第四講酶催化、生物催化與微生物

1、12 酶是生物催化劑，生物催化劑不僅包括從酶是生物催化劑，生物催化劑不僅包括從生物體（微生物、動(dòng)物、植物）中提取的生物體（微生物、動(dòng)物、植物）中提取的各種各種游離酶游離酶，還包括可以直接作為酶源使，還包括可以直接作為酶源使用的各種用的各種生物細(xì)胞生物細(xì)胞、固定化的酶固定化的酶和和固定化固定化細(xì)胞。細(xì)胞。3 因此生物催化劑可以是微生物、動(dòng)物、植因此生物催化劑可以是微生物、動(dòng)物、植物的物的整體細(xì)胞整體細(xì)胞，也可以是從細(xì)胞中提出來(lái)，也可以是從細(xì)胞中提出來(lái)的的酶酶。它們可以游離的形式使用，也可以。它們可以游離的形式使用，也可以采用固定化技術(shù)將其固定在多孔介質(zhì)表面采用固定化技術(shù)將其固定在多孔介質(zhì)表面后再

2、使用。后再使用。 4 利用酶或有機(jī)體（細(xì)胞、細(xì)胞器）作為催化利用酶或有機(jī)體（細(xì)胞、細(xì)胞器）作為催化劑實(shí)現(xiàn)化學(xué)轉(zhuǎn)化的過(guò)程，稱為劑實(shí)現(xiàn)化學(xué)轉(zhuǎn)化的過(guò)程，稱為生物催化生物催化。 生物催化中常用的有機(jī)體主要是微生物，其生物催化中常用的有機(jī)體主要是微生物，其本質(zhì)是利用微生物細(xì)胞內(nèi)的酶催化有機(jī)化合本質(zhì)是利用微生物細(xì)胞內(nèi)的酶催化有機(jī)化合物的生物轉(zhuǎn)化，又稱物的生物轉(zhuǎn)化，又稱微生物生物轉(zhuǎn)化。微生物生物轉(zhuǎn)化。 5 微生物生物轉(zhuǎn)化微生物生物轉(zhuǎn)化在有機(jī)合成中有著重要的在有機(jī)合成中有著重要的用途，它能提供廉價(jià)和多樣的生物催化用途，它能提供廉價(jià)和多樣的生物催化劑劑酶酶，或以，或以完整細(xì)胞完整細(xì)胞直接進(jìn)行生物催直接進(jìn)行生物催

3、化?；?。6 在生化反應(yīng)過(guò)程中，若采用活細(xì)胞在生化反應(yīng)過(guò)程中，若采用活細(xì)胞(包括微包括微生物、動(dòng)物、植物細(xì)胞生物、動(dòng)物、植物細(xì)胞)為催化劑時(shí)稱為催化劑時(shí)稱發(fā)酵發(fā)酵或細(xì)胞培養(yǎng)或細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程，若采用游離酶或固定化過(guò)程，若采用游離酶或固定化酶時(shí)稱為酶時(shí)稱為酶催化過(guò)程酶催化過(guò)程。7 它們的區(qū)別在于它們的區(qū)別在于發(fā)酵過(guò)程發(fā)酵過(guò)程中除得到反應(yīng)產(chǎn)中除得到反應(yīng)產(chǎn)物外，還可能得到更多的生物細(xì)胞，而物外，還可能得到更多的生物細(xì)胞，而酶酶反應(yīng)過(guò)程反應(yīng)過(guò)程中，酶則不會(huì)增長(zhǎng)。上述兩類反中，酶則不會(huì)增長(zhǎng)。上述兩類反應(yīng)過(guò)程，從催化作用的實(shí)質(zhì)看是沒(méi)有什么應(yīng)過(guò)程，從催化作用的實(shí)質(zhì)看是沒(méi)有什么區(qū)別的，利用活生物細(xì)胞作為催化劑的發(fā)區(qū)

4、別的，利用活生物細(xì)胞作為催化劑的發(fā)酵生化反應(yīng)，其實(shí)質(zhì)也是酵生化反應(yīng)，其實(shí)質(zhì)也是通過(guò)生物細(xì)胞內(nèi)通過(guò)生物細(xì)胞內(nèi)部的酶起催化作用。部的酶起催化作用。8第一節(jié)第一節(jié) 微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)的特點(diǎn)微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)的特點(diǎn) 微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)，可以采用發(fā)酵方式進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)，可以采用發(fā)酵方式進(jìn)行轉(zhuǎn)化，也可以按靜止的洗滌細(xì)胞或固定化轉(zhuǎn)化，也可以按靜止的洗滌細(xì)胞或固定化細(xì)胞等方式進(jìn)行連續(xù)生產(chǎn)。它與有機(jī)化學(xué)細(xì)胞等方式進(jìn)行連續(xù)生產(chǎn)。它與有機(jī)化學(xué)合成和酶法合成相比較有下列特點(diǎn)。合成和酶法合成相比較有下列特點(diǎn)。91 對(duì)立體結(jié)構(gòu)合成具有高度的專一選擇性對(duì)立體結(jié)構(gòu)合成具有高度的專一選擇性 微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)是一種酶的催化反

5、應(yīng)，對(duì)是一種酶的催化反應(yīng)，對(duì)底物底物(即反應(yīng)物即反應(yīng)物)作用時(shí)，具有高度的立體結(jié)作用時(shí)，具有高度的立體結(jié)構(gòu)選擇性；它不僅對(duì)結(jié)構(gòu)有構(gòu)選擇性；它不僅對(duì)結(jié)構(gòu)有化學(xué)選擇性化學(xué)選擇性和和非對(duì)映異構(gòu)體選揮性非對(duì)映異構(gòu)體選揮性，并且有嚴(yán)格的，并且有嚴(yán)格的區(qū)域區(qū)域選擇性選擇性、面選擇性面選擇性和和對(duì)映異構(gòu)體選擇性對(duì)映異構(gòu)體選擇性。10（1）化學(xué)選擇性）化學(xué)選擇性 同一微生物在不同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其轉(zhuǎn)同一微生物在不同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其轉(zhuǎn)化底物產(chǎn)生不同的化底物產(chǎn)生不同的化學(xué)選擇性化學(xué)選擇性。 NONH2NOOH紅球菌紅球菌COCl2CNNNC(10.1)(10.2)(10.3)2-甲基丁腈光氣3-氰基吡啶11 例

