雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)（教學(xué)課件）

1、2021/4/26專業(yè) 課件12021/4/26專業(yè) 課件2實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄實(shí)驗(yàn)記錄是在進(jìn)行科學(xué)研究過(guò)程中積累資料、經(jīng)驗(yàn)的一項(xiàng)重要工作，每一次實(shí)驗(yàn)過(guò)程實(shí)驗(yàn)記錄是在進(jìn)行科學(xué)研究過(guò)程中積累資料、經(jīng)驗(yàn)的一項(xiàng)重要工作，每一次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中都應(yīng)當(dāng)養(yǎng)成良好的習(xí)慣，及時(shí)做好記錄和總結(jié)。中都應(yīng)當(dāng)養(yǎng)成良好的習(xí)慣，及時(shí)做好記錄和總結(jié)。要求：要求： 真實(shí)性真實(shí)性 原始性原始性 完整性完整性 條理性條理性實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)整理和總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)整理和總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括：實(shí)驗(yàn)題目、實(shí)驗(yàn)?zāi)康睦ǎ簩?shí)驗(yàn)題目、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、實(shí)驗(yàn)

2、日期、操作步驟與條件、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、討論和結(jié)、實(shí)驗(yàn)日期、操作步驟與條件、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、討論和結(jié)論等項(xiàng)目。論等項(xiàng)目。2021/4/26專業(yè) 課件3實(shí)驗(yàn)室規(guī)則實(shí)驗(yàn)室規(guī)則 上實(shí)驗(yàn)課時(shí)不遲到，不早退，自覺(jué)遵守課堂紀(jì)律，上課時(shí)應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)室安靜，不得大上實(shí)驗(yàn)課時(shí)不遲到，不早退，自覺(jué)遵守課堂紀(jì)律，上課時(shí)應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)室安靜，不得大聲說(shuō)笑。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿實(shí)驗(yàn)工作服。聲說(shuō)笑。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿實(shí)驗(yàn)工作服。 實(shí)驗(yàn)課前認(rèn)真預(yù)習(xí)有關(guān)課程，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、要求和注意事?xiàng)，熟悉實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法實(shí)驗(yàn)課前認(rèn)真預(yù)習(xí)有關(guān)課程，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、要求和注意事?xiàng)，熟悉實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法步驟。步驟。 實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，按教師要求，認(rèn)真操作。要細(xì)心觀察

3、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，認(rèn)真記實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，按教師要求，認(rèn)真操作。要細(xì)心觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，認(rèn)真記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，作出結(jié)論，最后寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，作出結(jié)論，最后寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。要愛(ài)護(hù)公物，小心使用儀器和實(shí)驗(yàn)設(shè)備，注意節(jié)約用水、電、藥品和器材。要愛(ài)護(hù)公物，小心使用儀器和實(shí)驗(yàn)設(shè)備，注意節(jié)約用水、電、藥品和器材。所有固體廢棄物如：廢紙、固體廢棄物、沉淀物等必須棄于垃圾桶中。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿必所有固體廢棄物如：廢紙、固體廢棄物、沉淀物等必須棄于垃圾桶中。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿必須倒入玻璃器皿中，用水稀釋后倒入水槽。須倒入玻璃器皿中，用水稀釋后倒入水槽。2021/4/26專業(yè) 課件4實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)應(yīng)保持整潔。公用試劑用畢，立即

4、蓋嚴(yán)并還原。實(shí)驗(yàn)完畢，儀器洗實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)應(yīng)保持整潔。公用試劑用畢，立即蓋嚴(yán)并還原。實(shí)驗(yàn)完畢，儀器洗凈放好。凈放好。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須遵守操作規(guī)程，不得隨意亂動(dòng)亂用。如不會(huì)使用，應(yīng)請(qǐng)教指導(dǎo)教在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須遵守操作規(guī)程，不得隨意亂動(dòng)亂用。如不會(huì)使用，應(yīng)請(qǐng)教指導(dǎo)教師。凡因亂動(dòng)亂用違反操作規(guī)程而損壞儀器設(shè)備，造成事故者，按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行賠師。凡因亂動(dòng)亂用違反操作規(guī)程而損壞儀器設(shè)備，造成事故者，按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行賠償和處理。償和處理。 嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吃飯、吸煙、扔廢物和隨地吐痰，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)學(xué)生輪流安排值日，實(shí)嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吃飯、吸煙、扔廢物和隨地吐痰，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)學(xué)生輪流安排值日，實(shí)驗(yàn)結(jié)束離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室之前，關(guān)好窗戶

