10-親和分離技術(shù)

1、第第10章章 親和分離技術(shù)親和分離技術(shù) 1生物親和作用生物親和作用2親和作用的影響因素親和作用的影響因素3一般操作一般操作4親和吸附介質(zhì)親和吸附介質(zhì) 5親和配基親和配基6配基連接配基連接7親和作用體系親和作用體系8親和膜親和膜9親和萃取親和萃取 10 親和沉淀親和沉淀親和作用親和作用Affinity: 生物物質(zhì)，特別是酶和抗體等蛋白質(zhì)，具有識別特定物質(zhì)并與該物質(zhì)的分子相結(jié)合的能力。這種特異性相互作用稱為親和作用。親和純化親和純化affinity purification: 抗原-抗體利用生物分子間的這種特異性結(jié)合作用的原理進行生物物質(zhì)分離純化的技術(shù)稱為親和純化技術(shù)，其代表為親和層析法Affin

2、ity chromatography親和作用結(jié)構(gòu)特點親和作用結(jié)構(gòu)特點 pro立體結(jié)構(gòu)中含有某些親和結(jié)合的部位，這些呈陷或凸起部位恰好能夠進入與其發(fā)生親和作用的分子的凹陷部位，就象鑰匙和鎖孔的關(guān)系一樣。蛋白質(zhì)分子表面的凹陷凸起部位與整個蛋白質(zhì)分子相比要小得多，如，IgG直徑一般為幾納米到十幾納米，而結(jié)合部位的直徑一般為12nm。11生物親和作用生物親和作用 由于不是整個分子或物質(zhì)參與親和結(jié)合，親和作用的分子(物質(zhì))對可以是：大分子-小分子，大分子-大分子，大分子-細胞，細胞-細胞。親和作用的作用力親和作用的作用力具有“鑰匙和鎖孔”的關(guān)系是產(chǎn)生親和結(jié)合作用的必要條件，但并不充分。除此之外，還需要分

3、子或原子水平的各種相互作用.22親和作用的影響因素親和作用的影響因素 1)離子強度離子強度如如Affinity主要源于靜電引力或氫主要源于靜電引力或氫鍵，則提高鍵，則提高I無疑會減弱或完全破無疑會減弱或完全破壞壞Affinity。疏水性作用隨疏水性作用隨I提高而增大提高而增大, 因此，因此，當當Affinity作用主要源于疏水性相作用主要源于疏水性相互作用時，增大互作用時，增大I則可提高則可提高Affinity。許多親和吸附的目標蛋白質(zhì)可用許多親和吸附的目標蛋白質(zhì)可用高濃度鹽溶液洗脫，說明靜電引高濃度鹽溶液洗脫，說明靜電引力在力在Affinity中占有重要地位。中占有重要地位。2)pH在親和分

4、離操作中在親和分離操作中, 溶液溶液pH值的選擇值的選擇是非常重要的是非常重要的.3).抑制氫鍵形成的物質(zhì)抑制氫鍵形成的物質(zhì)脲和鹽酸胍的存在可抑制氫鍵脲和鹽酸胍的存在可抑制氫鍵配基配體的形成的形成. 因此因此,如果如果Affinity中存在氫中存在氫鍵鍵,則加入脲或鹽酸胍可減弱則加入脲或鹽酸胍可減弱Affinity。但它們?yōu)閺娏易冃詣?。但它們?yōu)閺娏易冃詣?)溫度溫度TT 使分子和原子的熱運動，結(jié)合中心的靜電作用、氫鍵及金屬配位鍵，但可使疏水性作用。5)大半徑的陰離子大半徑的陰離子SCN-，I-和ClO-4等半徑較大的陰離子能降低疏水相互作用。故，則這此離子會降低Affinity。6). 表面

