抗菌抗病毒常用試驗研究方法知識

1、抗菌抗病毒常用實驗研究方法細(xì)菌、病毒性疾病是目前國內(nèi)外流行的主要傳染病，尤其是近兩年來，由冠狀病毒引起的SARS及由流感病毒引起的禽流感給動物及人類帶來的嚴(yán)重危害，是人所共知的"由于各種疫苗的不斷出現(xiàn)，雖然一些細(xì)菌、病毒病已得到了有效的控制，但是其治療尚無有效的解決方法因此研制高效、低毒的新型中藥抗菌、抗病毒制劑已成為巫待解決的問題。1、常用的抗菌方法1、1稀釋法1、1、1試管稀釋法培養(yǎng)基內(nèi)抗生素的含量按幾何級數(shù)稀釋并接種適量的細(xì)菌，經(jīng)孵育后，觀察能引起抑菌作用最低抗生素濃度，稱最低抑菌濃度（MIC）為該菌對藥物的敏感度。稀釋法所獲得的結(jié)果比較準(zhǔn)確，常被用作校正其他方法的標(biāo)準(zhǔn)。如以下

2、黃貝貝等的青錢柳抗菌作用的實驗研究和黃利權(quán)等的火絨草的抗菌活性研究的實驗方法：1、應(yīng)用試管稀釋法，測定青錢柳提取物對試驗菌的抑菌效果，檢驗不同濃度下青錢柳提取物對細(xì)菌、霉菌的抗菌作用。結(jié)果：青錢柳提取物在體外對金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌等革蘭氏陽性菌具有較強(qiáng)的抗菌作用；而對大腸埃希氏菌、銅綠假單抱菌等革蘭氏陰性菌的抗菌作用不明顯；對黃曲霉、煙曲霉等霉菌的抗菌作用不明顯102、采用試管稀釋法，分別測定了火絨草水煎液、水提醇沉液、醇提物、醇提石油醴部分、醇提乙酸乙酯部分、醇提正丁醇部分、醇提水溶部分等7種提取物對大腸桿菌C83882大腸桿菌C83903大腸桿菌C83914沙門氏菌C79-20

3、、金黃色葡萄球菌NewbouldS-305、金黃色葡萄球菌臨床分離株等6株病原菌的最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）。試驗結(jié)果表明，火絨草醇提物及其石油醴部分和乙酸乙酯部分對兩種金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑制作用，其MIC為0114mg/ml生藥濃度,MBC為0127mg/ml生藥濃度，而其它部分對金黃色葡萄球菌的抑制作用較弱。火絨草醇提正丁醇部分和水溶部分對3株大腸桿菌和1株沙門氏菌具有較強(qiáng)的抑制作用，其MIC為2170mg/ml生藥濃度,MBC為2170mg/ml生藥濃度，顯示了較強(qiáng)的抗菌活性2。1、1、2肉湯稀釋法以水解酪蛋白（M-H）液體培養(yǎng)基將抗生素作不同濃度的稀釋，然后種

4、入待檢細(xì)菌，定量測定抗菌藥物抑制或殺死該菌的最低抑菌濃度（MIC）或最低殺菌濃度（MBC）。如劉菁菁的研究藍(lán)玉簪龍膽對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的體內(nèi)外抗菌活性。藍(lán)玉簪龍膽分別以乙醇、氯仿、正丁醇、蒸儲水提取，得到極性不同的4部分產(chǎn)物，利用肉湯稀釋法測定其對MRSA和甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）的最低抑菌濃度（MIC）;體內(nèi)實驗部分：采用腹腔注射MRSA法建立小鼠感染模型，分別給予藍(lán)玉簪龍膽水提液高、中、低劑量，銀黃膠囊治療15d,并與模型對照組比較，觀察存活率。結(jié)果：體外實驗：藍(lán)玉簪龍膽各極性組分對MRSA和MSSA菌株均有不同程度的抑菌作用，其中正丁醇組分抑菌作用最強(qiáng)，