5、，切斷電源，水源，確保安全。驗(yàn)結(jié)束離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室之前，關(guān)好窗戶，切斷電源，水源，確保安全。2021/4/26專業(yè) 課件5試劑使用規(guī)則試劑使用規(guī)則使用試劑前應(yīng)該仔細(xì)辨認(rèn)標(biāo)簽，看清名稱及濃度，是否為本實(shí)驗(yàn)所需。使用試劑前應(yīng)該仔細(xì)辨認(rèn)標(biāo)簽，看清名稱及濃度，是否為本實(shí)驗(yàn)所需。取出試劑后，立即將瓶塞蓋好，放回原位；未用完的試劑決不可倒回原瓶。取出試劑后，立即將瓶塞蓋好，放回原位；未用完的試劑決不可倒回原瓶。取標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，應(yīng)該將標(biāo)準(zhǔn)溶液倒入干試管中，再用干凈吸管吸取標(biāo)準(zhǔn)液，以免取標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，應(yīng)該將標(biāo)準(zhǔn)溶液倒入干試管中，再用干凈吸管吸取標(biāo)準(zhǔn)液，以免污染瓶中的標(biāo)準(zhǔn)液體。污染瓶中的標(biāo)準(zhǔn)液體。使用滴管時(shí)，滴管尖端朝下

6、，避免試劑流入橡皮帽內(nèi)。使用滴管時(shí)，滴管尖端朝下，避免試劑流入橡皮帽內(nèi)。使用有毒試劑及強(qiáng)酸強(qiáng)堿時(shí)，盡可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿使用有毒試劑及強(qiáng)酸強(qiáng)堿時(shí)，盡可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。用嘴吸取，以免造成意外。2021/4/26專業(yè) 課件6吸量管的使用吸量管的使用正確拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指頂住吸量管頂端。正確拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指頂住吸量管頂端。取液：用吸耳球吸取液體至刻度上，眼睛看著液面上升；吸完后用食指頂住吸量管上取液：用吸耳球吸取液體至刻度上，眼睛看著液面上升；吸完后用食指頂住吸量管上端。端。調(diào)刻度：吸量管與地面保

7、持垂直，下口與試劑瓶接觸，并成一角度；用食指控制液體調(diào)刻度：吸量管與地面保持垂直，下口與試劑瓶接觸，并成一角度；用食指控制液體下降至最上一刻度處；液體凹面、刻度和視線應(yīng)在一水平面上。下降至最上一刻度處；液體凹面、刻度和視線應(yīng)在一水平面上。放液：吸量管移入準(zhǔn)備接受溶液的容器中，使其出口尖端接觸器壁，并成一角度，吸放液：吸量管移入準(zhǔn)備接受溶液的容器中，使其出口尖端接觸器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放開(kāi)食指，使液體自動(dòng)流出。吸量管應(yīng)最后靠壁量管仍保持垂直。放開(kāi)食指，使液體自動(dòng)流出。吸量管應(yīng)最后靠壁1515秒。秒。2021/4/26專業(yè) 課件7吸量管上端標(biāo)有吸量管上端標(biāo)有“吹吹”字。將所量液體全

8、部放出后，還需要吹出殘留于管尖的溶字。將所量液體全部放出后，還需要吹出殘留于管尖的溶液。此類吸量管為液。此類吸量管為“吹出式吹出式”，未標(biāo)，未標(biāo)“吹吹”字的吸量管，則不必吹出管尖的殘留字的吸量管，則不必吹出管尖的殘留液體。液體。(0.5ml(0.5ml以下的都要吹）以下的都要吹）吸量管尖應(yīng)接觸受器內(nèi)壁，但不應(yīng)插入受器內(nèi)的原有液體之中，以免污染吸量管吸量管尖應(yīng)接觸受器內(nèi)壁，但不應(yīng)插入受器內(nèi)的原有液體之中，以免污染吸量管及試劑。及試劑。吸取血液、尿、組織樣品、粘稠試劑或有顏色的吸量管，用后應(yīng)及時(shí)用自來(lái)水沖吸取血液、尿、組織樣品、粘稠試劑或有顏色的吸量管，用后應(yīng)及時(shí)用自來(lái)水沖洗干凈。如果吸取一般試劑