5、活性劑表面活性劑/乙二醇乙二醇7)鰲合劑鰲合劑如果Affinity源于親和分子對與金屬離子形成的配位鍵，則加入乙二胺四乙酸EDTA等鰲合劑除去金屬離子，可使Affinity消失。結(jié)合中心結(jié)合中心33一般操作一般操作 關(guān)鍵關(guān)鍵: ?44親和吸附介質(zhì)親和吸附介質(zhì) 商品化的親和吸附介質(zhì)商品化的親和吸附介質(zhì)亞胺二乙酸54親和吸附介質(zhì)親和吸附介質(zhì)Home-made親和吸附介質(zhì)親和吸附介質(zhì)Home-made所需材料所需材料1st 親和配基親和配基2nd 載體載體Home-made基本方法基本方法親和配基親和配基 + 載體載體 = 載體載體-親和配基親和配基天然吸附介質(zhì)天然吸附介質(zhì)如植物凝集素與糖具有親和結(jié)

6、合作用，因此，天然瓊脂糖凝膠和葡聚糖凝膠可直接用做外源凝集素的親和吸附介質(zhì)。例如例如:1st Sephadex凝膠是葡萄糖通過a-1.6結(jié)合與交聯(lián)制備的葡萄糖凝膠,可親和吸附伴刀豆球蛋白A(一種植物凝集素); 2nd Sepharose 凝膠中含有半乳糖,在Ca2+離子存在下可親和吸附蛇毒凝集素.已介紹已介紹?65親和配基親和配基A 蛋白蛋白(protein A or A抗原抗原)分子量約分子量約42kD，存在于金黃色葡萄，存在于金黃色葡萄球菌的細胞壁中，占細胞壁構(gòu)成成球菌的細胞壁中，占細胞壁構(gòu)成成分的約分的約5%。A蛋白與動物蛋白與動物IgG具有很強的親和結(jié)具有很強的親和結(jié)合作用，每個合作用

7、，每個A蛋白含有蛋白含有5個個Fc片段片段結(jié)合部位。除結(jié)合部位。除IgG外，還與人外，還與人IgG和和人人IgA也具有親和結(jié)合作用，但較弱。也具有親和結(jié)合作用，但較弱。凝集素凝集素lectin與糖特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)的總稱與糖特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)的總稱(酶酶和抗體除外和抗體除外)，大部分凝集素為多聚，大部分凝集素為多聚體。如。常用做親和配基的伴刀豆體。如。常用做親和配基的伴刀豆球蛋白球蛋白A(concanavalin A, con A)與與葡萄糖和甘露糖的親和結(jié)合作用較葡萄糖和甘露糖的親和結(jié)合作用較強強 , 麥 芽 凝 集 素麥 芽 凝 集 素 ( w h e a t g e r m agglut

8、inin, WGA)與與N-乙酰葡萄糖乙酰葡萄糖胺親和結(jié)合作用較強。胺親和結(jié)合作用較強?？贵w抗體抗體與抗原之間具有高度特異性結(jié)合能力，結(jié)合常數(shù)一般為107 1012mol/L。因此，利用以單抗為配基的免疫和色譜法是高度純化蛋白質(zhì)類生物大分子物質(zhì)的有效手段。酶抑制劑酶抑制劑可與酶的活性部位結(jié)合,但結(jié)合后抑制酶的活性。如1st 大分子抑制劑：大分子抑制劑：如胰蛋白酶有胰臟蛋白酶抑制劑PTI、卵粘蛋白(ovomucoid)和大豆胰蛋白酶抑制劑,STI)等,2nd 小分子抑制劑：小分子抑制劑：如有芐脒、精氨酸和賴氨酸均可抑制胰蛋白酶的活性，并可作為親和純化胰蛋白酶的配基。75親和配基親和配基輔酶和磷酸

