蛋白質(zhì)與氨基酸測定

1、LOGO食品分析與檢驗(yàn)技術(shù)食品分析與檢驗(yàn)技術(shù)成都師范學(xué)院主講教師：主講教師：LOGO第六節(jié)第六節(jié) 蛋白質(zhì)和氨基酸的測定蛋白質(zhì)和氨基酸的測定LOGO一、一、 概述概述（1）蛋白質(zhì)的生理功用及在食品中的作用）蛋白質(zhì)的生理功用及在食品中的作用（2）食品中的蛋白質(zhì)含量）食品中的蛋白質(zhì)含量（3）蛋白質(zhì)系數(shù)）蛋白質(zhì)系數(shù)（4）蛋白質(zhì)水解）蛋白質(zhì)水解（5）蛋白質(zhì)測定方法）蛋白質(zhì)測定方法LOGO 蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是構(gòu)成生物體細(xì)胞組織的重要成分，是生物體發(fā)育及修補(bǔ)組織的原料，一切有生命的活體都含有不同類型的蛋白質(zhì)。 人體的酸堿平衡、水平衡的維持； 遺傳信息的傳遞； 物質(zhì)的代謝及運(yùn)轉(zhuǎn)都與蛋白質(zhì)有關(guān)。 人及動(dòng)

2、物只能從食品得到蛋白質(zhì)及其分解產(chǎn)物，來構(gòu)成自身的蛋白質(zhì)，是人體重要的營養(yǎng)物質(zhì) 食品的重要營養(yǎng)指標(biāo)。LOGO2、 食品中的蛋白質(zhì)含量食品中的蛋白質(zhì)含量 在各種不同的食品中蛋白質(zhì)的含量各不相同，一般說來動(dòng)物性食品的蛋白質(zhì)含量高于植物性食品。 LOGO例如:牛肉中蛋白質(zhì)含量為20.0%左右，豬肉中為9.5%，兔肉為21%，雞肉為20%，牛乳為3.5%黃魚為17.0%，帶魚為18.0%；大豆為40%，稻米 為8.5%，面粉為9.9%。菠菜為2.4%，黃瓜為1.0%，桃為0.8%，柑橘為0.9%，蘋果為0.4%和油菜為1.5%左右。LOGO（3）蛋白質(zhì)系數(shù)）蛋白質(zhì)系數(shù) 蛋白質(zhì)是復(fù)雜的含氮有機(jī)化合物，分子

3、量很大，大部分高達(dá)數(shù)萬數(shù)百萬，它們由20種氨基酸通過酰胺鍵以一定的方式結(jié)合起來，并具有一定的空間結(jié)構(gòu)，所含的主要化學(xué)元素為C、H、O、N,在某些蛋白質(zhì)中還含有微量的P、Cu、Fe、I等元素，但含氮?jiǎng)t是蛋白質(zhì)區(qū)別其他有機(jī)化合物的主要標(biāo)志。LOGOv不同的蛋白質(zhì)其氨基酸構(gòu)成比例及方式不同，故各種不同的蛋白質(zhì)其含氮量也不同。v一般蛋白質(zhì)含氮量為16%，即一 份氮素相當(dāng)于6.25份蛋白質(zhì)，此數(shù)值（6.25）稱為蛋白質(zhì)系數(shù)。LOGOv不同種類食品的蛋白質(zhì)系數(shù)有所不同。v如玉米，蕎麥，青豆，雞蛋等為6.25，花生為5.46，大米為5.95，大豆及其制品為5.71，小麥粉為5.70，牛乳及其制品為6.38。

4、LOGO4、蛋白質(zhì)水解、蛋白質(zhì)水解 在構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸中，亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸等8種氨基酸在人體內(nèi)不能合成，必須依靠食品提供，故被稱為必需氨基酸，他們對(duì)人體有極其重要的生理作用。 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)胨胨肽肽氨基酸氨基酸LOGO5、蛋白質(zhì)測定方法、蛋白質(zhì)測定方法 測定蛋白質(zhì)的方法可分為兩大類： 一類是利用蛋白質(zhì)的共性，即含氮量 、肽鍵和折射率測定蛋白質(zhì)含量 ； 另一類是利用蛋白質(zhì)中特定氨基酸殘基、酸性和堿性基團(tuán)以及芳香基團(tuán)等測定蛋白質(zhì)含量。 LOGOvGB 5009.5-2010食品中蛋白質(zhì)的測定v第一法：凱氏定氮法v第二法：分光光度法v第三法：燃燒法L