9、的吸量管可不必馬上沖洗，待實(shí)驗(yàn)完畢后，用自來(lái)水洗干凈。如果吸取一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，待實(shí)驗(yàn)完畢后，用自來(lái)水沖洗干凈，晾干備用。沖洗干凈，晾干備用。 吸量管的使用注意事項(xiàng)吸量管的使用注意事項(xiàng)2021/4/26專業(yè) 課件8玻璃器皿的一般清洗方法玻璃器皿的一般清洗方法一般玻璃儀器：如試管、燒杯、錐形瓶等，先用自來(lái)水洗刷后，用洗衣粉刷洗，一般玻璃儀器：如試管、燒杯、錐形瓶等，先用自來(lái)水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自來(lái)水反復(fù)沖洗，最后用蒸餾水淋洗再用自來(lái)水反復(fù)沖洗，最后用蒸餾水淋洗2 23 3次。干燥備用。次。干燥備用。容量分析儀器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自來(lái)水沖洗，待晾干后，再用容量分

10、析儀器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自來(lái)水沖洗，待晾干后，再用鉻酸洗液浸泡數(shù)小時(shí)，然后用自來(lái)水充分沖洗，最后用蒸餾水淋洗鉻酸洗液浸泡數(shù)小時(shí)，然后用自來(lái)水充分沖洗，最后用蒸餾水淋洗2 23 3次，干燥次，干燥備用。備用。比色杯：用畢立即用自來(lái)水反復(fù)沖洗。洗不凈時(shí)，用鹽酸或適當(dāng)溶劑沖洗，再用比色杯：用畢立即用自來(lái)水反復(fù)沖洗。洗不凈時(shí)，用鹽酸或適當(dāng)溶劑沖洗，再用自來(lái)水沖洗。避免用堿液或強(qiáng)氧化劑清洗，切忌用試管刷或粗糙布自來(lái)水沖洗。避免用堿液或強(qiáng)氧化劑清洗，切忌用試管刷或粗糙布( (紙紙) )擦拭。擦拭。上述所有玻璃器材洗凈上述所有玻璃器材洗凈( (以倒置后器壁不掛水珠為干凈的標(biāo)準(zhǔn)以倒置后器壁不掛水

11、珠為干凈的標(biāo)準(zhǔn)) )后，根據(jù)需要晾干后，根據(jù)需要晾干或烘干?；蚝娓伞?2021/4/26專業(yè) 課件9分光光度法分光光度法光是一種電磁波，通常用頻率和波長(zhǎng)來(lái)描述光。光是一種電磁波，通常用頻率和波長(zhǎng)來(lái)描述光。人的視覺(jué)所能感覺(jué)到的光稱為可見(jiàn)光，波長(zhǎng)范圍在人的視覺(jué)所能感覺(jué)到的光稱為可見(jiàn)光，波長(zhǎng)范圍在400760nm，人的眼睛感覺(jué)不到的，人的眼睛感覺(jué)不到的還有紅外光（波長(zhǎng)大于還有紅外光（波長(zhǎng)大于760-5000000nm）、紫外光（波長(zhǎng)）、紫外光（波長(zhǎng)200-400nm）、）、X射線等。射線等。在可見(jiàn)光區(qū)，不同波長(zhǎng)的光呈不同的顏色，但各種有色光之間并沒(méi)有嚴(yán)格的界線，而在可見(jiàn)光區(qū)，不同波長(zhǎng)的光呈不同的顏色

