細(xì)胞生物學(xué)研究中的激活劑和抑制劑.

1、細(xì)胞生物學(xué)研究中的激活劑和抑制劑AnandikaDhaliwal(anandikadotdhaliwalatgmaildotcom)RutgersUniversity,NewJersey,UnitedStates譯者王秀英(maryatlabomedotcom)美國(guó)新澤西州普林斯頓合原研究有限責(zé)任公司(SynatomResearch)DOI/10.13070/.3.185日期更新:2014-09-18;原始版:2013-04-27引用實(shí)驗(yàn)材料和方法2013;3:185摘要在細(xì)胞生物學(xué)研究中使用的化學(xué)激活劑和抑制劑的綜述。英文摘要Acomprehensiverev

2、iewofchemicalactivatorsandinhibitorsusedincellbiologyresearch.介紹細(xì)胞生物學(xué)研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、生理特性及細(xì)胞功能。它涉及到對(duì)細(xì)胞器、細(xì)胞與周圍環(huán)境間相互作用、生命周期、分化及死亡的研究。細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)和生物化學(xué)等其它生物學(xué)領(lǐng)域是密切相關(guān)的。放大圖1.真核細(xì)胞骨架。肌動(dòng)蛋白纖維顯示為紅色，微管為綠色，核為藍(lán)色。肌動(dòng)蛋白染色使用的是羅丹明-鬼筆環(huán)肽，微管使用的是連接有Alexa488的抗a微管蛋白著色劑，DNA則使用的是Hoechst染料。對(duì)于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的研究者而言，為了更加全面地理解細(xì)胞的功能、細(xì)胞的信號(hào)傳

3、遞以及控制細(xì)胞命運(yùn)、功能及表型的胞內(nèi)機(jī)制，抑制劑與激活劑是至關(guān)重要的研究工具。許多抑制劑和激活劑都被廣泛用于研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)及功能。這里我們對(duì)真核細(xì)胞中各種細(xì)胞生物學(xué)研究如細(xì)胞內(nèi)吞、分泌、粘附、細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體研究中常用的抑制劑和激活劑進(jìn)行了綜述。細(xì)胞骨架細(xì)胞骨架為細(xì)胞提供了特定的結(jié)構(gòu)與形狀。真核細(xì)胞主要有三種細(xì)胞骨架纖維：1)微絲，2)中間絲和3)微管。微絲(肌動(dòng)蛋白絲)：這是細(xì)胞骨架中最細(xì)的纖維。它們由肌動(dòng)蛋白亞基的線性聚合物所組成，通過(guò)在纖維一端的伸長(zhǎng)并伴隨著另一端的收縮來(lái)產(chǎn)生力，從而使其間的纖維產(chǎn)生凈移動(dòng)。中間絲：這種纖維的平均大小為直徑10納米并且比肌動(dòng)蛋白絲更穩(wěn)定(是

4、緊密結(jié)合的)，是細(xì)胞骨架的異質(zhì)成分。中間絲負(fù)責(zé)組織細(xì)胞內(nèi)部的三維結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器，是核纖層的結(jié)構(gòu)性組成部分。它們也參與一些細(xì)胞-細(xì)胞間和細(xì)胞-基質(zhì)間的連接過(guò)程。微管：它們是直徑為23nm的空心圓柱，大多數(shù)情況下由13條原纖維組成，而這些原纖維則是alpha微管蛋白和beta微管蛋白的聚合物。它們具有很高的動(dòng)態(tài)活性，通過(guò)結(jié)合GTP來(lái)進(jìn)行聚合反應(yīng)并通常由中心體來(lái)組織。抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果肌細(xì)胞松弛素D動(dòng)(C30H37NO6)蛋白結(jié)合于肌動(dòng)蛋白核和F-肌動(dòng)蛋白的生長(zhǎng)端，從而抑制聚合反應(yīng)。誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白解聚。肌LantraculinA動(dòng)C22H31NO5S)蛋白擾亂微絲介導(dǎo)的過(guò)程。與G-肌動(dòng)蛋白單體

5、形成1:1的復(fù)合物(Kd=200nM)。肌LantraculinB動(dòng)(C20H29NO5S)蛋白體外反應(yīng)中抑制肌動(dòng)蛋白的聚合(Kd=60nM)。擾亂微絲的組織和微絲介導(dǎo)的過(guò)程。選擇性地抑制N-WASP肌Wiskostatin動(dòng)C17H18Br2N2O)蛋白Wiskott-Aldrich綜合癥蛋白(WASp)家族成員)并抑制Arp2/3復(fù)合物的活化。該分子阻斷肌動(dòng)蛋白絲的組裝。溶于DMSO和乙醇。抑制收縮。抑制依賴于p-53的細(xì)胞通路。引起G1-S轉(zhuǎn)化過(guò)程中的細(xì)胞周期阻滯。抑制胰島素刺激的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。溶于DMSO和乙醇。比細(xì)胞松弛素的抑制效果強(qiáng)10-100倍。抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。比Lantr

