植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)氯化三苯基四氮唑(TTC)法測定根系

1、實(shí)驗(yàn)4氯化三苯基四氮唾(TTC)法測定才艮系活力重要指標(biāo)，可以衡量根系吸收水分或礦質(zhì)元素的能力大小，甚至可以反映地上部分的營養(yǎng)狀況以及產(chǎn)量水平。學(xué)會利用TTC法測定根系活力。一、原理氯化三苯基四氮喳(TTC)溶于水中成為無色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯基甲替(TTF),如下式：CJL-C/N N CJL I 、N=而一C6H5TTC （天色）HI/NNC6H$C,HaC+HC1、N=NC6HsTTF（紅色）生成的TTF比較穩(wěn)定，不會被空氣中的氧自動氧化，所以TTC被廣泛地用作酶試驗(yàn)的氫受體，植物根所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸得到增強(qiáng)，而被丙二酸、碘乙酸所抑制

2、。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性，并作為根系活力的指標(biāo)。二、材料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料：玉米等植物根系。（二）儀器設(shè)備：分光光度計(jì)；天平；恒溫箱1臺；研缽1套；漏斗；量筒；移液管；試管；刻度試管10ml;試管架；藥勺；石英砂適量；燒杯;小培養(yǎng)皿；洗瓶。二、材料、設(shè)備儀器及試劑（三）試劑：1.乙酸乙酯2.次硫酸鈉（Na2s2O4,強(qiáng)還原劑，俗稱保險(xiǎn)粉）3.lmg/ml的TTC溶液：4.磷酸緩沖液（66mmol/L,pH7）.5.lmol/L硫酸：6.0.4moi/L琥珀酸：三、實(shí)驗(yàn)步驟1 .定性測定(教師做演示實(shí)驗(yàn))(1)配置反應(yīng)液把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸鈉和磷酸緩沖液按1

3、:5：4比例混合。(2)把根仔細(xì)洗凈，把地上部分從莖基切除，將根放入三角瓶中，倒入反應(yīng)液，以浸沒根為度，置37C左右暗處放lh,以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細(xì)側(cè)根都明顯地變成紅色，表明該處有脫氫酶存在.三、實(shí)驗(yàn)步驟2 .定量測定(1)TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作tA. 111111 HU vx fci - j i wi 11 2P TIMa T 9 /JUZ、 .(黃豆大小)保險(xiǎn)粉搖勻，加入乙酸乙酯40mL左右 劇烈震蕩摩保臉球充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻居 即成TTF麟菠(20陽/mL )。取1mg/mL的TTC2mL于100mL容量瓶中，加入2勺按下表制作TTF標(biāo)準(zhǔn)曲線。以空白作參比，在48

4、5nm波長下測定光密度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試怪編號123456空白樣品TTF含量(ug)02040608010011卜(ml)012345Jc乙酸乙酯（ml）498765I0r0OD(485nm)三、實(shí)驗(yàn)步驟（2）.樣品的提取及測定樣品提?。悍Q取根樣品0.5g,放入小培養(yǎng)皿，加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml,把根充分浸沒在溶液內(nèi)，在37*C下暗處保溫lh,此后加入Imo1/L硫酸2ml,以停止反應(yīng)。（與此同時(shí)做一空白實(shí)驗(yàn)，先加硫酸，再加根樣品，其他操作同上）。根系活力測定：把根取出，吸干水分后與乙酸乙酉旨341nl和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把紅色提出液過濾后移入10nli刻度試管，用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈於寥?，皆移入試?最后加乙酸乙酯使總量為10ml,用分光光度計(jì)在485nm下比色，以空白作參比讀出光密度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出四氮哇還原量。人結(jié)果計(jì)算四氮喳還原強(qiáng)度:mg/g（根鮮重）小=四氮嗖還原量（mg）/根重（g）X時(shí)間（h）五注意事項(xiàng)