血液標本采集和制片

1、會計學1血液標本采集和制片血液標本采集和制片l 臨床檢驗基礎l 臨床生化檢驗l 臨床免疫檢驗l 臨床微生物檢驗l 臨床血液檢驗l 臨床輸血檢驗l 臨床分子診斷學檢驗臨床醫(yī)學檢驗 醫(yī)學檢驗是一門具有多學科理論交叉、應用性強、發(fā)展迅速的應用技術學科，是醫(yī)學各科中發(fā)展最快的專業(yè)之一。 電子技術和計算機在醫(yī)學檢驗中得到了廣泛應用，基礎醫(yī)學的重大進展促進了實驗診斷迅猛發(fā)展。 標本用量少、減少標本的轉(zhuǎn)運環(huán)節(jié)、更快速、更靈活、易操作、信息量大、易質(zhì)控、報告及時。 但是許多手工操作仍然是基礎,是金指標,可校準儀器,是質(zhì)量控制重要方法。l二、臨床檢驗現(xiàn)狀和特點 （一）現(xiàn)狀 1、臨床檢驗已進入儀器化時代： 由簡單

2、的為臨床提供檢驗結(jié)果發(fā)展檢驗技術+參與臨床咨詢+臨床診斷+治療及預防工作 3、運用循證醫(yī)學理論為臨床提供合理的檢驗項目。 4、檢驗醫(yī)師與臨床醫(yī)師共同制定診斷和療效判斷標準。l（二）醫(yī)學檢驗的特點l（二）醫(yī)學檢驗的特點l 能做能質(zhì)控能維護能分析 期待檢驗醫(yī)師能遵照和參與國家、國際標準化檢驗的實踐活動，精通先進檢驗操作方法，并能與臨床醫(yī)生進行交流。 五、學習的基本要求學習目的： 1、掌握本學科基本技能，用準確 、經(jīng)濟 、簡便 、快速的檢測方法獲取檢測結(jié)果 達到協(xié)助診斷疾病和預防疾病的目的 2、為探索準確 、經(jīng)濟 、簡便 、快速的檢測方法，培養(yǎng)創(chuàng)新能力打下堅實的基礎。五、學習的基本要求 1、掌握臨檢

3、的基本理論 2、掌握各種操作技能 3、掌握方法學評價 4、熟悉各項實驗的參考區(qū)間 6、加強職業(yè)道德培養(yǎng) 必須養(yǎng)成嚴謹、細心 、有條不紊 、一絲不茍 、 認真負責、實事求是的工作作風 , 樹立優(yōu)良的職業(yè)道德。 5、熟悉實驗項目的臨床意義五、 學習的要求: 7、勤學苦練基本技能和具有過硬的形態(tài)學本領,才能勝任工作,成為一個優(yōu)秀的檢驗工作者。 8、上課要同時帶理論教材和實驗教材。 9、實驗課前要求預習實驗指導；不無故缺課，實驗考試不及格不準參加理論考試。 本課程總課時學128時,其中理論64學時; 實驗64學時 皮膚采血 靜脈采血法 動脈采血采集部位普通靜脈采血真空采血法 二、血標本采集的方法 （一

4、）皮膚采血(毛細血管采血) 2）耳垂：痛感較輕，操作方便，適于反復采血。 缺陷：血循環(huán)較差，受氣溫影響較大，血細胞汁數(shù)和血紅蛋白濃度等結(jié)果靜脈血，且冬季波動幅度較大，已是淘汰。入試管。入試管。 抗凝：應用物理的或化學的方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，稱抗凝。 抗凝劑（物質(zhì)）：能夠阻止血液凝固的化學試劑或物質(zhì)。 P10 表1-3 （一） 枸櫞酸鈉 機理：與血中鈣離子形成可溶性螯合物，從而阻止血液凝固。 濃度：109mmol/L(32.0g/L)， 106mmol/L(30.8g/L) （一）枸櫞酸鈉 用途： 1.止凝血象檢查，血液保養(yǎng)液用109mmol/L按1:9比例。 2.

5、血沉測定，用106mmol/L與血按1:4比例。（ICSH國際血液學標準化委員會推薦） 缺點：不適于血細胞計數(shù)。三、血液標本的抗凝 （二）草酸鈉： 機理：可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀，阻止血凝固。 濃度：0.1mol/L，與血按1:9比例混合。 用途：出凝血性疾病 缺點：不能作血涂片，因可產(chǎn)生草酸鹽結(jié)晶，還可使淋巴細胞核出現(xiàn)“三葉式”改變或紅細胞出現(xiàn)棘形。三、血液標本的抗凝 （三）雙草酸鹽：草酸鉀+草酸銨 機理：與鈣離子形成草酸鈣沉淀達到抗凝。 配制：100ml抗凝劑中含草酸鉀0.8g，草酸銨1.2g取此液0.20.5ml于小瓶內(nèi)80以下/烘干可使25ml血不凝。80草酸酸鹽可被分解為碳酸鹽而

