分子生物學(xué)知識點歸納

1、分子生物學(xué)1 .DNA勺一級結(jié)構(gòu)：指DNA分子中核甘酸的排列順序。2 .DNA勺二級結(jié)構(gòu)：指兩條DNAII鏈形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)、三股螺旋結(jié)構(gòu)以及四股螺旋結(jié)構(gòu)。3 .DNA勺三級結(jié)構(gòu)：雙鏈DNA進(jìn)一步扭曲盤旋形成的超螺旋結(jié)構(gòu)。4 .DNA的甲基化：DNA的一級結(jié)構(gòu)中，有一些堿基可以通過加上一個甲基而被修飾，稱為DNA的甲基化。甲基化修飾在原核生物DNA中多為對一些酶切位點的修飾，其作用是對自身DNA產(chǎn)生保護(hù)作用。真核生物中的DNA甲基化則在基因表達(dá)調(diào)控中有重要作用。真核生物DNA中，幾乎所有的甲基化都發(fā)生于二核甘酸序列5-CG-3的C上，即5-mCG-3.5 .CG島：基因組DNM大部分CG二核甘

2、酸是高度甲基化的，但有些成簇的、穩(wěn)定的非甲基化白CG小片段，稱為CG島，存在于整個基因組中。CG島特點是G+C含量高以及大部分CG二核甘酸缺乏甲基化。6 .DNAa螺旋結(jié)構(gòu)模型要點：(1) DNA是反向平行的互補雙鏈結(jié)構(gòu)。(2) DNA鏈?zhǔn)怯沂致菪Y(jié)構(gòu)。螺旋每旋轉(zhuǎn)一周包含了10對堿基，螺距為3.4nm.DNA雙鏈說形成的螺旋直徑為2ns每個堿基旋轉(zhuǎn)角度為36度。DNAZ螺旋分子表面存在一個大溝和一個小溝，目前認(rèn)為這些溝狀結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)和DNA間的識別有關(guān)。(3) 疏水力和氫鍵維系DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定橫向依靠兩條鏈互補堿基間的氫鍵維系，縱向則靠堿基平面間的疏水性堆積力維持。

3、7 .核小體的組成：染色質(zhì)的基本組成單位被稱為核小體，由DN解口5種組蛋白H1,H2A,H2B,H3和H4共同構(gòu)成。各兩分子的H2A,H2B,H3和H4共同構(gòu)成八聚體的核心組蛋白，DNA雙螺旋纏繞在這一核心上形成核小體的核心顆粒。核小體的核心顆粒之間再由DNA和組蛋白H1構(gòu)成的連接區(qū)連接起來形成串珠樣結(jié)構(gòu)。8 .順反子(Cistron)：由結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄生成的RNA序列亦稱為順反子。9 .單順反子(monocistron)：真核生物的一個結(jié)構(gòu)基因與相應(yīng)的調(diào)控區(qū)組成一個完整的基因，即一個表達(dá)單位，轉(zhuǎn)錄物為一個單順反子。從一條mRNAR能翻譯出一條多肽鏈。10 .多順反子(polycistron):

4、原核生物具有操縱子結(jié)構(gòu)，幾個結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄在一條mRNA鏈上，因而轉(zhuǎn)錄物為多順反子。每個順反子分別翻譯出各自的蛋白質(zhì)。11 .原核生物mRNA吉構(gòu)的特點：(1)原核生物mRN柱往是多順反子白1即每分子mRNA?有幾種蛋白質(zhì)的遺傳信息。(2) mRNA5端無帽子結(jié)構(gòu)，3端無多聚A尾。(3) mRNAr般沒有修飾堿基。12 .真核生物mRNA吉構(gòu)的特點：(1) 5端有帽子Z勾。即7甲基鳥喋吟三磷酸鳥昔n7GpppN(2) 3端大多數(shù)帶有多聚腺甘酸尾巴。(3)分子中可能有修飾堿基，主要有甲基化。(4)分子中有編碼區(qū)和非編碼區(qū)。14. tRNA的結(jié)構(gòu)特點(1) tRNA是單鏈小分子。(2) tRNA含有

5、很多稀有堿基。(3) tRNA的5端總是磷酸化，5末端核甘酸往往是pG.(4) tRNA的3端是CCAOH序列。是氨基酸的結(jié)合部位。(5) tRNA的二級結(jié)構(gòu)形狀類似于三葉草，含二氫尿喀咤環(huán)(D環(huán))、T環(huán)和反密碼子環(huán)。(6) tRNA的三級結(jié)構(gòu)是倒L型。D環(huán)和T環(huán)在L的拐角上。15. rRNA（1） rRNA是細(xì)胞內(nèi)含量最豐富的RNA它們與核糖體蛋白共同構(gòu)成核糖體，后者是蛋白質(zhì)合成的場所。（2）核糖體和rRNA一般都用沉降系數(shù)S表示大小。原核生物核糖體白沉降系數(shù)為70S,由50S和30S兩個大小亞基組成，30S小亞基含有16SrRNA和21種蛋白質(zhì)。50S大亞基含有23S和5SrRNA以及34

6、種蛋白質(zhì)。真核生物沉降系數(shù)為80S,由大小亞基組成。40S小亞基含有18SrRNA和30多種蛋白質(zhì)。60SrRNA含有5S、5.8S和28SrRNA以及大約45種蛋白質(zhì)。16 .核酶（ribozyme）:某些RNA子能催化自身或其他RNA分子進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，即具有酶樣的催化活性，這類具有催化活力的RN麗為核酶。核酶分為3類：（1）異體催化的剪切型。（2）自體催化的剪切型（3）內(nèi)含子的自我剪切型。17 .核內(nèi)不均一RNA（hnRNA：真核生物轉(zhuǎn)錄生成的mRN廁體即為hnRNA這類mRNAltf體必須經(jīng)過一系列的加工處理才能變成成熟的mRNA加工過程的主要環(huán)節(jié)包括：（1）5端加帽（2）3端加尾（3）

7、內(nèi)含子的切除和外顯子的連接（4）分子內(nèi)部的甲基化修飾（5）核甘酸序列的編輯作用。18 .miRNA是一種單鏈小分子RNA廣泛存在于真核生物中，是一組不編碼蛋白質(zhì)的短序列RNA其特點就是高度的保守性、時序性和組織特異性。研究表明miRNA可能決定組織和細(xì)胞的功能特異性，也可能參與了復(fù)雜的基因調(diào)控，對組織的發(fā)育起重要作用。19 .siRNA:小干擾RNA是人工合成白短的雙鏈RNA它可抑制細(xì)胞內(nèi)特定基因的表達(dá)，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄后基因失活。siRNA是RNAi的重要工具。20 .反義RNA堿基序列正文?和有意義mRNAT補的RNA稱為反義RNA這類RNA也是單鏈RNA可與mRNA1已對形成雙鏈，最終抑制mRN