6、如紅球菌生長(zhǎng)在含有例如紅球菌生長(zhǎng)在含有COCl2培養(yǎng)基中，所培養(yǎng)基中，所產(chǎn) 生 的 酶 將 底 物 （產(chǎn) 生 的 酶 將 底 物 （ 1 0 . 1 ） 水 解 為 酰 胺） 水 解 為 酰 胺（10.2）；而生長(zhǎng)在含有）；而生長(zhǎng)在含有2-甲基丁腈甲基丁腈培養(yǎng)基培養(yǎng)基中，所產(chǎn)生的酶將底物（中，所產(chǎn)生的酶將底物（10.1）水解為羧酸）水解為羧酸（10.3）。）。12（2） 非對(duì)映異構(gòu)體選揮性非對(duì)映異構(gòu)體選揮性 非對(duì)映異構(gòu)體選擇性非對(duì)映異構(gòu)體選擇性是指對(duì)非對(duì)映異構(gòu)體是指對(duì)非對(duì)映異構(gòu)體的氫或基團(tuán)進(jìn)行催化反應(yīng)，導(dǎo)入一個(gè)非對(duì)的氫或基團(tuán)進(jìn)行催化反應(yīng)，導(dǎo)入一個(gè)非對(duì)映體的基團(tuán)。這類選擇性生物催化的例子，映體的

7、基團(tuán)。這類選擇性生物催化的例子，大多是對(duì)亞甲基中大多是對(duì)亞甲基中2個(gè)非對(duì)映體氫的進(jìn)行催個(gè)非對(duì)映體氫的進(jìn)行催化，導(dǎo)入一個(gè)基團(tuán)?；?，導(dǎo)入一個(gè)基團(tuán)。 13OOCH3OOCH3HO黑根霉OOCH2OHOAcOOCH2OHOAcHO新月彎孢霉(10.4)(10.5)(10.6)(10.7)黃體酮黃體酮14 例如來(lái)自黑根霉生物體的酶選擇性氧化羥例如來(lái)自黑根霉生物體的酶選擇性氧化羥基基黃體酮黃體酮（10.4）的）的11-位氫，生成位氫，生成11-羥羥基黃體酮（基黃體酮（10.5）；而來(lái)自新月彎孢霉生）；而來(lái)自新月彎孢霉生物體的酶則選擇性地氧化物體的酶則選擇性地氧化甾體化合物甾體化合物的的（10.6）的）的1

8、1-位非對(duì)映異構(gòu)體氫，形成位非對(duì)映異構(gòu)體氫，形成11-羥基化合物（羥基化合物（10.7）。）。 15（3）區(qū)域選擇性）區(qū)域選擇性 HOCOOH諾卡氏菌糞產(chǎn)堿桿菌16 應(yīng)用糞產(chǎn)堿桿菌對(duì)乙基環(huán)己烷選擇性氧化應(yīng)用糞產(chǎn)堿桿菌對(duì)乙基環(huán)己烷選擇性氧化時(shí)僅作用于時(shí)僅作用于4-位上的次甲基位上的次甲基，生成反式乙，生成反式乙基環(huán)己烷醇，側(cè)鏈不起氧化反應(yīng)；而諾卡基環(huán)己烷醇，側(cè)鏈不起氧化反應(yīng)；而諾卡氏菌對(duì)丁基環(huán)己烷選擇性氧化時(shí)，僅作用氏菌對(duì)丁基環(huán)己烷選擇性氧化時(shí)，僅作用于于環(huán)己烷的側(cè)鏈丁基環(huán)己烷的側(cè)鏈丁基，生成環(huán)己烷丁酸，生成環(huán)己烷丁酸，顯示了酶的區(qū)域選擇性氧化反應(yīng)。顯示了酶的區(qū)域選擇性氧化反應(yīng)。17（4）面選擇

9、性）面選擇性 無(wú)環(huán)無(wú)環(huán)-酮酯易被酵母還原為酮酯易被酵母還原為-羥酯，羥酯， -羥羥酯酯(這種產(chǎn)物這種產(chǎn)物)是是-內(nèi)酰胺、昆蟲(chóng)激素和類胡內(nèi)酰胺、昆蟲(chóng)激素和類胡蘿卜素等合成的手性源。蘿卜素等合成的手性源。OOR1O R2OR1O R2OR1O R2O HO H面 包 酵 母面 包 酵 母18OOR1O R2OR1O R2OR1O R2O HO H面 包 酵 母面 包 酵 母OOR1O R2OR1O R2OR1O R2O HO H面 包 酵 母面 包 酵 母R1小小 COOR2大大R1大大 COOR2小小H-H-酮酯酮酯-酮酮酯酯19 氫負(fù)離子按氫負(fù)離子按Prelog規(guī)則從空間位阻小的一規(guī)則從空間位