6、失效。 三、血液標本的抗凝 （三）雙草酸鹽：草酸鉀+草酸銨 用途：草酸鉀鹽或鈉鹽可使紅細胞體積皺縮（約11%）。草酸銨可使紅細胞脹大。二者適當混合不影響紅細胞形態(tài)和體積如：紅細胞比積，血細胞計數(shù)，網(wǎng)織紅計數(shù)等，抗凝以后小時結(jié)果可靠。 缺點：草酸鹽可引起血小板聚集，并可影響白細胞形態(tài)故不適用于血小板計數(shù)和白細胞分類計數(shù)。 三、血液標本的抗凝 （四）肝素： 肝素廣泛存在于肺、肝、脾等幾乎所有組織的血管肥大細胞和嗜堿性粒細胞的顆粒中。 三、血液標本的抗凝 （四）肝素： 機理： 1.與抗凝血酶(AT-)一起，在低濃度能抑制因子IXa、和PF3之間的作用，阻止凝血酶形成。 2. 加強抗凝血酶(AT-)滅

7、活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成 3. 抑制凝血酶的自我催化抑制因子的作用。 4. 高濃度時可陰斷凝血酶與纖維蛋白的反應 三、血液標本的抗凝 （四）肝素： 配制：肝素粉（每mg含100125單位），配成1g/L水溶液取0.5ml置小瓶中，放3750烘干，可抗凝血5ml。 三、血液標本的抗凝 （四）肝素： 用途：肝素具有抗凝能力強，不影響血細胞引起溶血等優(yōu)點，為一種較好的抗凝劑。紅細胞計數(shù)，血紅蛋白測定，紅細胞比積及多種生化分析。也是抗血栓藥物之一。 缺點：過量肝素會引起白細胞凝集和血小板減少，故不能用于白細胞計數(shù)，血小板計數(shù)。肝素抗凝血瑞氏染色后背景呈是深蘭色，影響鏡檢，故也不適于作DC。

8、（五）乙二胺四乙酸（EDTA）鹽： 機理:與血中鈣離子結(jié)合成螯合物,阻止血液凝固. 配制：ICSH建議其使用濃度為每毫升血1.52.2mg。實驗室常將其配成15g/L，取0.5ml100，烘干，可抗凝血5ml。 用途：適用于多項血液學檢查 血細胞計數(shù)（特別是血小板計數(shù)） 紅細胞比積測定（室溫下48h內(nèi)紅細胞比積不改變）（五）乙二胺四乙酸（EDTA）鹽： （五）乙二胺四乙酸（EDTA）鹽： 缺點： 1.影響血小板聚集和白細胞吞噬功能，不適于出血凝血檢查及血小板功能檢驗。 2.能影響某些酶的活性和抑制紅斑狼瘡因子，故不適于制作組化染色和檢查紅斑狼瘡細胞的血涂片。 （六）脫纖維蛋白法（物理抗凝）：

9、方法：將血液注入有玻璃珠的盛器中不停轉(zhuǎn)動，使纖維蛋白纏繞凝固于玻璃珠上，從而阻止血凝固?；蛴妹藓灀?。 用途：適用于免疫學檢查和紅斑狼瘡細胞檢查。 血液標本的采集是分析前質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)之一l 、藥物對檢驗結(jié)果影響: l 影響反應系統(tǒng)待測成分的物理性質(zhì)；l 參與檢驗化學反應；l 影響機體生理功能和細胞活動的代謝；l 對器官的藥理活性和毒性作用。第三節(jié)血涂片制備和染色（二）制血片： 推片法于載玻片1/3與2/3交界處加綠豆大血1滴左手拇指與中指持載玻片(血滴靠中指端) 右手持邊緣平滑的推片,從血滴前方接觸血液使血液散開成一線 以推片與載片保持25 30度夾角向前(母指方向)推動形成血膜 體尾體頭

10、尾(四四)涂片好壞與下列因素有關涂片好壞與下列因素有關l(1)瑞氏粉的組成：l 美藍的氯鹽 + 伊紅的鈉鹽 +水 瑞氏粉沉淀(ME)l 瑞氏粉不溶于水，而溶于甲醇l(一)瑞氏染色法（right)l 【原理】 l1、瑞氏染液組成：l (1)瑞氏粉的組成：l ME(瑞氏粉)甲醇M+ E -l 瑞氏染液l 美藍氧化后-天青(紫紅色)l(一)瑞氏染色法（right)l 【原理】l1、瑞氏染液組成：l(一)瑞氏染色法（right)l 【原理】 l1、瑞氏染液組成：l2、甲醇作用： l a. 玻片必須化學清潔（洗衣粉）；l b. 用PH6.46.8緩沖液或新鮮蒸餾水調(diào)節(jié)PH；l c. 染色完后應用近中性水沖洗。正常染色偏酸偏堿l 臨床檢驗基礎l 臨床生化檢驗l 臨床免疫檢驗l 臨床微生物檢驗l 臨床血液檢驗l 臨床輸血檢驗l 臨床分子診斷學檢驗臨床醫(yī)學檢驗 五、學習的基本要求學習目的： 1、掌握本學科基本技能，用準確 、經(jīng)濟 、簡便 、快速的檢測方法獲取檢測結(jié)果 達到協(xié)助診斷疾病和預防疾病的目的 2、為探索準確 、經(jīng)濟 、簡便 、快速的檢測方法，培養(yǎng)創(chuàng)新能