S006紅細(xì)胞ABO血型反定型鑒定標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程

1、噩文件名冗紅細(xì)胞ABO血型節(jié)編制人蠅審核人量批準(zhǔn)人肆批準(zhǔn)日期墨紅細(xì)胞ABO血型反定型鑒定標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程反定型鑒定標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程蜜修改日期蓬簽字蜩修改日期滕簽字蝕一*、 目的黃為保證血艘復(fù)審日期量簽字薇復(fù)審日期交簽字液及血液成 分的紅細(xì)胞 ABO血型在 臨床上同型 輸注,保證臨 床輸血平安、 有效,根據(jù)臨床輸血技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)?第十五條特制定本標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程莆二、方法蟻采用試管法檢測(cè)紅細(xì)胞ABO血型反定型肇三、原理芨用的A1、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞測(cè)定被檢者血清中有無(wú)相應(yīng)的抗 A或抗B抗體, 結(jié)合正定型結(jié)果判斷ABO血型.荽四、適用范圍建適用于輸血前患者與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞 ABO血型反定型確認(rèn).溝五、儀器設(shè)備肇普

2、通離心機(jī)；血型專用離心機(jī)；蜜六、試劑蟆1、試劑名稱：人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒；蕨2、試劑生產(chǎn)廠家：上海血液生物醫(yī)藥；膀3、批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字 S20060059 ;材4、包裝規(guī)格：A1、B、O試劑J各1支,10ml/支；膈5、貯藏條件；2-8 C保存,不能冰凍充6、有效期：自檢定合格之日起 2個(gè)月;膈7、試劑性能：外觀、溶血率%、特異性、抗原性均符合檢定規(guī)程要求.量七、檢測(cè)樣本要求芍1、標(biāo)本類型：靜脈血EDTA抗凝劑:血液=1:10.墨2、標(biāo)本采集：見(jiàn)輸血科標(biāo)本治理標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程.輻3、標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸：新鮮血 28c貯存時(shí)間不超過(guò)72小時(shí).聿4、標(biāo)本拒收狀態(tài)：標(biāo)識(shí)不準(zhǔn)確、標(biāo)本稀釋、細(xì)菌

3、污染,嚴(yán)重溶血等不能測(cè)定.期八、操作步驟蔻1、取10mmx60mm 潔凈小試管3支,分別標(biāo)明A1型細(xì)胞、B型細(xì)胞、O型細(xì)胞, 用滴管分別參加受檢者血清1滴于試管,再分別用滴管參加 A1、B、O型試劑紅細(xì) 胞懸液1滴.蟻2、,搖動(dòng)試管,立即以1000rpm離心1min或3400rpm 離心15s.腿3.先觀察是否有溶血,溶血可能是陽(yáng)性結(jié)果,或者是細(xì)菌污染；將試管輕輕搖晃,如肉眼不使沉于管底的紅細(xì)胞浮起,觀察細(xì)胞扣情況,并判斷凝集強(qiáng)度見(jiàn)下表 見(jiàn)凝集,應(yīng)將反響物倒于玻片上,再以低倍鏡檢查.肇紅細(xì)胞ABO血型反定型結(jié)果凝集強(qiáng)度判斷對(duì)照表滕紅細(xì)胞凝集反響描述蔓凝集強(qiáng)度腿鏡下可見(jiàn)少數(shù)紅細(xì)胞凝集,而絕大多數(shù)

4、紅細(xì)胞仍呈分散曹混合凝集外觀分布薄溶血,上精液中有游離血紅蛋白蒙溶血芳紅細(xì)胞凝集成一大塊,血清清楚透明薄4+蒞紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊,血清尚清楚冗3+放紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊,周圍可見(jiàn)到游離紅細(xì)胞箍2+螃肉眼可見(jiàn)大顆粒,周圍有較多游離紅細(xì)胞聿1 +唐鏡下可見(jiàn)數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起,周圍有很多游離紅細(xì) 莆土胞菜鏡下未見(jiàn)凝集,紅細(xì)胞均勻分布肅陰性覆4、ABO血型反定型表現(xiàn)型反響格局表九、質(zhì)量限制1、對(duì)新進(jìn)批蟆受檢者血型籍受檢者血清+試劑紅細(xì)胞號(hào)的試劑應(yīng)作親和力與B細(xì)胞效價(jià)驗(yàn)定.2、此檢測(cè)項(xiàng)袂O細(xì)胞研A細(xì)胞目應(yīng)參加衛(wèi)生部臨床檢A0-+驗(yàn)中央組織的室間質(zhì)評(píng),B0+-且成績(jī)合格；3、每次做血O0+型鑒定應(yīng)采

5、用血漿質(zhì)控AB0-品做室內(nèi)質(zhì)量限制,且要求在控.4、嚴(yán)格執(zhí)行查對(duì)制度,判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄,防止筆誤等引起的過(guò)失,如 有疑問(wèn)應(yīng)鏡下觀察紅細(xì)胞形態(tài)或用其他介質(zhì)重新檢測(cè).5、檢測(cè)標(biāo)本應(yīng)在28 c保存留一周,以備復(fù)查.6、試驗(yàn)中應(yīng)同時(shí)檢測(cè)O型紅細(xì)胞,假設(shè)產(chǎn)生陽(yáng)性反響,那么需要添加自身對(duì)照試驗(yàn),如 自身對(duì)照為陽(yáng)性,說(shuō)明是自身冷凝集素導(dǎo)致,如為陰性那么說(shuō)明被檢者血清或血漿中 可能存在ABO系統(tǒng)以外的其他系統(tǒng)的抗體干擾.十、生物參考區(qū)間ABO血型：A型,B型,O型,AB型；十一、干擾因素1、冷凝集素：在惡性腫瘤或病原體感染后有時(shí)冷反響性自身抗體可異常增高造成溶血.2、自身抗體：紅細(xì)胞被自身抗體強(qiáng)烈致