8、A乍為模板進(jìn)行翻譯，這是反義RNAi要的調(diào)控功能。21 .順式作用元件（cis-actingelement）:真核生物基因中的調(diào)控序列被稱為順式作用元件，包括：啟動子和上游啟動子元彳%增強子，反應(yīng)元件，Poly（A）加尾信號。22 .增強子（enhancer）：是一段短的DNA列，其中含有多個作用元件，可以特異性與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，增強基因的轉(zhuǎn)錄活性。增強子可以位于基因的任何位置，增強子的功能與其位置和方向無關(guān)。23 .基因：是核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位，是指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA序列信息及表達(dá)這些信息所必需的全部核甘酸序列。一個基因不僅僅包括編碼蛋白質(zhì)肽鏈或RNA的核酸序列，還包

9、括保證轉(zhuǎn)錄所必需的調(diào)控序列及位于編碼區(qū)5端上游的非編碼序列，內(nèi)含子和位于編碼區(qū)3端下游的非編碼序列。24 .基因組：泛指一個細(xì)胞或病毒的全部遺傳信息。在真核生物體中，基因組是指一套完整單倍體DN解口線粒體DNA勺全部序列，既包括編碼序列，也包括非編碼序列。25 .病毒基因組包括：單鏈正股RNA單鏈負(fù)股RNA雙鏈RNA雙鏈DNA單鏈正股DNA26.SARSS狀病毒屬于：單鏈正股RNAW毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒屬于：單鏈正股RNAW毒。27 .逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組包括三個結(jié)構(gòu)基因：gag、pol和envo分別編碼：核心蛋白、逆轉(zhuǎn)錄酶和膜蛋白。28 .操縱子（operon）:是指數(shù)個功能上相關(guān)聯(lián)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一

10、起，構(gòu)成信息區(qū)，連同其上游的調(diào)控區(qū)（包括啟動子和操縱序列）和下游的轉(zhuǎn)錄終止信號所構(gòu)成的基因表達(dá)單位，所轉(zhuǎn)錄的RNW多順反子。29 .質(zhì)粒：是存在于細(xì)菌染色體之外的、具有自主復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子。30 .質(zhì)粒的不相容性：具有相同復(fù)制起始位點和分配區(qū)的兩種質(zhì)粒不能共存于一個宿主菌，這種現(xiàn)象稱為質(zhì)粒的不相容性。31 .轉(zhuǎn)座因子：既可移動的基因成分，是指能在一個DNA子內(nèi)部或兩個DN冊子之間移動的DNM段。原核生物的轉(zhuǎn)座因子包括：插入序列、轉(zhuǎn)座子和Mu噬菌體。32 .插入序列：是一類較小的沒有表型效應(yīng)的轉(zhuǎn)座因子，由一個轉(zhuǎn)位酶基因及兩側(cè)的反向重復(fù)序列組成。33 .轉(zhuǎn)座子：是一類較大的可移動成分，

11、除有關(guān)轉(zhuǎn)座的基因外，至少帶有一個與轉(zhuǎn)座作用無關(guān)的并決定宿主菌遺傳性狀的基因。34 .斷裂基因：真核生物的結(jié)構(gòu)基因，由若干個編碼區(qū)和非編碼區(qū)互相間隔而又連續(xù)鑲嵌而成，去除編碼區(qū)再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質(zhì)這些基因稱為斷裂基因。35 .snRNA:核內(nèi)小RNA分子中尿喀咤含量最豐富。snRNA和核內(nèi)蛋白質(zhì)組成小分子核糖核蛋白體，作為RN頌接的場所。36 .啟動子：能夠被RNA聚合酶識別并結(jié)合并起始轉(zhuǎn)錄的核甘酸序列。典型的啟動子包括TATA盒，CAAT盒和GC盒。37 .反應(yīng)元件：一些信息分子的受體被細(xì)胞外信息分子激活后，能與特異的DNA序歹U結(jié)合，調(diào)控基因的表達(dá)。這些特異的DNA

12、序列實際上也是順式元件，由于能介導(dǎo)基因?qū)?xì)胞外的某種信號產(chǎn)生反應(yīng)，被稱為反應(yīng)元件。38 .基因家族：指核甘酸序列或編碼產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)具有一定程度同源性的一組基因。39 .端粒DNA1復(fù)序列：TTAGGG微衛(wèi)星DNA常見重復(fù)單位（AC）和（TG）。40 .衛(wèi)星DNA是出現(xiàn)在非編碼區(qū)的串聯(lián)重復(fù)序列。其特點是具有固定的重復(fù)序列，該重復(fù)單位首尾相連形成重復(fù)序列片段，通常存在于間隔DN府口內(nèi)含子中。衛(wèi)星DNA可分為大衛(wèi)星DNA小衛(wèi)星DNA微衛(wèi)星DNA41 .端粒：以線性染色體形式存在的真核基因組DNA勺末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)，端粒。該結(jié)構(gòu)是一段DNA列和蛋白質(zhì)形成的一種復(fù)合體，僅在真核細(xì)胞染色體末端存在。端

13、粒的功能主要有：保護(hù)線性DNA的完整復(fù)制，保護(hù)染色體末端及決定細(xì)胞的壽命等。42 .Alu家族：序列中有限制性內(nèi)切酶Alu的酶切位點。重復(fù)單位是300bp.屬短散在核元件，為靈長類基因組所特有。43 .假基因：是指與某些有功能的基因結(jié)構(gòu)相似，但不能表達(dá)基因產(chǎn)物的基因。44 .人類基因組的四張圖譜：遺傳圖、物理圖、序列圖和轉(zhuǎn)錄圖。遺傳圖指基因或DNA標(biāo)記在染色體上以遺傳距離表示的相位置。物理圖指基因或DNA標(biāo)記間的實際距離。序列圖指人類基因組的全部核昔酸序列，也是最詳盡的物理圖。轉(zhuǎn)錄圖指基因圖譜。45 .端粒酶：由三部分組成，端粒RNA端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶，端粒酶協(xié)同蛋白。端粒酶兼有提供RNA莫版和催

14、化逆轉(zhuǎn)錄酶的功能。端粒酶通過一種爬行模型的機制維持染色體的完整。46 .半保留復(fù)制：子代細(xì)胞的DNA一股單鏈從親代完整的接受過來，另一股單鏈則完全重新合成，兩個子細(xì)胞的DNATB和親代DNAM基序列一致，這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制。47 .半不連續(xù)復(fù)制：順著解鏈方向生成的子鏈，復(fù)制是連續(xù)進(jìn)行的，這股鏈稱為領(lǐng)頭鏈。另一股鏈因為復(fù)制方向與解鏈方向相反，不能順著解鏈方向連續(xù)延長，必須等模板鏈解開至足夠長度，然后從5-3生成引物并復(fù)制子鏈。延長過程中，又要等待下一段有足夠長度的模板再次生成引物而延長。這股不連續(xù)復(fù)制的鏈稱為隨從鏈。領(lǐng)頭鏈連續(xù)復(fù)制而隨從鏈不連續(xù)復(fù)制，這就是復(fù)制的半不連續(xù)復(fù)制。48 .岡崎