12、，但各種有色光之間并沒(méi)有嚴(yán)格的界線，而是由一種顏色逐漸過(guò)渡到另一種顏色。是由一種顏色逐漸過(guò)渡到另一種顏色。溶液的顏色與吸收光顏色的關(guān)系溶液的顏色與吸收光顏色的關(guān)系一般性實(shí)驗(yàn)一般性實(shí)驗(yàn)-1-12021/4/26專業(yè) 課件10Beer-Lambert定律吸收光譜法基本定律定律吸收光譜法基本定律描述物質(zhì)對(duì)單色光吸收強(qiáng)弱與厚度和待測(cè)物濃度的關(guān)系。描述物質(zhì)對(duì)單色光吸收強(qiáng)弱與厚度和待測(cè)物濃度的關(guān)系。含義：一束單色光通過(guò)溶液時(shí)，光能被吸收的程度與溶液的濃度和液層厚度成正比。含義：一束單色光通過(guò)溶液時(shí)，光能被吸收的程度與溶液的濃度和液層厚度成正比。AKCL 或或 lgI0/I =KCLA A為溶液對(duì)光的吸光度

13、為溶液對(duì)光的吸光度，反映了物質(zhì)對(duì)光的吸收程度；，反映了物質(zhì)對(duì)光的吸收程度；C C為溶液濃度為溶液濃度；L L為溶液厚度為溶液厚度；I I0 0為照射待測(cè)物質(zhì)的單色光強(qiáng)度，為照射待測(cè)物質(zhì)的單色光強(qiáng)度，I I為透過(guò)待測(cè)物質(zhì)光線的光強(qiáng)度為透過(guò)待測(cè)物質(zhì)光線的光強(qiáng)度，透光度，透光度T= I/IT= I/I0 0即溶液透過(guò)光的強(qiáng)度與入射光的強(qiáng)度之比；即溶液透過(guò)光的強(qiáng)度與入射光的強(qiáng)度之比；K K為吸光系數(shù)，是物質(zhì)在單位濃度和單位厚度的條件下對(duì)入射光的吸光度為吸光系數(shù)，是物質(zhì)在單位濃度和單位厚度的條件下對(duì)入射光的吸光度。實(shí)驗(yàn)中溶液厚度不變，則實(shí)驗(yàn)中溶液厚度不變，則A AKCKC9、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬

14、間被決定。2022-5-22022-5-2Monday, May 02, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-5-22022-5-22022-5-25/2/2022 3:24:12 AM11、人總是珍惜為得到。2022-5-22022-5-22022-5-2May-222-May-2212、人亂于心，不寬余請(qǐng)。2022-5-22022-5-22022-5-2Monday, May 02, 202213、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來(lái)懲罰自己。2022-5-22022-5-22022-5-22022-5-25/2/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月2日星期一2022

15、-5-22022-5-22022-5-215、一個(gè)人炫耀什么，說(shuō)明他內(nèi)心缺少什么。2022年5月2022-5-22022-5-22022-5-25/2/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-5-22022-5-2May 2, 202217、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2022-5-22022-5-22022-5-22022-5-22021/4/26專業(yè) 課件12光吸收示意圖光吸收示意圖I I0 0I IbC C2021/4/26專業(yè) 課件13吸收光譜和物質(zhì)的定性分析吸收光譜和物質(zhì)的定性分析物質(zhì)的吸收光譜與物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。物質(zhì)的吸收光譜與物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。吸收光譜曲線是

16、物質(zhì)的特征曲線。用各種不同波長(zhǎng)的光線作為入射光測(cè)定物質(zhì)的吸光度吸收光譜曲線是物質(zhì)的特征曲線。用各種不同波長(zhǎng)的光線作為入射光測(cè)定物質(zhì)的吸光度（Absorbance），），然后以波長(zhǎng)（然后以波長(zhǎng)（）為橫軸，相應(yīng)的吸光度（為橫軸，相應(yīng)的吸光度（A）為縱軸，按結(jié)果作圖，為縱軸，按結(jié)果作圖，可得到該物質(zhì)的吸收光譜曲線，這種曲線體現(xiàn)了物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收能力。可得到該物質(zhì)的吸收光譜曲線，這種曲線體現(xiàn)了物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收能力。在一定的溫度、在一定的溫度、pH值等條件下吸收光譜的曲線形狀是一定的。在吸收光譜中，往往可值等條件下吸收光譜的曲線形狀是一定的。在吸收光譜中，往往可找到一個(gè)或幾個(gè)吸收最大值，

