《DNA的粗提取與鑒定》課件新人教版選修1

1、DNA的粗提取與鑒定討論2：如何證明他們是遺傳物質(zhì)？ 討論3：怎樣才能將細(xì)胞內(nèi)的這些物質(zhì)分離出來？ 討論1：構(gòu)成生物體的遺傳物質(zhì)是什么？1、提取生物大分子的基本思路選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子2、生物大分子主要指蛋白質(zhì)、酶和核酸3、提取DNA的基本思路利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分（一）提取DNA的方法（1）DNA的溶解性DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 molL時(shí)，DNA的

2、溶解度最大，濃度為 014 molL時(shí)，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使DNA在鹽溶液中溶解或析出如何通過控制NaCl溶液的濃度使DNA在鹽溶液中溶解或析出？（2）DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離（3）DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對(duì)DNA沒有影響大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080C的高溫，而DNA在80C以上才會(huì)變性洗滌劑可以溶解細(xì)胞的細(xì)胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì),但對(duì)DNA沒有影響1、 在沸水浴中， DNA遇二苯胺會(huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑 （二）D

3、NA的鑒定2、甲基綠 （綠色）（一）實(shí)驗(yàn)材料的選?。ǘ┢扑榧?xì)胞，獲取含DNA的濾液（三）除去濾液中的雜質(zhì)(純化)（四） DNA的析出與鑒定二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取 1、材料：魚卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌。（從中選取23種實(shí)驗(yàn)材料） 2、原則：選用DNA含量相對(duì)較高、容易提取的生物組織。雞血3、合適的材料：原因：一是雞血細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；二是雞血細(xì)胞極易吸水漲破。動(dòng)物細(xì)胞的破碎較易，例如，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水 ，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1、

4、動(dòng)物細(xì)胞答：蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來說是一種低滲溶液，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，從而釋放出DNA。討論：為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？2、植物細(xì)胞植物細(xì)胞需要先用一定的洗滌劑和食鹽溶解細(xì)胞膜實(shí)例：提取洋蔥DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液討論：加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？答：洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解討論：如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？具體做法：10mL雞血20mL蒸餾水同方向攪拌3層尼龍布過濾濾液答：研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋

5、放不完全，提取的DNA量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)（三）去除濾液中的雜質(zhì)答：用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽溶液中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽溶液使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)方案一、在濾液中加入NaCl，使NaCl溶液濃度為2mol/L，過濾除去不溶的雜質(zhì)，再加入蒸餾水，調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度為0.14mol/L，析出DNA，過濾除去溶液中的雜質(zhì)，再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。 討論：方案二與方案三的原理有什么不同？

6、答：方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離方案二、直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)1015分鐘。方案三、將濾液放在60750C的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘。為了純化提取的DNA需要將濾液作進(jìn)一步處理討論：此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)具體做法:方案一：30mL濾液35gNaCl同方向攪拌，DNA溶解加入蒸餾水DNA析出過濾得到過濾物放到2mol/LNaCl溶液中溶解DNA-NaCl溶解液方案二：30mL濾液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）靜置1015分鐘DN

7、A濾液方案三：30mL濾液6075處理過濾獲得DNA濾液（四） DNA的析出與鑒定DNA的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為95 ） ，靜置23min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水。1、DNA的析出鑒定DNA時(shí)在試管中先加入物質(zhì)的量的濃度為2mol/L 的NaCl溶液5ml于兩只試管中，其中一只加入DNA絲狀物，各加入二苯胺4ml 試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min,待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否有藍(lán)色2、 DNA的鑒定在沸水中加熱的目的：加快顏色反應(yīng)的

8、速率沸水加熱：說明DNA對(duì)高溫具有較強(qiáng)的耐受性1、以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉，防止血液凝固。2、加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。3、二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)影響鑒定的效果。制備雞血細(xì)胞液加檸檬酸鈉，靜置或離心破碎細(xì)胞，釋放DNA 加蒸餾水，同一方向攪拌過濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。溶解核內(nèi)DNA加入NaCl至2mol/L，同一方向緩慢攪拌DNA析出加蒸餾水至0.14mol/L，過濾，在溶解到2mol/L 溶液中除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。DNA初步純化與等體積95冷卻酒精混合，析出白色 絲狀物除去核蛋白、RNA、多糖等。DNA鑒定 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色實(shí)驗(yàn)操作2.實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 molL對(duì)DNA有何影響?1.在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：B答：前者是溶解DNA