15、片段：隨從鏈的復(fù)制由于與解鏈方向相反，必須待母鏈解開足夠長度后才開始生成引物接著延長。復(fù)制中形成的不連續(xù)復(fù)制片斷就是岡崎片段。49 .滾環(huán)復(fù)制：是某些低等生物或染色體外的DNA的復(fù)制形式。環(huán)狀DN做卜環(huán)打開，伸出環(huán)外作母鏈復(fù)制，內(nèi)環(huán)不打開一邊滾動一邊復(fù)制。最后，一個雙鏈環(huán)就滾動復(fù)制成兩個雙鏈環(huán)。50 .TT二聚體：在紫外線照射下，相鄰的兩個DNA分子上的喀咤堿基之間共價結(jié)合而成的。51 .著色性干皮病：是由于DNA員傷修復(fù)有缺陷而造成的一種遺傳性疾病，患者有較高的皮膚癌發(fā)病傾向。對該病的研究，發(fā)現(xiàn)了一些與切除損傷部位有關(guān)的蛋白質(zhì)，稱為XP蛋白。52 .切除修復(fù)：DNAfg傷修復(fù)的一種方式。通過

16、切除損傷部位，剩下的空隙由DNA-polI催化dNTP聚合而填補，最后由DNA連接酶結(jié)合裂隙。切除損傷在原核生物需Uvr蛋白類，真核生物需XP蛋白類。53 .光修復(fù)：生物體內(nèi)有一種光修復(fù)酶，被光激活后能利用光所提供的能量使紫外線照射引起的喀咤二聚體分開，恢復(fù)原來的非聚合狀態(tài)，稱為光修復(fù)。54 .DNA損傷的修復(fù)類型：光修復(fù)、切除修復(fù)、重組修復(fù)和SOS啰復(fù)。55 .重組修復(fù)時，recA蛋白被激活，使得LexA蛋白被水解。56 .突變的分子改變類型：(1)錯配：DNA分子上的堿基配對又稱點突變。(2) 缺失，插入和框移：缺失和插入都可以導(dǎo)致框移突變。框移突變是指三聯(lián)體密碼的閱讀方式改變，造成蛋白質(zhì)

17、氨基酸排列順序發(fā)生改變，其后果是翻譯出的蛋白質(zhì)可能完全不同。(3)重排：DNA分子中較大片斷的交換，稱為重組或重排。57 .點突變分為：轉(zhuǎn)換和顛換。轉(zhuǎn)換是指由一種喀咤變成另一種喀咤，或一種喋吟變成另一種喋吟。顛換是指由喀咤變成喋吟，或由喋吟換為喀咤。58 .突變的意義：(1) 突變是進(jìn)化、分化的分子基礎(chǔ)。(2) 只有基因型改變的突變。(3) 致死性的突變。(4) 突變是某些疾病的發(fā)病基礎(chǔ)。59 .D環(huán)復(fù)制：是線粒體DNA的復(fù)制形式。復(fù)制時需合成引物。MtDNA為雙鏈，第一個引物以內(nèi)環(huán)為模板延伸。至第二個復(fù)制起始點時，又合成另一個反向引物，以外環(huán)為模板進(jìn)行反向的延伸，最后完成兩個雙鏈環(huán)狀DNA勺

18、復(fù)制。60 .逆轉(zhuǎn)錄酶有三種活性：(1)RNA指導(dǎo)的DN臊合酶活性。(2)DNA指導(dǎo)的DN臊合酶活性。(3)RNA酶H(RNaseH活性。61 .RNA復(fù)制：是指某些病毒在宿主細(xì)胞中以自身RNA為模板，以宿主細(xì)胞中的4種dNTP為原料，按5-3方向催化合成互補的RNAg,此過程稱為RNAM制。62 .逆轉(zhuǎn)錄：是指以RNA為模板，利用宿主細(xì)胞中4種dNTP為原料，按5-3方向催化合成與RNA互補的DNA鏈的過程。63 .逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制過程：(1)逆轉(zhuǎn)錄酶以RNW模板，催化dNTP聚合生成DNA5補鏈，產(chǎn)物是RNA/DN賒化雙鏈。(2)雜化雙鏈中的RNA被逆轉(zhuǎn)錄酶中有RNAB活性的組分如RNase

19、H水解.(3) 利用單鏈DNW模板，由逆轉(zhuǎn)錄病毒催化合成第2條DNA5補鏈。64. Klenow片斷具有：DNA聚合酶活性和3-5核酸外切酶活性。65. DNA-polI的功能：對復(fù)制中的錯誤進(jìn)行較讀，對復(fù)制和修復(fù)中出現(xiàn)的空隙進(jìn)行填補。66. DNA復(fù)制的保真性依賴的機制：(1)遵守嚴(yán)格的堿基配對規(guī)律。(2)聚合酶在復(fù)制延長中對堿基的選擇功能。(3)復(fù)制出錯時有即時的較讀功能。67 .引發(fā)體：解螺旋酶，DnaC蛋白，引物酶和DNA起始復(fù)制區(qū)域組成。68 .拓?fù)洚悩?gòu)酶作用：(1)拓?fù)涿窱切斷DNA雙鏈中的一股，使DNA解鏈旋轉(zhuǎn)中不致打結(jié)，適當(dāng)時候又把切口封閉，使DN儂為松弛狀態(tài)。反應(yīng)不需ATR(

20、2)拓?fù)涿窱I在無ATP時，切斷處于正超螺旋的DN酚子雙鏈某一部位，斷端通過切口使超螺旋松弛；在利用ATP功能的情況下，松弛狀態(tài)的DN取進(jìn)入負(fù)超螺旋狀態(tài)，斷端在同一酶催化下連接恢復(fù)。69 .復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的異同：相似之處：(1)都是酶促的核甘酸聚合反應(yīng)。(2)都以DNA為模板。(3)都需依賴DNA的聚合酶。(4)聚合過程中都是核甘酸之間形成磷酸二酯鍵。(5)都從5-3方向延伸聚核甘酸鏈。(6)都遵從堿基配對規(guī)律。區(qū)別：(1)模板。復(fù)制：兩股鏈均復(fù)制。轉(zhuǎn)錄：不對稱轉(zhuǎn)錄。(2)原料。復(fù)制：dNTR轉(zhuǎn)錄：NTR(3)酶。復(fù)制：DNAm合酶。轉(zhuǎn)錄：RNAM合酶。(4)產(chǎn)物。復(fù)制：子代雙鏈DNA(半保留復(fù)制