10、阻小的一面向羰基親核進(jìn)攻，形成穩(wěn)定的優(yōu)勢(shì)中間面向羰基親核進(jìn)攻，形成穩(wěn)定的優(yōu)勢(shì)中間體，還原醇的手性中心構(gòu)型由體，還原醇的手性中心構(gòu)型由底物結(jié)構(gòu)決底物結(jié)構(gòu)決定定，即與羰基兩側(cè)取代基的大小有關(guān)。，即與羰基兩側(cè)取代基的大小有關(guān)。 20（5）對(duì)映異構(gòu)體選擇性）對(duì)映異構(gòu)體選擇性 OHOOCCOOHHHHOHHOOCCOOHOHHHOHHOOCCOOHOHH糞產(chǎn)堿桿菌枯草桿菌(10.8)(10.9)(10.10)環(huán)氧馬來(lái)酸環(huán)氧馬來(lái)酸(S,S)-酒石酸(R,R)-酒石酸21 如 一 種 糞 產(chǎn) 堿 桿 菌如 一 種 糞 產(chǎn) 堿 桿 菌 ( A l c a l i g e n e s levotartaricu

11、s)微生物催化環(huán)氧馬來(lái)酸微生物催化環(huán)氧馬來(lái)酸(10.8)的水解反應(yīng)，其產(chǎn)物為的水解反應(yīng)，其產(chǎn)物為(S,S)-酒石酸酒石酸(10.9)；而以枯草桿菌微生物催化（；而以枯草桿菌微生物催化（10.8）的水解產(chǎn)物則為的水解產(chǎn)物則為(R,R)-酒石酸酒石酸（10.10）。）。22 這種嚴(yán)格的立體結(jié)構(gòu)選擇性，對(duì)有機(jī)合成這種嚴(yán)格的立體結(jié)構(gòu)選擇性，對(duì)有機(jī)合成特別是藥物合成來(lái)說(shuō)是非常重要的。因?yàn)樘貏e是藥物合成來(lái)說(shuō)是非常重要的。因?yàn)樗幬锏漠悩?gòu)體不僅無(wú)效或低效，并且往往藥物的異構(gòu)體不僅無(wú)效或低效，并且往往還有副作用，甚至有相反的藥效和強(qiáng)力的還有副作用，甚至有相反的藥效和強(qiáng)力的毒性。毒性。23 特別像生理活性很高的激

12、素、抗生素以及特別像生理活性很高的激素、抗生素以及心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等藥物的藥效對(duì)立心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等藥物的藥效對(duì)立體結(jié)構(gòu)的要求很高往往具有嚴(yán)格對(duì)映體體結(jié)構(gòu)的要求很高往往具有嚴(yán)格對(duì)映體構(gòu)型的要求，此為有機(jī)化學(xué)合成方法難以構(gòu)型的要求，此為有機(jī)化學(xué)合成方法難以達(dá)到的。達(dá)到的。242 微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)條件溫和、設(shè)備簡(jiǎn)單、微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)條件溫和、設(shè)備簡(jiǎn)單、公害少并且反應(yīng)速率快公害少并且反應(yīng)速率快 微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)一般都在常溫和微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)一般都在常溫和pH為為7左左右進(jìn)行催化合成，無(wú)需高壓、強(qiáng)熱等苛刻右進(jìn)行催化合成，無(wú)需高壓、強(qiáng)熱等苛刻的條件，所以設(shè)備簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和，的條件，所以設(shè)備簡(jiǎn)單，反應(yīng)

13、條件溫和，生產(chǎn)安全；原料除底物和普通培養(yǎng)基外沒(méi)生產(chǎn)安全；原料除底物和普通培養(yǎng)基外沒(méi)有其他化學(xué)品，因此一般無(wú)公害。有其他化學(xué)品，因此一般無(wú)公害。25 微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)是酶催化反應(yīng)，在最適條微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)是酶催化反應(yīng)，在最適條件下，酶能在一秒鐘內(nèi)使件下，酶能在一秒鐘內(nèi)使102106個(gè)底物個(gè)底物分子轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物。分子轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物。 263 微生物轉(zhuǎn)化收率高、成本低微生物轉(zhuǎn)化收率高、成本低 微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)是在全細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，保持微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)是在全細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，保持原有整體酶系統(tǒng)比較符合生物催化所需環(huán)原有整體酶系統(tǒng)比較符合生物催化所需環(huán)境與條件，在境與條件，在氧化氧化-還原還原等催化反應(yīng)時(shí)不需等催化反應(yīng)時(shí)不需添

14、加輔酶（輔酶非常不穩(wěn)定，難以分離制添加輔酶（輔酶非常不穩(wěn)定，難以分離制取，這是酶法合成中很難補(bǔ)救的）。取，這是酶法合成中很難補(bǔ)救的）。27 微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)可以持續(xù)進(jìn)行，反應(yīng)量大，微生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)可以持續(xù)進(jìn)行，反應(yīng)量大，收率高，可以大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。加上設(shè)備收率高，可以大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。加上設(shè)備和原料簡(jiǎn)單易得等優(yōu)點(diǎn)，生產(chǎn)成本不僅低和原料簡(jiǎn)單易得等優(yōu)點(diǎn)，生產(chǎn)成本不僅低于酶法合成，并且也低于化學(xué)合成。于酶法合成，并且也低于化學(xué)合成。284 微生物轉(zhuǎn)化可以減少反應(yīng)步驟微生物轉(zhuǎn)化可以減少反應(yīng)步驟 通過(guò)酶合成基因構(gòu)建得到的基因工程菌，通過(guò)酶合成基因構(gòu)建得到的基因工程菌，可以將原需幾步催化中間體過(guò)程在一次發(fā)可以將

