體外診斷和治療試劑分析性能評估指導原則

1、體外診斷和治療試劑分析性能評估指導原則1. 檢測限2. 線性范圍3. 可報告范圍4. 準確度回收實驗5. 準確度方法學比對6. 精密度7. 干擾實驗8. 穩(wěn)定性9. 參考值參考區(qū)間檢測限檢測限評估的根本原那么 實驗人員應熟悉檢測方法與儀器操作； 采用適宜的校準品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)； 用于實驗的試劑應為同一批號，且在有效期內(nèi)。檢測限檢測限的評估和數(shù)據(jù)處理方法實驗材料和根本要求空白樣本的制備：空白樣本應不含被測物，但其基質(zhì)應與待測定常規(guī)樣本相同。如空白樣本難以得到，可采用5%牛血清或人血清白蛋白溶液。或根據(jù)測定工程選用相應基質(zhì)的樣本，但應注意將基質(zhì)效應減至最小。實驗方法在一次運行中將空

2、白樣本重復測定20次。數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)記錄：將測定結果記錄于表格中。如果檢測系統(tǒng)對于低于零的結果報告為零，應記錄初始響應值，如吸光度值等。數(shù)據(jù)統(tǒng)計：計算20次結果的均值與標準差SD。結果報告：以空白均值加兩倍標準差報告方法的檢測限。線性范圍線性范圍評估的根本原那么實驗操作人員應熟悉方法原理與操作，能對樣本進行正確處理，確保儀器工作狀態(tài)正常，采用適當?shù)男势穼x器進行校準。 儀器的各項性能指標如精密度應與標稱值相符，不存在明顯的攜帶污染等。應使用同批號試劑及校準品。線性范圍根本要求樣本基質(zhì)應與臨床實驗樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的

3、樣本。進行血清學標志物檢測時，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預期測定范圍內(nèi)選擇7-11個濃度水平。如將預期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。當對標稱線性參數(shù)進行驗證時，需在線性范圍內(nèi)選擇5-7個濃度水平。無論是建立或驗證線性范圍，所選用的濃度水平應可覆蓋整個預期測定范圍并包括與臨床有關的重要評價濃度，如最小測定濃度或線性范圍的最低限、不同的醫(yī)學決定水平、最大測定濃度或線性范圍的高限等。線性范圍制備方法不同濃度水平的樣本可通過將高濃度樣本與低濃度

4、樣本進行倍比稀釋得到，注意在進行液體吸取時應選擇精密度與準確性好的移液裝置。制備時應將樣本完全混合并防止蒸發(fā)或其他使樣本變質(zhì)的情況。每份樣本的濃度與體積單位應統(tǒng)一。如果高/低濃度血清的值未知，可將每種血清編碼，用編碼代表每個血清的相對濃度。對于等濃度間隔樣本，可用連續(xù)整數(shù)如1、2、3、4、5代表連續(xù)樣本。進行數(shù)據(jù)處理時可用樣本號代替X值。樣本的特殊處理：在無法得到適用的人血清時，需對樣本進行一些特殊處理以滿足實驗要求。這些處理過程包括稀釋、參加添加物或透析、熱處理等，無論進行何種處理均應以保持基質(zhì)恒定為根本原那么。在評價報告中應對所使用的稀釋液、添加物、溶劑等的材料來源加以注明。線性范圍實驗過

5、程建立線性范圍：需測定9-11個濃度水平，每個濃度水平重復測定3-4次驗證標稱線性參數(shù)：需測定4-6個濃度水平，每個濃度水平重復測定3-4次。所有樣本應在一次運行中或幾次間隔很短的運行中隨機測定，最好在一天之內(nèi)完成。線性范圍結果報告線性范圍報告的具體格式不要求，但至少應包括以下幾方面：進行線性評價的實驗室或生產(chǎn)廠家名稱。被評價的方法或試劑名稱，批號。測定工程。線性范圍如為二階線性應包括臨床允許誤差。如可能應標出測定工程的醫(yī)學決定水平及在此水平處的臨床允許誤差?？蓤蟾娣秶蓤蟾娣秶u估的根本原那么1.實驗人員應熟悉測定方法與儀器操作。2.采用適宜的校準品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)。3.用于評