6、aculinB的效果更強(qiáng)。溶于DMSO、甲醇或乙醇。比細(xì)胞松弛素的抑制效果強(qiáng)10-100倍。在該復(fù)合物持續(xù)存在的情況下被血清緩慢失活并導(dǎo)致短暫的誘導(dǎo)變化。在DMSO中溶解度可達(dá)100mMo同樣抑制PIP2誘導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白聚合反應(yīng)(EC504mM)抑制依賴于肌動(dòng)蛋白的參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商123,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,TocrisBioscience,EnzoLifeScience,Invitrogen,SantaCruzBiotechnology,CaymanChemical1234,Invitrogen,TocrisBioscience,Sigma-Aldri

7、ch,CaymanChemical,SantaCruzBiotechnology,EMD/Millipore567,Invitrogen,Sigma-Aldrich,CaymanChemical,SantaCruzBiotechnology,EMD/Millipore,EnzoLifeScience8910,AffixScientific,EnzoLifeScience,Sigma-Aldrich,TocrisBioscienceMycalolideB(C52H74N4O17)肌動(dòng)蛋白它選擇性地將F-肌動(dòng)蛋白徹底解聚成G-肌動(dòng)蛋白。與肌動(dòng)蛋白以1:1的摩爾比進(jìn)行結(jié)合(今13-20nM)。Noc

8、odazoleC14H11N3O3S)抑制微管的動(dòng)態(tài)變化并促使微管解聚。與0微管蛋白結(jié)合并阻止兩個(gè)鏈間二硫鍵中任意一個(gè)的形成。長(zhǎng)春堿(C46H58N4O9H2SO4)解聚微管。與微管蛋白結(jié)合并誘導(dǎo)其自締形成螺旋形聚合體，抑制微管組裝。秋水仙堿(C22H25NO6)長(zhǎng)春新堿(C46H56N4O10H2SO4)表1.常用的細(xì)胞骨架抑制劑激活劑靶點(diǎn)細(xì)胞功能(遷移、運(yùn)輸、吞噬、內(nèi)褶)。溶于DMSO、甲醇或異丙醇。抑制肌動(dòng)球蛋白ATP酶。在DMSO的溶解度達(dá)10mg/ml。有絲分裂抑制劑。將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。抑制各種癌癥相關(guān)的激酶，包括ABL、c-KIT、BRAF、MEK1、MEK2和MET。溶

9、于水和甲醇。通過(guò)阻斷有絲分裂紡錘體的形成將細(xì)胞周期阻滯于G2/M期。在一些腫瘤細(xì)胞系中誘導(dǎo)凋亡。抑制自在乙醇中溶解度達(dá)50mg/ml,在水中溶解度可達(dá)100微與微管蛋白結(jié)合并阻止mM,DMSO中溶解管其聚合度可達(dá)100mMo有絲分裂抑制劑。在一些正常的及癌癥細(xì)胞系中誘導(dǎo)凋亡噬體的成熟。能與微管蛋白結(jié)合并抑制微管形成的吲哚生物堿。解聚微管。溶于甲醇和水。延遲細(xì)胞周期的進(jìn)程。在人類淋巴瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡。機(jī)制作用特點(diǎn)及效果Jasplakinolide肌在體外誘導(dǎo)肌動(dòng)在DMSO中溶解度2111213,SantaCruzBiotechnology,EnzoLifeScience14151617,Sigm

10、a-Aldrich,TocrisBioscience,CellSignalingTechnology,EMD/Millipore181619,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD/Millipore,SantaCruzBiotechnologyo202122,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD/Millipore232425,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD/Millipore,SantaCruzBiotechnologyo參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商26272829,C36H45BrN4O6)動(dòng)蛋

11、白聚合及穩(wěn)mg/mlo一種具有殺菌、殺蛋定。在體內(nèi)同樣蟲(chóng)、抗癌特性的環(huán)羧酚酸白誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白單肽。無(wú)熒光且具有細(xì)胞透性Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,SantaCruzBiotechnology,Invitrogen,體聚合成F-肌動(dòng)的F-肌動(dòng)蛋白。蛋白。TocrisBioscience紫杉醇(Taxol)(C47H51NO14)結(jié)合于作微管蛋白的N端，促進(jìn)微管組裝并抑制微管蛋白分解溶于DMSO和甲醇?？鼓[瘤和抗白血病試劑。將細(xì)胞周期阻止于G2/M期。導(dǎo)致異常的有絲分裂并且有時(shí)會(huì)引起凋亡。303132,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,CellSig

12、nalingTechnolgy,CytoskeletonInc.鬼筆環(huán)肽C35H48N8O11S)肌動(dòng)蛋白與聚合的F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合并保持其穩(wěn)定，防止解聚的發(fā)生（F-肌動(dòng)蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)镚-肌動(dòng)蛋白）溶于乙醇和甲醇。從真菌中分離出的有毒雙環(huán)七肽。干擾富含肌動(dòng)蛋白的結(jié)構(gòu)行使功能。鬼筆環(huán)肽的偶聯(lián)物被用作確認(rèn)纖維狀肌動(dòng)蛋白的探針。333435,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,TocrisBioscience,SantaCruzBiotechnology,EnzoLifeScience表2.常用的細(xì)胞骨架激活劑。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）是真核生物中一種會(huì)形成互連的膜囊泡網(wǎng)絡(luò)的細(xì)胞器。它參與