15、原需幾步催化中間體過(guò)程在一次發(fā)酵中轉(zhuǎn)化完成。酵中轉(zhuǎn)化完成。 將幾步中間體合成中轉(zhuǎn)化酶的合成基因，將幾步中間體合成中轉(zhuǎn)化酶的合成基因，通過(guò)基因構(gòu)建于同一個(gè)工程菌中，在發(fā)酵通過(guò)基因構(gòu)建于同一個(gè)工程菌中，在發(fā)酵法轉(zhuǎn)化時(shí)需幾步催化合成的中間體就能一法轉(zhuǎn)化時(shí)需幾步催化合成的中間體就能一步轉(zhuǎn)化成功。步轉(zhuǎn)化成功。29 例如維生素例如維生素C生物合成中基因重組生物合成中基因重組葡萄糖酸葡萄糖酸氧化桿菌氧化桿菌的代謝工程菌，將的代謝工程菌，將L- -山梨糖脫氫山梨糖脫氫酶基因酶基因和和L- -山梨酮脫氫酶山梨酮脫氫酶基因，通過(guò)基因基因，通過(guò)基因重組構(gòu)建成一個(gè)代謝工程菌，發(fā)酵可以在重組構(gòu)建成一個(gè)代謝工程菌，發(fā)酵可

16、以在同一次轉(zhuǎn)化發(fā)酵中將同一次轉(zhuǎn)化發(fā)酵中將D-山梨醇轉(zhuǎn)化成山梨醇轉(zhuǎn)化成-酮酮-L-古洛糖酸古洛糖酸。30第二節(jié)第二節(jié) 生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)方法生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)方法 1 生物催化劑的來(lái)源與制備方法生物催化劑的來(lái)源與制備方法 2 微生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)過(guò)程微生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)過(guò)程 3 微生物轉(zhuǎn)化方法微生物轉(zhuǎn)化方法 4 微生物轉(zhuǎn)化的影響因素微生物轉(zhuǎn)化的影響因素 5 產(chǎn)物的檢測(cè)與分離純化產(chǎn)物的檢測(cè)與分離純化 6 對(duì)映體過(guò)量對(duì)映體過(guò)量311 生物催化劑的來(lái)源與制備方法生物催化劑的來(lái)源與制備方法 離體酶主要來(lái)源于動(dòng)物、植物、微生物等離體酶主要來(lái)源于動(dòng)物、植物、微生物等的含酶細(xì)胞、組織或器官，通過(guò)提取法可的含酶細(xì)胞、組織或器官，通過(guò)提

17、取法可制得多種離體酶。制得多種離體酶。32 例如，從動(dòng)物胃中提取分離例如，從動(dòng)物胃中提取分離胃蛋白酶胃蛋白酶；從；從動(dòng)物胰臟中提取動(dòng)物胰臟中提取胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶脂肪酶，或這些酶的混合制劑胰酶；從動(dòng)，或這些酶的混合制劑胰酶；從動(dòng)物血液中提取物血液中提取超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶（SOD）；）；從木瓜中提取從木瓜中提取木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶；從波蘿中提??；從波蘿中提取波蘿蛋白酶波蘿蛋白酶；從大腸桿菌中提??；從大腸桿菌中提取谷氨酰胺谷氨酰胺酶酶等。等。33 完整細(xì)胞主要來(lái)自于微生物，通過(guò)微生物完整細(xì)胞主要來(lái)自于微生物，通過(guò)微生物發(fā)酵法來(lái)制備各種含酶細(xì)胞。例如以釀酒發(fā)

18、酵法來(lái)制備各種含酶細(xì)胞。例如以釀酒酵母為菌種進(jìn)行發(fā)酵，可得到含有酵母為菌種進(jìn)行發(fā)酵，可得到含有丙酮酸丙酮酸脫羧酶脫羧酶和和乙醇脫氫酶乙醇脫氫酶等多種酶和輔酶的酵等多種酶和輔酶的酵母細(xì)胞。母細(xì)胞。34 有機(jī)合成中所用的酶一般為粗品，其酶含有機(jī)合成中所用的酶一般為粗品，其酶含量?jī)H有量?jī)H有130，其余是無(wú)活性的蛋白質(zhì)、，其余是無(wú)活性的蛋白質(zhì)、穩(wěn)定劑、鹽或者含有提取過(guò)程中混雜進(jìn)來(lái)穩(wěn)定劑、鹽或者含有提取過(guò)程中混雜進(jìn)來(lái)的多糖。的多糖。酶的粗品比純品更為穩(wěn)定，但粗酶的粗品比純品更為穩(wěn)定，但粗酶催化反應(yīng)的副產(chǎn)物多酶催化反應(yīng)的副產(chǎn)物多。隨著蛋白質(zhì)分離。隨著蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)的發(fā)展，生物催化反應(yīng)中純酶的純化技術(shù)的

19、發(fā)展，生物催化反應(yīng)中純酶的使用正在逐步增加。使用正在逐步增加。352 微生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)過(guò)程微生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)過(guò)程 微生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的簡(jiǎn)要過(guò)程如下：微生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的簡(jiǎn)要過(guò)程如下： 選擇菌種選擇菌種成熟菌絲或孢子的培養(yǎng)成熟菌絲或孢子的培養(yǎng)選擇選擇適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)化方式適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)化方式轉(zhuǎn)化培養(yǎng)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)(即生物轉(zhuǎn)化即生物轉(zhuǎn)化)或或轉(zhuǎn)化菌絲及孢子懸浮液轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化菌絲及孢子懸浮液轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化液的分轉(zhuǎn)化液的分離提取離提取產(chǎn)品精制產(chǎn)品精制 36（1）選擇菌種）選擇菌種 選好菌種是進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)的關(guān)鍵步驟選好菌種是進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)的關(guān)鍵步驟；可；可以根據(jù)轉(zhuǎn)化反應(yīng)類型，選擇能產(chǎn)生催化這以根據(jù)轉(zhuǎn)化反應(yīng)類型，選擇能產(chǎn)生催化這類反應(yīng)酶的微生物。一般

