人凝血因子Ⅷ效價測定一步法

1、人凝血因子效價測定一步法1試劑1.1樣品稀釋液：取1容積的3.8%枸櫞酸鈉液加入5容積咪唑緩沖液。1.1.1咪唑緩沖液稱0.68g咪唑和1.17g氯化鈉溶于100ml蒸餾水中，加入42.2ml0.1mol/L鹽酸，然后被加入蒸餾水至200ml,pH為7.3。1.1.23.8%枸櫞酸鈉溶液稱9.5g枸櫞酸鈉溶解于250ml蒸餾水中。1.2血小板代用品“兔（人）腦組織的氯仿抽提液”。用前用生理鹽水稀釋至適當(dāng)倍數(shù)。1.3白陶土生理鹽水混懸液稱0.5g白陶土加生理鹽水至100ml即可使用。1.4基質(zhì)血漿取人凝血因子含量低于2%的血友病病人血漿或人工基質(zhì)血漿，然后分裝于5ml安瓿，凍干或-30保存。1.

2、50.05mol/L氯化鈣溶液稱111g氯化鈣溶于1000ml蒸餾水中，配制成1mol/L氯化鈣貯存液，用前進行20倍稀釋，配成0.05mol/L氯化鈣溶液。1.6人凝血因子標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)準(zhǔn)血漿人凝血因子國家標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)化的工作標(biāo)準(zhǔn)（定量分裝凍干，置-30保存，一般2IU/ml左右），用前取樣品稀釋液溶解成1IU/ml。標(biāo)準(zhǔn)血漿系取30份新鮮正常人血漿等量混合后，分裝于小瓶內(nèi)，置-30保存。自采血后至分漿凍結(jié)整個過程不得超過4小時。1.7待測樣品按標(biāo)示量加入注射用水溶解，測定時稀釋成1IU/ml。2測定2.1取2支試管，每管加入0.1ml基質(zhì)血漿和0.1ml樣品稀釋液，混勻，再加0.1m

3、l血小板代用品和0.1ml白陶土懸液，混勻，將試管置37水浴保溫一定時間（一般26分鐘），然后加入0.1ml0.05mol/L氯化鈣溶液，記錄凝固時間，2管平均值為基質(zhì)血漿的“空白”值（一般應(yīng)大于3分鐘）。2.2標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)血漿用樣品稀釋液分別進行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀釋，用不同稀釋濃度標(biāo)準(zhǔn)品代替2.1項試驗中樣品稀釋液，按上述方法分別測定凝固時間。2.3待測樣品稀釋成約0.020.04IU/ml，代替2.1項試驗中樣品稀釋液，同時分別測定凝固時間。2.4測定時要求每個稀釋度平行測定2管，兩管之差不得超過均值10%，否則重測。3計算將標(biāo)準(zhǔn)品5個不同稀釋度所含人凝血因子單位（IU/ml），分別取其對數(shù)值，再將其各相應(yīng)濃度所測得凝固時間（秒），也分別取對數(shù)值，然后按照統(tǒng)計學(xué)方法作直線回歸方程。方程式：logy=bolgx+a其中x代表人凝血固子單位數(shù)，y代表測得相應(yīng)凝固時間（秒）。將測試