植物組織切片

1、植物組織永久制片一、徒手切片法二、滑走切片法三、離析法四、壓片法 五、石蠟切片法 六、冰凍切片法1石蠟切片法 石蠟切片法是用石蠟作為包埋劑的一種顯微制片方法，是顯微技術中最重要最常用的方法之一。它的優(yōu)點是能夠切出薄而均勻的連續(xù)切片，便于進行器官的三維重構。此法多用手搖切片機切片。對于較硬的材料，也可以使用滑走切片機。 石蠟切片法的操作程序包括：取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、修塊、切片、粘片、染色和封片。 2取材選取生長良好、有代表性的目標材料，洗凈。用鋒利的雙面刀片截取材料，動作要迅速。材料的大小不超過0.5lcm3。 3固定將選取的材料放人固定液中，固定液的體積大約是材料的20倍。固定

2、是用化學試劑迅速殺死細胞的過程。目的是盡可能使細胞中的各個組分保持生活狀態(tài)的結構，并固定在它們原來的位置上。常用的固定劑有：FAA 、卡諾和納瓦興固定液。 【FAA是Formalin-Aceto-Alcohol（福爾馬林-乙酸-乙醇）混合液的縮寫，配法：50%或70%酒精90毫升, 冰醋酸 5毫升, 福爾馬林, 5毫升。柔軟材料用50%酒精，堅硬材料用70%酒精配制。】 4脫水固定好的材料經(jīng)各級酒精脫水至純酒精。各級酒精的濃度為：30%、50%、70%、85%、95%和l00%。（自動脫水機 )5透明純酒精中的植物材料用l2純酒精和l2二甲苯混合液處理23h，轉入純二甲苯中，處理兩次。由于石蠟

3、溶于二甲苯而不溶于酒精，因此透明的作用除了使材料變得透明外，另一方面是將材料中的酒精除去。 6浸蠟使石蠟慢慢溶于透明劑中，然后完全取代透明劑進人植物組織中。一般將透明好的材料換入新的二甲苯中，然后加入等體積的碎蠟，置于40左右的溫箱中。隨著碎蠟的溶解，不斷加入碎蠟使石蠟飽和為止。時間大約l2天。 7包埋浸蠟后，在60的溫箱中，換兩次已溶解的純蠟，每次約2h。然后將材料和石蠟一起倒人小紙盒中，用加熱的鑷子迅速把材料按需要的切面和一定的間隔排列整齊，再將小紙盒平放于冷水中，使其很快凝固。 8修快和切片按需要的切面將蠟塊切成梯形，切面在梯形的上部，注意上部矩形的對邊平行。 用手搖切片機將蠟塊切成連續(xù)的蠟帶。切片時，把切片刀夾在刀架上，再把木塊夾在固定裝置上，調(diào)整固著位置，使材料的切與面刀口平行。然后調(diào)整厚度，轉動切片機切片。 9粘片粘片是將切好的蠟片粘在載玻片上。在潔凈的載玻片上，加少許粘貼劑并涂勻。 再將帶有蠟片的載玻片放在溫臺上，溫臺的溫度在45左右，蠟片受熱后慢慢伸直。用濾紙吸去多余液體，表面烤干后，轉入30溫箱放置一晝夜。 10染色和封片切片干燥后，可以選用不同的染色法染色。染色前先要進行脫蠟，使