21、)。轉(zhuǎn)錄：mRNA,rRNA,tRNA.(5)堿基配對。復(fù)制：A-T,C-G。轉(zhuǎn)錄：A-U,G-C,T-A。.70 .真核生物RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和對鵝膏蕈堿的反應(yīng)。(1) RNA-polI:轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物：45S-rRNA對鵝膏蕈堿的反應(yīng)：耐受。(2) RNA-polII:轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物：hnRNA對鵝膏蕈堿的反應(yīng)：極敏感。(3) RNA-polIII:轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物：5S-RNA,tRNA,snRNA.對鵝膏蕈堿的反應(yīng)：中度敏感。71 .轉(zhuǎn)錄：以DNA一條鏈為模板，以四種NTP為原料，在DNA旨導(dǎo)的聚合酶作用下，按照堿基互補原則(A-U,T-A,G-C)合成RNAB1的過程。72 .不對稱轉(zhuǎn)錄：轉(zhuǎn)錄時因為(

22、1)DNA分子雙鏈一股鏈用作模板指引轉(zhuǎn)錄，另一股鏈不轉(zhuǎn)錄。(2)模板鏈并非總是在同一條鏈上。故稱為不對稱轉(zhuǎn)錄。73 .原核生物聚合酶組成：由四種亞基組成a233b五聚體的蛋白質(zhì)。其中a233亞基稱為核心酶。b因子辨認(rèn)起始點。a決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄。3起催化作用。3起結(jié)合DNA莫板(開鏈)作用。74 .操縱子：轉(zhuǎn)錄是不連續(xù)、分區(qū)段進(jìn)行的。每一轉(zhuǎn)錄區(qū)段可視為一個轉(zhuǎn)錄單位，稱為操縱子。操縱子包括若干個結(jié)構(gòu)基因及其上游的調(diào)控序列。調(diào)控序列中的啟動子是RNAm合酶結(jié)合模板DNA勺部位，也是控制轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵部位。75 .電子顯微鏡下觀察到的羽毛狀的圖形說明：在同一DNA莫板上，有多個轉(zhuǎn)錄同時在進(jìn)行。在RNAB

23、1上觀察到的小黑點是多聚核蛋白體。轉(zhuǎn)錄和翻譯都在高效率的進(jìn)行。76 .轉(zhuǎn)錄空泡：由酶-DNA-RNA成的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物。77 .依賴p因子的轉(zhuǎn)錄終止：P因子是由相同亞基組成的六聚體，它是原核生物轉(zhuǎn)錄終止因子?？山Y(jié)合轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA3端的多聚C特殊序列，還有ATP酶和解螺旋酶活性。p因子與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA3端的多聚C結(jié)合后，P因子和RN咪合酶都發(fā)生構(gòu)象改變，從而使RNA聚合酶停頓，解螺旋酶活性使DNA和RNA化雙鏈拆離，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中釋放。78 .非依賴p因子的轉(zhuǎn)錄終止：RNA鏈延長至終止區(qū)時，轉(zhuǎn)錄出的堿基序列隨即形成莖-環(huán)結(jié)構(gòu)。這種二級結(jié)構(gòu)是阻止轉(zhuǎn)錄繼續(xù)向下游推進(jìn)的關(guān)鍵。其機制有兩方面：一是莖

24、環(huán)結(jié)構(gòu)在RNA分子形成可能改變RNA聚合酶的構(gòu)象。由于酶構(gòu)象的改變導(dǎo)致酶一模板結(jié)合方式的改變，可使酶不再向下游移動，于是轉(zhuǎn)錄停頓。其二，轉(zhuǎn)錄復(fù)合物（酶DNA-RNA上有局部的RNA/DN賒化雙鏈。RNA分子和DNA分子都要形成自己的雙鏈，雜化鏈形成的機會不大，本來不穩(wěn)定的雜化鏈更不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)錄復(fù)合物趨于解體。接著一串寡聚U是使RNA鏈從模板脫落的促進(jìn)因素，因為所有白堿基配對中以U和A的配對最不穩(wěn)定。79 .TFII的功能：TFIID:TBP（TATA吉合蛋白）結(jié)合TATA盒。TAF（TBP輔助因子）輔助TBP-DNA吉合。TFIIA:穩(wěn)定IID-DNA復(fù)合物。TFIIB:促進(jìn)RNA-polII結(jié)

25、合及作為其他因子結(jié)合的橋梁。TFIIF:解螺旋酶TFIIE:ATPaseTFIIH:蛋白激酶活性。80 .轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物（PIC）:是真核生物轉(zhuǎn)錄因子之間先互相辨認(rèn)結(jié)合，然后以復(fù)合體的形式與RNA聚合酶一同結(jié)合于轉(zhuǎn)錄起始前的DNAK域而成。81 .真核生物mRNA專錄終止及加尾修飾真核生物mRNA專錄終止后，緊接著發(fā)生加尾修飾。過程如下：在模板鏈上轉(zhuǎn)錄終止點上游約百個或上千個核甘酸處常有一組共同的序列AATAAA此序列后接著相當(dāng)多的GT序歹U。這些序列稱為轉(zhuǎn)錄終止的修飾點。轉(zhuǎn)錄越過修飾點后，mRNA在修飾點被切斷，隨即加入polyA尾及帽子結(jié)構(gòu)。下游的RNAM然繼續(xù)轉(zhuǎn)錄，但很快被RNA降解。

26、因此有理由相信，帽子結(jié)構(gòu)是保護(hù)RNA免受降解的，因為修飾點以后的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物無帽子結(jié)構(gòu)。82 .外顯子：在斷裂基因及其初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上出現(xiàn)，并表達(dá)為成熟RNA勺核酸序列。83 .內(nèi)含子：隔斷基因的線性表達(dá)而在剪接過程中被除去的核酸序列。84 .人類最龐大的一個基因是：抗肌萎縮蛋白基因。85 .剪接體：是由snRNP與hnRNA吉合，使內(nèi)含子形成套索并拉近上下游外顯子距離的復(fù)合體。剪接體是mRNAI接的場所。剪接過程的化學(xué)反應(yīng)稱為二次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)。86 .mRN編輯：通過對mRNAH勺加工，使遺傳信息在mRN冰平上發(fā)生改變。87 .tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工：（1） tRNA前體的剪接。先由核酸內(nèi)切酶進(jìn)行催化進(jìn)

27、行剪切反應(yīng)，再由連接酶將外顯子連接起來。（2）加上3端CCA-OH（3）化學(xué)修飾。包括：甲基化反應(yīng)，使某些喋吟變成甲基喋吟。還原反應(yīng)，使某些尿喀咤還原成雙氫尿喀咤（DHU。轉(zhuǎn)位反應(yīng)，尿喀咤核昔轉(zhuǎn)變?yōu)榧倌蚩搴宋簦ǎＣ摪狈磻?yīng)，某些腺甘酸脫氨成為次黃喋吟核甘酸（I）。88 .rRNA的轉(zhuǎn)錄后加工（1） rRNA前體的剪接。45S-rRNA經(jīng)剪接后，分出屬于小亞基的18SrRNA,余下的部分再剪接成5.8S,28SrRNA。rRNA成熟后，就在核仁上裝配，與核蛋白體蛋白質(zhì)一起形成核蛋白體，輸出胞漿。(2)化學(xué)彳飾.主要是甲基化反應(yīng)。89 .開放閱讀框架(ORF：從mRN/5端起始密碼子AU由U3端

