)其耐旱性情況。(4)如果耐旱基因整合到同源染色體的兩條上，相當(dāng)于耐旱純合子，則子代將全部表現(xiàn)為耐旱，不會(huì)出現(xiàn)性狀分離；如果耐旱基因整合到同源染色體的一條上，則轉(zhuǎn)基因植株

48、的基因型相當(dāng)于雜合子，自交后代出現(xiàn)耐旱不耐旱31的性狀分離比。362014·山東卷 【生物現(xiàn)代生物科技專題】人組織纖溶酶原激活物(htPA)是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得。流程如下：(1)htPA基因與載體用_切割后，通過(guò)DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。檢測(cè)目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用_技術(shù)。(2)為獲取更多的卵(母)細(xì)胞，要對(duì)供體母羊注射促性腺激素，使其_。采集的精子需要經(jīng)過(guò)_，才具備受精能力。(3)將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是_。為了獲得母羊，移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行_。利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個(gè)轉(zhuǎn)基因個(gè)

49、體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的_。(4)若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測(cè)到_，說(shuō)明目的基因成功表達(dá)。36(1)同種限制性核酸內(nèi)切酶(或同種限制酶)DNA分子雜交(或核酸探針)(2)超數(shù)排卵獲能(處理)(3)顯微注射法性別鑒定全能性(4)htPA(或人組織纖溶酶原激活物)解析 (1)基因工程中，重組表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)，需用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和載體，以得到相同的黏性末端便于連接。檢測(cè)目的基因是否插入受體細(xì)胞DNA的常用方法是DNA分子雜交技術(shù)(或核酸探針技術(shù))。(2)胚胎工程中，對(duì)供體母羊通常注射促性腺激素以促使其超數(shù)排卵，從而獲得更多的卵(母)細(xì)胞；采集的精子并不具備受精能力，需要在體外

50、獲能處理后，才具備該能力。(3)將重組表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用的方法是顯微注射法。在胚胎移植前，需對(duì)胚胎進(jìn)行性別鑒定以獲得所需性別的子代個(gè)體。利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個(gè)轉(zhuǎn)基因個(gè)體，體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的全能性。(4)基因工程中，目的基因是否成功表達(dá)的標(biāo)志是轉(zhuǎn)基因生物是否產(chǎn)生了目的基因控制合成的蛋白質(zhì)。33 2014·福建卷 生物現(xiàn)代生物科技專題 Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞?？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：(1)步驟中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的_。(2)步驟中，重組胚胎培養(yǎng)到_期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES

51、細(xì)胞。(3)步驟中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體?？梢愿鶕?jù)Rag2基因的_設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。用Hind和Pst限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有_酶的酶切位點(diǎn)。(4)為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的_，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。33(1)細(xì)胞核(2)囊胚(3)核苷酸序列Hind和Pst(4)蛋白質(zhì)解析 (1)步驟是核移植過(guò)程，是將上皮細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核卵母細(xì)胞。(2)重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出 ES 細(xì)胞。(3)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其條件是模板DNA、據(jù)Rag2基因的核苷