13、了細(xì)胞物質(zhì)的合成、修飾和運(yùn)輸。它從細(xì)胞膜開(kāi)始伸展，經(jīng)過(guò)細(xì)胞質(zhì)，一直與核膜相連。取決于細(xì)胞類型、細(xì)胞功能和細(xì)胞需求，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有多種不同的功能。在結(jié)構(gòu)與功能上，它由兩種區(qū)域組成。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)：它是一系列扁平狀囊泡且胞漿側(cè)由核糖體組成。核糖體是細(xì)胞中的蛋白質(zhì)合成位點(diǎn)。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)加工膜及分泌蛋白，在某些白細(xì)胞中產(chǎn)生抗體，而在胰腺細(xì)胞中產(chǎn)生胰島素。其它功能還包括組裝過(guò)程中的起始N-糖基化和溶酶體酶的加工?；鎯?nèi)質(zhì)網(wǎng)：它是一個(gè)光滑的微管網(wǎng)絡(luò)并且不包含核糖體。它通常與粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相連，是那些負(fù)責(zé)將內(nèi)質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)物運(yùn)輸?shù)讲煌稽c(diǎn)的囊泡的過(guò)渡區(qū)域。它具有多種功能，包括脂質(zhì)合成、碳水化合物代謝、鈣離子濃度調(diào)節(jié)、藥物解毒和受

14、體附著到細(xì)胞膜蛋白。在肌肉中，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輔助肌肉細(xì)胞的收縮，在腦細(xì)胞中則合成雄性和雌性荷爾蒙。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)的蛋白折疊一旦失衡就會(huì)引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的應(yīng)激信號(hào)傳導(dǎo)通路或應(yīng)激響應(yīng)被稱作未折疊蛋白反應(yīng)（UPR）。最初的UPR只是嘗試通過(guò)停止蛋白翻譯并激活可增加參與蛋白折疊的分子伴侶的信號(hào)通路來(lái)恢復(fù)細(xì)胞的正常運(yùn)作。當(dāng)UPR的這種初始嘗試失敗而擾亂還在持續(xù)的情況下，UPR就會(huì)開(kāi)始誘導(dǎo)凋亡。下面提到的抑制劑是用于抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能或誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的，而提到的激活劑則用于誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能或抵抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的：抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)靶向p97相關(guān)的在DMSO中溶解度

15、達(dá)3637383940,蛋白降解去泛素化過(guò)程100mM,在乙醇中溶解度Sigma-Aldrich,(ERAD)（PAD）并抑制達(dá)5mM在淋巴樣細(xì)胞EMD/Millipore,TocrisEeyarestatinI(C27H25Cl2N7O7)依賴于ataxin-3(atx3)的去泛素化過(guò)程。抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中Sec61介導(dǎo)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)。系、BJAB、HBL-2、JEKO-1、Jurkat、KMS-12、MINO以及慢性淋巴細(xì)胞白血病中的原代白血病細(xì)胞中誘發(fā)細(xì)胞毒性。通過(guò)促凋亡蛋Bioscience,SantaCruzBiotechnology白NOXA誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。以可逆且ATP內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)競(jìng)爭(zhēng)性的方

16、式(Ki=3.2|jM)抑制ATP酶p97DBeQ(C22H20N4)蛋白降解途22204徑活性(對(duì)于野生型或C522Ap97的IC50=1-6|jM)可逆地抑制內(nèi)質(zhì)XestosponginC血管舒緩激網(wǎng)鈣庫(kù)中的血管(C28H50N2O2)肽和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)舒緩激肽-和氨285022的鈣外流甲酰膽堿-Ca2+外流。DMSO中溶解度達(dá)100Kifunensine(C8H12N2O6)蛋白降解(ERAD)的甘露糖苷酶活性。衣霉素誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。抑制N-糖基蛋白折疊化并阻斷N-糖(CH_.NO3960416苷蛋白-糖類鍵的形成。mM。在RPMI8226、HeLa和HEK29細(xì)胞中抑制細(xì)胞增殖。抑制caspa

17、se3/7活性及凋亡。4142,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,TocrisBioscience,BioVisionInc.溶于DMSO、乙醇和甲434445,醇。大環(huán)雙Sigma-Aldrich,-1-oxaquinolizidine的合EMD/Millipore,成形式。具有膜通透性。CaymanChemicals,可逆地抑制IP3受體。TocrisBioscience4647,水(雙蒸熱水)中溶解度Sigma-Aldrich,達(dá)50mM。生物堿化合EMD/Millipore,物。選擇性抑制負(fù)責(zé)加工CaymanChemicals,I類糖蛋白的a甘露糖苷TocrisB

18、ioscience,酶。SantaCruzBiotechnology.溶于DMF、DMSO和吡啶。衣霉素A、B、C和484950,D的混合物。引起G1期Sigma-Aldrich,Tocris阻滯。抑制N-乙酰葡糖胺Bioscience,磷酸轉(zhuǎn)移酶(GPT)。劑EMD/Millipore,Santa量依賴性地抑制DNA合CruzBiotechnology。成。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)毒胡蘿卜素(C34H50O12)肌漿網(wǎng)Ca2+ATP酶(SERCA)抑制肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶。抑制自噬過(guò)程并誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。溶于DMSO和乙醇?？蓾B透細(xì)胞。誘導(dǎo)凋亡。被用于誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞自噬。515253,S