28、終止密碼子之間的核甘酸序列，各個三聯(lián)體密碼連續(xù)排列編碼一個蛋白質(zhì)多肽鏈，稱為開放閱讀框架。90 .遺傳密碼的特點：(1)連續(xù)性。編碼蛋白質(zhì)氨基酸序列的各個三聯(lián)體密碼連續(xù)閱讀。(2)簡并性。除甲硫氨酸和色氨酸外，其他氨基酸都有2個或多個密碼子為之編碼，密碼子中第三位堿基是可以不同的，這稱為密碼子的簡并性。(3)通用性。蛋白質(zhì)生物合成的整套密碼，從原核生物到人類都通用。(4)擺動性。反密碼與密碼之間不嚴(yán)格遵守常見的堿基配對規(guī)律，尤其是密碼子的第三位堿基對反密碼子的第一位堿基，即使不嚴(yán)格配對也能辨認(rèn)配對，這種現(xiàn)象稱為擺動配對。91 .原核生物翻譯起始復(fù)合物形成：(1)核蛋白體亞基分離。核蛋白體大小亞

29、基分離。IF-1,IF-3與小亞基結(jié)合，促進(jìn)大小亞基分離。(2) mRN施小亞基定位結(jié)合。原核生物mRNAfc小亞基定位涉及兩種機制。其一，在各種原核mRN裾始AUGk游約813核甘酸部位，存在49個核甘酸的一致序列，富含喋吟堿基如AGGAGG稱為S-D序列。而原核小亞基16S-rRNA的3端有一段富含喀咤的段序列如UCCUCC通過與S-D序列堿基配對使mRNAf小亞基結(jié)合。S-D序列又稱核蛋白體結(jié)合位點(RBS。其二，mRNAh緊接S-D序列后的小核昔酸序列可被核蛋白體小亞基蛋白rpS-1識別結(jié)合。(3)起始氨基酰tRNA的結(jié)合。起始fMet-tRNAifMet和GTP結(jié)合的IF-2一起，識

30、別結(jié)合對應(yīng)小亞基P位白mRN裾始密碼AUG起始時A位被IF-1占據(jù)，不與任何氨基酰tRNA結(jié)合。(4)核蛋白體大亞基結(jié)合。上述結(jié)合mRNAfMet-tRNA，et的小亞基再與核蛋白體大亞基結(jié)合，同時IF2結(jié)合的GTP水解釋能，促使3種IF釋放，形成由完整核蛋白體、mRNA起始氨基酰tRNA組成的翻譯起始復(fù)合物。此時，結(jié)合起始密碼AUG的fMet-tRNAifMet占據(jù)P位，而A位空留，對應(yīng)mRNAtAU斫的下一組三聯(lián)體密碼，準(zhǔn)備相應(yīng)氨基酰tRNA的進(jìn)入。92.肽鏈的延長。(1)進(jìn)位。核糖體A位上mRN福碼子所規(guī)定的氨酰tRNA進(jìn)入核糖體A位上稱為進(jìn)位。這一過程需延長因子EF-T的參與。延長因子

31、有三種：1 .EF-Tu.功能：協(xié)助氨基酰tRNA進(jìn)入核糖體。與氨基酰tRNA以及GTP吉合形成EF-Tu-GTP-氨基酰-tRNA,將氨基酰-tRNA轉(zhuǎn)運到核糖體的A位。2 .EF-Ts.功能：促進(jìn)EF-Tu-GTP的再生。EF-Tu-GTP在參加一輪核糖體循環(huán)后轉(zhuǎn)變?yōu)镋F-Tu-GDP,EF-Ts使EF-Tu-GDP再轉(zhuǎn)變成EF-Tu-GTP,后者可被再利用。3 .EF-G.功能：促進(jìn)肽酰-tRNA移位。促進(jìn)mRNAlt酰-tRNA由A位移到P位，促進(jìn)tRNA的釋放。(2)成肽。在轉(zhuǎn)肽酶的催化下，P位上的肽?；cA位上的氨基?；呻?，成肽反應(yīng)在A位進(jìn)行，卸載的tRNA仍在P位。(3)轉(zhuǎn)位。

32、在轉(zhuǎn)位酶的催化下，新生肽鏈-tRNA連同mRNMA位移到P位，而卸載的tRNA移入E位。A位空留并對應(yīng)下一組三聯(lián)體密碼。93 .終止因子：又稱釋放因子(RF)。其功能是識別mRNAk的終止密碼子，終止肽鏈的合成并釋放出肽鏈。原核生物中釋放因子是RF-1,RF-2,RF-3.RF-1識別密碼子UAA及UAGRF-2能識別UAA及UGARF-3結(jié)合GTP并能促進(jìn)RF-1,RF-2與核糖體結(jié)合。94 .原核肽鏈終止過程：肽鏈延長到mRN貨止密碼在核蛋白體A位出現(xiàn)，終止密碼子不能被任何氨基酰-tRNA識別進(jìn)位。RF-1,RF-2進(jìn)入A位，識別結(jié)合終止密碼。RF-1或RF-2任一釋放因子結(jié)合終止密碼后都

33、可觸發(fā)核蛋白體構(gòu)象改變，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)肽酶轉(zhuǎn)變?yōu)轷ッ富钚?。使新生肽鏈與結(jié)合在P位的tRNA間酯鍵水解，將合成的肽鏈釋出。再促使mRNA卸載tRNA及RF從核蛋白體脫離。RF-3有GTPW活性，能介導(dǎo)RF-1,RF-2與核蛋白體的相互作用。95 .分子伴侶：分子伴侶是細(xì)胞中的一類保守蛋白質(zhì)，可識別肽鏈的非天然構(gòu)象，促進(jìn)各功能域和整體蛋白質(zhì)的正確折疊。細(xì)胞中至少有兩類分子伴侶家族：熱休克蛋白和伴侶素。96 .蛋白質(zhì)合成后的加工：(1)新生肽鏈的折疊。(2) 一級結(jié)構(gòu)的修飾。包括：肽鏈N端的修飾，個別氨基酸的修飾，多肽鏈的水解修飾。(3)空間結(jié)構(gòu)的修飾。包括：亞基聚合，輔基連接，疏水脂鏈的共價連接。97 .