5、其次為乙醇、水層組分；體內(nèi)試驗：除了藍(lán)玉簪龍膽大劑量組，其余各治療組存活率均高于模型對照組，而藍(lán)玉簪龍膽中劑量組存活率最高。結(jié)論藍(lán)玉簪龍膽對MRSA和MSSA均具有一定的抗菌作用，而且敏感性差異無顯著性；對MRSAS染小鼠有一定治療作用冏。胡景玉等為了了解衡水地區(qū)大腸埃希菌的藥敏情況，采用肉湯稀釋法18種抗菌藥物最低抑菌濃度（MIC）并計算其MIG0和MIG0。結(jié)果亞胺培南、哌拉西林、他唾巴坦和頭抱哌酮、舒巴坦顯示良好的抗菌作用，其MIG。分別為0.5g/ml、1g/ml、0.5g/ml；MIG。均為2仙g/ml,其他藥物顯示不同程度的耐藥，且大腸埃希菌產(chǎn)ESBL3勺檢出率較高。結(jié)論檢出的大腸

6、埃希菌存在多重耐藥，僅對亞胺培南、哌拉西林、他口坐巴坦和頭抱哌酮、舒巴坦普遍敏感4。KianbakhtS等通過肉湯稀釋法研究刺蓑藜不同部位（果、莖葉、根）的甲醇提取物對金黃色葡萄球菌ATCC29213、糞腸球菌ATCC29212腸埃希氏菌ATCC25922綠膿桿菌ATCC2785圳種細(xì)菌的抗菌能力，研究結(jié)果表明：果、莖葉對四種菌的MIC值均為2mg/ml;根的甲醇提取物對MIC值對金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、腸埃希氏菌均為4mg/ml,對綠膿桿菌的MIC值為2mg/ml5。1、1、3瓊脂平板稀釋法將不同濃度的抗菌藥物，分別加入到定量的瓊脂培養(yǎng)基中，混勻，制成固體含藥平皿，使每一個平皿中所含抗菌藥

7、物的濃度相差2倍，用多點接種儀把待測細(xì)菌點種到含有抗菌藥物的瓊脂培養(yǎng)基的表面上，在特定溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時間后，平皿上無菌落生長的最低藥物濃度為抗菌藥物對受試菌種的最低抑菌濃度。每一次實驗都應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)菌株做質(zhì)控。瓊脂平板稀釋法本法的特點是可同時進(jìn)行大量菌株的藥敏測定。也適用于中草藥和厭氧菌的藥敏測定。如汪黎虹等應(yīng)用超微粉碎法將虎杖、石榴皮、馬齒覓、苦楝皮、大黃等10種中藥進(jìn)行加工處理至粒徑為510仙m后，利用瓊脂稀釋法測定其實驗室近年來收集的患病鰻鯽中分離得到的18株常見致病菌的抑菌作用。結(jié)果表明：上述10種中藥單用對除B12肺炎克雷伯菌以外的17株養(yǎng)殖鰻鯽主要致病菌均有一定的抑制作用，具平均抑菌濃

8、度（MIC）范圍為0.165128mg/mL,平均殺菌濃度（MBC）范圍為0.210128mg/mL6。1、1、4濃度梯度法濃度梯度試驗是一種定量的抗生素藥敏測定技術(shù)，可用于非苛養(yǎng)革蘭陽性和陰性需氧菌（如腸桿菌、假單胞菌、葡萄球菌和腸球菌）以及苛養(yǎng)菌（如厭氧菌、肺炎鏈球菌和嗜血桿菌）的藥敏測定。該系統(tǒng)包含有一個預(yù)先制備好的抗生素濃度梯度，可用于在瓊脂培養(yǎng)基判斷某抗生素對微生物的最小抑菌濃度（MIC）。如劉芳等的武漢地區(qū)住院患兒感染肺炎鏈球菌的耐藥狀況。如劉芳等的收集醫(yī)院2009年1-12月住院患兒分離的肺炎鏈球菌1521株，采用紙片擴(kuò)散法及E-test法進(jìn)行抗菌藥物敏感試驗；按CLSI2008