20、可向國(guó)家、地方類反應(yīng)酶的微生物。一般可向國(guó)家、地方保管菌種委員會(huì)或?qū)W校、研究機(jī)關(guān)去函索保管菌種委員會(huì)或?qū)W校、研究機(jī)關(guān)去函索取、購(gòu)買。取、購(gòu)買。37（2）配制培養(yǎng)基）配制培養(yǎng)基 一般要求培養(yǎng)基的成分能使菌絲生長(zhǎng)豐滿一般要求培養(yǎng)基的成分能使菌絲生長(zhǎng)豐滿和富含需要的酶。按轉(zhuǎn)化菌種的培養(yǎng)特征和富含需要的酶。按轉(zhuǎn)化菌種的培養(yǎng)特征和轉(zhuǎn)化反應(yīng)需要配制培養(yǎng)基。和轉(zhuǎn)化反應(yīng)需要配制培養(yǎng)基。 為成熟菌絲或孢子的培養(yǎng)做準(zhǔn)備。為成熟菌絲或孢子的培養(yǎng)做準(zhǔn)備。38（3）投轉(zhuǎn)化底物）投轉(zhuǎn)化底物 選擇適當(dāng)?shù)木晟L(zhǎng)期加底物，并考慮選選擇適當(dāng)?shù)木晟L(zhǎng)期加底物，并考慮選擇加底物的方法擇加底物的方法(例如固體加料或液體加料例如固體

21、加料或液體加料)和方式和方式(例如連續(xù)或間歇加料例如連續(xù)或間歇加料)。39（4）添加刺激劑或抑制劑）添加刺激劑或抑制劑 添加刺激劑的目的是提高酶活力和增加酶添加刺激劑的目的是提高酶活力和增加酶生長(zhǎng)量。添加抑制劑的目的是抑制酶副反生長(zhǎng)量。添加抑制劑的目的是抑制酶副反應(yīng)或抑制其他對(duì)反應(yīng)不良酶的生長(zhǎng)。應(yīng)或抑制其他對(duì)反應(yīng)不良酶的生長(zhǎng)。 40(5) 轉(zhuǎn)化過(guò)程中各項(xiàng)影響因素的控制轉(zhuǎn)化過(guò)程中各項(xiàng)影響因素的控制 例如開(kāi)始加底物時(shí)間，加入的底物和轉(zhuǎn)化例如開(kāi)始加底物時(shí)間，加入的底物和轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物在轉(zhuǎn)化環(huán)境中最大穩(wěn)定的滯留時(shí)間；的產(chǎn)物在轉(zhuǎn)化環(huán)境中最大穩(wěn)定的滯留時(shí)間；適宜的轉(zhuǎn)化溫度；適宜的轉(zhuǎn)化溫度；pH值和菌絲濃度等。

22、值和菌絲濃度等。 41（6）轉(zhuǎn)化反應(yīng)終點(diǎn)的控制）轉(zhuǎn)化反應(yīng)終點(diǎn)的控制 根據(jù)影響轉(zhuǎn)化反應(yīng)的各種因素，控制好轉(zhuǎn)根據(jù)影響轉(zhuǎn)化反應(yīng)的各種因素，控制好轉(zhuǎn)化反應(yīng)培養(yǎng)終點(diǎn)，使底物轉(zhuǎn)化達(dá)最大反應(yīng)化反應(yīng)培養(yǎng)終點(diǎn)，使底物轉(zhuǎn)化達(dá)最大反應(yīng)完全值。當(dāng)取樣分析反映轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)完全值。當(dāng)取樣分析反映轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)化產(chǎn)物積累量不再增加時(shí)，立刻采用物理化產(chǎn)物積累量不再增加時(shí)，立刻采用物理方法將菌絲體方法將菌絲體(包括轉(zhuǎn)化反應(yīng)的胞外酶包括轉(zhuǎn)化反應(yīng)的胞外酶)及培及培養(yǎng)物除去來(lái)停止轉(zhuǎn)化反應(yīng)。養(yǎng)物除去來(lái)停止轉(zhuǎn)化反應(yīng)。42（7）分離精制轉(zhuǎn)化產(chǎn)物）分離精制轉(zhuǎn)化產(chǎn)物 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物已與生物轉(zhuǎn)化系統(tǒng)分開(kāi)，可按化轉(zhuǎn)化產(chǎn)物已與生物轉(zhuǎn)化系統(tǒng)分開(kāi)，可按化學(xué)

23、方法將產(chǎn)物分離精制。一般來(lái)說(shuō)轉(zhuǎn)化過(guò)學(xué)方法將產(chǎn)物分離精制。一般來(lái)說(shuō)轉(zhuǎn)化過(guò)濾液中雜質(zhì)含量大，產(chǎn)物濃度低。濾液中雜質(zhì)含量大，產(chǎn)物濃度低。 43微生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)過(guò)程微生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)過(guò)程 選擇菌種選擇菌種 成熟菌絲或孢子的培養(yǎng)成熟菌絲或孢子的培養(yǎng) 選擇適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)化方式？選擇適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)化方式？ 轉(zhuǎn)化培養(yǎng)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)(即生物轉(zhuǎn)化即生物轉(zhuǎn)化)或轉(zhuǎn)化菌絲及孢子懸或轉(zhuǎn)化菌絲及孢子懸浮液轉(zhuǎn)化浮液轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化液的分離提取轉(zhuǎn)化液的分離提取 產(chǎn)品精制產(chǎn)品精制443 微生物轉(zhuǎn)化方法微生物轉(zhuǎn)化方法 生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法 靜止細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法靜止細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法 固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化法固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化法45生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)