17、該處的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)（找到一個(gè)或幾個(gè)吸收最大值，該處的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)（max）。）。物質(zhì)不同，它物質(zhì)不同，它們的最大吸收波長(zhǎng)也往往不同。們的最大吸收波長(zhǎng)也往往不同。2021/4/26專業(yè) 課件14不同濃度不同濃度的的VitB12溶液對(duì)相同波長(zhǎng)的光的不同吸收溶液對(duì)相同波長(zhǎng)的光的不同吸收g/mlA 550nm2021/4/26專業(yè) 課件15原理：根據(jù)物質(zhì)對(duì)于入射光的特征吸收，可應(yīng)用于物質(zhì)溶液的定性檢測(cè)原理：根據(jù)物質(zhì)對(duì)于入射光的特征吸收，可應(yīng)用于物質(zhì)溶液的定性檢測(cè)比較吸收光譜曲線：在相同的條件下，吸收光譜曲線不同，表明物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)不同。比較吸收光譜曲線：在相同的條件下，吸收光譜曲線不同

18、，表明物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)不同。比較最大吸收波長(zhǎng)：不同物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)不同；化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)最大吸收波長(zhǎng)比較最大吸收波長(zhǎng)：不同物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)不同；化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)最大吸收波長(zhǎng)相同，吸收系數(shù)不同。相同，吸收系數(shù)不同。比較吸光度的比值：多用于檢測(cè)物質(zhì)的純度（比較吸光度的比值：多用于檢測(cè)物質(zhì)的純度（DNA A260/A280=1.8 純度鑒定純度鑒定)物質(zhì)定性分析常用方法物質(zhì)定性分析常用方法2021/4/26專業(yè) 課件16物質(zhì)的定量分析物質(zhì)的定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑顯色。選用合適波長(zhǎng)的入射光。測(cè)定配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑顯色。

19、選用合適波長(zhǎng)的入射光。測(cè)定時(shí)先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率時(shí)先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率100%100%，然后分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度。以吸光度為縱坐，然后分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖得到一條通過(guò)原點(diǎn)的直線，叫做標(biāo)準(zhǔn)曲線（或稱標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖得到一條通過(guò)原點(diǎn)的直線，叫做標(biāo)準(zhǔn)曲線（或稱A-CA-C曲線）。曲線）。標(biāo)準(zhǔn)管法標(biāo)準(zhǔn)管法 對(duì)個(gè)別樣品進(jìn)行測(cè)定，且對(duì)個(gè)別樣品進(jìn)行測(cè)定，且A-CA-C曲線線性良好直接比較測(cè)定結(jié)果。曲線線性良好直接比較測(cè)定結(jié)果。 A標(biāo)標(biāo) =K標(biāo)標(biāo)c標(biāo)標(biāo)b標(biāo)標(biāo) A測(cè)測(cè) =K測(cè)測(cè) c測(cè)測(cè) b測(cè)測(cè) c測(cè)測(cè) =A測(cè)測(cè) /A標(biāo)標(biāo) c標(biāo)標(biāo)2021/4/26專業(yè) 課件17

20、分光光度計(jì)的基本構(gòu)造分光光度計(jì)的基本構(gòu)造儀器中光源經(jīng)過(guò)單色器中的單色原件（如棱鏡），所得到的單色光（入射光）進(jìn)入儀器中光源經(jīng)過(guò)單色器中的單色原件（如棱鏡），所得到的單色光（入射光）進(jìn)入樣品室，透出的光被受光器（光電池或光電色）產(chǎn)生光電流，放大后在測(cè)量?jī)x上顯樣品室，透出的光被受光器（光電池或光電色）產(chǎn)生光電流，放大后在測(cè)量?jī)x上顯示出吸光度（示出吸光度（A）或透光度（或透光度（T）。光光 源源單色器單色器樣品室樣品室受光器受光器測(cè)量器測(cè)量器2021/4/26專業(yè) 課件1872722 2分光光度計(jì)使用方法分光光度計(jì)使用方法接通電源，打開(kāi)儀器電源開(kāi)關(guān)，打開(kāi)樣品室蓋，預(yù)熱接通電源，打開(kāi)儀器電源開(kāi)關(guān)，打開(kāi)