19、igma-Aldrich,EMD/Millipore,TocrisBioscience.ERO1抑制劑I,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化選擇性抑制酵母溶于DMSOo體外抑制依54,EMD/MilliporeErodoxin酶1抑制劑內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化酶1賴于ERO1的硫氧還蛋(C7H5BrN2O5)(ERO1)。對(duì)小鼠EROIa(IC50=4005UyM)抑制較弱白-1(Trx1)氧化活性。與參與蛋白折疊、糖基化和細(xì)胞壁合成的基因聚類。兔抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白72(623-638)多克隆抗體555657,EMD/Millipore,USBiological,NovusBiologicals.識(shí)別小鼠大腦、脾臟、睪丸和大鼠腦、肌肉、

20、脾、睪丸組織中72kDa的ERp72蛋白。以及人宮頸上皮細(xì)胞(HeLa)、人成纖維細(xì)胞(A431)、人胸腺細(xì)胞(Hs67)和小鼠成纖維細(xì)胞(3T3)的細(xì)胞裂解物。表3.常用的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)抑制劑激活劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商5,8,11-二十碳三炔酸(C2uH28O2)在MDCK細(xì)胞中引發(fā)Ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中釋放。引起Ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和其它濃度達(dá)30yM的鈣庫(kù)中釋放出來(lái)乙醇中溶解度達(dá)25mg/ml，DMSO中溶解度達(dá)25mg/ml或溶于二甲基甲酰胺。脂肪氧化酶的抑制劑。在較高濃度下抑制環(huán)氧合酶。5859,Sigma-Aldrich,CaymanChemicals,EnzoLi

21、feSciencesSalubrinalC21H17Cl3N4OS)防止內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激保護(hù)細(xì)胞免受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所誘導(dǎo)的凋亡(EC5u-15pM)。溶于DMSO。選擇性抑制使真核翻譯啟動(dòng)因子2亞基a(elF-2a)去磷酸化的磷酸酶復(fù)合體606162,TocrisBioscience,SantaCruzBiotechnology,EMD/Millipore.牛磺脫氧膽酸(TUDCA)(C26H44NaNO6S)抵抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。溶于水。被用作去垢劑來(lái)使脂質(zhì)和膜結(jié)合蛋白增溶。606162,SigmaAldrich,SantaCruzBiotechnology,EMD/Millipore.表4.

22、常用的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激活劑。高爾基體高爾基體是真核細(xì)胞中的一種細(xì)胞器，是細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)的一部分。高爾基體長(zhǎng)約1yM,并由兩部分組成：被稱為潴泡的扁平膜囊和膜封閉的小泡。它在各種蛋白分泌前的加工過(guò)程中起著重要的作用。植物細(xì)胞壁中的多糖合成位點(diǎn)。高爾基體的各種功能包括：它從來(lái)自粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、含有蛋白質(zhì)的囊泡處接收蛋白并進(jìn)行進(jìn)一步修飾。細(xì)胞合成的各種大分子在分泌前或被送到各自目的地之前，都由它負(fù)責(zé)修飾、富集、分類及包裝。它通過(guò)加入糖基和磷酸基團(tuán)來(lái)對(duì)蛋白修飾。它在動(dòng)物細(xì)胞胞外基質(zhì)的蛋白聚糖合成中起著重要作用。抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商1,3-環(huán)己烷雙甲胺(CBM)(CeHZCNH)通過(guò)高爾

23、基體在體內(nèi)和體外都可以抑制外被體蛋白與高爾基體溶于乙醇和乙醚636465,Sigma-Aldrich,FisherScientific運(yùn)輸膜結(jié)合以及完整到質(zhì)細(xì)胞的分泌膜。溶于甲醇。可逆地布雷菲德菌素A(BFA)(C16H24O4)膜運(yùn)輸、高爾基體10能域間形成的界mg/ml)。導(dǎo)致高組裝面裂縫中選擇性爾基體和反面高爾GolgicideA(C17H14F2N2)和運(yùn)地可逆抑制順面基網(wǎng)的解體與分輸高爾基體ArfGEF散。抑制可溶性的GBF1。Arf屬于和膜結(jié)合的蛋白質(zhì)RasGTP酶家族分泌。并介導(dǎo)囊泡運(yùn)輸。胞凋亡。6970Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,SantaCr

24、uzBiotechnology,EMD/Millipore1-Deoxymannojirimycin(DMM)(C6H13NO/HCI)6134糖蛋抑制N-糖基化。白加抑制甘露糖苷酶工I。溶于乙醇和水。用于高爾基體介導(dǎo)的糖蛋白加工過(guò)程的研究。717273,EMD/Millipore,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,SantaCruzBiotechnology.表5.常用的高爾基體抑制劑。生物分子的分泌分泌是指細(xì)胞或腺體產(chǎn)生和釋放一種有用的物質(zhì)，包括激素、酶、細(xì)胞因子和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白。該過(guò)程中物質(zhì)被包裝進(jìn)囊泡然后以胞吐方式從細(xì)胞中分泌出來(lái)。分泌途徑：在真核細(xì)胞中，經(jīng)