6、價實驗的試劑應為同一批號，并在有效期內(nèi)?？蓤蟾娣秶鷺颖疽笞詈眠x擇與測定樣本具有相同基質(zhì)的樣本。制備方法低值樣本：將待測樣本含被分析物用混合人血清含被分析物濃度水平較低或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液進行稀釋，產(chǎn)生接近于方法線性范圍低限濃度水平的樣本，一般為5個濃度水平，濃度水平間隔應小于線性范圍低限的10%。高值樣本：選取含被測物的高值樣本，必要時可添加被分析物的純品，并計算出理論值。使用混合血清或5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液或測定方法要求的稀釋液對高值待測樣本進行稀釋，使其接近于線性范圍的上1/3區(qū)域內(nèi)，并記錄稀釋倍數(shù)。至少選用三個高濃度樣本，稀釋倍數(shù)應為方法性能標明的最大稀釋倍數(shù)、并適當增

7、加或減小稀釋比例?？蓤蟾娣秶鷮嶒炦^程在一次運行中將低值樣本重復測定10次，高值稀釋樣本重復測定3次。數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)記錄：可根據(jù)附表進行數(shù)據(jù)記錄。數(shù)據(jù)統(tǒng)計：分別計算AVE、SD、CV值。對于可報告范圍高限還應計算乘以稀釋倍數(shù)后的復原濃度和相對偏差。結果報告可報告范圍低限：以方法性能標示的CV值為可接受界值，由數(shù)據(jù)中選取CV值等于或小于可接受界值的最低濃度水平做為可報告范圍低限?？蓤蟾娣秶呦蓿哼x取復原濃度與理論濃度的偏差%等于或小于方法標示CV值時的最大稀釋倍數(shù)為方法推薦的最大稀釋倍數(shù)，方法線性范圍的上限與最大稀釋倍數(shù)的乘積為該方法可報告范圍的高限。準確度回收實驗回收實驗評估的根本原那么1.實驗人

8、員應熟悉測定方法與儀器操作。2.采用適宜的校準品、質(zhì)控品并保持儀器處于正常狀態(tài)。 準確度回收實驗實驗樣本的根本要求和制備方法1 選擇適宜濃度的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3-4份。2 在其中2-3份樣本中參加不同量的待測物標準，制成2-3個不同參加濃度的回收樣本，計算參加的待測物的濃度。3 在另一份樣本中參加同樣量的無被測物的溶劑，制成根底樣本。實驗過程用待評價方法對回收樣本和根底樣本進行測定，通常對樣本進行2-3次重復分析，取其均值進行計算。數(shù)據(jù)處理及結果報告1 計算回收率：回收率1 = 2可接受判斷：比例系統(tǒng)誤差不大于CLIA 88允許總誤差的1/2 準確度回收實驗本卷須知：1 參加體積：

9、參加的標準液體積一般在樣本體積的10%以內(nèi)；并且保證在加樣過程中的取樣準確度。2 參加待測物的濃度：在保證總濃度在方法分析測量范圍內(nèi)，盡量使參加標準液后樣本中的被測物濃度到達醫(yī)學決定水平。3 標準物濃度：因為標準物溶液參加體積不到10%，為保證得到不同濃度的回收樣本，標準物的濃度應該足夠高。 準確度方法學比對方法學比對的根本原那么1.熟悉待評價系統(tǒng)。2.編寫儀器標準操作規(guī)程，其中包括校準程序和室內(nèi)質(zhì)控程序。3.比對方法的選擇：對于比較、對方法，采用符合生產(chǎn)廠家要求的實驗室現(xiàn)行方法，或采用公認的參考方法。比對方法應具有以下條件：1具有比實驗樣品方法更好的精密度。2沒有的干擾物。3同實驗樣品方法具

10、有相同單位。比較方法應該選擇正確性經(jīng)過驗證的方法,根據(jù)實際條件,選擇的順序如下：參考方法、原裝系統(tǒng)、配套系統(tǒng)、經(jīng)過驗證的非配套系統(tǒng)。4.待評價方法的處理：進行方法學比照實驗前，應該對系統(tǒng)進行初步評價可參考NCCLS EP-10，并且對待評價方法進行精密度評價參考相關標準,只有在以上評價完成并且到達相關標準后，才可進行比照實驗。準確度方法學比對實驗樣本的根本要求1 按照實驗對樣品的要求收集處理病人樣品，樣本貯存時間及條件由被測組分的穩(wěn)定性而定，盡可能防止使用貯存的樣品。2 樣品應來自于許多病人，并且此病人的疾病對于被測組成的影響應該是知道的，不要使用含有干擾此方法的組分或條件(如溶血)樣品。3