9、腺苷輔酶和磷酸腺苷脫氫酶和激酶需要在輔 酶脫氫酶和激酶需要在輔 酶co-enzyme的存在下表現(xiàn)其生物催化的存在下表現(xiàn)其生物催化活性，即脫氫酶和激酶與輔酶之活性，即脫氫酶和激酶與輔酶之間具有親和結(jié)合作用。輔酶主要間具有親和結(jié)合作用。輔酶主要有輔酶有輔酶I(NAD)、輔酶、輔酶II(NADP)和和ATP等。此外，等。此外，AMP, ADP的腺苷的腺苷部分與上述輔酶的結(jié)構(gòu)類似，與部分與上述輔酶的結(jié)構(gòu)類似，與脫氫和激酶同樣具有脫氫和激酶同樣具有Affinity。三嗪類色素三嗪類色素三嗪類色素三嗪類色素(triazine dyes)是一類是一類分子內(nèi)含有三嗪環(huán)的合成活性染分子內(nèi)含有三嗪環(huán)的合成活性染料

10、，與各種需要在料，與各種需要在NAD的存在下的存在下表現(xiàn)其生物活性的脫氫酶和激酶表現(xiàn)其生物活性的脫氫酶和激酶具有結(jié)合作用。這類結(jié)合具有抑具有結(jié)合作用。這類結(jié)合具有抑制酶活性的作用。制酶活性的作用。三嗪類色素還與白蛋白、三嗪類色素還與白蛋白、INF、核、核酸酶和糖解酶等具有很高的親和酸酶和糖解酶等具有很高的親和結(jié)合能力的結(jié)合能力的.Cibacron Blue 3GA(又稱Reactive Blue 2)是最常用的活性色素 過渡金屬離子過渡金屬離子Cu2+、Ni2+，Zn2+和Co2+等過渡金屬離子可與N，S和O等供電子原子產(chǎn)生配位鍵，因此可與蛋白質(zhì)表面的組氨酸(His)的咪唑基、半胱氨酸(Cys

11、)的巰基和色氨酸(Trp)的吲哚基發(fā)生親和作用，其中以His的咪唑基發(fā)生親和作用最強。過渡金屬離子與 咪 唑 基 的 結(jié) 合 強 弱 順 序 是Cu2+Ni2+Zn2+ Co2+ 。肝素肝素heparin是存在于哺乳動物臟器中的酸性多糖類物質(zhì)，M為5-30kD，具有抗凝血作用。肝素與脂肪酶、甾體受體，限制性核酸內(nèi)切酶、抗凝酶、凝血蛋白質(zhì)等具有親和作用. 86配基連接配基連接溴化氰活化法溴化氰活化法固定配基：固定配基：R-NH2應(yīng)用：多糖凝膠的活化，適用于應(yīng)用：多糖凝膠的活化，適用于R-NH2型配基的修飾，如蛋白質(zhì)配基型配基的修飾，如蛋白質(zhì)配基IgG方法：反應(yīng)在碳酸鹽方法：反應(yīng)在碳酸鹽buffe

12、r下進行，下進行， 注意：注意： CNBr劇毒藥品，且具有揮發(fā)性，上述操作要在通風櫥中進行劇毒藥品，且具有揮發(fā)性，上述操作要在通風櫥中進行至少二人在場至少二人在場急救藥品急救藥品 二價鐵鹽二價鐵鹽活化活化交連交連連接連接96配基連接配基連接環(huán)氧基活化法環(huán)氧基活化法 應(yīng)用對象：應(yīng)用對象：用于多糖凝膠和表用于多糖凝膠和表面為氨基的載體的面為氨基的載體的活化，固定分子結(jié)活化，固定分子結(jié)構(gòu)為構(gòu)為R-NH2、R-OH和和R-SH的配基。的配基。步驟：步驟：1st 活化活化2nd 直接固化法直接固化法反應(yīng)速度很慢，所反應(yīng)速度很慢，所需固定化時間較長需固定化時間較長(24h以上以上)2nd 間接固定化法間接