25、典的分泌過(guò)程是通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和其它細(xì)胞內(nèi)囊泡來(lái)實(shí)現(xiàn)的，是一個(gè)由細(xì)胞嚴(yán)格調(diào)控的過(guò)程。廣義上來(lái)說(shuō)，要輸送出去的蛋白被核糖體合成后停靠在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。然后含有正確折疊的蛋白的囊泡進(jìn)入高爾基體。糖基化修飾后進(jìn)一步進(jìn)行翻譯后修飾。然后蛋白質(zhì)進(jìn)入分泌囊泡，沿著細(xì)胞骨架移至細(xì)胞邊緣。最后一步就是囊泡在一個(gè)被稱為融合孔的結(jié)構(gòu)處與細(xì)胞膜融合并進(jìn)行胞吐，蛋白就被釋放到環(huán)境中。非經(jīng)典的蛋白質(zhì)分泌途徑：有許多蛋白不是通過(guò)牽涉到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的經(jīng)典途徑來(lái)分泌的，相反是利用各種不同的非經(jīng)典的蛋白質(zhì)分泌途徑來(lái)分泌的。這些蛋白包括FGF-1(aFGF)、FGF-2(bFGF)和白細(xì)胞介素-1(IL1)7475。非

26、經(jīng)典的分泌機(jī)制大致可分為兩種。1)直接使物質(zhì)跨過(guò)胞質(zhì)蛋白的質(zhì)膜進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)，例如FGF2的分泌。2)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)中間物，例如?；o酶A結(jié)合蛋白的分泌76。抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商CP-10447(Ci6Hi3BrN2O)載脂蛋白B(apoB)分泌抑制微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白(MTP,MTTP)并刺激apoB的早期內(nèi)質(zhì)網(wǎng)降解溶于DMSO(10mg/ml)。抑制甘油三酯分泌而不影響其合成。人體肝臟微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)活性的有效抑制劑。777879,Sigma-Aldrich,PfizerExo1(C15H12NFO3)胞吐在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中通過(guò)誘導(dǎo)高爾基體膜解體和成管以及重新運(yùn)輸回內(nèi)質(zhì)

27、網(wǎng)來(lái)可逆地抑制從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體間的囊泡運(yùn)輸。溶于DMSO、DMF、甲醇或乙醇。它的影響僅限于高爾基體，不能影響其它的內(nèi)吞細(xì)胞器?；罨郀柣鵄RF1(ADP核糖基化因子)GTP酶。80,Sigma-Aldrich,EMDMillipore類似于BFA但是Exo2(廿18叫025)胞吐選擇性更強(qiáng)?？赡艿陌悬c(diǎn)包括TGN(反面高爾基網(wǎng))、高爾基體和一部分早期內(nèi)涵溶于DMSO(20mg/ml)。抑制志賀毒素運(yùn)送到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。作為胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)囊环N化學(xué)探針。818283,Sigma-Aldrich,SantaCruzBiotechnology體生長(zhǎng)激素抑制素(C76Hi04Ni80i9S2)生長(zhǎng)激素、胰島素和胰

28、高血糖素抑制生長(zhǎng)激素、胰島素和胰高血糖素的內(nèi)源性肽溶于5%乙酸，水中溶解度為0.30mg/ml。它是一個(gè)環(huán)狀十四肽。同樣抑制電壓門(mén)控Ca2+通道。848586,TocrisBioscience,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore胃腸胰肽激素和生長(zhǎng)激素它是一個(gè)合成的8788,奧曲肽(C49H66N10O10S2)較長(zhǎng)作用八肽，是生長(zhǎng)激素抑制素溶于水Sigma-Aldrich,Bachem,Tocris糸的類似物。Bioscience它靶向于GHRH(生長(zhǎng)激素釋放SXN101742,一種定向分泌抑制劑(TSI)生長(zhǎng)激素激素)受體并使參與GH(生長(zhǎng)激素)胞吐過(guò)程的TSI是來(lái)自于肉

29、毒毒素(BoNTs)的重組蛋白。8990,SyntaxinLtd.SNARE蛋白耗盡。抗FGF1抗體酸性成纖維酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體/Beta血管內(nèi)91929394,表6.常用的分泌抑制劑激活劑a-蛛毒素細(xì)胞生長(zhǎng)因皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗體。產(chǎn)自于兔子或小鼠。子(aFGF)與人反應(yīng)。其應(yīng)用包括WB、ELISA、IHC-P及中和。用于各種應(yīng)用的方法及濃度請(qǐng)參考生產(chǎn)商的操作流程靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果溶于50%甘油。那格列奈(C19H27NO3)血管緊張素II(C50H71N13O12)Sigma-aldrich,Abcam,Origene,ThermoScientific.參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商與蛛毒

30、素受體結(jié)合。利用誘導(dǎo)胞吐Ca2+依賴性和非依賴性的作用機(jī)制。引起神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。導(dǎo)致Ca2+非依賴性的胰島素胞吐。刺激皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)物中Ca2+非依賴性的GABA和谷氨酸釋放。溶于DMSO胰島素醛固酮959697,AlomoneLabs,EMD/Millipore,EnzoLifeSciences通過(guò)增加胞漿中Ca2+濃度來(lái)引起胰腺0-細(xì)胞中的胰島素分泌。(5mg/ml)。它是Kir6.2/SUR1通道的抑制劑。刺激ATP敏感性鉀通道依賴性和非依賴性胰島素分泌。降9899100101,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,TCIAmerica血糖藥。溶于水或5%乙