11、在具有臨床意義范圍內(nèi)即醫(yī)學決定水平范圍內(nèi)，評價實驗樣品方法，通常根本從低于參考范圍的低限到高于參考范圍的高限。分析濃度盡可能在報告的濃度范圍內(nèi)均勻分布。商品質(zhì)控物或者校準物可能存在基質(zhì)效應，應防止使用。 準確度方法學比對實驗過程1 每天選擇8個臨床病人樣本，按1到8的順序編號。用兩種方法同時進行實驗，按照1，2，3，4，5，6，7，8，8，7，6，5，4，3，2，1的樣本順序進行測定。2 以上實驗至少重復5天，即至少分析40個不同的臨床病人樣本。每天實驗必須進行校準和室內(nèi)質(zhì)控。只有在室內(nèi)質(zhì)控合格的情況下，當天的實驗室數(shù)據(jù)才有效。 精密度1.批內(nèi)精密度是眾多種類精密度中最根本的一個，它是在嚴格的

12、相似條件下，所得到的最正確的精密度。2.批間精密度指在同一實驗室，由同一組操作員在同一儀器上，使用同一方法和同種、同一批號試劑，在一段時間內(nèi)(一般為一個月或20個工作日)對同一測試樣品常用質(zhì)控品測量結果的精密度。 Text in here精密度精密度評估的根本原那么1.操作者必須熟悉方法和/或儀器工作原理，了解并掌握儀器的操作步驟和各項本卷須知，能在評估階段維持儀器的可靠和穩(wěn)定。2.用于評估試驗的樣品一般常采用臨床實驗室收集的穩(wěn)定和冷凍貯存的血清(漿)庫；當實驗室收集的樣品不穩(wěn)定或不易得到時，也可考慮使用穩(wěn)定的、以蛋白質(zhì)為基質(zhì)的商品物質(zhì)，如校準品或質(zhì)控品。3.評估精密度時，應至少評估二個濃度水

13、平樣本的精密度。當二個濃度的精密度有顯著差異時，建議增加為三個濃度。所選樣本濃度應在測量范圍內(nèi)有醫(yī)學意義，即至少有一個濃度在醫(yī)學決定水平(medical decision levels)左右。不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。也不應選用靠近最低檢出限的樣品，此時所得的精密度往往偏大。相當多的檢驗工程低值常無實際臨床意義，但有少數(shù)檢驗工程，其低值也有臨床價值，此時就需要評估有判斷價值的低值精密度，適用時，可進行功能靈敏度的評估。如沒有醫(yī)學決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度。此外，再根據(jù)檢驗工程的性質(zhì)在線性區(qū)間內(nèi)選擇另一個值。如與廠商或文獻報導的精密度進行比較，

14、所選濃度應與被比較精密度的濃度相接近。否那么，有可能得出不恰當?shù)慕Y論。精密度只評估批內(nèi)不精密度1 試劑和校準品：應使用同一種類、同一批號的試劑和校準物,如可能,只進行一次校準。使用不同批號試劑和屢次校準都會增加檢驗結果的變異程度。2 評估方法：在以上條件滿足的情況下，在一批內(nèi)對樣本進行重復測定，至少進行20次重復測定。3 質(zhì)量控制：檢驗時應同時至少測一個質(zhì)控品。當質(zhì)控品結果超出規(guī)定的失控限，不管實驗結果是否滿意都應棄去不用，重新進行試驗以取得20個實驗數(shù)據(jù)。要保存所有的質(zhì)控數(shù)據(jù)和失控處理記錄。 4 數(shù)據(jù)收集：在進行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然過失引起的離群值(outliers)，可用下述