24、轉(zhuǎn)化法 生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法，是在微生物細(xì)胞培轉(zhuǎn)化法，是在微生物細(xì)胞培養(yǎng)前或培養(yǎng)一段時(shí)間后，直接將養(yǎng)前或培養(yǎng)一段時(shí)間后，直接將底物底物投入投入到微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，利用微生物自身到微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，利用微生物自身繁殖生長(zhǎng)的同時(shí)對(duì)底物進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化。繁殖生長(zhǎng)的同時(shí)對(duì)底物進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化。 這種轉(zhuǎn)化一般在這種轉(zhuǎn)化一般在搖瓶搖瓶或或發(fā)酵罐發(fā)酵罐中進(jìn)行培養(yǎng)中進(jìn)行培養(yǎng)轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化。 46 搖瓶轉(zhuǎn)化搖瓶轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)主要用于篩選菌種和發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)主要用于篩選菌種和發(fā)酵罐放大轉(zhuǎn)化反應(yīng)條件的選擇。放大轉(zhuǎn)化反應(yīng)條件的選擇。 在通氣的條件下將微生物培養(yǎng)至生長(zhǎng)旺盛在通氣的條件下將微生物培養(yǎng)至生長(zhǎng)旺盛的的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的中期

25、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的中期，或在，或在后期后期所產(chǎn)生酶所產(chǎn)生酶的晚期時(shí)加入底物進(jìn)行轉(zhuǎn)化；極個(gè)別也有的晚期時(shí)加入底物進(jìn)行轉(zhuǎn)化；極個(gè)別也有在生長(zhǎng)早期加底物，此根據(jù)轉(zhuǎn)化需要的酶在生長(zhǎng)早期加底物，此根據(jù)轉(zhuǎn)化需要的酶生長(zhǎng)情況。生長(zhǎng)情況。47 加入的底物可以粉末狀的固體或底物的水加入的底物可以粉末狀的固體或底物的水溶液，必要時(shí)也可以應(yīng)用有機(jī)溶劑；投料溶液，必要時(shí)也可以應(yīng)用有機(jī)溶劑；投料方式可以一次或分批。方式可以一次或分批。48 生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法是最簡(jiǎn)單和最常用的生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法是最簡(jiǎn)單和最常用的一種方法，一種方法，優(yōu)點(diǎn)是微生物生物轉(zhuǎn)化容易、優(yōu)點(diǎn)是微生物生物轉(zhuǎn)化容易、效率高，缺點(diǎn)是產(chǎn)物的后處理及分離純化效率高，

26、缺點(diǎn)是產(chǎn)物的后處理及分離純化煩瑣。煩瑣。 一般適用于經(jīng)過(guò)誘變處理的微生物菌株，一般適用于經(jīng)過(guò)誘變處理的微生物菌株，它可以底物作為唯一碳源，也能適應(yīng)連續(xù)它可以底物作為唯一碳源，也能適應(yīng)連續(xù)化生產(chǎn)過(guò)程?；a(chǎn)過(guò)程。 49靜止細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法靜止細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法 靜止細(xì)胞培養(yǎng)靜止細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法，是把微生物細(xì)胞在轉(zhuǎn)化法，是把微生物細(xì)胞在一定的條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，經(jīng)離心收一定的條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，經(jīng)離心收集菌體，將菌體懸浮于水或緩沖溶液中，集菌體，將菌體懸浮于水或緩沖溶液中，然后加入底物，在適宜的溫度、然后加入底物，在適宜的溫度、pH和振蕩和振蕩條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法。條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法。50 靜止細(xì)胞

27、轉(zhuǎn)化法是靜止細(xì)胞轉(zhuǎn)化法是將一種生長(zhǎng)影響減至最將一種生長(zhǎng)影響減至最小情況下進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化小情況下進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化。 它通過(guò)提高菌絲體濃度可以達(dá)到加快轉(zhuǎn)化它通過(guò)提高菌絲體濃度可以達(dá)到加快轉(zhuǎn)化速率的目的。速率的目的。51 應(yīng)用應(yīng)用干細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化干細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化是另一種靜止細(xì)胞轉(zhuǎn)是另一種靜止細(xì)胞轉(zhuǎn)化法，便于貯備隨時(shí)使用。干細(xì)胞制備有化法，便于貯備隨時(shí)使用。干細(xì)胞制備有兩種方法，兩種方法，冷凍干燥法冷凍干燥法和和丙酮干粉制備法。丙酮干粉制備法。 靜止細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法的優(yōu)點(diǎn)是靜止細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法的優(yōu)點(diǎn)是產(chǎn)物后處理產(chǎn)物后處理簡(jiǎn)單、沒(méi)有培養(yǎng)基成分的污染，缺點(diǎn)是增簡(jiǎn)單、沒(méi)有培養(yǎng)基成分的污染，缺點(diǎn)是增加了額外的菌體收集與重懸

28、過(guò)程。加了額外的菌體收集與重懸過(guò)程。52固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化法固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化法 固定化細(xì)胞固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化法是指利用化學(xué)或物理手轉(zhuǎn)化法是指利用化學(xué)或物理手段將段將游離的細(xì)胞游離的細(xì)胞定位于限定的空間區(qū)域并定位于限定的空間區(qū)域并使其保持活性及可以反復(fù)使用的特性，然使其保持活性及可以反復(fù)使用的特性，然后用于催化有機(jī)化合物的生物轉(zhuǎn)化得到所后用于催化有機(jī)化合物的生物轉(zhuǎn)化得到所需產(chǎn)物的方法。需產(chǎn)物的方法。 53 制取固定化細(xì)胞的方法分為兩大類：制取固定化細(xì)胞的方法分為兩大類： 將細(xì)胞與固定材料通過(guò)化學(xué)反應(yīng)相結(jié)合或?qū)⒓?xì)胞與固定材料通過(guò)化學(xué)反應(yīng)相結(jié)合或分子鍵的締合，稱分子鍵的締合，稱共價(jià)鍵合共價(jià)鍵合； 將整個(gè)細(xì)胞包