13、固定化法 環(huán)氧氯丙烷 活性環(huán)氧基 直接固化直接固化 活化：活化：間接固定間接固定EDC106配基連接配基連接硅膠上連接硅膠上連接活化活化 -氨丙基三甲氧基硅烷 環(huán)氧丙基三甲氧基硅烷 活性氨基 活性環(huán)氧基 在酸溶液中環(huán)氧基發(fā)生二醇化反應(yīng) 116配基連接配基連接金屬配位金屬配位 亞胺二乙酸iminodiacetic acid, IDA配基His性質(zhì)獨特性質(zhì)獨特: 具有弱疏水性、咪唑環(huán)為弱電性。因此His可與pro發(fā)生親和合作用。在鹽濃度較低的pH約等于目標pro的pI溶液中，固定化His親和作用最強，隨鹽濃度，親和作用。因此利用利用His為配基可分離為配基可分離pI相差較大的相差較大的pro。 空

14、間位阻空間位阻126 6配基連接配基連接間隔臂間隔臂空間位阻空間位阻：當較小的配基直接固定在載體下，會由于載體的空間位陰，配基與生物大分子不能發(fā)生有效的親和吸附作用。辦法：辦法：在配基與載體之間連接一個“間隔臂”(spacer)。間隔臂長度有一定限制，當間當間隔臂含有隔臂含有68個亞甲基個亞甲基(-CH2-)時親和力最大，時親和力最大，亞甲基數(shù)超過8(長度1.0nm)時，親和力下降。137親和作用體系親和作用體系 高度特異性親和體系高度特異性親和體系抗原與其單克隆抗抗原與其單克隆抗體的結(jié)合基本上是體的結(jié)合基本上是一對一的關(guān)系，即一對一的關(guān)系，即該單克隆抗體不能該單克隆抗體不能與其他抗原結(jié)合。與

15、其他抗原結(jié)合。群特異性親和體系群特異性親和體系外源凝素可與任何外源凝素可與任何含有糖基的蛋白質(zhì)含有糖基的蛋白質(zhì)結(jié)合。結(jié)合。14158. 親和膜親和膜(AM)概述概述隨著生物工程和生命科學(xué)的迅速發(fā)展，對生物大分子純隨著生物工程和生命科學(xué)的迅速發(fā)展，對生物大分子純化分離的要求越來越迫切。近年來，膜分離技術(shù)的快速化分離的要求越來越迫切。近年來，膜分離技術(shù)的快速發(fā)展，對生物大分子的純化分離是一個極大的推動。親發(fā)展，對生物大分子的純化分離是一個極大的推動。親和膜和膜將將親和色譜與膜分離技術(shù)親和色譜與膜分離技術(shù)結(jié)合起來的現(xiàn)貨膜新結(jié)合起來的現(xiàn)貨膜新成員。成員。親和膜分離的基本原理親和膜分離的基本原理：u其原

16、理與親和色譜基本相同，主要是基于欲分離物質(zhì)其原理與親和色譜基本相同，主要是基于欲分離物質(zhì)(或或稱配合物稱配合物ligate)和鍵合在膜上的親和配位基和鍵合在膜上的親和配位基(ligand)之間之間的生物特異相互作用，具有高度的選擇性和專一性。這的生物特異相互作用，具有高度的選擇性和專一性。這種相互作用可比喻為鎖和鑰匙之間的對應(yīng)關(guān)系。種相互作用可比喻為鎖和鑰匙之間的對應(yīng)關(guān)系。u一個完整的親和膜包括三種具有一定聯(lián)系的物種：合適一個完整的親和膜包括三種具有一定聯(lián)系的物種：合適的的基材基材、間隔臂間隔臂(Spacer)和和配位基配位基。168. 親和膜分離親和膜分離 活化后的膜材料活化后的膜材料1與間