5、OGO 蛋白質(zhì)的測定，目前多采用將蛋白質(zhì)消化，測定其含氮量，再換算為蛋白質(zhì)含量的凱氏定氮法。 不同食品的蛋白質(zhì)系數(shù)有所不同。LOGO 凱氏定氮法是測定總有機(jī)氮量較為準(zhǔn)確、操作較為簡單的方法之一。 可用于所有動(dòng)、植物食品的分析及各種加工食品的分析；可同時(shí)測定多個(gè)樣品。 國內(nèi)外應(yīng)用較為普遍，是個(gè)經(jīng)典分析方法，至今仍被作為標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。LOGO 凱氏定氮法：常量法、微量法、改良凱氏定氮法、自動(dòng)定氮儀法、半微量法等。 LOGO(1) 原理 將樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化。 使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出。而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨，并與硫酸結(jié)合成硫酸銨，此過程稱為消化。 LOGO

6、然后加堿將消化液堿化，使氨游離出來。 再通過水蒸氣蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收后形成硼酸銨。 再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸溶液滴定。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量可計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。LOGOLOGO 蒸餾蒸餾在消化完全的樣品溶液中加入濃氫氧化鈉使呈堿性，加熱蒸餾，即可釋放出氨氣，反應(yīng)方程式如下：aLOGO ：加熱蒸餾所放出的氨，可用硼酸溶液進(jìn)行吸收，待吸收完全后，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，因硼酸呈微弱酸性（k5.810-10），用酸滴定不影響指示劑的變色反應(yīng)，但它有吸收氨的作用，吸收及滴定的反應(yīng)方程式如下：LOGO(2) (2) 適用范圍適用范圍 此法可應(yīng)用于各類食品中蛋白質(zhì)含量測定(3)(3)儀器儀器500ml凱氏燒

7、瓶；定氮蒸餾裝置LOGOv硫酸銅 ； （催化劑）v 硫酸鉀；（提高沸點(diǎn)）v 硫酸； （消化劑)v 40gL硼酸溶液； (吸收劑）v 混合指示劑；v 400gL氫氧化鈉；（堿化）v0.1molL鹽酸 標(biāo)準(zhǔn)溶液（滴定）(4)試劑試劑LOGO(5) 操作步驟操作步驟樣品消化：樣品消化：準(zhǔn)確稱取均勻的固體樣品0.22g,或半固體樣品25g,或吸取溶液樣品1020ml。小心移入干燥的100或500ml凱氏燒瓶中(勿粘附在瓶壁上)。加入0.21g硫酸銅、3g硫酸鉀及20ml濃硫酸。小心搖勻后，瓶頸45角傾斜置電爐上，在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱消化。 LOGO 先以小火緩慢加熱，待內(nèi)容物完全炭化、泡沫消失后，加大火力消

8、化至溶液呈藍(lán)綠色。取下漏斗，繼續(xù)加熱0.5h，冷卻至室溫。LOGOLOGOLOGO 蒸餾蒸餾、吸收吸收LOGO冷凝管下端浸入接受瓶液面之下（瓶內(nèi)預(yù)先裝有50ml 40gL硼酸溶液及混合指示劑56滴）。LOGOv 滴定：將接受瓶內(nèi)的硼酸液用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)。v 同時(shí)做一試劑空白（除不加樣品，從消化開始操作完全相同）。LOGO式中W蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%； c鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，mol/L； V1空白滴定消耗標(biāo)準(zhǔn)液量，mL； V2試劑滴定消耗標(biāo)準(zhǔn)液量，mL； m樣品質(zhì)量，g； 0.014氮的毫摩爾質(zhì)量，g/mmol； F蛋白質(zhì)系數(shù)。100014. 0)(12mFVVcW(6) 結(jié)

9、果計(jì)算LOGO2.2 微量凱氏定氮法微量凱氏定氮法 微量凱氏定氮法的原理與操作方法，與微量凱氏定氮法的原理與操作方法，與常量法基本相同，所不同的是常量法基本相同，所不同的是樣品質(zhì)量及試樣品質(zhì)量及試劑用量較少劑用量較少，且有一套適于微量測定的定型，且有一套適于微量測定的定型儀器儀器微量凱氏定氮器。微量凱氏定氮器。LOGOLOGO100ml凱氏燒瓶。凱氏燒瓶。微量凱氏定氮器。微量凱氏定氮器。 LOGO 2%硼酸溶液。 50%氫氧化鈉。 0.03%甲基紅乙醇溶液與0.1%溴甲酚綠乙醇溶液，臨用時(shí)按1：5混合。 0.01000mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 其他試劑同常量法。LOGO ：樣品消化步驟同常量法。