15、離群值的標準；從已收集的20數(shù)據(jù)計算出總均值和標準差，任何結果和總均值的差值超過4個標準差時，可認為是離群值。為了能收集到至少20個有效數(shù)據(jù)。除補充由于質(zhì)控失控而增加的測試外，還應再增加由于離群值不用于精密度的計算所需增加的檢驗次數(shù)。在進行這種批內(nèi)精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，當離群值超過1個時，應疑心是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時，應不用此次試驗數(shù)據(jù)。檢查問題和解決問題后重新開始新的評估實驗。Text in here精密度同時評價批內(nèi)和批間不精密度評估方法：每天做2個批次的測試，每批測試時，對同一樣品作雙份測量，共做20天。評估結束時共有40對，即80個測試結果。從40批

16、次測量中雙份結果的差值求出批內(nèi)精密度。從所有80個數(shù)據(jù)計算出批間精密度。在實施此項評估工作時，必須由同一個或一組操作者在同一臺儀器上進行，應該使用相同的校準品、相同種類和批號的試劑。所用時間不得少于20個工作日，這樣所測到的精密度能更好地反映出該臨床實驗室定量測量方法在一段時間內(nèi)的理想或最適的穩(wěn)定性。 在每一批次測量中，必須同時測量質(zhì)控品，以保證結果是可靠的，數(shù)據(jù)能夠采用。注：也可以一日進行一個批次測量，一個批次中對同一樣品重復測量4次，共測20個工作日，由80個數(shù)據(jù)求出批內(nèi)和批間精密度；如果取得穩(wěn)定樣品有困難，也可改為測5日，每日2個批次，每個批次測一個樣本8次。仍有80個數(shù)據(jù)。從10個批次

17、中每一樣品8次差異算出批內(nèi)精密度。從所有80個結果計算出批間精密度。同時評價批內(nèi)和批間不精密度數(shù)據(jù)的收集要收集到足夠有效數(shù)據(jù)(至少為80個數(shù)據(jù))。除補充由于質(zhì)控失控而增加的測試外，應在進行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然過失引起的離群值(outlier)，可用下述剔除值的標準；從實施段已收集的40對均值的數(shù)據(jù)計算出總均值和標準差，出現(xiàn)以下任何一種情況都可認為是離群值：1任何一對均值和總均值的差超過4倍標準差2任何一對中二個結果的絕對差值超過4倍標準差離群值不用于精密度的計算。在剔除后應再增加檢驗次數(shù)，以保證至少有40批次，80個數(shù)據(jù)進行計算。注：任何一次實驗的剔除值不能超過總測量數(shù)的2.5%

18、。當超過時，應疑心是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時應不用此次試驗數(shù)據(jù)，重新開始新的試驗。 精密度精密度精密度的報告形式精密度的結果受眾多因素影響，在報告測量精密度時，應同時說明以下各點：批內(nèi)標準差及其95%置信區(qū)間；批內(nèi)變異系數(shù);批間標準差及其95%置信區(qū)間;批間變異系數(shù);實驗進行的工作日數(shù);檢驗批次數(shù);每個批次重復檢驗數(shù)和總檢驗數(shù);試劑的種類和批號;校準品種類、批號和校準次數(shù);如適用，使用儀器的種類和型號。干擾實驗干擾實驗評估的根本原那么一干擾物質(zhì)來源：干擾物質(zhì)可能來自內(nèi)源或外源物質(zhì)?？梢筛蓴_物質(zhì)的來源通常有：1.常見的異常標本，例如溶血、黃疸及脂血；2.普通的處方藥及非處方藥；3.

19、患者群體中異常的生化代謝物；4.患者群體中常見的治療藥物；5.干擾測量程序的藥物包括代謝物；6.已報道干擾相似測量程序的物質(zhì)；7.標本處理過程中的添加物，例如抗凝劑、防腐劑；8.采集及處理過程中接觸標本的物質(zhì)，例如血清別離設備、導管、標本收集容器及塞子；9.影響某些實驗的膳食物質(zhì)，例如咖啡因，- 胡蘿卜素，罌粟籽。二在實施評價實驗前，必須決定臨床可接受的標準。三在實施評價實驗前，操作者必須熟悉儀器設備及測量程序并對精密度及準確度進行評價，在進行實驗設計時要防止遺留效應影響分析結果，確保分析系統(tǒng)保持穩(wěn)定。 干擾實驗干擾實驗的評估及數(shù)據(jù)處理方法干擾物質(zhì)對實驗結果的影響，一般是通過測定對照或根底樣本