9、年版判斷結(jié)果；使用X2檢驗分析耐藥性的變化。研究結(jié)論為武漢地區(qū)住院患兒分離的肺炎鏈球菌對紅霉素、克林霉素、四環(huán)素及磺胺甲嗯口坐、甲氧葦呢的敏感率極低，對左氧氟沙星及萬古霉素均有極高的敏感率，對青霉素仍保持較高的敏感率，可作為治療普通肺炎鏈球菌感染的首選藥物701、1、5試管兩倍稀釋法試管兩倍稀釋法取生長濁度達(dá)9X108mg/ml菌液，菌液用培養(yǎng)液稀釋，接種于無菌試管中，然后加入不同濃度的抗菌藥物或未知藥物，37c孵育。1624h,以無細(xì)菌生長的最低濃度為MIC將無細(xì)菌生長的完全清晰液再移種于不含抗菌藥物的血平板中，經(jīng)37c過夜培養(yǎng)，菌落數(shù)不超5個的平板的最低藥物濃度即為該藥物的MBC一月以MI

10、C來評價細(xì)菌對藥物的敏感度。馬加慶等的采用試管兩倍稀釋法觀測利膽止痛膠囊在體外對甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌及痢疾桿菌、大腸桿菌和沙門菌生長的影響.研究結(jié)果表明：利膽止痛膠囊對金黃色葡萄球菌、甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、痢疾桿菌和大腸桿菌的MIC分別為25、50、50、25和12.5mg/mL對沙門菌無明顯抑菌作用網(wǎng)。1、1、6微量肉湯稀釋法微量肉湯稀釋法的原理：原理同肉湯稀釋法。石功名等的對西他沙星與莫西沙星抑制細(xì)胞內(nèi)外金黃色葡萄球菌ATCC2592的活性進(jìn)行體內(nèi)外研究，采用微量肉湯稀釋法檢測藥物的MIC,MBCtMPC研究結(jié)果表明：在體外實驗中，MIC,MBC

11、MP及時間與濃度殺菌曲線實驗表明西他沙星胞內(nèi)外抑菌活性均強(qiáng)于莫西沙星901、1、7微量稀釋法微量稀釋法本法為改進(jìn)的試管稀釋法。取稀釋菌液接種在96孔板中，然后加入待試抗菌藥物，混勻后放置37c孵育1624h,在襯有黑底板的光線下觀察，細(xì)菌生長時小孔呈彌散狀混濁或在孔底部有圓形或絲狀的沉淀；無細(xì)菌生長時孔內(nèi)所含最低抗菌藥物濃度即為MIC把無細(xì)菌生長孔內(nèi)液體移種不含抗菌藥物血平板中，菌落數(shù)少5個的平板的最低藥物濃度即為MBC如宋曉晶等通過微量稀釋法分別測定特比蔡芬、氟康哇、伊曲康唾、制霉菌素對38株臨床分離的口腔念珠菌的體外敏感性。研究結(jié)果表明：38株白念珠菌對氟康哇耐藥4株，敏感34株；對伊曲康

12、唾耐藥5株，敏感33株；對特比奈芬耐藥15株，敏感23株；制霉菌素均敏感10。1、2紙片瓊脂擴(kuò)散法瓊脂擴(kuò)散法是將抗菌藥物加至接種試驗菌的平板表面，抗菌藥物在瓊脂膠內(nèi)向四周自由擴(kuò)散，其濃度隨擴(kuò)散距離增大而降低，在藥物一定的擴(kuò)散距離內(nèi)，由于藥物的抗菌效應(yīng)，試驗菌不能生長，此無菌生長的范圍稱為抑菌圈，抑菌圈的大小與藥物的抑菌效應(yīng)成正比。如熊楓等的從西太平洋近赤道區(qū)采集到的18個深海沉積物樣品中分離到83株海洋真菌，采用濾紙片瓊脂擴(kuò)散法和MTT法分別對其發(fā)酵液乙酸乙酯抽提物的抗菌、抗月中瘤活性進(jìn)行篩選.結(jié)果顯示，有37株菌株對至少一種指示菌有抑制作用；有29株菌株對KB或Raji月中瘤細(xì)胞具有顯著的抑