17、隔臂分子與間隔臂分子2產(chǎn)生化學(xué)結(jié)合，生成帶間產(chǎn)生化學(xué)結(jié)合，生成帶間隔臂的膜隔臂的膜3； 間隔臂膜間隔臂膜3與具有生物特異性的親和配位基與具有生物特異性的親和配位基4共價結(jié)合，生共價結(jié)合，生成帶配位基的親和膜成帶配位基的親和膜5； 多組分生物大分子混合物多組分生物大分子混合物6通過親和膜時，混合物中與親通過親和膜時，混合物中與親和配基具有特異性相互作用的物質(zhì)和配基具有特異性相互作用的物質(zhì)7與膜上的配位基產(chǎn)生與膜上的配位基產(chǎn)生相互作用，生成配合物質(zhì)相互作用，生成配合物質(zhì)8而在膜上吸附，沒有相互作用而在膜上吸附，沒有相互作用的物質(zhì)的物質(zhì)9則通過膜；則通過膜； 選用一種能與膜上的親和配基產(chǎn)生相互作用的

18、試劑選用一種能與膜上的親和配基產(chǎn)生相互作用的試劑10通過通過膜或調(diào)節(jié)體系的膜或調(diào)節(jié)體系的pH、離子強度、溫度等使形成的配合物解、離子強度、溫度等使形成的配合物解離而洗脫得到純化好的物質(zhì)離而洗脫得到純化好的物質(zhì)11，膜上親和配基則被頂替物，膜上親和配基則被頂替物質(zhì)質(zhì)12占有；占有； 選用合適的洗滌試劑洗脫試劑分子選用合適的洗滌試劑洗脫試劑分子12，使膜再生。，使膜再生。17+12934567810111212生物大生物大分子在分子在親和膜親和膜上的分上的分離原理離原理洗脫洗脫膜膜親和配位基親和配位基間隔臂分子間隔臂分子帶配位基的親和膜帶配位基的親和膜生物大分生物大分子混合物子混合物試劑試劑純化的

19、產(chǎn)物純化的產(chǎn)物頂替試劑分子頂替試劑分子18 8. 親和膜分離親和膜分離 親和膜的基質(zhì)材料親和膜的基質(zhì)材料基質(zhì)材料基質(zhì)材料除了達到一般膜材料的要求即除了達到一般膜材料的要求即容易成膜容易成膜，具有良好的具有良好的化學(xué)和機械穩(wěn)定性化學(xué)和機械穩(wěn)定性外，還要求與生物外，還要求與生物活性物質(zhì)具有良好的活性物質(zhì)具有良好的相容性和耐細菌性相容性和耐細菌性，更主要，更主要的的要有良好的化學(xué)反應(yīng)性能要有良好的化學(xué)反應(yīng)性能，以便進行活化。，以便進行活化。基質(zhì)材料基質(zhì)材料 要求聚合物分子上含有要求聚合物分子上含有 -OH、NH2、SH、COOH等。即等。即纖維素、聚酰胺纖維素、聚酰胺等等的聚合物。的聚合物?；幕罨?/p>

20、方法基材活化方法：溴化氰法、雙環(huán)氧烷法、高碘酸：溴化氰法、雙環(huán)氧烷法、高碘酸鹽法等。鹽法等。19 8. 親和膜分離親和膜分離親和膜的間隔臂親和膜的間隔臂在分離相對分子質(zhì)量很大的生物大分子時，為了克服幾在分離相對分子質(zhì)量很大的生物大分子時，為了克服幾何位阻障礙，往往在介質(zhì)和配位基之間插入一個具有一何位阻障礙，往往在介質(zhì)和配位基之間插入一個具有一定幾何長度的有機基團，即定幾何長度的有機基團，即間隔臂（或空間臂），間隔臂（或空間臂），以使以使欲分離的物質(zhì)方便地接近配位基上的親和位點。欲分離的物質(zhì)方便地接近配位基上的親和位點。理想的間隔臂應(yīng)有一定的長度（至少理想的間隔臂應(yīng)有一定的長度（至少含含3個原子