20、池中待測物的濃度計算得出的。在某些情況下，對照樣本池中可能含有一定量的內(nèi)源性干擾物質(zhì)，如膽紅素、血紅蛋白、蛋白質(zhì)和脂類。在一些測量程序中，采用標本前處理、樣本空白、血清基質(zhì)校正物和因子校正等手段以減少這些干擾物質(zhì)在平均濃度下的影響，只有當患者樣本中干擾物質(zhì)濃度高于或低于平均水平時，由于干擾物質(zhì)引起的誤差才會顯現(xiàn)出來?；诖耍袃煞N評估干擾物質(zhì)的根本方法，每一種方法都有它的優(yōu)點及內(nèi)在局限性，當兩種方法同時使用時，可提供相互補充的信息。一種方法是將可疑干擾物質(zhì)參加樣本以評價干擾效果，另一種方法是測量個別有代表性病人標本，相對于高特異性可比較的測量程序評價被分析測量程序產(chǎn)生的偏倚。干擾實驗實驗材料和

21、根本要求1根底樣本池：從一些未服用藥物的健康個體獲得新鮮標本，以此反響標本基質(zhì)。假設不能獲得新鮮標本，可使用冷凍或凍干的標本代替，但應保證實驗材料充分接近新鮮臨床標本。使用適當純度的分析物將樣本池中分析物的濃度調(diào)整到醫(yī)學決定水平，但要防止引入其它的干擾物質(zhì)。2儲存溶液：準備一種適當純度或者最接近循環(huán)形式的可疑干擾物質(zhì)。選擇一種實驗物質(zhì)能充分被溶解的溶劑，例如試劑純水、稀釋的HCl或NaOH、甲醇或乙醇、丙酮、二甲亞砜DMSO及其他有機溶劑。制備至少20倍干擾物實驗濃度的儲存溶液。3每個標本所需要的重復測量次數(shù)：雙側檢驗的實驗重復次數(shù)為：，單側檢驗用Z1-代替Z1-/2。其中，Z1-/2是雙側檢

22、驗的可信度為100(1-)% 時標準正態(tài)分布相對應的百分位數(shù)；Z1-是單側檢驗的可信度為100(1-)% 時標準正態(tài)分布相對應的百分位數(shù)；Z1-是把握度為100(1-)%時標準正態(tài)分布相對應的的百分位數(shù)；dmax是檢測分析物濃度時最大允許的干擾interference；s是測量程序的重復性標準差。由于實驗次數(shù)必須為整數(shù)，所以將計算結果四舍五入為整數(shù)。4干擾物實驗濃度：干擾物質(zhì)濃度應到達病理標本的最高濃度值。5分析物實驗濃度：分析物實驗濃度應選擇兩個濃度水平。在大多數(shù)情況下，可選擇醫(yī)學決定水平、參考范圍的上、下限或病理濃度。干擾實驗實驗過程1選擇適當?shù)姆治鑫餄舛龋?建立一個臨床上顯著性差異dma

23、x的標準；3決定每個樣本的重復次數(shù)；4制備一個根底樣本池；5制備一個儲存溶液；6制備實驗樣本，將儲存溶液加至容量瓶體積的1/20，再用根底樣本加至刻度，混勻；7制備對照樣本，將溶劑加至另一容量瓶體積的1/20，再用根底樣本加至刻度，混勻；8在同一批測定中，交替分析實驗T及對照樣品C，例如C1T1C2T2C3T3.CnTn；9記錄分析結果。 穩(wěn)定性穩(wěn)定性評估的根本原那么1.實驗操作人員能熟練應用操作系統(tǒng)。能定期包括：每日、每周、每月、每季度對所用儀器進行維護保養(yǎng)，按儀器說明書所要求定期更換易損零配件，每年請國家計量院對儀器濾光片進行校驗，使儀器處在正常的工作狀態(tài)，確保儀器有較好的測定精密度及減少