13、制活性，分別占總供測菌株的44.6%口34.9%.在抗月中瘤活性菌株中，WP-M-1、DY-G-2、DY-C-2、WP-K-3和WP-Q-2等5株菌具有很高的活性，具發(fā)酵液乙酸乙酯抽提物對Raji細(xì)胞的IC50分別為5.000、1.064、2.796、1.920、0.520Lg/mL.研究結(jié)果表明，海洋沉積物來源的真菌中蘊藏著豐富的抗菌及抗月中瘤活性代謝產(chǎn)物產(chǎn)生菌，是開發(fā)抗菌和抗月中瘤藥物的寶貴資源11o又如鄒曉勇等的建立了蛙皮抗菌肽的活性測定方法一一一TTC微量稀釋法；利用SephadexG25凝膠層析分離抗菌肽粗品獲得一個活性組分命名為G5,利用TTC微量稀釋法測定活性組分G5抑制大腸桿菌

14、的MIC是80wg/mL、抑制銅綠假單胞菌的MIC是20仙g/mL、抑制金黃色葡萄球菌的MIC是80g/mL;活性組分G5再經(jīng)凝膠HPLC分離純化獲得兩個活性組分I和R,組分I和組分n再分別經(jīng)過RP-HPLC分離純化獲得兩個色譜純的活性組分命名為RanaI和Ranan12。1、3平板稀釋法如吳決等的探討抗菌性中藥藥物敏感試驗在鑒定中藥新藥上的應(yīng)用。應(yīng)用中藥藥敏試驗平板稀釋法鑒定中藥新藥/萬力通0對常見十余種細(xì)菌的最低抑菌濃度(MIC).結(jié)果運用平板稀釋法測定中藥新藥MIC,效果理想.結(jié)論在中藥藥敏試驗諸方法中，平板稀釋法鑒定中藥新藥抑菌作用，方法簡便，易操作，結(jié)果易觀察13。1、4打洞法如向紅

15、采用平板打洞法對西南委陵菜（Potentillafuigens）的全草、根、葉的水煎劑進(jìn)行體外抗菌實驗。結(jié)果表明，全草、根、葉的水煎劑對G-大腸桿菌、G-志賀氏痢疾桿菌、G僉黃色葡萄球菌均有抑菌作用。不同的入藥部位對同一細(xì)菌的抑菌能力不同，作用的強(qiáng)弱與藥液濃度的大小有關(guān)；同一入藥部位對不同細(xì)菌無明顯選擇抑制作用14o再如袁婷等常見中草藥的體外抑菌試驗，應(yīng)用體外抑菌試驗的平板打洞法、試管兩倍稀釋法和平板培養(yǎng)法對本地常見中草藥一枝黃花、黑老虎、土甘草、花木通等進(jìn)行了對肺炎鏈球菌、蠟狀芽抱桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的藥物敏感性測定。結(jié)果一枝黃花對鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌呈高度敏感，最