21、以上個原子以上），），且自身不帶任何電荷，疏水性也不能太強，不帶任何附且自身不帶任何電荷，疏水性也不能太強，不帶任何附加的活性中心。加的活性中心。常用的間隔臂是含兩個活潑氨基的常用的間隔臂是含兩個活潑氨基的二胺類二胺類物質(zhì)，如乙二物質(zhì)，如乙二胺、丙二胺、己二胺、對苯二胺等；許多氨基酸和肽類胺、丙二胺、己二胺、對苯二胺等；許多氨基酸和肽類物質(zhì)也可作間隔臂。物質(zhì)也可作間隔臂。20 8. 親和膜分離親和膜分離親和膜的配位基親和膜的配位基由于親和分離是基于由于親和分離是基于生物大分子和在基質(zhì)材料上生物大分子和在基質(zhì)材料上結(jié)合的配位基之間所發(fā)生的生物特異性相互作用結(jié)合的配位基之間所發(fā)生的生物特異性相互作

22、用，如酶與抑制劑或其底物，抗原與抗體等，所以，如酶與抑制劑或其底物，抗原與抗體等，所以，配位基的選擇和使用特別重要。配位基的選擇和使用特別重要。通用型配位基通用型配位基 包括外源凝集素、包括外源凝集素、A蛋白、蛋白、G蛋白、蛋白、硼酸、輔酶、生物模擬染料、金屬螯合物等。硼酸、輔酶、生物模擬染料、金屬螯合物等。特異性配位基特異性配位基 包括酶和其底物或抑制劑，各種特包括酶和其底物或抑制劑，各種特異性免疫試劑（抗原異性免疫試劑（抗原抗體、細胞受體抗體、細胞受體調(diào)節(jié)劑、調(diào)節(jié)劑、單克隆抗體）。單克隆抗體）。21 8. 親和膜分離親和膜分離親和膜的應(yīng)用親和膜的應(yīng)用 醫(yī)藥制劑的生產(chǎn)和純化。醫(yī)藥制劑的生產(chǎn)和

23、純化。 生物大分子的分離和濃縮。生物大分子的分離和濃縮。 臨床診斷和治療臨床診斷和治療 酶反應(yīng)機理和基因工程研究等。酶反應(yīng)機理和基因工程研究等。22 9 9 親和萃取親和萃取 （Affinity extraction）定義：利用定義：利用偶聯(lián)親和配基的偶聯(lián)親和配基的PEG為成相聚為成相聚合物進行的合物進行的雙水相萃取雙水相萃取，在親和配基的親，在親和配基的親和結(jié)合作用下促進目標產(chǎn)物在和結(jié)合作用下促進目標產(chǎn)物在PEG相（上相（上相）的分配，提高目標產(chǎn)物的相）的分配，提高目標產(chǎn)物的分配系數(shù)和分配系數(shù)和選擇性選擇性。 PEG/Dextran, PEG/無機鹽無機鹽23親和萃取純化過程親和萃取純化過程

24、 親和分配（進料），親和分配（進料），雜蛋白反萃?。ㄇ逑矗╇s蛋白反萃?。ㄇ逑矗┠繕水a(chǎn)物反萃?。ㄏ疵摚?。目標產(chǎn)物反萃?。ㄏ疵摚?。 249、親和反膠團萃取、親和反膠團萃?。ˋffinity-based reversed micellar extraction） 定義：指在定義：指在反膠團反膠團相中除通相中除通常的表面活性劑以外，添加常的表面活性劑以外，添加另一種親水另一種親水頭部為親和配基頭部為親和配基的的助表面活性劑助表面活性劑（cosurfactant）；）；通過通過親和配基親和配基與與目標分子目標分子的的親和結(jié)合作用，促進目標產(chǎn)親和結(jié)合作用，促進目標產(chǎn)物在反膠團相的分配。物在反膠團相的分配。