34、起始因子：(1) IF-1,能促進(jìn)IF-2、IF-3的活化。(2) IF-2.促進(jìn)fMet-tRNAifMet與30s小亞基結(jié)合的作用，并具有GTP酶活性。(3) IF-3.功能是使30S亞基從不具活性的核糖體釋放，輔助mRNAf小亞基結(jié)合，并阻止大小亞基重新聚合。98 .信號假說機制：這一假說認(rèn)為，分泌性蛋白初級產(chǎn)物的N-端有信號肽結(jié)構(gòu)。在分泌性蛋白合成中，信號肽一出現(xiàn)，就被信號肽識別粒子與其受體對接蛋白結(jié)合，促使膜通道開放，信號肽帶動合成中的蛋白質(zhì)沿通道穿過膜，信號肽在沿通道折回膜內(nèi)時，被位于膜外側(cè)的信號肽酶切斷，使成熟的蛋白質(zhì)釋放到細(xì)胞外。99 .抗生素類作用位點：四環(huán)素類：作用于核蛋白

35、體小亞基，抑制氨基酰-tRNA與小亞基結(jié)合。鏈霉素、卡那霉素：作用與核蛋白體小亞基，改變構(gòu)象引起讀碼錯誤。氯霉素：作用與核蛋白體大亞基。抑制轉(zhuǎn)肽酶，阻斷延長。紅霉素：作用與核蛋白體大亞基。抑制轉(zhuǎn)肽酶，妨礙轉(zhuǎn)位。放線菌酮：作用與真核核蛋白體大亞基。抑制轉(zhuǎn)肽酶，阻斷延長。喋吟霉素：作用與真核、原核核蛋白體。屬氨基酰-tRNA類似物，進(jìn)位后引起未成熟肽鏈脫落。100 .白喉毒素作用機制：可使真核生物延長因子eEF-2發(fā)生ADP糖基化而失活。干擾素作用機理：(1)誘導(dǎo)特異蛋白激酶活化，該活化的激酶使真核主要的起始因子eIF2磷酸化失活，從而抑制病毒蛋白質(zhì)的合成。(2)干擾素與雙鏈RN砍同活化2-5A合

36、成酶，2-5A可活化核酸內(nèi)切酶RNaseL后者使病毒mRNA條解，阻斷病毒蛋白質(zhì)合成。101 .管家基因：有些基因產(chǎn)物對生命全過程都是必不可少的。這類基因在一個生物個體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)，通常稱為管家基因。管家基因的表達(dá)水平受環(huán)境因素影響很小，而是在個體各個生長階段的大多數(shù)、或幾乎全部組織中持續(xù)表達(dá)，或變化很小。這類基因表達(dá)稱為基本(或組成性)基因表達(dá)。102 .誘導(dǎo)：可誘導(dǎo)基因在一定環(huán)境中表達(dá)增強的過程稱為誘導(dǎo)。阻遏：可阻遏基因表達(dá)產(chǎn)物水平降低的過程稱為阻遏。103 .基因表達(dá)調(diào)控的生物學(xué)意義：(1)適應(yīng)環(huán)境、維持生長和增殖。(2)維持個體發(fā)育與分化。104 .原核生物轉(zhuǎn)錄的影響因素：

37、(1)啟動子。啟動子決定轉(zhuǎn)錄的效率和方向。(2)(T因子。(3)阻遏蛋白具有負(fù)調(diào)控作用。(4)正調(diào)控蛋白促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄。(5)倒位蛋白通過DN底:組倒位而調(diào)節(jié)基因表達(dá)。倒位蛋白是一種位點特異性的重組酶。(6)RN咪合酶抑制物可與RNA吉合并抑制轉(zhuǎn)錄。(7)衰減子。105 .衰減子(attenuator):細(xì)菌中mRNA專錄和翻譯是偶聯(lián)在一起的。這一特點使細(xì)菌中的一些操縱子的特殊序列可以在轉(zhuǎn)錄過程中控制轉(zhuǎn)錄水平。這些特殊序列稱為衰減子。106 .乳糖操縱子(1)乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)：含有Z、Y、A三個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼3-半乳糖甘酶、透酶和乙?；D(zhuǎn)移酶。此外，含有一個操縱基因O,一個啟動序列P,一個

38、CAP結(jié)合位點和一個基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，與操縱基因O結(jié)合。啟動序列P、操縱序列O和CAP吉合位點組成乳糖操縱子的調(diào)控區(qū)。(2)阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)控作用：1 .當(dāng)有乳糖存在時，乳糖通過3-半乳糖甘酶變?yōu)榘肴樘?，再?jīng)透酶進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。真正的誘導(dǎo)劑是半乳糖而不是乳糖。乳糖可與阻遏蛋白結(jié)合，導(dǎo)致阻遏蛋白與操縱序列O解離，啟動基因轉(zhuǎn)錄。2 .當(dāng)沒有乳糖存在時，沒有誘導(dǎo)劑與阻遏蛋白結(jié)合，阻遏蛋白與操縱序列O結(jié)合，發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用，基因不轉(zhuǎn)錄。(3) CAP的正性調(diào)控作用：1 .當(dāng)沒有葡萄糖及cAM瞰度較高時，cAMP和CAP吉合緊密，此時CAP結(jié)合在CAP結(jié)合位點，刺激RNA專錄活性。2 .當(dāng)有葡

39、萄糖存在及cAM限度較低時，cAMP和CAP結(jié)合受阻，因此lac操縱子表達(dá)下降。(4)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：1 .當(dāng)葡萄糖存在，乳糖存在時：盡管乳糖作為誘導(dǎo)劑和阻遏蛋白結(jié)合，使阻遏蛋白與操縱序列O解離。但由于cAM限度較低，cAM林口CAP吉合受阻，基因處于關(guān)閉狀態(tài)。2 .當(dāng)葡萄糖存在，乳糖不存在時：此時無誘導(dǎo)劑存在，阻遏蛋白與DNA結(jié)合。而且由于葡萄糖的存在，CAP也不能發(fā)揮正性調(diào)控作用，基因處于關(guān)閉狀態(tài)。3 .當(dāng)葡萄糖和乳糖都不存在時：CAP可以發(fā)揮正性調(diào)控作用，但由于沒有誘導(dǎo)劑，阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控作用使基因仍處于關(guān)閉狀態(tài)。4 .當(dāng)葡萄糖不存在，乳糖存在時：此時CAP可以發(fā)揮正性調(diào)控作用，阻遏蛋白由于誘

40、導(dǎo)劑的存在而失去復(fù)調(diào)控作用，基因被打開，啟動轉(zhuǎn)錄。107 .色氨酸操縱子調(diào)控機制：(1) 當(dāng)細(xì)胞內(nèi)色氨酸增多時，結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄受到抑制。衰減子轉(zhuǎn)錄物有4段特殊序歹U。片段1和2,2和3,3和4能配對形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，形成發(fā)夾能力的強弱依次為片段1/2片段2/3片段3/4。片段3/4所形成的發(fā)夾結(jié)構(gòu)之后緊接著寡尿喀咤，是不依賴p因子的轉(zhuǎn)錄終止信號。(2)當(dāng)細(xì)胞內(nèi)有色氨酸存在時，形成色氨酰tRNA,核糖體編譯可通過片段1并通過片段2,核糖體在到達(dá)片段3之前就從mRNA兌落。在這種情況下，片段1/2和片段2/3都不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，只有片段3/4形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，即形成轉(zhuǎn)錄終止信號，從而導(dǎo)致RNAm合酶作用停止