10、將消化完全的消化液冷卻后，完全轉(zhuǎn)入100容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻。 LOGO 蒸餾 按圖安裝好微量定氮蒸餾裝置。于水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)裝水至2/3容積處，加指示劑數(shù)滴及硫酸數(shù)毫升，以保持水呈，加入數(shù)粒玻璃珠，加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)的水。在加入10ml 40g/L硼酸及2滴混合指示劑，將冷凝管下端插入液面以下。LOGO由進(jìn)樣漏斗進(jìn)入反應(yīng)室，以少量水沖洗進(jìn)樣漏斗，并流入反應(yīng)室。再從進(jìn)樣口加入10ml使呈強(qiáng)堿性，用少量蒸餾 水洗漏斗數(shù)次，蓋塞 ，進(jìn)行水蒸氣 蒸餾。冷凝管下端 預(yù)先插入盛有10mL4%（或2%）蒸餾至吸收液中所加的混合指示劑變?yōu)榫G色開始記時(shí)，繼續(xù)蒸餾10min后，將冷凝管尖端提離液面再

11、蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管尖端后停止蒸餾。 LOGO 滴定 取下接受瓶，以0.01000mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色為終點(diǎn)。LOGO(5) 結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算 式中W蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%； V0滴定空白蒸餾液消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液體積，mL； V1滴定樣品蒸餾液消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液體積，mL； V2蒸餾時(shí)吸取樣品稀釋液體積，mL； C鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，mol/L； 0.014氮的毫摩爾質(zhì)量，g/mmol； F蛋白質(zhì)系數(shù)； m樣品質(zhì)量，g。%100100014. 0)(201VmFcVVWLOGO（1）所用試劑應(yīng)用配制。（2）消化過程應(yīng)注意凱氏燒瓶，利用冷凝酸液將附在瓶壁上的炭粒沖下，以促進(jìn)消化完全

12、。（3）若樣品含脂肪或糖較多時(shí)，應(yīng)注意發(fā)生的大量少量辛醇或液體石蠟，或硅消泡劑，防止其溢出瓶外，并注意適當(dāng)控制熱源強(qiáng)度。（4）若樣品消化液不易澄清透明，可將凱氏燒瓶冷卻，加入300g/L23ml后再加熱。2.4 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)LOGO（5）若取樣量較大，如干試樣超過5g，可按每克試樣5ml的比例增加硫酸用量。（6）消化時(shí)間一般約4小時(shí)左右即可，消化時(shí)間過長會(huì)引起氨的損失。一般消化至透明后，繼續(xù)消化30min即可。 有機(jī)物如分解完全，分解液呈藍(lán)色或淺綠色。但含鐵量多時(shí)，呈較深綠色。LOGO（7）蒸餾過程應(yīng)注意接頭處無現(xiàn)象，蒸餾完畢，先將蒸餾出口離開液面，繼續(xù)蒸餾1min，將附著在尖端的吸收液完

13、全洗入吸收瓶內(nèi)，再將吸收瓶移開，最后關(guān)閉電源，絕不能先關(guān)閉電源，否則吸收液將發(fā)生倒吸。（8）不應(yīng)超過40C，否則氨吸收減弱，造成損失，可置于冷水浴中。（9）混合指示劑在堿性溶液中呈，在中性溶液中呈，在酸性溶液中呈。LOGO2、分光光度法、分光光度法v分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。LOGOv在分光光度計(jì)中，將不同波長的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時(shí)，便可得到與眾分光光度法不同波長相對(duì)應(yīng)的吸收強(qiáng)度。如以波長（）為橫坐標(biāo)，吸收強(qiáng)度（A）為縱坐標(biāo)，就可繪出該物質(zhì)的吸收光譜曲線。LOGOLOGOv（1 1）原理）原理v