31、酸。刺激血管生成并增加微血管密度。有很強(qiáng)導(dǎo)致腎上的血管收縮效腺中的醛果。在血管平滑固酮釋放肌細(xì)胞中活化p60c-src和ERK1/2、JNK102103104,Sigma-Aldrich,Calbiochem/EMD/Millipore.及p38絲裂原活化蛋白激酶。甲苯磺丁脲(磺脲類)(C12H18N2O3S)胰島素通過(guò)直接溶于DMSO或作用于胰100%乙醇。被105106107108,SantaCruzBiotechnology,腺0細(xì)胞CYP2C9(甲苯中的ATP敏感性鉀通道引起胰島素釋放磺丁脲羥化酶)所代謝Sigma-Aldrich,Abeam.瑞格列奈(C27H36N2O4)胰島素關(guān)閉

32、胰腺0細(xì)胞質(zhì)膜上的ATP敏感性鉀(KATP)通道在DMSO中溶解度達(dá)100mM,在乙醇中溶解度達(dá)100mM。體內(nèi)具有降血糖效果。109110111112,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience溶于水(100mg/ml)、甲醇油酸鈉(CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COONa)載脂蛋白B100(Apo-B)增加肝臟中的載脂蛋白B100分泌(50mg/ml)和乙醇。激活肝細(xì)胞中的蛋白激酶C(PKC)。在較高生理劑量下抑制載脂蛋白B100分113114,SantaCruzBiotechnology,Sigma-Aldrieh,TCIAmerica泌。溶于5%的乙酸或水。

33、它是一種分泌素(C130H220N44O40)胰液刺激富含碳酸鹽的胰液分泌強(qiáng)堿性胃腸肽類激素。放松平滑肌。引起胰管線中劑量依賴性的cAMP積累。115116117,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore表7.常用的分泌激活劑。內(nèi)吞細(xì)胞通過(guò)內(nèi)陷產(chǎn)生的囊泡從膜上脫落來(lái)吸收大分子和溶質(zhì)的過(guò)程被稱為“內(nèi)吞”。內(nèi)吞可大致分為兩類：1)吞噬和2)胞飲。吞噬是特定細(xì)胞攝取大顆粒。胞飲是所有細(xì)胞中都發(fā)生的攝入液體和溶質(zhì)過(guò)程。當(dāng)泛指細(xì)胞內(nèi)化時(shí)，“吞噬”和“胞飲”多數(shù)被用作同義詞。主要有三種內(nèi)吞途徑：1)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，2)胞膜窖介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和3)巨胞飲。在這三種內(nèi)吞途徑中，內(nèi)化步驟始于

34、質(zhì)膜內(nèi)陷并將該膜轉(zhuǎn)變?yōu)榉Q作內(nèi)涵體的封閉囊泡。每個(gè)途徑都有控制內(nèi)化的一套分子。抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商氯丙嗪網(wǎng)格引起網(wǎng)格蛋白溶于水和甲醇。抑制鈣118119,SantaCruz(C17H19CIN2SHCl)蛋白網(wǎng)絡(luò)在內(nèi)涵體調(diào)蛋白依賴性的環(huán)核Biotechnology,介導(dǎo)膜上的組裝并苷酸磷酸二酯酶和一的內(nèi)阻止細(xì)胞表面氧化氮合成酶激活。對(duì)吞作上的被膜小窩白血病細(xì)胞具有細(xì)胞用組裝。毒性和抗增殖活性。Sigma-Aldrich,EMD/Millipore溶于DMSOo可滲透胞膜細(xì)胞。抑制表皮生長(zhǎng)因窖介可逆性抑制酪子受體激酶?？寡苌鹑府慄S素（C15H10O5）導(dǎo)的氨酸激酶

35、成劑。抑制腫瘤細(xì)胞增內(nèi)吞殖。抑制腫瘤細(xì)胞分作用化。體外抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II活性。胞膜窖介導(dǎo)的清除膽固醇內(nèi)吞作用水中溶解度達(dá)50mg/mlo由相同的環(huán)狀a1,4-糖苷鍵連接的D-葡萄吡喃糖單元形成的七元環(huán)。形成包合物。常用的絡(luò)合劑。120121119122,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore0-環(huán)糊精（c42h70o35）123124,Sigma-AldrichFisherScientific,EMD/Millipore鹽酸阿米洛利C6H8ClN7O.HCl.H2O）巨胞飲抑制Na+/H+交換。降低膜下pH值。阻止Rac1和Cdc42的信號(hào)傳導(dǎo)。S水中溶解度達(dá)50mg/mloT

36、-型鈣通道阻滯劑。抑制尿激酶纖溶酶原激活物（uPA）o抑制血管生成。125126127,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD4Bioscience,AlomoneLabs網(wǎng)格蛋白溶于DMSO和乙醇。介導(dǎo)抑制動(dòng)力蛋白同樣抑制Drp1（線粒128129130,的內(nèi)1和2的GTP體）。會(huì)引起纖維化并Sigma-Aldrich,Tocris吞作酶活性（IC50在胸膜間皮細(xì)胞中誘Bioscience,SantaCruz用中5015pM)。導(dǎo)PAI-1。抑制BSC1Biotechnology,的動(dòng)力蛋白細(xì)胞的細(xì)胞鋪展和遷移。EMD4Bioscience,AbcamDynas