6、敏后將干擾 ABO定型,且自身抗體的存在 會(huì)導(dǎo)致交叉配血不合.3、弱凝集：當(dāng)患者紅細(xì)胞上抗原異?？赡軙?huì)導(dǎo)致減弱的或缺少的凝集反響,如亞型 紅細(xì)胞抗原性較弱、新生兒、老年人及少數(shù)惡病質(zhì)患者紅細(xì)胞抗原形成缺乏或敏感 性降低.4、細(xì)菌性凝集：常見(jiàn)有類B凝集,A型或O型病人因大腸桿菌O86感染,從而使 紅細(xì)胞上獲得類B抗原,能與抗B抗體發(fā)生凝集,表現(xiàn)為B或AB型.其不受溫度 影響,病情好轉(zhuǎn)類B凝集即消失.另外紅細(xì)胞被細(xì)菌或細(xì)菌酶污染,紅細(xì)胞上的 T 抗原被激活,與供血者中抗 T抗體發(fā)生凝集.5、混合外觀凝集現(xiàn)象：主要見(jiàn)于患者有近期輸血史、骨髓移植、胎盤出血、白血病或其他原因如嵌合現(xiàn)象、A3亞型及Tn多

7、凝集反響.？6、不規(guī)那么抗體：可通過(guò)測(cè)定唾液中的血型物質(zhì)來(lái)鑒定 ABO血型.7、亞型：？亞型紅細(xì)胞抗原性較弱易產(chǎn)生弱凝集；8、假凝集：常見(jiàn)于某些肝病、傳染病、多發(fā)性骨髓瘤、霍金氏病、心肌堵塞、感染 等??；9、血漿樣本血型鑒定時(shí)應(yīng)注意排除纖維蛋白原和補(bǔ)體的干擾；十二、考前須知1、檢測(cè)標(biāo)本必須正確有標(biāo)識(shí),其血液量、紅細(xì)胞或血漿的質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)要求和受血者當(dāng)前的免疫學(xué)狀態(tài)；2、輸血前檢查要求是輸血前3天內(nèi)的血樣預(yù)防受血者在輸血前的 3個(gè)月之內(nèi)可能 有妊娠或輸血等免疫史而可能產(chǎn)生不規(guī)那么抗體.3、標(biāo)本血液離體后要求盡快送檢,至檢測(cè)完畢最長(zhǎng)不能超過(guò)3d,每次檢測(cè)后受血者和供血者的血標(biāo)本應(yīng)在 2 c8 c保

8、存7天；4、每批次試劑均應(yīng)進(jìn)行效價(jià)測(cè)定,試劑使用前應(yīng)仔細(xì)檢查試劑的貯存條件是否符合 要求、是否變質(zhì)失效；5、注意離心力、溫度、紅細(xì)胞濃度及抗原抗體的比例對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響；6、患者使用的藥物影響的處理：如果使用右旋糖酊、PVP等治療,應(yīng)注意將紅細(xì)胞 洗滌；如果受者使用肝素治療,那么應(yīng)用硫酸魚精蛋白對(duì)抗,使樣本凝結(jié)；7、疑存在冷凝集素的病人標(biāo)本的血型鑒定時(shí)應(yīng)用37c生理鹽水洗滌3次再測(cè)定,并放37 C免疫微柱孵育器10分鐘后觀察結(jié)果.8、疑存在自身抗體的病人標(biāo)本的正定型血型鑒定時(shí)應(yīng) 用37 c45 c生理鹽水洗滌 紅細(xì)胞三次或者用放散后的紅細(xì)胞放散方法需不破壞紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)；9、疑為亞型應(yīng)通過(guò)亞型定型

9、試劑來(lái)具體定型.鑒定血型時(shí)要注意正反定型的結(jié)合,加用抗H和抗A、B型標(biāo)準(zhǔn)血清、A2紅細(xì)胞等檢查唾液中的血型物質(zhì),必要時(shí)作吸 收放散試驗(yàn)以確定.假設(shè)血清中存在不規(guī)那么抗體可在反定型用O細(xì)胞加以鑒定,有些亞型由于抗原的某些位點(diǎn)缺失,也會(huì)產(chǎn)生相對(duì)于缺失抗原位點(diǎn)的抗體,這些抗體的 產(chǎn)生有助于亞型的判定.10、疑為紅細(xì)胞被細(xì)菌或細(xì)菌酶污染產(chǎn)生的假凝集可置37c免疫微柱孵育器10分鐘后觀察結(jié)果,此種凝集在4 c和37c之間隨著溫度的升高凝集程度逐漸減弱,在 37 c時(shí)最弱或消失.11、出現(xiàn)混合外觀凝集的情況時(shí)一般要核對(duì)標(biāo)本,必要時(shí)可重新抽取血樣；12、紅細(xì)胞出現(xiàn)弱凝集、假凝集應(yīng)進(jìn)行紅細(xì)胞形態(tài)顯微鏡鏡檢,假凝集用生理鹽水 稀釋或洗滌紅細(xì)胞可使凝集消失.13、注意血漿因抗凝