24、樣本、試劑攜帶污染等。2.要采用與評價試劑配套的校準品，校準品的使用儲存、復溶應嚴格按照產(chǎn)品說明，校準步驟與間隔應按照本室的標準操作程序進行。3.要做好室內(nèi)質(zhì)控，質(zhì)控物應有可靠的來源，穩(wěn)定性應在一年以上，應盡可能采用人血清基質(zhì)，可選用定值或非定值質(zhì)控品，質(zhì)控物的使用儲存、復溶應嚴格按照產(chǎn)品說明，質(zhì)控物的定值與靶值確實定應按照本室的標準操作程序進行。4.進行穩(wěn)定性評價時應注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑，最好用同批混合試劑，這樣可防止瓶間差。試劑應存放在說明書規(guī)定的條件下。工作液配制應嚴格按照產(chǎn)品說明進行，試劑瓶上要標注翻開的日期及開瓶后的失效日期并簽上名或縮寫，要注意配制

25、好的工作液是否需要避光保存。5.實驗室應對用來保存試劑的冰箱有溫度監(jiān)控記錄，如果發(fā)現(xiàn)冰箱溫度可能存在問題，應該及時調(diào)整冰箱溫度，以符合試劑保存的要求，如果不能調(diào)整，應該及時轉(zhuǎn)移冰箱內(nèi)的試劑。還應做好實驗室內(nèi)溫度記錄，對實驗用水進行電阻率的測定不能低于1兆歐姆.厘米。穩(wěn)定性實驗工程：1.1 測定新配制的試劑工作液和穩(wěn)定期末試劑工作液兩組平均值之間的一致性。1.2 測定穩(wěn)定期末試劑工作液的空白吸光度值。1.3 測定穩(wěn)定期末試劑工作液的空白值實驗樣本：2.1 兩組平均值之間的一致性實驗的樣本要求1臨床樣本人血清：可防止基質(zhì)效應對結果的影響，力求新鮮，但不可選用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本

26、，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣本。最理想的濃度為醫(yī)學決定水平一般有兩個水平。2質(zhì)控品：選擇易得到的、有可靠來源，穩(wěn)定性好的定值或非定值質(zhì)控物、此質(zhì)控物至少要有兩個濃度水平。2.2試劑空白吸光度值、試劑空白值實驗的樣本要求生理鹽水開瓶時間在三個月內(nèi)應該透明清澈如出現(xiàn)沉淀或者混濁應及時更換。實驗方法每個濃度水平樣本重復測定至少6次，計算平均值。新配制及穩(wěn)定期末工作液應在同次運行中測定，可將儀器帶來的不精密度減到最小。Description of the contentsDescription of the contentsDescription of the contents參考值參考

27、區(qū)間定義 1.參考個體：根據(jù)設計標準篩選出進行實驗的個體確定一個人的健康狀況通常是非常重要的。2.參考人群：由參考個體組成的群體。參考人群的數(shù)量通常是未知的，因此它是一個假定的實體。參考人群也可以由一個人組成，例如為自身或其他人做參考。主題特異性參考個體在本指導文件中不包含在內(nèi)。 3.參考樣品組：選出適當數(shù)量的個體以代表參考人群。4.參考值：經(jīng)過對一定數(shù)量參考個體的測量和觀查，所獲得的檢測結果。對參考個體的實驗結果，參考值源于參考樣品組5.參考值分布：一組參考值的分布。6.參考樣本組的參考值分布：通過測定，并用適當?shù)慕y(tǒng)計方法進行處理。7.參考人群的參考值分布：評估參考樣本組的參考值分布，并用統(tǒng)

28、計方法進行處理。8.參考限：源自參考值的分布，用于描述局部參考值的位置小于或等于、大于或等于、下限/上限。9.參考區(qū)間：參考值低限和高限之間。如：GLU：3.66.1 mmol/L。有時只有參考值高限X有意義 ，其參考區(qū)間為：0X)。10.觀測值：病人樣本的實驗室檢驗結果，與參考值、參考值分布、參考限、參考區(qū)間作比較。 參考值參考區(qū)間選擇參考個體1.1 概要健康是一個缺乏統(tǒng)一定義的概念，因此，確定排除非健康的標準是選擇參考個體的第一步。每一項研究均有不同的健康標準。一個準參考個體的健康狀態(tài)需經(jīng)過一系列檢查才能確定，這些檢查包括病歷檢查或現(xiàn)狀態(tài)生理指標的臨床實驗檢查。用于參考值研究的標準應具有詳