14、食品中的食品中的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)在催化加熱條件下被分解，在催化加熱條件下被分解，分解產(chǎn)生的氨分解產(chǎn)生的氨與與硫酸結(jié)合生成硫酸銨硫酸結(jié)合生成硫酸銨，在，在pH pH 4.8 4.8 的乙酸鈉的乙酸鈉- -乙酸緩沖溶液中，乙酸緩沖溶液中，硫酸銨與乙硫酸銨與乙酰丙酮和甲醛反應(yīng)生成黃色酰丙酮和甲醛反應(yīng)生成黃色的的3,5-3,5-二乙酰二乙酰-2,6-2,6-二甲基二甲基-1,4-1,4-二氫化吡啶化合物。二氫化吡啶化合物。v在波長在波長400 nm 400 nm 下下測定吸光度測定吸光度值，與標(biāo)準(zhǔn)系列值，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量，結(jié)果乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)比較定量，結(jié)果乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。含量。LO

15、GO（2 2）儀器和設(shè)備）儀器和設(shè)備分光光度計(jì)。分光光度計(jì)。電熱恒溫水浴鍋：電熱恒溫水浴鍋：100 100 0.5 0.5 。10 mL 10 mL 具塞玻璃比色管。具塞玻璃比色管。天平：感量為天平：感量為1mg1mg。LOGOv（3）操作方法）操作方法v試樣消解試樣消解v試樣溶液的制備試樣溶液的制備v標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制v試樣測定試樣測定LOGOv（4）結(jié)果計(jì)算）結(jié)果計(jì)算p74LOGO3、燃燒法、燃燒法v（1 1）原理）原理v試樣在試樣在900 900 1200 1200 高溫下燃燒，燃燒過高溫下燃燒，燃燒過程中產(chǎn)生混合氣體，其中的碳、硫等干擾氣程中產(chǎn)生混合氣體，其中的碳、硫等干擾氣

16、體和鹽類被吸收管吸收，氮氧化物被全部還體和鹽類被吸收管吸收，氮氧化物被全部還原成氮?dú)?，形成的氮?dú)鈿饬魍ㄟ^原成氮?dú)猓纬傻牡獨(dú)鈿饬魍ㄟ^熱導(dǎo)檢測儀熱導(dǎo)檢測儀（TCDTCD）進(jìn)行檢測。）進(jìn)行檢測。LOGOv（2）設(shè)備）設(shè)備v氮氮/蛋白質(zhì)分析儀。蛋白質(zhì)分析儀。天平：感量為天平：感量為0.1mgLOGOv（3 3）操作）操作v稱取稱取0.1 g0.1 g1.0 g 1.0 g 充分混勻的試樣（精確至充分混勻的試樣（精確至0.0001 g0.0001 g），用錫箔包裹后置于樣品盤上。），用錫箔包裹后置于樣品盤上。v試樣進(jìn)入燃燒反應(yīng)爐（試樣進(jìn)入燃燒反應(yīng)爐（900 900 1200 1200 ）后，）后，在高

17、純氧（在高純氧（99.99%99.99%）中充分燃燒。）中充分燃燒。v燃燒爐中的產(chǎn)物（燃燒爐中的產(chǎn)物（NOxNOx）被載氣）被載氣CO2 CO2 運(yùn)送至運(yùn)送至還原爐（還原爐（800 800 ）中，經(jīng)還原生成氮?dú)夂髾z）中，經(jīng)還原生成氮?dú)夂髾z測其含量。測其含量。LOGOvX = C X = C F FvXX試樣中蛋白質(zhì)的含量，單位為克每百克試樣中蛋白質(zhì)的含量，單位為克每百克（g/100 gg/100 g）；）；vCC試樣中氮的含量，單位為克每百克試樣中氮的含量，單位為克每百克（g/100 gg/100 g）；）；vFF氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)。氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)。LOGO二、二、 氨基酸總量的測定氨

18、基酸總量的測定LOGO 蛋白質(zhì)可以被酶、酸或堿水解，其水解的最終產(chǎn)物為氨基酸。LOGO氨基酸態(tài)氮的氨基酸態(tài)氮的測定測定雙指示劑甲醛滴定法：雙指示劑甲醛滴定法：電位滴定法：LOGO1、 雙指示劑甲醛滴定法(1) 原理 氨基酸具有酸性的-COOH基和堿性的-NH2基。它們相互作用而使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽，不能直接用堿液滴定它的羧基。 當(dāng)加入甲醛溶液時(shí)，-NH2基與甲醛結(jié)合，使-COOH基顯示出酸性，可用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。此法測定的結(jié)果是樣品中氨基酸態(tài)氮的含量，氣精確度僅為氨基酸理論 含量的90%。LOGO(2) 方法特點(diǎn)及應(yīng)用 此法簡單易行、快速方便。 在發(fā)酵工業(yè)中常用此法測定發(fā)酵液中氨基酸含