21、樣品室蓋，預(yù)熱10min;將空白液或?qū)φ找杭皽y(cè)定液分別裝入比色杯將空白液或?qū)φ找杭皽y(cè)定液分別裝入比色杯3/4體積并用擦鏡紙擦凈外壁，放入樣體積并用擦鏡紙擦凈外壁，放入樣品室內(nèi)品室內(nèi), 空白液一般放于最外格，樣品比色杯放入位置與試管位置對(duì)應(yīng)空白液一般放于最外格，樣品比色杯放入位置與試管位置對(duì)應(yīng);調(diào)好波長(zhǎng)調(diào)好波長(zhǎng);調(diào)節(jié)按鈕調(diào)節(jié)按鈕 開(kāi)蓋時(shí)，調(diào)開(kāi)蓋時(shí)，調(diào) T 參數(shù)參數(shù) 調(diào)為調(diào)為 100 合上蓋，調(diào)合上蓋，調(diào) A 參數(shù)參數(shù) 調(diào)為調(diào)為 0;逐步拉出樣品室拉桿（聽(tīng)到逐步拉出樣品室拉桿（聽(tīng)到“咔咔”一聲），讀取吸光度值一聲），讀取吸光度值(A）;讀數(shù)完打開(kāi)樣品室蓋，再將讀數(shù)寫(xiě)入記錄本。讀數(shù)完打開(kāi)樣品室蓋，再

22、將讀數(shù)寫(xiě)入記錄本。 2021/4/26專業(yè) 課件1972722 2分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)樣品室蓋應(yīng)輕開(kāi)輕放；樣品室蓋應(yīng)輕開(kāi)輕放；比色皿拿其磨砂面，液體裝入約比色皿拿其磨砂面，液體裝入約3/43/4高度，并用擦鏡紙擦凈外壁，每次用完后自來(lái)水高度，并用擦鏡紙擦凈外壁，每次用完后自來(lái)水沖洗干凈，倒置于濾紙上；沖洗干凈，倒置于濾紙上；倒取試劑時(shí)不能在儀器表面上方操作，儀器上請(qǐng)勿放任何物品；倒取試劑時(shí)不能在儀器表面上方操作，儀器上請(qǐng)勿放任何物品；每調(diào)換一次波長(zhǎng)，都應(yīng)將空白溶液的吸光度調(diào)至每調(diào)換一次波長(zhǎng)，都應(yīng)將空白溶液的吸光度調(diào)至“0 0”。2021/4/26專業(yè) 課件20雙縮脲法測(cè)

23、定蛋白質(zhì)含量雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康牧私夂驼莆针p縮脲測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法了解和掌握雙縮脲測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法。2021/4/26專業(yè) 課件21蛋白質(zhì)在強(qiáng)堿性溶液中與稀硫酸銅溶液作用產(chǎn)生顏色反應(yīng)，生成紫紅色化合物，蛋白質(zhì)在強(qiáng)堿性溶液中與稀硫酸銅溶液作用產(chǎn)生顏色反應(yīng)，生成紫紅色化合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。稱為雙縮脲反應(yīng)。 具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應(yīng)，蛋白質(zhì)在堿性溶液中，能具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應(yīng)，蛋白質(zhì)在堿性溶液中，能與與CuCu2+2+形成紫紅色絡(luò)合物，顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，故可以用來(lái)測(cè)定蛋白形成紫紅色絡(luò)合物，顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度

24、成正比，故可以用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度。質(zhì)的濃度。 在一定的濃度范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系。因此可用比色法測(cè)在一定的濃度范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系。因此可用比色法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。定蛋白質(zhì)濃度。NHONHNHONHCCNHONHONHCC加熱180 Co+NH2222223實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理2021/4/26專業(yè) 課件22紫紅色銅雙縮脲復(fù)合物分子結(jié)構(gòu)紫紅色銅雙縮脲復(fù)合物分子結(jié)構(gòu)2021/4/26專業(yè) 課件23在分光光度法中，許多不吸收光的無(wú)色物質(zhì)可以用顯色反應(yīng)變成有色物質(zhì)，使之能進(jìn)行比在分光光度法中，許多不吸收光的無(wú)色物質(zhì)可以用顯色反應(yīng)變成有色物質(zhì)，使之能進(jìn)行比色測(cè)定，并能