37、ore(C18H14N2O4)非律平（C35H58O11）胞膜窖介導(dǎo)的內(nèi)吞作用與膜上的膽固醇結(jié)合并形成超微機(jī)構(gòu)聚集與復(fù)合。非律平由4個(gè)異構(gòu)的多烯大環(huán)內(nèi)酯組成。非律平III是主要成分?？股睾涂拐婢?。抑制朊蛋白（PrP）的內(nèi)吞。123131132133,CaymanChemical,Sigma-Aldrich,SantaCruzBiotechnology.制霉菌素（C47H75NO17）胞膜窖介導(dǎo)的內(nèi)吞膽固醇隔離。溶于DMSO、DMF、乙醇和甲醇?？刮⑸铮ń湍浮⒅гw）。增加Na+-K+泵活性。134135136,Sigma-Aldrich,EMD4Bioscience,Invitrogen內(nèi)

38、涵阻止內(nèi)涵體酸溶于氯仿、乙醇和甲醇。聚醚類抗生素。Na+離子載體。阻斷糖莫能菌素（C36H61O11.Na）體成366111熟化蛋白分泌。阻斷神經(jīng)酰胺在高爾基體中的運(yùn)輸137138139140,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,EnzoLifeSciences磷酸氯喹(Cl8H26C叫POq)它是一種可以裝入內(nèi)涵體和內(nèi)涵溶酶體這樣的體成酸性囊泡的弱熟堿，從而抑制內(nèi)涵體酸化和溶酶體酶活性。水中溶解度達(dá)100mM。內(nèi)涵體Toll樣受體抑制劑（拮抗劑）。在許多癌癥細(xì)胞系中抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。128139141,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience

39、,Imgenex渥曼青霉素（C23H24O8）142143144145,CellSignalingTechnology,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD/Millipore抑制磷脂酰肌巨胞醇-3激酶（PI3飲激酶）（IC50=5nM）溶于DMSO。具有細(xì)胞通透性。在很高濃度時(shí)抑制肌球蛋白輕鏈激酶和PI4激酶活性。抑制polo樣激酶1（PLK1）（IC50=5.850nM)。表8常用的內(nèi)吞作用抑制劑。HOE.64和LY294002是另外兩種巨胞飲抑制劑。單丹磺酰尸胺和巴弗洛霉素A1是用于研究網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用的另外兩種抑制劑。參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商激活劑靶

40、點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果在體內(nèi)和體外DMSO中可溶解至佛波醇-12-十四酸酯巨都激活蛋白激100mM，在乙醇中可146147148,Sigma-Aldrich,-13-乙酸酯（PMA）胞酶C。誘導(dǎo)膜溶解至10mM。具有感EnzoLifeSciences,Tocris（C36H56O8）（佛波酯）飲轉(zhuǎn)運(yùn)和酶激光性。強(qiáng)力的腫瘤誘發(fā)Bioscience,Abcam活。物內(nèi)溶于DMSO和乙醇。12-O-十四烷酰佛波醋結(jié)合并激活蛋具有感光性。強(qiáng)力的腫149150151152,酸酯-13(TPA)吞瘤誘發(fā)物。人單核作用白激酶CSigma-Aldrich,Cellsignaling（C36H56O8）（佛波酯）

41、U937細(xì)胞中誘導(dǎo)凋technology亡。表9常用的內(nèi)吞作用激活劑。12,13-二丁酸佛波醇是另一種類似于PMA和TPA的佛波酯，被用于刺激內(nèi)吞攝取。核運(yùn)輸核運(yùn)輸主要是通過(guò)核孔復(fù)合物（NPC）進(jìn)行的。離子和小分子是通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散穿越NPC來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)的。較大核蛋白質(zhì)、RNA及核糖核蛋白的輸入由核定位信號(hào)（NLS）介導(dǎo)?？坑诤丝住Ａ硪环矫?，核輸出是由核輸出信號(hào)（NES）介導(dǎo)的。核輸入途徑大致由四步組成：1）在輸入物、輸入蛋白a和輸入蛋白B間形成三聚復(fù)合物，2）將復(fù)合物?？坑贜PC（核孔復(fù)合物），3）通過(guò)中央通道進(jìn)行轉(zhuǎn)位，4）復(fù)合物解離并將輸入物釋放到核質(zhì)中。抑制劑靶機(jī)制點(diǎn)核通過(guò)直接與核孔相互作用來(lái)

42、麥胚凝集素（WGA）輸抑制核蛋白運(yùn)入輸。直接與CRM1核（輸出蛋白來(lái)普霉素A(C32H46O6)輸-1）這一主要出的核輸出蛋白結(jié)合。抑制核運(yùn)輸受體Crm1，該蛋核白用于識(shí)別底來(lái)普霉素B（C33H48O6）輸物蛋白中被稱出為核輸出序列（NES）的短肽核制含有RatjadoneA(C28H40O5)輸LR-NES(富含出亮氨酸的核輸出信號(hào)）的蛋白依維菌素（C48H74O14核輸入最近被發(fā)現(xiàn)對(duì)(22,23-dihydroavermectin于輸入蛋白B1a)+c47h72o14a/0介導(dǎo)的核(22,23dihydroavermectin輸入具有廣譜通過(guò)與CRM1共價(jià)結(jié)合來(lái)抑作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)