16、小抑菌濃度分別為1/80和1/40，最小殺菌濃度分別為1/20和1/10;對肺炎鏈球菌、蠟狀芽抱桿菌呈中度敏感，最小抑菌濃度均為1/20,未見最小殺菌濃度，黑老虎、土甘草均對肺炎鏈球菌呈高度敏感，最小抑菌濃度均為1/80,最小殺菌濃度分別為1/20和1/10,對鼠傷寒沙門氏菌、蠟狀芽抱桿菌、金黃色葡萄球菌無抑菌作用；花木通則對四種供試菌均未見抑菌作用1501、5挖溝法如武延雋等的了解巴豆油抗菌譜。方法：采用瓊脂挖溝法與瓊脂絕對濃度法3,6,對20種臨床常見的病原菌和條件致病菌進(jìn)行了實驗室條件下，巴豆油抗菌活性研究。結(jié)果：瓊脂絕對濃度法，巴豆油在1B101B40的濃度時，對金黃色葡萄球菌有抑制生

17、長的作用，對其余19種細(xì)菌均無作用；瓊脂挖溝擴(kuò)散法，巴豆油對所有20種實驗菌均無抑制生長作用。結(jié)論：瓊脂挖溝擴(kuò)散法實驗中，巴豆油對所有實驗菌均無抗菌活性，而在瓊脂絕對濃度法的實驗中1B40稀釋的濃度對金黃色葡萄球菌仍有抗菌活性，不同方法影響巴豆油抗菌的結(jié)果1602、抗病毒方法2、1細(xì)胞病變法（cytopathiceffect,CPE）細(xì)菌病變法是以CPE為指標(biāo)，方法簡便，能夠?qū)Χ鄶?shù)藥物抑制病毒增殖的效果進(jìn)行測定與評價。一般以加號表示細(xì)胞病變程度，細(xì)胞病變<25咖+,細(xì)胞病變25%50%J+,細(xì)胞病變50%75%J+,細(xì)胞病變>75%+。如張春江等的探討藏藥甘青烏頭抗單純皰疹病毒II

18、型（HSV-2）的作用和機(jī)制。方法MTT法測定甘青烏頭對Vero細(xì)胞的毒性，采用細(xì)胞病變法和蝕斑法測定甘青烏頭體外抗病毒活性，以半數(shù)抑制濃度和治療指數(shù)為評價指標(biāo)；定量熒光PCR法和蝕斑法考察甘青烏頭體外抗病毒作用機(jī)制。用HSV-2建立小鼠腦炎模型，對甘青烏頭體內(nèi)抗單純皰疹病毒的抗病毒活性進(jìn)行評價。結(jié)果：甘青烏頭對Vero細(xì)胞的半數(shù)中毒濃度（CC50）為5.57gL-1。細(xì)胞病變法和蝕斑法測得甘青烏頭的半數(shù)有效濃度（EC50）分別為2.25,1.68g-L-1,治療指數(shù)TI分別為2.47,3.32。LD50值為0.85gkg-1。甘青烏頭延長了小鼠的平均存活時間，對小鼠的死亡顯示出10%的保護(hù)率

19、。甘青烏頭能直接滅活HSV-2,能夠顯著抑制HSV-2的感染性；對病毒吸附到細(xì)胞沒有抑制作用，能抑制HSV-2大分子的增值。抑制HSV-2DNA合成的抑制倍數(shù)達(dá)102。結(jié)論：甘青烏頭體外具有較強(qiáng)的抗HSV-2的活性，抗病毒作用是通過抑制病毒復(fù)制循環(huán)的各個環(huán)節(jié)起作用的17。2、2染料吸收法2、2、1MTT染色法MTT可被活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成紫色不溶性結(jié)晶（顆粒）并沉積在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周圍，而死細(xì)胞則無此功能。二甲基亞碉（DMSO或酸化異丙醇能溶解細(xì)胞中的紫色不溶性結(jié)晶物,用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光密度值（OD）,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶物形