25、提高測(cè)定的靈敏度和選擇性。在比色分析或分光光度分析中，將待測(cè)組分轉(zhuǎn)色測(cè)定，并能提高測(cè)定的靈敏度和選擇性。在比色分析或分光光度分析中，將待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫做顯色反應(yīng)，與待測(cè)組分反應(yīng)生成有色化合物的試劑叫顯色劑。變成有色化合物的反應(yīng)叫做顯色反應(yīng)，與待測(cè)組分反應(yīng)生成有色化合物的試劑叫顯色劑。在實(shí)際分析中，同一待測(cè)組分可與多種顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)，生成不同的有色物質(zhì)。為了在實(shí)際分析中，同一待測(cè)組分可與多種顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)，生成不同的有色物質(zhì)。為了保證測(cè)定的靈敏度和準(zhǔn)確度，在分析時(shí)常需對(duì)顯色反應(yīng)進(jìn)行選擇，選擇原則如下：保證測(cè)定的靈敏度和準(zhǔn)確度，在分析時(shí)常需對(duì)顯色反應(yīng)進(jìn)行選擇，選擇原則如下：

26、 1. 選擇性好，干擾少或干擾易消除；選擇性好，干擾少或干擾易消除； 2. 靈敏度要高；靈敏度要高； 3. 生成有色化合物的組成恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定；生成有色化合物的組成恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定； 4. 生成的有色化合物與顯色劑之間的顏色須有明顯的差別，最大吸收波長(zhǎng)之差大于生成的有色化合物與顯色劑之間的顏色須有明顯的差別，最大吸收波長(zhǎng)之差大于60nm。顯色劑與顯色反應(yīng)顯色劑與顯色反應(yīng)2021/4/26專業(yè) 課件24 管號(hào)管號(hào)試劑試劑 0 1 2 3 4 5 6 牛血清標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液（牛血清標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液（ml）2mg/ml 0.6 1.2 1.8 2.4 3.0 0待測(cè)蛋白液（待測(cè)蛋白液（ml） 3.0蒸

27、餾水（蒸餾水（ml） 3 2.4 1.8 1.2 0.6 0 0蛋白質(zhì)濃度（蛋白質(zhì)濃度（mg/ml） 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0未知未知實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1.1.按下圖表所示加入相應(yīng)的試劑或樣品按下圖表所示加入相應(yīng)的試劑或樣品2021/4/26專業(yè) 課件25各管混勻后加入雙縮脲試劑各管混勻后加入雙縮脲試劑3.0ml，充分混勻；，充分混勻；37度水浴度水浴30min；在在540nm 處以處以0號(hào)管調(diào)零點(diǎn)測(cè)定各管吸光度；號(hào)管調(diào)零點(diǎn)測(cè)定各管吸光度；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)；對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，求待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。對(duì)照

28、標(biāo)準(zhǔn)曲線，求待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。2021/4/26專業(yè) 課件26讀數(shù)時(shí)要注意讀的是讀數(shù)時(shí)要注意讀的是A的值；的值；注意正確標(biāo)記試管（用記號(hào)筆清晰標(biāo)記于試管注意正確標(biāo)記試管（用記號(hào)筆清晰標(biāo)記于試管2/3高處）；高處）；準(zhǔn)確記時(shí)。準(zhǔn)確記時(shí)。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)2021/4/26專業(yè) 課件279、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。22.5.222.5.2Monday, May 02, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/2/2022 3:24:12 AM11、人總是珍惜為得到。22.5.2*May-222-May-2212、人亂于心，不寬余請(qǐng)。*Monday, May 02, 202213、

29、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來(lái)懲罰自己。22.5.222.5.2*May 2, 202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月2日星期一*22.5.215、一個(gè)人炫耀什么，說(shuō)明他內(nèi)心缺少什么。2022年5月*22.5.2*May 2, 202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。*5/2/202217、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。*22.5.2謝謝大家謝謝大家9、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。22.5.222.5.2Monday, May 02, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/2/2022 3:24:13 AM11、人總是珍惜為得到。22.5.2*May-222-May-2212、人亂于心，不寬余請(qǐng)。*Monday, May 02, 202213、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來(lái)懲罰自己。22.5.222.5.2*May 2, 202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月2日