41、。(3)當(dāng)細(xì)胞內(nèi)沒有色氨酸存在時，色氨酰tRNA缺乏，核糖體停留在兩個相鄰的色氨酸密碼子的位置上，片段1/2不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，片段2/3之間形成形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，則片段3/4之間就不能形成轉(zhuǎn)錄終止信號，后面的基因得以轉(zhuǎn)錄。108 .SD序列：mRN裾始密碼子前的一段富含喋吟核甘酸的核糖體結(jié)合位點。109 .原核翻譯水平的調(diào)控：(1) SD序列是影響翻譯的重要因素。(2) mRNA勺穩(wěn)定性是調(diào)控翻譯的方式之一。(3)翻譯產(chǎn)物也可以對相應(yīng)mRNA勺翻譯進(jìn)行調(diào)控。(4)小分子RNAM以抑制特定mRNA勺翻譯。110 .真核生物基因表達(dá)在DNAK平的調(diào)控主要通過下列幾種方式：(1)染色質(zhì)丟失。(2)基因擴

42、增。(3)基因重排。(4)DNA甲基化。(5)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)可影響基因表達(dá)。111 .反式作用因子：真核細(xì)胞內(nèi)有大量的序列特異的DNA結(jié)合蛋白，其中一些蛋白的主要功能是使基因開放或關(guān)閉，稱為反式作用因子。112 .轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物形成的步驟：(1) TFIID結(jié)合TATA盒。(2) RNA-pol識別并結(jié)合TFIIDDNAM合物。(3)其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA-pol結(jié)合，轉(zhuǎn)錄起始部位的DNAS鏈，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物。113.反式作用因子的特點：(1)一般具有三個功能結(jié)構(gòu)域：DNA吉構(gòu)域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié),其他蛋白的結(jié)合域。(2)能識別并結(jié)合基因調(diào)控區(qū)中的順式作用元件。(3)對基因表達(dá)有正性和負(fù)性調(diào)控作用

43、，即激活和阻遏基因的表達(dá)。114 .鋅指結(jié)構(gòu)：是指在結(jié)合DNA吉構(gòu)域中含有較多的半胱氨酸(Cys)和組氨酸(His)的區(qū)域，借肽鏈的彎曲使2個Cys和2個His或4個Cys與一個鋅離子絡(luò)合成的指狀結(jié)構(gòu)。115 .同源結(jié)構(gòu)域：許多反式作用因子結(jié)合DNA的結(jié)構(gòu)域中有一段相同的保守序列。是由60個左右的氨基酸組成的螺旋一回折一螺旋結(jié)構(gòu)的區(qū)域，稱為同源結(jié)構(gòu)域。116 .亮氨酸拉鏈：有些反式作用因子結(jié)合DNA吉構(gòu)域中有一段約30個氨基酸組成的核心序歹U,每隔6個氨基酸有規(guī)律的出現(xiàn)1個亮氨酸殘基，能形成兩性“-螺旋。在螺旋的一側(cè)是排列成行的亮氨酸，具有疏水性，稱為亮氨酸拉鏈區(qū)。兩個亮氨酸拉鏈區(qū)的單體以疏水

44、作用形成亮氨酸拉鏈。117 .反式作用因子DNA結(jié)合域的結(jié)構(gòu)模式：(1)鋅指結(jié)構(gòu)。(2)同源結(jié)構(gòu)域。(3)亮氨酸拉鏈。(4)螺旋一環(huán)螺旋結(jié)構(gòu)。(5)堿性a螺旋。118 .轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)模型：(1)酸性a螺旋結(jié)構(gòu)域(2)富含谷氨酰胺結(jié)構(gòu)域(3)富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域。119 .mRNA勺選擇性剪接方式(1)外顯子選擇方式可保留或部分保留外顯子。(2)內(nèi)含子選擇方式可刪除或部分刪除內(nèi)含子。(3)互斥外顯子是指兩個外顯子不能同時被保留。(4)內(nèi)部剪切位點造成內(nèi)含子或外顯子的部分序列被切除或保留。120 .翻譯起始的調(diào)控(1)阻遏蛋白的調(diào)控作用。(2)翻譯起始因子的功能調(diào)控。(3) 5AUG寸翻譯的調(diào)控

45、作用。(4) mRNAE編碼區(qū)長度對翻譯的影響。121 .翻譯后水平的調(diào)控(1)新生肽鏈的水解。(2)肽鏈中氨基酸的共價修飾。(3)通過信號肽分揀、運輸、定位。122 .同源重組：是指發(fā)生在同源序列間的重組，它通過鏈的斷裂和再連接，在兩個DNA分子同源序列之間進(jìn)行單鏈或雙鏈片段的交換。又稱基本重組。123 .Holliday模型：(1)兩個同源染色體DNME列整齊(2) 一個DNA的一條鏈斷裂，并與另一個DNA對應(yīng)的鏈連接，形成Holliday中間體。(3)通過分支移動產(chǎn)生異源雙鏈DNA(4)Holliday中間體切開并修復(fù)，形成兩個雙鏈重組DNA即片段重組體和拼接重組體。124 .細(xì)菌的基因

46、轉(zhuǎn)移：細(xì)菌中，可以通過接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞融合四種方式，在不同DNA分子間發(fā)生共價連接，即基因轉(zhuǎn)移。125 .接合作用：當(dāng)細(xì)胞或細(xì)菌通過菌毛相互接觸時，質(zhì)粒DNA可以從一個細(xì)胞(細(xì)菌)轉(zhuǎn)移導(dǎo)另一個細(xì)胞(細(xì)菌)，這種類型的DNA專移稱為接合作用。126 .轉(zhuǎn)化作用：通過自動獲取或人為的供給外源DNA使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型，這就是轉(zhuǎn)化作用。127 .轉(zhuǎn)導(dǎo)作用：當(dāng)病毒從被感染的細(xì)胞(供體)釋放出來，再次感染另一細(xì)胞(受體)時，發(fā)生在供體細(xì)胞和受體細(xì)胞之間的DNA轉(zhuǎn)移及基因重組即為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。自然界常見的例子就是噬菌體感染宿主時伴隨發(fā)生的基因轉(zhuǎn)移。當(dāng)噬菌體感染宿主時會有兩種結(jié)局，一是搭