20、成量與細(xì)胞數(shù)成正比，因此可用于抗病毒藥物的活性篩選。如付光發(fā)等的中藥鴨拓草提取物抗病毒作用的研究。在96孔培養(yǎng)板單層培養(yǎng)vero細(xì)胞，將鴨拓草提取物按照倍比關(guān)系稀釋，濃度分別為25.6mg/ml12.8mg/ml6.4mg/ml3.2mg/ml1.6mg/ml0.8mg/ml0.4mg/ml0.2mg/ml0.lmg/ml,每一稀釋濃度都要重復(fù)3次，同時設(shè)正常細(xì)胞對照，觀察細(xì)胞病變，采用MTT法，在培養(yǎng)過48h的細(xì)胞中，加入含MTT培養(yǎng)液5mg/ml,每孔0.01ml,繼續(xù)培養(yǎng)4一6h后，加入二甲亞磯,每孔0.lml,測定其在570nm波長下的吸光度。將Vero細(xì)胞生長呈單層孔培養(yǎng)板上，加入1

21、00而TCro50HZN州病毒液，每孔加入0.lml,lh后，除去病毒液，加入TCS（12.80mg/ml）的1/10倍稀釋出5個濃度的鴨拓草提取物，再以4倍倍比稀釋，即分別為1280、320、80、20、5vg/ml,并設(shè)病毒對照，細(xì)胞對照，受試藥物和陽性藥物對照組用此法檢測病毒抑制率，按照Probit回歸法計算IC5018。又如KrusePF,Patterson等的采用MTT法評價清熱消炎復(fù)方制劑體外抗柯薩奇病毒（CVB3）、呼吸道合胞病毒（RSV）效果。方法：待正常細(xì)胞長成單層，用病毒感染，培養(yǎng)一定時間后，根據(jù)不同病毒感染細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞病變（CPE）時間的不同，加入一定量的MTTC然后測定

22、OD570S，計算病毒抑制率。結(jié)果:MTT法較光鏡CPEt更為客觀，能以O(shè)D®變化反映藥物對病毒的抑制程度，從而獲得實驗結(jié)果，且便于統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果證明MTT法是一種能廣泛應(yīng)用于抗病毒藥物篩選和評價的方法19o2、2、2中性紅染色法中性紅染料吸收法的原理是活細(xì)胞能夠吸收一種弱陽離子染料）中性紅，后者與活細(xì)胞胞漿中的陰離子結(jié)合而滯留于活細(xì)胞中，并不被細(xì)胞洗滌液洗脫，滲入活細(xì)胞的中性紅量與活細(xì)胞數(shù)量成正比，因此OD信直接反映活細(xì)胞的數(shù)量，與細(xì)胞增殖的程度成正比。一般根據(jù)各組之平均OD值,計算抑制百分率，再按ReedandMuench法計算IC50o抑制百分率=實驗組平均OD值-病毒對照組

23、平均OD值細(xì)胞對照組平均OD值-病毒對照組平均ODfi勤x100%如高川等的探討白穎苔草粗提物對呼吸道合并胞體病毒（RSV）、甲型流感病毒（FluA）和柯薩基病毒B3（CoxB3）的體外抑制作用。方法：采用超聲提取，獲得藥物粗提物，以HEK293-RSVMDCK-FluAF口HEK293-CoxB駐外感染模型，通過顯微鏡下觀察細(xì)胞病變，酶標(biāo)儀測定中性紅染色A540fi，計算抑毒指數(shù)評價抗病毒效果。結(jié)果：白穎苔草丙酮-乙酸乙酯粗提物可抑制RS卡口FluA的細(xì)胞病變效應(yīng)，抑毒指數(shù)分別為14.22和92.41,XtCoxB3病毒的抑毒指數(shù)為1。結(jié)論：白穎苔草對RS卡口FluA具有顯著的抑制作用，而對