29、細的描述和證明，實驗操作者根據(jù)此標準來判定參考樣品組的健康狀態(tài)，調(diào)查問卷可用于評價每個參考個體的健康狀態(tài)。1.2 排除和分組排除標準詳細規(guī)定了準參考個體的非健康狀態(tài)，用于排除非健康參考樣本。表-1列出了根本的排除標準，此表并沒有囊括所有的排除標準，每個工程應根據(jù)實際情況細化排除標準。分組標準詳細規(guī)定了組別特征。最常用的分組標準是年齡和性別。表-2還列出了其它的分組標準。各個工程可根據(jù)實際情況進行調(diào)整。排除和分組的最正確方法是調(diào)查問卷的方式。調(diào)查問卷常只需要答復“是或“否即可確定，也可與體檢同時進行。 1.3 選擇參考個體：健康參考值的參考個體不要求是健康年青人，他們應與疾病人群相似。許多情況下

30、，年齡相關的參考區(qū)間更適用于臨床診斷。但有些情況下，與年齡相關的實驗室指標改變可能不代表健康狀況的變化，如老年人的總膽固醇或生長激素水平改變。除非特別需要嬰兒、老年人，參考個體通常不應是臨床病人。1.4 抽樣調(diào)查問卷：為了保護參考個體的權益，應確保問卷信息和檢測結果的保密性。 參考值參考區(qū)間工程準備：對所有的分析前條件，包括工程準備、樣品收集和處理、分析方法、儀器，應進行嚴格限定，限定條件應可同時應用于參考個體和患者人群。一般情況下，分析前應考慮兩個因素，即生物學因素和方法學因素。生物學因素包括代謝和血液動力學，方法學因素包括樣品收集和處置等。樣本的種類、收集、處置和貯存實驗室應有樣品收集、處

31、置和貯存的標準操作手冊。選擇適宜的采血管，采血管不能引入外源性干擾。確定樣本是否可在厭氧條件下貯存。不應使用溶血、脂血、黃疸的血清或血漿樣本。血樣如果選擇的樣本為血樣，應確定需要的是動脈血、靜脈血還是毛細血管血。樣本需要抗凝時，應選擇抗凝劑，應明確樣本的采集方法。其它體液樣本其它的體液樣本包括尿液、腦脊液、胸膜積液、腹腔積液、心包積液、關節(jié)內(nèi)滑液、羊水和唾液等。應注意體液收集的時間段。溫度應明確樣本收集和貯存的溫度。通常情況下，樣本在采集后，應盡快進行處置和檢測，盡量減少放置時間。參考值參考區(qū)間分析方法特征實驗室應對所用檢測方法進行細致的描述和規(guī)定，應建立不精密度、不準確性、最小檢測限、線性、

32、回收率、干擾特征的評價準那么。 參考值參考區(qū)間考值參考區(qū)間評估的方法和結果報告1. 新的分析物質(zhì)或分析方法1.1 方法描述此方法適用于新分析物、新分析方法及以前的分析物參考值的建立。健康人群某分析物質(zhì)參考值的產(chǎn)生和參考區(qū)間的估計，應根據(jù)一個詳細限定條件的方法進行，這些條件限定包括以下幾點。1根據(jù)醫(yī)學科技文獻，建立適宜的生物變異和分析干擾的工程列表。 2建立選擇、排除及分組標準，設計適宜的調(diào)查問卷，以揭示潛在參考個體的標準。3參加參考區(qū)間實驗的參考個體應簽署書面同意協(xié)議，并完成調(diào)查問卷。4按照問卷結果及其它適宜的健康分析結果，對潛在的參考個體進行分類。5根據(jù)排除標準或體檢結果，從參考樣品組排除不