29、埋在膠質(zhì)材料（如角叉菜膠、將整個(gè)細(xì)胞包埋在膠質(zhì)材料（如角叉菜膠、卡拉膠和海藻膠等）內(nèi)，稱卡拉膠和海藻膠等）內(nèi)，稱包埋法包埋法。 54 目前獲得廣泛應(yīng)用的固定化方法有聚丙烯目前獲得廣泛應(yīng)用的固定化方法有聚丙烯酰胺聚合的固定化方法和角叉菜膠的包埋酰胺聚合的固定化方法和角叉菜膠的包埋法，其固定化細(xì)胞也可懸浮于培養(yǎng)基中發(fā)法，其固定化細(xì)胞也可懸浮于培養(yǎng)基中發(fā)酵生長(zhǎng)同時(shí)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，以保證輔酶的酵生長(zhǎng)同時(shí)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，以保證輔酶的再生以及新活細(xì)胞的生長(zhǎng)。再生以及新活細(xì)胞的生長(zhǎng)。55 固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化最大優(yōu)點(diǎn)固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化最大優(yōu)點(diǎn)可以長(zhǎng)期反復(fù)使可以長(zhǎng)期反復(fù)使用用，有的能維持有效催化達(dá)數(shù)月之久，還，有的能維持有

30、效催化達(dá)數(shù)月之久，還有有分離純化容易分離純化容易，因此便于自動(dòng)化和大規(guī)，因此便于自動(dòng)化和大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)；模工業(yè)生產(chǎn)； 缺點(diǎn)缺點(diǎn)是固定化細(xì)胞的生物轉(zhuǎn)化活性比游離是固定化細(xì)胞的生物轉(zhuǎn)化活性比游離細(xì)胞的生物活性低。細(xì)胞的生物活性低。 564 微生物轉(zhuǎn)化的影響因素微生物轉(zhuǎn)化的影響因素 微生物生物轉(zhuǎn)化最重要的步驟是微生物生物轉(zhuǎn)化最重要的步驟是底物與催底物與催化反應(yīng)的酶之間的相互接觸化反應(yīng)的酶之間的相互接觸，而參與生物，而參與生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)的微生物酶一般是轉(zhuǎn)化反應(yīng)的微生物酶一般是微生物胞內(nèi)酶，微生物胞內(nèi)酶，底物必須能透過(guò)細(xì)胞壁和細(xì)胞膜底物必須能透過(guò)細(xì)胞壁和細(xì)胞膜。57 因此底物添加方法對(duì)轉(zhuǎn)化率有很大影響，因

31、此底物添加方法對(duì)轉(zhuǎn)化率有很大影響，必須考慮底物的各種性質(zhì)必須考慮底物的各種性質(zhì) 如如滲透性滲透性、溶解性溶解性、穩(wěn)定性穩(wěn)定性及毒性等。及毒性等。58 如果添加能溶于水的底物到培養(yǎng)基中進(jìn)行如果添加能溶于水的底物到培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)化是比較容易的，主要注意的問(wèn)題是轉(zhuǎn)化是比較容易的，主要注意的問(wèn)題是加加底物量的多少，添加的速度和底物對(duì)轉(zhuǎn)化底物量的多少，添加的速度和底物對(duì)轉(zhuǎn)化的微生物是否有毒性的微生物是否有毒性。 應(yīng)用含酶活力強(qiáng)和含酶量多的微生物進(jìn)行應(yīng)用含酶活力強(qiáng)和含酶量多的微生物進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)，添加底物的速度可以快，添加底轉(zhuǎn)化時(shí)，添加底物的速度可以快，添加底物的量也可以多。物的量也可以多。59 對(duì)一般微生物

32、轉(zhuǎn)化來(lái)說(shuō)，非離子化合物的對(duì)一般微生物轉(zhuǎn)化來(lái)說(shuō)，非離子化合物的底物底物最大投料質(zhì)量濃度約為最大投料質(zhì)量濃度約為10；對(duì)離子；對(duì)離子化合物的底物最大的投料質(zhì)量濃度約化合物的底物最大的投料質(zhì)量濃度約5。 60 此外，不同的微生物對(duì)有毒的底物的忍受此外，不同的微生物對(duì)有毒的底物的忍受力是不一樣的，添加底物速度與添加量要力是不一樣的，添加底物速度與添加量要低于微生物的忍受量；低于微生物的忍受量；一般在微生物生長(zhǎng)一般在微生物生長(zhǎng)期耐受有毒底物的能力比較低。期耐受有毒底物的能力比較低。61 必須注意的是即使非毒性的底物，當(dāng)轉(zhuǎn)化必須注意的是即使非毒性的底物，當(dāng)轉(zhuǎn)化到積累至大量時(shí)，也能產(chǎn)生對(duì)轉(zhuǎn)化微生物到積累至大

33、量時(shí)，也能產(chǎn)生對(duì)轉(zhuǎn)化微生物的抑制作用。的抑制作用。最好隨時(shí)分離轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。最好隨時(shí)分離轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。 例如采用兩相例如采用兩相(水、有機(jī)溶劑水、有機(jī)溶劑)轉(zhuǎn)化法或固定轉(zhuǎn)化法或固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化法?；?xì)胞轉(zhuǎn)化法。62 如果如果添加不能溶于水的底物添加不能溶于水的底物是比添加水溶是比添加水溶性的底物要困難得多?？梢圆捎枚喾N方法性的底物要困難得多?？梢圆捎枚喾N方法加以克服：加以克服：63 （1）用細(xì)粉末狀的固體投料。用細(xì)粉末狀的固體投料。這樣可使轉(zhuǎn)這樣可使轉(zhuǎn)化細(xì)胞和粉末底物之間有最佳的接觸面積?；?xì)胞和粉末底物之間有最佳的接觸面積。若要轉(zhuǎn)化氣體狀態(tài)的碳?xì)浠衔锶粢D(zhuǎn)化氣體狀態(tài)的碳?xì)浠衔?如甲烷如甲烷)，以氣