24、CoxB3無抑制作用如。再如褚秀玲等采用中性紅染色法檢測人參皂昔及其衍生物抗馬立克病毒作用的研究，研究結(jié)果表明先加中藥后感染病毒時，人參皂昔和衍生物7表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制病毒活性作用；先接病毒后加中藥時，人參皂昔和衍生物7表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制病毒活性作用；病毒和藥物混合感作后加入細(xì)胞時，衍生物7,8,2表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制病毒活性作用；綜合3種加藥試驗結(jié)果，中藥抑制病毒活性作用由強(qiáng)到弱的順序依次為衍生物7、人參皂甘、衍生物2、衍生物1、衍生物6和衍生物821。2、3蝕斑減少法實驗證明，將病毒接種于單層培養(yǎng)細(xì)胞，數(shù)天后固定細(xì)胞并染色，因病毒感染而導(dǎo)致變性的細(xì)胞不被染色，形成蝕斑(空斑)。蝕斑降低法以此為基礎(chǔ)

25、，利用蝕斑的形成，以接種病毒后，在未添加試驗藥物的培養(yǎng)基上形成的蝕斑數(shù)為100%寸照,通過計算添加試驗藥物的培養(yǎng)基上形成的蝕斑減少率，來研究試驗藥物的抗病毒活性。通常用于對照的蝕斑數(shù)為50-100個。超過該范圍，藥物的感受性即降低，且會影響實驗結(jié)果。另外蝕斑縮小也是抗病毒活性的指標(biāo)。因此，蝕斑降低法是一種定量測定法，理論上一個蝕斑代表一個有感染性毒粒。藥物處理后，蝕斑數(shù)減少，表示病毒復(fù)制受到抑制，子代毒粒產(chǎn)生減少。蝕斑降低法定量準(zhǔn)確，結(jié)果可靠。用一系列藥物濃度，可得到劑量反應(yīng)曲線，適用于不同藥物抑制強(qiáng)度的比較。由于操作較復(fù)雜。需較多細(xì)胞及藥物，不適合初篩，可作為二篩或有效藥物的效價評估。2、4

26、病毒抗原的測定有些病毒不產(chǎn)生細(xì)胞病變或蝕斑，或者產(chǎn)生細(xì)胞病變過程較慢，如乙型肝炎病毒、EB病毒、巨細(xì)胞病毒等。病毒復(fù)制過程可產(chǎn)生各種病毒基因編碼的蛋白質(zhì)，如表面糖蛋白、衣殼蛋白、酶蛋白及調(diào)控蛋白等，這些蛋白為病毒的結(jié)構(gòu)蛋白或功能蛋白，出現(xiàn)于病毒繁殖周期的不同階段，均可作為病毒復(fù)制程度之指征。利用抗原、抗體特異結(jié)合的免疫學(xué)原理，用特異抗體檢測某一特異抗原，尤其單克隆抗體的應(yīng)用，更明顯地提高了免疫檢測法的特異性。另外，可利用定量PCR熒光定量PCR?方法測定病毒核酸。參考文獻(xiàn)1黃貝貝，葉荷平,HUANGXY,等.青錢柳抗菌作用的實驗研究J.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2006,18(4):48-49.2黃利

27、權(quán)，伍義行.火絨草的抗菌活性研究J.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2006,105(1):5-6.3劉菁菁.藍(lán)玉簪龍膽提取物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌抗菌作用的實驗研究J.中國藥理學(xué)通報，2011,27(7):1024-1026.4胡景玉，杜紅麗，喬艷梅，等.245例大腸埃希菌臨床分離株藥敏分析J.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2012,39(21):5664-5666.5KianbakhtS,JahanianiF.EvaluationofAntibacterialActivityofTribulusterrestrisL.GrowinginIranJ.IranianJournalofPharmacologyandTherapeutics,2003,2(1):22-24.6汪黎虹，關(guān)瑞章,李忠琴，等.10種單味中藥對養(yǎng)殖鰻鯽主要致病菌的抑制作用J.集美大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2010,15(6):1-5.7劉芳,虞濤,鮑連生,等.2009年武漢地區(qū)住院患兒分離肺炎鏈球菌的耐藥分析J.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(5):1040-1042.8馬加慶，陳鵬，沈志強(qiáng)，等.利膽止痛膠囊對小鼠抗抑菌炎、