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1、轉(zhuǎn)基因植物圖片2022-5-6Copyright Jiangyong2022-5-6Copyright Jiangyong番木瓜優(yōu)良抗病品種番木瓜優(yōu)良抗病品種 2022-5-6Copyright Jiangyong金大米金大米 2022-5-6Copyright Jiangyong地雷探測(cè)草地雷探測(cè)草 擬南芥擬南芥2022-5-6Copyright Jiangyong不會(huì)引起過敏的大豆不會(huì)引起過敏的大豆 2022-5-6Copyright Jiangyong轉(zhuǎn)基因芥菜可減輕土壤污染轉(zhuǎn)基因芥菜可減輕土壤污染 2022-5-6Copyright Jiangyong彩色玉米彩色玉米2022-5-6C

2、opyright Jiangyong巨型鮭魚巨型鮭魚 2022-5-6Copyright Jiangyong熒光魚熒光魚 2022-5-6Copyright Jiangyong超級(jí)奶牛超級(jí)奶牛 2022-5-6Copyright Jiangyong培育出人耳的小鼠培育出人耳的小鼠2022-5-6Copyright Jiangyong轉(zhuǎn)基因豬轉(zhuǎn)基因豬2022-5-6Copyright Jiangyong 2022-5-6Copyright Jiangyong理論基礎(chǔ)理論基礎(chǔ) uDNADNA是遺傳物質(zhì)的證明是遺傳物質(zhì)的證明uDNADNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則的確立雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則的確立u遺傳密碼

3、的破譯遺傳密碼的破譯工程技術(shù)工程技術(shù)u基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)u工具酶的發(fā)現(xiàn)工具酶的發(fā)現(xiàn)uDNADNA合成和測(cè)序技術(shù)的發(fā)現(xiàn)合成和測(cè)序技術(shù)的發(fā)現(xiàn)uDNADNA體外重組的實(shí)現(xiàn)體外重組的實(shí)現(xiàn)u重組重組DNADNA表達(dá)實(shí)驗(yàn)的成功表達(dá)實(shí)驗(yàn)的成功u第一例轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的問世第一例轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的問世uPCRPCR技術(shù)的發(fā)明技術(shù)的發(fā)明2022-5-6Copyright Jiangyong 基因的剪刀基因的剪刀限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶 基因的針線基因的針線DNADNA連接酶連接酶 基因的運(yùn)輸工具基因的運(yùn)輸工具運(yùn)載體運(yùn)載體分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀-限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶( (限制酶限制酶) )

4、磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵 EcoRI、SmaI限制酶限制酶提醒提醒 切割的化學(xué)鍵為切割的化學(xué)鍵為磷酸二酯鍵。磷酸二酯鍵。在切割目的基因在切割目的基因和運(yùn)載體時(shí)要求用和運(yùn)載體時(shí)要求用同一種限制酶,目同一種限制酶,目的是產(chǎn)生相同的黏的是產(chǎn)生相同的黏性末端。性末端。將一個(gè)基因從將一個(gè)基因從DNADNA分子上切割下分子上切割下來,需要來,需要2 2個(gè)限制個(gè)限制酶,同時(shí)產(chǎn)生酶,同時(shí)產(chǎn)生4 4個(gè)個(gè)黏性末端黏性末端2022-5-6Copyright Jiangyong限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶( (限制酶限制酶) )來源:來源:主要從原核生物中分離主要從原核生物中分離化學(xué)本質(zhì):化學(xué)本質(zhì):蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)作用:

5、作用:能夠識(shí)別雙鏈能夠識(shí)別雙鏈DNADNA分子的某種特定分子的某種特定核苷酸序列,并使每一條鏈中特定部位的核苷酸序列,并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。特性:特性:特異性。即限制酶識(shí)別特定的脫氧特異性。即限制酶識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列,切割特定位點(diǎn)核苷酸序列,切割特定位點(diǎn)切割后的切割后的DNADNA末端末端:黏性末端;平末端:黏性末端;平末端分子縫合針分子縫合針-DNA-DNA連接酶連接酶種類種類T T4 4 DNA DNA連接酶:連接酶:既能既能“縫合縫合”雙鏈雙鏈DNADNA片段互補(bǔ)的黏性末端,片段互補(bǔ)的黏性末端,也能也能“縫合縫合”雙

6、鏈雙鏈DNADNA的平末的平末端(效率低)端(效率低)Ecoli DNAEcoli DNA連接酶:連接酶:只能將只能將雙鏈片段互補(bǔ)的黏性末端連接雙鏈片段互補(bǔ)的黏性末端連接常用載體常用載體 質(zhì)粒質(zhì)粒 噬菌體的衍生物噬菌體的衍生物 動(dòng)植物病毒動(dòng)植物病毒基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體(分子運(yùn)輸車)(分子運(yùn)輸車)2022-5-6Copyright Jiangyong2022-5-6Copyright Jiangyong (1) (1)載體是基因運(yùn)輸工具,在基因操作過程中,載體是基因運(yùn)輸工具,在基因操作過程中,使用載體有使用載體有兩個(gè)目的兩個(gè)目的:一是用它作為運(yùn)載工具,:一是用它作為運(yùn)載工