33、符合要求的參考個體。6根據(jù)所需要的參考限，決定適宜的參考個體的數(shù)目。7 用被分析物檢測的常規(guī)方法，對被選擇的參考個體進行采樣。8按照常規(guī)方法對樣本進行收集和處理。9按照被評價方法分析樣品，收集數(shù)據(jù)。整個過程與常規(guī)的操作保持一致。10檢測數(shù)據(jù)，設計圖表，以評價數(shù)據(jù)分布。11識別可能的數(shù)據(jù)錯誤。12選擇估計方法、估計參考限和參考區(qū)間，對參考區(qū)間進行分析。13對以上的步驟進行證明。 參考值參考區(qū)間1.2 結果分析 參考區(qū)間包括兩個值，即參考上限和參考下限。對于大多數(shù)分析物，以2.5%為低限，以97.5%為高限，通常確定范圍在2.5%97.5%的測定值為參考值。有時，只有參考上限具臨床意義。對于單側指

34、標，可以確定第5百分位數(shù)或第95百分位數(shù)為參考值。1.2.1 所需最少的參考個體數(shù)：120個觀測值可以滿足90%的置信限，153個觀測值可以滿足95%的置信限，198個觀測值可以滿足99%的置信限。作為通行標準，推薦一個分析工程至少需要120個參考個體數(shù)。如果實驗分組，每一組至少需要120個參考個體數(shù)。如果這120個參考值中，有不符合健康條件的值，將其排除后，應補測符合標準的值，最終總體參考值不少于120個。1.2.2 離群值的處理：設定比值D/R，其中D=最大值-次大值，或D=最小值-次小值，R為所有觀測值的極差。如果D1/3R，那么極值應被刪除。當兩三個離群值處在數(shù)據(jù)分布的一側時，D1/3

35、R規(guī)律常常不能識別出極值是否是具有顯著水平的異常值。這種情況下，1/3規(guī)律應將最小的極值認定為離群值。1.2.3 參考值分組：對不同性別、不同年齡之間參考區(qū)間的差異應進行驗證，每一組至少應選擇120個參考個體。一般情況下，如果兩組數(shù)據(jù)具有顯著性差異，那么參考區(qū)間應分別報告。兩組之間平均值差異應用z檢驗進行驗證。第一步，每組先檢測60個個體。每一組平均值的顯著性差異應用標準正態(tài)檢驗。參考值參考區(qū)間已有的分析物質(zhì)或分析方法1 方法描述此方法適用于將的有效參考值參考區(qū)間從供給實驗室轉(zhuǎn)移到接收實驗室。在適宜的情況下，如果檢測主體、方法學、取樣方法均具有兼容性，參考值參考區(qū)間的轉(zhuǎn)移是可行的。測量系統(tǒng)之間

36、的可比性可以通過相應的方法進行驗證。 參考值參考區(qū)間已有的分析物質(zhì)或分析方法2 參考值參考區(qū)間的轉(zhuǎn)移參考值參考區(qū)間的轉(zhuǎn)移是一個復雜的過程，為了使參考值具有可接收性，需要滿足一定的條件。可接收的轉(zhuǎn)移條件應視具體情況而定： 2.1 使用相同的分析系統(tǒng)方法和儀器：1在相同的實驗室里；2從一個實驗室到另一個實驗室；檢測主體來自相同的地區(qū)或相同的人口統(tǒng)計學總體；檢測主體來自不同的地區(qū)或不同的人口統(tǒng)計學總體；2.2 使用不同的分析系統(tǒng)不同的方法和不同的儀器：1在相同的實驗室里；2從一個實驗室到另一個實驗室； 檢測主體來自相同的地區(qū)或相同的人口統(tǒng)計學總體； 檢測主體來自不同的地區(qū)或不同的人口統(tǒng)計學總體； 如果首次參考值參考區(qū)間的測定已經(jīng)完成，那么不同參考值參考區(qū)間的轉(zhuǎn)移應著重注意兩個事項：即分析系統(tǒng)的結果可比性和樣本總體的可比性。整個的分析前過程及分析過程，均應與首次參考值參考區(qū)間確立過程保持一致。 參考值參考區(qū)間已有的分析物質(zhì)或分析方法3 參考值參考區(qū)間確認：有三種方法可用于參考值參考區(qū)間轉(zhuǎn)移可接收性的評價。3.1 參考值參考區(qū)間轉(zhuǎn)移可接收性可以通過對首次適宜參考值研究的相關要素的檢查來進行評估，包括參考總體的地區(qū)和人口統(tǒng)計學同質(zhì)性，分析前和分析程序，