293T細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程_第1頁
293T細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程_第2頁
293T細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程_第3頁
全文預(yù)覽已結(jié)束

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、百利藥業(yè)生物藥研發(fā)部標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程題目：293T細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作規(guī)程編號：SOP-M-e-003-制定者：（簽名）日期：年月日批準(zhǔn)者：（簽名）日期：年月日生效日期：年月日修改和追加記錄第1頁共3頁百利藥業(yè)生物藥研發(fā)部編號：SOP-M-e-OO-題目：293T細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程1目的293T細(xì)胞是常用于包裝和擴(kuò)增病毒載體的工具細(xì)胞，因此做好293T細(xì)胞的培養(yǎng)，為保證相關(guān)實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行提供必要條件。2適用范圍本部門293T細(xì)胞培養(yǎng)3操作方法31將移液器和移液槍、15ml離心管、離心管架、75cm2新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶放于生物安全柜中，按照生物安全柜的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，將生物安全柜的紫外開啟半小時(shí)。3.2將含10

2、%胎牛血清和100U/ml雙抗的DMEM及PBS放于37°C水浴鍋中預(yù)熱。321將已長到80%-90%的293T細(xì)胞培養(yǎng)瓶從37C,5%的CO2培養(yǎng)箱中取出，先用75%的酒精噴灑于瓶表面，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶旋轉(zhuǎn)放于生物安全柜中，用無菌的移液管吸凈其中的培養(yǎng)基，加5ml的預(yù)熱的PBS洗滌一次，吸凈PBS。322將含EDTA-0.25%tyption用PBS稀釋兩陪到五倍，向該75cm2的細(xì)胞瓶中加入3ml稀釋好的EDTA-0.25%tyption，讓其充分平鋪于細(xì)胞表面。蓋好瓶蓋，將細(xì)胞瓶放在顯微鏡下觀察，直到細(xì)胞變圓，加含10%胎牛血清的DMEM終止反應(yīng)，用移液管輕輕將瓶上的細(xì)胞吹下，將細(xì)胞液移到15ml無菌的離心管中，1000rpm離心3分鐘。323將離心上清吸棄掉，用手指輕輕拍打離心管底將底部細(xì)胞分散開，再加3mlDMEM培養(yǎng)基將分散的細(xì)胞重懸稀釋開，取一定量的細(xì)胞液進(jìn)行n倍稀釋后計(jì)數(shù)，按照細(xì)胞計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。324計(jì)數(shù)好之后細(xì)胞傳代密度按照25X104個(gè)細(xì)胞/cm2進(jìn)行傳代培養(yǎng)，每個(gè)75cm2的培養(yǎng)瓶中加10mlDMEM培養(yǎng)基，放于37C,5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。32

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論