7、具,將目的基因送到宿主細(xì)胞中去;二是利用它在宿將目的基因送到宿主細(xì)胞中去;二是利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。 (2)(2)種類種類:質(zhì)粒:質(zhì)粒( (既存在于原核生物細(xì)菌中,也存既存在于原核生物細(xì)菌中,也存在于真核生物酵母菌中在于真核生物酵母菌中) )、噬菌體的衍生物、動(dòng)噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。植物病毒。 (3) (3)本質(zhì)本質(zhì):DNA(DNA(其中質(zhì)粒為環(huán)狀其中質(zhì)粒為環(huán)狀DNADNA分子分子) ) (4) (4)作為載體必須具備作為載體必須具備三個(gè)條件三個(gè)條件: 能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制。能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制。 有有1 1個(gè)或

8、多個(gè)限制酶切點(diǎn),以便與外源基因連接。個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn),以便與外源基因連接。 具有某些標(biāo)記基因,以便進(jìn)行篩選。具有某些標(biāo)記基因,以便進(jìn)行篩選。2022-5-6Copyright Jiangyong2022-5-6Copyright Jiangyong注意問題注意問題(1)(1)一般來說,天然載體往往不能同時(shí)具一般來說,天然載體往往不能同時(shí)具備載體必須具備的條件,所以在基因工備載體必須具備的條件,所以在基因工程中需要根據(jù)不同的和需要,對(duì)載體進(jìn)程中需要根據(jù)不同的和需要,對(duì)載體進(jìn)行人工改建?,F(xiàn)在所使用的質(zhì)粒載體幾行人工改建。現(xiàn)在所使用的質(zhì)粒載體幾乎都是經(jīng)過改建的。乎都是經(jīng)過改建的。2022-5-6C

9、opyright Jiangyong (2) (2)作為載體必須具有多個(gè)限制酶切點(diǎn),而作為載體必須具有多個(gè)限制酶切點(diǎn),而且每種酶的切點(diǎn)且每種酶的切點(diǎn)最好只有一個(gè)最好只有一個(gè)。因?yàn)槟撤N限。因?yàn)槟撤N限制性內(nèi)切酶只能識(shí)別單一切點(diǎn),若載體上有制性內(nèi)切酶只能識(shí)別單一切點(diǎn),若載體上有一個(gè)以上的酶切點(diǎn),則切割重組后可能丟失一個(gè)以上的酶切點(diǎn),則切割重組后可能丟失某些片段,若丟失的片段含復(fù)制起點(diǎn)區(qū),則某些片段,若丟失的片段含復(fù)制起點(diǎn)區(qū),則進(jìn)入受體細(xì)胞后便不能自主復(fù)制。一個(gè)載體進(jìn)入受體細(xì)胞后便不能自主復(fù)制。一個(gè)載體若只有某種限制酶的一個(gè)切點(diǎn),則酶切后既若只有某種限制酶的一個(gè)切點(diǎn),則酶切后既能把環(huán)打開接納外源能把環(huán)

10、打開接納外源DNADNA片段,又不會(huì)丟失片段,又不會(huì)丟失自己的片段。自己的片段。2022-5-6Copyright Jiangyong(3)(3)大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌等細(xì)大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌等細(xì)菌中都有質(zhì)粒。它存在于細(xì)菌的細(xì)胞質(zhì)中,菌中都有質(zhì)粒。它存在于細(xì)菌的細(xì)胞質(zhì)中,上面一般含幾個(gè)到幾百個(gè)基因,控制著細(xì)上面一般含幾個(gè)到幾百個(gè)基因,控制著細(xì)菌的抗藥性、固氮、抗生素合成等性狀。菌的抗藥性、固氮、抗生素合成等性狀。由于土壤農(nóng)桿菌很容易感染植物細(xì)胞,使由于土壤農(nóng)桿菌很容易感染植物細(xì)胞,使細(xì)胞生有瘤狀物。所以科學(xué)家培育轉(zhuǎn)基因細(xì)胞生有瘤狀物。所以科學(xué)家培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí),常常用土壤農(nóng)桿

11、菌中的質(zhì)粒做載植物時(shí),常常用土壤農(nóng)桿菌中的質(zhì)粒做載體。體。(4)(4)注意與細(xì)胞膜上載體的區(qū)別,兩者的化注意與細(xì)胞膜上載體的區(qū)別,兩者的化學(xué)本質(zhì)和作用都不相同。學(xué)本質(zhì)和作用都不相同。操作操作在綠色紙上寫上在綠色紙上寫上GGCTCCCGGGAATTCATTTTGCCGAGGGCCCTTAAGTAAAAC 在紅色紙上寫上在紅色紙上寫上 TCCCGGGAATTCCCGGGAATTCTA AGGGCCCTTAAGGGCCCTTAAGAT 如果用如果用EcoR限制酶,情況限制酶,情況? 用什么酶連接?用什么酶連接?如果用如果用Sma限制酶,情況限制酶,情況? 用什么酶連接?用什么酶連接?操作中涉及到的用具和材料分別操作中涉及到的用具和材料分別 綠色紙綠色紙 紅色紙紅色紙 剪刀剪刀 透明膠條透明膠條 連接好的綠紅紙條連接好的綠紅紙條歸納歸納 什么是基因工程什么是基因工程? P1? P1 什么水平什么水平? ? 原理?變異種類?基因重組種類?原理?變異種類?基因重組種類? 幾種酶幾種酶DNADNA連接酶、聚合酶、限制酶、解旋連接酶、聚合酶、限制酶、解旋酶酶(解旋哪里斷開,復(fù)制哪里接上去,什(解旋哪里斷開,復(fù)制哪里接上去,什么時(shí)候用到?)么時(shí)候用到?)2022-5-6Copyright Jiangyong基因工程的別名基因工程的別名基因拼接技術(shù)或基

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