25、25親和反膠團萃取過程親和反膠團萃取過程26反萃取反萃取271010、親和沉淀、親和沉淀 （Affinity precipitation）親和沉淀親和沉淀: :是是生物親和相互作用生物親和相互作用與與沉淀分離沉淀分離相結(jié)合的生物大分子的分離純化技術(shù)。相結(jié)合的生物大分子的分離純化技術(shù)。 一次作用親和沉淀一次作用親和沉淀二次作用親和沉淀二次作用親和沉淀28一次作用親和沉淀一次作用親和沉淀水溶性化合物分子水溶性化合物分子上偶聯(lián)有兩個或兩個以上上偶聯(lián)有兩個或兩個以上的的親和配基親和配基雙 配 基 （雙 配 基 （ b i s - l i g a n d ） ； 多 配 基） ； 多 配 基（polyl

26、igand）。）。雙配基或多配基雙配基或多配基與含有兩個以上與含有兩個以上親和結(jié)合部親和結(jié)合部位位的的多價蛋白質(zhì)多價蛋白質(zhì)產(chǎn)生親和交聯(lián)，增大為較大產(chǎn)生親和交聯(lián)，增大為較大的交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)而沉淀。的交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)而沉淀。29二次作用親和沉淀二次作用親和沉淀 制備親和沉淀介質(zhì)制備親和沉淀介質(zhì): :利用在利用在物理場物理場改變時溶解度下改變時溶解度下降、發(fā)生可逆性沉淀的降、發(fā)生可逆性沉淀的水溶性聚合物水溶性聚合物為載體為載體固定親固定親和配基。和配基。親和介質(zhì)結(jié)合目標分子后，通過親和介質(zhì)結(jié)合目標分子后，通過改變物理場改變物理場使使介質(zhì)介質(zhì)與目標分子共同沉淀與目標分子共同沉淀的方法稱為二次作用親和沉淀。的方法稱為

27、二次作用親和沉淀。 離心或過濾回收沉淀，即可除去未沉淀的雜蛋白。離心或過濾回收沉淀，即可除去未沉淀的雜蛋白。沉淀清洗后加入洗脫劑即可純化目標產(chǎn)物。沉淀清洗后加入洗脫劑即可純化目標產(chǎn)物。30可逆沉淀性聚合物可逆沉淀性聚合物 聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺31可逆沉淀性聚合物可逆沉淀性聚合物聚合脂質(zhì)體（聚合脂質(zhì)體（polymerized liposome,PLS） 32親和沉淀純化技術(shù)優(yōu)點親和沉淀純化技術(shù)優(yōu)點 （1）溶液中進行溶液中進行，無擴散傳質(zhì)阻力，親和結(jié)合速，無擴散傳質(zhì)阻力，親和結(jié)合速度快；度快；（2）親和配基裸露在溶液中，配基利用率高；）親和配基裸露在溶液中，配基利用率高；（3）離心或過濾技術(shù)回收沉

28、淀，規(guī)模放大；）離心或過濾技術(shù)回收沉淀，規(guī)模放大；（4）可用于）可用于高粘度高粘度或或含微粒含微粒料液中目標產(chǎn)物純化。料液中目標產(chǎn)物純化。10.4 分子印跡技術(shù)分子印跡技術(shù)-原理介紹原理介紹分子印跡技術(shù)（分子印跡技術(shù)（MIT）的起源）的起源Pauling 鎖匙理論（理論基礎(chǔ)）鎖匙理論（理論基礎(chǔ)）Dickey 專一性吸附（萌芽）專一性吸附（萌芽）Wulff 首次合成（形成標志）首次合成（形成標志）Mosbach 茶堿分子印跡聚合物（發(fā)展）茶堿分子印跡聚合物（發(fā)展）Lund University 成立分子印跡學(xué)會成立分子印跡學(xué)會（Society for Molecular Imprinting，SMI）34分子印跡技術(shù)的基本原理分子印跡技術(shù)的基本原理分子印跡技術(shù)是指分子印跡技術(shù)是指制備制備對某一特定的目標分對某一特定的目標分子子 (模板分子、印跡分子或烙印分子模板分子、印跡分子或烙印分子) 具特異具特異選擇性的選擇性的聚合物聚合物技術(shù)。技術(shù)。 三大特點：三大特點：構(gòu)效預(yù)訂性、特異識別性、廣泛適