43、源及供應(yīng)商細(xì)胞生物學(xué)中廣泛使用的一種外源凝集素。對(duì)N-乙酰-0-D-葡糖胺基和N-乙153154155,酰-0-D-葡糖胺寡聚物有親Sigma-Aldrich,和性。用于細(xì)胞粘附研究。PolysciencesInc.,也用于影響淋巴細(xì)胞活化Invitrogen及研究基于糖類的治療方法。溶于甲醇和乙醇。來(lái)普霉156157,素A和B的性質(zhì)是很相似Sigma-Aldrich,的。具有細(xì)胞通透性，抗SantaCruz真菌及抗生素?？梢哉T導(dǎo)Biotechnology,野生型ERK5在核內(nèi)積聚。EMD/Millipore溶于乙醇。抗真菌、抗生素?？鼓[瘤細(xì)胞毒素。比來(lái)普霉素A效力強(qiáng)兩倍。158159160,

44、LC受來(lái)普霉素B影響的含labs,Sigma-Aldrich,NES的蛋白包括HIV-1CellsignalingREV、肌動(dòng)蛋白、c-Abl、technology,細(xì)胞周期蛋白B1、EMD/MilliporeMDM2/p53、MPF、PKA和MEK。溶于含水緩沖液和甲醇。161162163,可通透細(xì)胞的聚酮?？股鶶igma-Aldrich,素。與來(lái)普霉素B一樣有EMD/Millipore,Cell效。抑制擴(kuò)增。導(dǎo)致腫瘤signaling細(xì)胞在G1期發(fā)生細(xì)胞周technology,Santa期阻滯。CruzBiotech.抗病毒。對(duì)于研究蛋白質(zhì)164165166,MP核輸入十分有用。調(diào)節(jié)谷Bi

45、omedicals,氨酸-GABA活化的氯通Sigma-Aldrich,道。FisherScientificBib)作用表10.核運(yùn)輸?shù)某Ｓ靡种苿?。一般為了誘導(dǎo)核輸入會(huì)將設(shè)計(jì)成NLS的肽段結(jié)合在輸入底物上。另一方面，針對(duì)諸如輸入蛋白和運(yùn)蛋白等可以識(shí)別NLS的核運(yùn)輸受體而設(shè)計(jì)的細(xì)胞通透性肽被用于抑制核運(yùn)輸167。細(xì)胞收縮在特定胞內(nèi)Ca2+農(nóng)度下，磷脂酶C(PLC)、蛋白激酶C(PKC)、RhoGTP酶、Rho激酶(RhoA的下游效應(yīng)蛋白)、肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)和肌球蛋白輕鏈磷酸酶(MLCPh)都會(huì)參與細(xì)胞收縮過(guò)程。放大ERPRlioRockpAI)PActinPhivated)MLCKI

46、nteminreceiptorsMLCPh(hiactivated)MLCECMReceiptorsthatactivatePLCATPRlio-GTPMLC圖2.細(xì)胞收縮MLCK和MLCPh的作用：細(xì)胞收縮主要由肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白介導(dǎo)。肌球蛋白輕鏈的磷酸化會(huì)誘發(fā)肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白分子之間的相互作用。肌球蛋白輕鏈的磷酸化是由肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)活化與肌球蛋白輕鏈磷酸酶(MLCPh)之間的平衡所決定的。RhoGTP酶和Rho激酶的作用:細(xì)胞通過(guò)粘附位點(diǎn)與微環(huán)境間的相互作用會(huì)活化RhoGTP酶?；罨腞hoGTP酶會(huì)與絲氨酸/蘇氨酸激酶、Rho激酶、ROK及相關(guān)的p160ROCK等激酶結(jié)合

47、并提高它們的活性?；罨腞ho-激酶會(huì)抑制肌球蛋白磷酸酶的活性，從而促使肌球蛋白輕鏈（MLC）磷酸化。PLC、Ca2+和PKC的作用168:收縮過(guò)程始于磷脂酶C（PLC）活化，從而產(chǎn)生兩種第二信使，甘油二酯（DG）和肌醇1,4,5-三磷酸（IP3）。IP3會(huì)導(dǎo)致Ca2+從肌質(zhì)網(wǎng)中釋放出來(lái)。Ca2+會(huì)以兩種方式來(lái)誘導(dǎo)收縮：1）Ca2+與DG一起激活蛋白激酶C。PKC則通過(guò)使L型Ca2+通道和其它調(diào)控橫橋周期的蛋白發(fā)生磷酸化來(lái)進(jìn)一步促進(jìn)收縮，2）Ca2+與鈣調(diào)蛋白結(jié)合并活化肌球蛋白輕鏈激酶（MLCK）。現(xiàn)在用于研究細(xì)胞收縮途徑的各種抑制劑和激活劑包括:抑制劑靶點(diǎn)機(jī)制作用特點(diǎn)及效果參考文獻(xiàn)、來(lái)源及供應(yīng)商溶于DMSO和甲醇。也抑制蛋抑制肌球蛋白1