實(shí)驗(yàn)二平板培養(yǎng)測(cè)數(shù)法ppt課件

1、福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二平板培育測(cè)數(shù)法平板培育測(cè)數(shù)法 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解稀釋平板計(jì)數(shù)的原理，掌握涂抹平板培育法和混合平板培育法，認(rèn)識(shí)細(xì)菌、放線菌、霉菌、酵母菌的菌落特征。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院二 實(shí)驗(yàn)原理 稀釋平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培育基上所構(gòu)成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細(xì)胞繁衍而成這一培育特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個(gè)細(xì)胞存在否那么一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞，再取一定稀釋度、一定

2、量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培育基內(nèi)。經(jīng)培育后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁衍構(gòu)成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計(jì)算的菌數(shù)是培育基上長(zhǎng)出來(lái)的菌落數(shù)，故又稱活菌計(jì)數(shù)。普通用于某些廢品檢定如殺蟲菌劑等、生物制品檢驗(yàn)、土壤含菌量測(cè)定及食品、水源的污染程度的檢驗(yàn)。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院三 實(shí)驗(yàn)資料1活資料：菜園土。2培育基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培育基、高氏號(hào)培育基、馬鈴薯培育基3器材：90ml無(wú)菌水、9ml無(wú)菌水、無(wú)菌平皿、lml無(wú)菌吸管、天平、稱樣瓶、記號(hào)筆、玻璃刮鏟等。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院四 實(shí)驗(yàn)步驟 1樣品稀釋液的

3、制備 準(zhǔn)確稱取待測(cè)樣品l0g，放入裝有90ml無(wú)菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20 min，使微生物細(xì)胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液；再用1ml無(wú)菌吸管，汲取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無(wú)菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；再換一支無(wú)菌吸管汲取10-2稀釋液1 ml，移入裝有9ml無(wú)菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液；以此類推，延續(xù)稀釋，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液如圖。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院測(cè)定土壤細(xì)菌數(shù)量時(shí)，采用測(cè)定土壤細(xì)菌數(shù)量時(shí)

4、，采用10104 4、10105 5、10106 6稀釋度，測(cè)定放線菌稀釋度，測(cè)定放線菌數(shù)量時(shí)，采用數(shù)量時(shí)，采用10103 3、10104 4、10105 5稀釋度，測(cè)定真菌數(shù)量時(shí)，采用稀釋度，測(cè)定真菌數(shù)量時(shí)，采用10102 2、10103 3、10104 4稀釋度。稀釋度。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2 2、平板接種培育、平板接種培育 平板接種培育有混合平板培育法和涂抹平板培育法兩種方法。 1混合平板培育法 將無(wú)菌平板編上10-4、10-5、10-6號(hào)碼，每一號(hào)碼設(shè)置三個(gè)反復(fù)，用無(wú)菌吸管按無(wú)菌操作要求汲取10-6稀釋液各

5、1ml放入編號(hào)10-6的3個(gè)平板中，同法汲取10-5稀釋液各lml放入編號(hào)10-5的3個(gè)平板中，再汲取10-4稀釋液各lml放入編號(hào)10-4的3個(gè)平板中由低濃度向高濃度時(shí)，吸管可不用改換。然后在9個(gè)平板中分別倒入已融化并冷卻至45-50的細(xì)菌培育基，悄然轉(zhuǎn)動(dòng)平板，使菌液與培育基混合均勻，冷疑后倒置，適溫培育。至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 涂抹平板計(jì)數(shù)法涂抹平板計(jì)數(shù)法 涂抹平板計(jì)數(shù)法與混合法根本一樣，所不同的是先將培育基熔化后趁熱倒入無(wú)菌平板中，待凝固后

6、編號(hào)，然后用無(wú)菌吸管汲取0.2mL菌液對(duì)號(hào)接種在不同稀釋度編號(hào)的瓊脂平板上，每個(gè)編號(hào)設(shè)三個(gè)反復(fù)。再用無(wú)菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻，每個(gè)稀釋度用一個(gè)滅菌刮鏟，改換稀釋度時(shí)需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時(shí)，也可以不改換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上2030min，使菌液浸透入培育基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培育，至菌落長(zhǎng)出后即可計(jì)數(shù)。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院3 計(jì)數(shù)下次實(shí)驗(yàn) 培育48h后取出培育平板，根據(jù)統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)，計(jì)算出同一稀釋度3個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，按以下公式計(jì)算： 每毫升樣品中菌落構(gòu)成單位數(shù)CFU= 同

7、一稀釋度3次反復(fù)的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)5 細(xì)菌細(xì)菌32-37，真菌真菌22-28，放線菌放線菌28-37 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表中計(jì)算結(jié)果時(shí)，常按以下規(guī)范從接種后的3個(gè)稀釋度中選擇一個(gè)適宜的稀釋度，求出每克菌劑中的含菌數(shù)。 1同一稀釋度各個(gè)反復(fù)的菌數(shù)相差不太懸殊。 2細(xì)菌、放線菌、酵母菌以每皿30-300個(gè)菌落為宜，霉菌以每皿10-100個(gè)菌落為宜。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院五 本卷須知1、吸樣量準(zhǔn)確：無(wú)論是汲取菌液，還是將菌液吸入平板均要準(zhǔn)確；2、混合均勻：在進(jìn)展延續(xù)稀釋時(shí)要將菌液充沛混勻后再汲取稀釋液；3、改換吸管：每個(gè)稀釋度要改換一支吸管，不能用1支吸管進(jìn)展一系列稀釋；4、涂布