19、量的變化，以了解可被微生物利用的氮源的量及利用情況，并以此作為控制發(fā)酵生產(chǎn)的指標(biāo)之一。LOGO(3) 試劑40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示劑，用氫氧化鈉將40%甲醛中和至淡藍(lán)色。0.1%百里酚酞乙醇溶液0.1%中性紅50%乙醇溶液0.1%mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液LOGO(4) 操作方法 移取含氨基酸約2030mg的樣品溶液2份，分別置于250ml錐形瓶中，各加50ml 蒸餾水，其中1份加入3滴中性紅置試劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至由紅變?yōu)?琥珀色為終點(diǎn)； 另1份加入3滴百里酚酞指示劑及中性甲醛20ml，搖勻，靜置1分鐘，用0.1ml/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡藍(lán)色為終點(diǎn)。

20、分別紀(jì)錄兩次所消耗的堿液ml數(shù)。LOGO式中 c 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L; V1用中性紅作指示劑滴定時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL; V2用百里酚酞作指示劑滴定時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL; m測定用樣品溶液相當(dāng)于樣品的質(zhì)量，g 0.014氮的毫摩爾質(zhì)量，g/m mol (5) (5) 結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算100014. 0)(12mcVV氨基酸態(tài)氮（%）LOGO（6）說明及注意）說明及注意v此法測定食品中的游離氨基酸；此法測定食品中的游離氨基酸；v固體樣品應(yīng)先粉碎，準(zhǔn)確稱樣后用水萃取，固體樣品應(yīng)先粉碎，準(zhǔn)確稱樣后用水萃取，測定萃取液；液體樣品可直接測定；測定萃取液；液體樣品

21、可直接測定；v樣品顏色較深，可加適量活性炭脫色后測定樣品顏色較深，可加適量活性炭脫色后測定，或用點(diǎn)位滴定法測定。，或用點(diǎn)位滴定法測定。LOGOv2 2、電位滴定法、電位滴定法v（1 1）原理）原理v根據(jù)氨基酸的兩性作用，加入甲醛以固定氨根據(jù)氨基酸的兩性作用，加入甲醛以固定氨基的堿性，使羧基顯示出酸性，將酸度計(jì)的基的堿性，使羧基顯示出酸性，將酸度計(jì)的玻璃電極與甘汞電極同時(shí)插入被測液中構(gòu)成玻璃電極與甘汞電極同時(shí)插入被測液中構(gòu)成電池，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)酸度電池，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)酸度計(jì)指示的計(jì)指示的pHpH判斷和控制滴定終點(diǎn)。判斷和控制滴定終點(diǎn)。LOGOv(2)(2)、儀器、儀器

22、酸度計(jì)、復(fù)合玻璃電極、磁力攪拌器、微量滴酸度計(jì)、復(fù)合玻璃電極、磁力攪拌器、微量滴定管定管v（3 3）試劑）試劑v 20%20%中性甲醛中性甲醛v 0.05mol/L0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液LOGOv（4 4）操作方法）操作方法v吸取吸取5.05.0mLmL的樣品溶液于的樣品溶液于100mL100mL容量瓶中，定容量瓶中，定容至標(biāo)線，吸取容至標(biāo)線，吸取20.0mL20.0mL置于置于200mL200mL燒杯中，加燒杯中，加水水60mL60mL，開動(dòng)磁力攪拌器，用，開動(dòng)磁力攪拌器，用0.05mo1/L0.05mo1/L氫氧氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計(jì)指示化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至

23、酸度計(jì)指示pH8.2pH8.2，記錄，記錄消耗的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。消耗的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。LOGOv加入加入10.0mL10.0mL甲醛溶液，混勻。再用甲醛溶液，混勻。再用0.05mol/L0.05mol/L的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液繼續(xù)滴定至的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液繼續(xù)滴定至pH9.2pH9.2，記錄，記錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(V1(V1）。）。LOGOv同時(shí)取同時(shí)取80mL80mL蒸餾水，做空白實(shí)驗(yàn)。記錄消耗蒸餾水，做空白實(shí)驗(yàn)。記錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積( V2( V2）。）。LOGO（5）計(jì)算）計(jì)算v式中：式中：vVlVl樣品稀釋液在加入甲醛后滴定至終點(diǎn)樣品稀釋液在加入甲醛后滴定至終點(diǎn)(pH9.2 )(pH9.2 )所消耗的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體