47、菌生長途徑，二是溶噂菌生長途徑。128 .特異位點重組：由整合酶催化，在兩個DNA序列的特異位點之間發(fā)生的整合稱為位點特異的重組。129 .重組DNA常用的工具酶1 .限制性核酸內(nèi)切酶：識別特異序列，切割DNA2 .DNA1接酶3 .DNA聚合酶I。具有完整的5-3聚合，3-5外切活性，以及5-3外切活性。用枯草桿菌蛋白酶可將DNAm合酶I裂解成兩個片段，大片段稱為Klenow片段。具有5-3聚合，3-5外切活性，無5-3外切活性。Klenow片段用途：(1)在cDNA克隆中，第二股鏈的合成。(2) DN附列分析。(3)補齊雙鏈DNA勺3端。(4)通過補齊3端，使3端標(biāo)記。4 .逆轉(zhuǎn)錄酶。5

48、.堿性磷酸酶。能去除末端磷酸基。6 .末端轉(zhuǎn)移酶。在3/羥基末端進(jìn)行同聚物加尾。7 .多聚核甘酸激酶。催化多聚核甘酸5羥基磷酸化，或標(biāo)記探針。130 .限制性核酸內(nèi)切酶：就是識別DNA的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶。131 .回文結(jié)構(gòu)：大部分II類限制性核酸內(nèi)切酶識別DNA位點的核甘酸序列呈二元旋轉(zhuǎn)對稱，通常稱這種特殊結(jié)構(gòu)順序為回文結(jié)構(gòu)。132 .C值：基因組的大小常以其DNA含量表示。單倍體基因組中的全部DNAS稱為C值。133 .作為克隆載體的質(zhì)粒應(yīng)具備：(1)分子量相對較小，能在細(xì)菌中穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)。(2)具有一個以上的遺傳標(biāo)志。(3)具有多個限制性

49、內(nèi)切酶的單一切點，便于外源基因的插入。134 .常用作克隆的載體：質(zhì)粒、入噬菌體、M13噬菌體、粘性質(zhì)粒、病毒載體、酵母人工染色體和細(xì)菌人工染色體。135 .DNA克隆：應(yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將各種來源的遺傳物質(zhì)與載體結(jié)合成一具有自我復(fù)制能力的DNA分子一一復(fù)制子，繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞，再進(jìn)行擴增、提取獲得大量同一DNA分子，即DNA克隆。又稱基因克隆。實現(xiàn)基因克隆所采用的方法及相關(guān)工作稱為基因工程或重組DNA技術(shù)。136 .基因克隆的步驟：(1)目的基因的獲取。1 .化學(xué)合成法。2 .基因組DNAC庫。3 .cDNAC庫。4 .PCR(2)克隆載體的選擇

50、和構(gòu)建。(3)外源基因和載體的連接。1 .粘性末端連接。2 .平端連接。3 .同聚物加尾連接。4 .人工街頭連接。(4)重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。1 .轉(zhuǎn)化：是指將質(zhì)?；蚱渌庠碊NAt入處于感受態(tài)的宿主菌，并使其獲得新的表型的過程。2 .感染：入噬菌體、粘性質(zhì)粒和真核細(xì)胞病毒為載體的重組DNA分子，在體外包裝成具有感染能力的病毒或噬菌體顆粒，然后才能感染適當(dāng)?shù)募?xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)擴增。3 .轉(zhuǎn)染：轉(zhuǎn)染是轉(zhuǎn)化和感染兩個詞構(gòu)成的新詞，指真核細(xì)胞主動攝取或被動導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的遺傳表型的過程。常用方法有：電穿孔法、磷酸鈣共沉淀法和脂質(zhì)體融入法等。(5)重組體的篩選。1 .遺傳學(xué)方法2 .免疫學(xué)

51、方法3 .核酸雜交法4 .PC破術(shù)5 .酶切鑒定(6)克隆基因的表達(dá)137.真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法：(1)磷酸鈣共沉淀法(2) 電穿孔法(3) DEA3葡聚糖法(4) 脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染(5) 顯微注射法138 .重組DNA術(shù)應(yīng)用(1)疾病基因的發(fā)現(xiàn)和克隆(2)生物制藥(3)基因診斷(4)基因治療(5)遺傳病的預(yù)防139 .細(xì)胞間信息物質(zhì)(第一信使)：凡由細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生命活動的化學(xué)物質(zhì)統(tǒng)稱細(xì)胞間信息物質(zhì)。包括：神經(jīng)遞質(zhì)、內(nèi)分泌激素、局部化學(xué)介質(zhì)和氣體信號。140 .細(xì)胞內(nèi)信息物質(zhì)：在細(xì)胞內(nèi)傳遞細(xì)胞調(diào)控信號的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞內(nèi)化學(xué)物質(zhì)。141 .第二信使：通常將Ca2+、cAMPcGMPDA

52、GIP3、Cer、花生四烯酸及其代謝產(chǎn)物這類在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息的小分子化合物稱為第二信使。142 .第三信使：負(fù)責(zé)細(xì)胞核內(nèi)外信息傳遞的物質(zhì)稱為第三信使。是一類可與靶基因特異序列結(jié)合的核蛋白，能調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄，因此又稱為DNA結(jié)合蛋白。143 .膜受體分為：環(huán)狀受體、G蛋白偶聯(lián)受體、單次跨膜“螺旋受體和具有鳥甘酸環(huán)化酶活性的受體。144 .胞內(nèi)受體包括四個區(qū)域：高度可變區(qū)、DNA吉合區(qū)、錢鏈區(qū)和激素結(jié)合區(qū)。145 .受體與配體結(jié)合的特點：高度專一性、高度親和力、可飽和性、可逆性和特定的作用模式。146 .膜受體介導(dǎo)的信息轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(1)cAMP蛋白激酶途徑。1. cAMP的生成與降解。一些激素如腎上

53、腺素、胰高血糖素等作用于相應(yīng)的受體后，活化相應(yīng)的受體，活化的受體可催化Gs的GD叫GT汽換，導(dǎo)致Gs的a亞基與3丫解離，釋放出asGTP，asGTP可導(dǎo)致AC活化，使得ATP轉(zhuǎn)變?yōu)閏AMP細(xì)胞內(nèi)cAM限度升高。cAMP在細(xì)胞內(nèi)的濃度除與AC活性相關(guān)，還和磷酸二酯酶活性有關(guān)。2. cAMP的作用機制。cAMP對細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用是通過激活cAMP依賴性蛋白激酶系統(tǒng)來實現(xiàn)的。PKA是一種由四聚體組成的別構(gòu)酶(GR).其中C為催化亞基，R為調(diào)節(jié)亞基。每個調(diào)節(jié)亞基上有兩個cAMP吉合位點，催化亞基有催化底物蛋白質(zhì)特定絲/蘇氨酸殘基磷酸化的功能。調(diào)節(jié)亞基與催化亞基結(jié)合時，PKA呈無活性狀態(tài)。當(dāng)4分子cAMP與兩分子調(diào)節(jié)亞基結(jié)合后，調(diào)節(jié)亞基脫落，游離的催化亞基具有蛋白激酶活性。3.