34、泡形式從底部通氣，使泡慢慢通過(guò)轉(zhuǎn)以氣泡形式從底部通氣，使泡慢慢通過(guò)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基來(lái)增加相互接觸面積，獲得良好化培養(yǎng)基來(lái)增加相互接觸面積，獲得良好的轉(zhuǎn)化效果。的轉(zhuǎn)化效果。64 （2）利用非毒性表面活性劑利用非毒性表面活性劑 利用非毒性利用非毒性表面活性劑如表面活性劑如吐溫吐溫80類類也能分散不溶性底也能分散不溶性底物，增加轉(zhuǎn)化細(xì)胞和底物相間接觸。物，增加轉(zhuǎn)化細(xì)胞和底物相間接觸。 65 (3) 利用無(wú)毒性溶劑利用無(wú)毒性溶劑 如如95%乙醇、丙酮、乙醇、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺和二甲亞砜等來(lái)溶解底二甲基甲酰胺和二甲亞砜等來(lái)溶解底物，這是較理想的辦法；但是這類有機(jī)溶物，這是較理想的辦法；但是這類有機(jī)溶劑

35、在水中的溶解度很大，且底物濃度很高，劑在水中的溶解度很大，且底物濃度很高，因此每次添加的量應(yīng)盡量的少，最好在添因此每次添加的量應(yīng)盡量的少，最好在添加底物前測(cè)定該有機(jī)溶劑的忍耐度。加底物前測(cè)定該有機(jī)溶劑的忍耐度。66 另外，在培養(yǎng)菌絲體和轉(zhuǎn)化過(guò)程中的適當(dāng)另外，在培養(yǎng)菌絲體和轉(zhuǎn)化過(guò)程中的適當(dāng)階段，有時(shí)另加誘導(dǎo)物，促進(jìn)劑或抑制劑階段，有時(shí)另加誘導(dǎo)物，促進(jìn)劑或抑制劑來(lái)促進(jìn)酶的生成，提高酶的轉(zhuǎn)化活力或抑來(lái)促進(jìn)酶的生成，提高酶的轉(zhuǎn)化活力或抑制副反應(yīng)產(chǎn)生。制副反應(yīng)產(chǎn)生。675 產(chǎn)物的檢測(cè)與分離純化產(chǎn)物的檢測(cè)與分離純化 在生物轉(zhuǎn)化過(guò)程中底物的減少或產(chǎn)物的增在生物轉(zhuǎn)化過(guò)程中底物的減少或產(chǎn)物的增加可采用薄層色譜法

36、加可采用薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜、高效液相色譜法法(HPLC)或氣相色譜法或氣相色譜法(GC)等分析技術(shù)進(jìn)等分析技術(shù)進(jìn)行鑒定。行鑒定。68 根據(jù)分析結(jié)果可以隨時(shí)判斷生物轉(zhuǎn)化進(jìn)行根據(jù)分析結(jié)果可以隨時(shí)判斷生物轉(zhuǎn)化進(jìn)行的程度，確定底物的最高轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)物的的程度，確定底物的最高轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)物的收率等，得出生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)的最佳條件。收率等，得出生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)的最佳條件。69 產(chǎn)物的分離純化產(chǎn)物的分離純化一般先將微生物細(xì)胞與轉(zhuǎn)一般先將微生物細(xì)胞與轉(zhuǎn)化液相分離化液相分離，常采用抽濾或離心法（固定，常采用抽濾或離心法（固定化細(xì)胞轉(zhuǎn)化法則可省去此步驟）?；?xì)胞轉(zhuǎn)化法則可省去此步驟）。 然后用有機(jī)溶劑從濾液中

37、萃取轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，然后用有機(jī)溶劑從濾液中萃取轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，若為非中性產(chǎn)物則應(yīng)調(diào)節(jié)溶液若為非中性產(chǎn)物則應(yīng)調(diào)節(jié)溶液pH值，以提值，以提高萃取效率。高萃取效率。 70 雖然生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物絕大多數(shù)存在于轉(zhuǎn)化液雖然生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物絕大多數(shù)存在于轉(zhuǎn)化液中，但在菌絲體中也會(huì)殘留一些，因此很中，但在菌絲體中也會(huì)殘留一些，因此很有有必要用有機(jī)溶劑對(duì)菌絲體萃取必要用有機(jī)溶劑對(duì)菌絲體萃取12次次，以，以提高轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的收率。提高轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的收率。71 真菌類轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的分離一般先采用真菌類轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的分離一般先采用離心或離心或抽濾法抽濾法將菌絲體與轉(zhuǎn)化液相互分離；將菌絲體與轉(zhuǎn)化液相互分離； 但細(xì)菌類轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的分離一般則不需要采但細(xì)菌類轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的分離一般則不需要采用分離步驟，可直接用有機(jī)溶劑萃取產(chǎn)物。用分離步驟，可直接用有機(jī)溶劑萃取產(chǎn)物。直接用有機(jī)溶劑萃取可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)物中含直接用有機(jī)溶劑萃取可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)物中含有少量細(xì)胞組分。有少量細(xì)胞組分。72 萃取所得粗品需進(jìn)一步的分離純化才能得萃取所得粗品需進(jìn)一步的分離純化才能得到純品。到純品。 常用的精制方法有重結(jié)晶、柱層析法和色常用的精制方法有重結(jié)晶、柱層析法和色譜法等。譜法等。736 對(duì)映體過(guò)量對(duì)映體過(guò)量 有機(jī)合成中常用有機(jī)合成中常用化學(xué)產(chǎn)率化學(xué)產(chǎn)率(yield)來(lái)描述有來(lái)描述有機(jī)合成反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，產(chǎn)率是指實(shí)際產(chǎn)機(jī)合成反應(yīng)