感染性疾病的免疫學(xué)診斷課件

1、1感染性疾病的臨床免疫學(xué)診斷 Clinical immunology diagnosis of infectious diseases 2了解感染性疾病的基本特點(diǎn)及機(jī)體抗感染免疫的相關(guān)防御機(jī)制熟悉臨床免疫學(xué)診斷在各種感染性疾病中的應(yīng)用掌握肝炎病毒主要的免疫學(xué)診斷指標(biāo)及其臨床意義教學(xué)目標(biāo)3感染性疾病(infectious diseases)：由微生物（細(xì)菌、病毒、真菌等）和寄生蟲感染人體后機(jī)體組織細(xì)胞受到不同程度的損害并出現(xiàn)一系列的臨床癥狀和體征。感染性疾病傳染?。╟ommunicable diseases)4當(dāng)今感染性疾病的特點(diǎn)感染性病原體的種類不斷發(fā)生變遷宿主的免疫防御能力下降內(nèi)源性感染(e

2、ndogenous infection)與條件致病菌(conditioned pathogen)感染的增加5常用的檢測(cè)技術(shù)直接顯微鏡檢（direct microscopic examination)病原體的分離、培養(yǎng)和鑒定(isolation,cultivation and identification for pathogen)病原體的免疫學(xué)檢測(cè)(immunological detection for pathogen)病原體核酸檢測(cè)(detection for pathogen nucleic acid)6病原微生物機(jī)體抗感染免疫 結(jié)局？致病能力感染與免疫抗感染免疫（anti-infect

3、ion immunity):又稱免疫防御，是機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別和清除病原體的生理性防御機(jī)制。7大吞噬細(xì)胞 屏障機(jī)構(gòu)吞噬細(xì)胞非特異性免疫（固有免疫）皮膚與粘膜屏障血-腦脊液屏障胎盤屏障小吞噬細(xì)胞免疫分子補(bǔ)體溶菌酶防御素免疫防御機(jī)制8人體固有免疫系統(tǒng)9 體液免疫：由特異性抗體起主要作用的 免疫應(yīng)答； 細(xì)胞免疫：以T淋巴細(xì)胞為主的免疫應(yīng)答特異性免疫(獲得性免疫）10病原菌感染過程和宿主免疫防御機(jī)制11小 結(jié)臨床免疫學(xué)檢測(cè)對(duì)感染性疾病的早期診斷和治療至關(guān)重要；在感染性疾病中，機(jī)體對(duì)病原體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答可以反映疾病的產(chǎn)生、發(fā)展、治療、預(yù)后的情況，因此對(duì)感染性疾病進(jìn)行免疫檢測(cè)可反映機(jī)體感染情況，達(dá)到臨床診斷

4、治療的目的。12病毒感染性疾病病毒性肝炎(viral hepatitis)：由病毒感染所致的臨床上以肝功能指標(biāo)異常為主的全身性疾病。Hepatitis A virus (HAV) Hepatitis B virus (HBV) Hepatitis C virus (HCV) Hepatitis D virus (HDV) Hepatitis E virus (HEV)13甲型肝炎( HAV)歷史：1973年，免疫電鏡 性質(zhì)：27-32nm，無包膜，小RNA病毒，腸道病毒72型傳播途徑：主要經(jīng)糞-口途徑 14急性黃疸肝炎15標(biāo)志物病毒顆粒/HAV Ag：潛伏期后期和急性期，糞便中可查到病毒顆粒；

5、血清查抗原；HAV-IgM： 急性期早期出現(xiàn)，2-4W高峰；1-2M 下降，持續(xù)3-6M消失；早期感染診斷的指標(biāo)；目前最常用的特異性診斷HAV-IgG： 恢復(fù)期出現(xiàn)，2-6M高峰； 主要用于了解既往感染史、疫苗免疫效果評(píng)價(jià)或流行病學(xué)調(diào)查HAV-IgA： 急性期腸道分泌IgA；早期診斷指標(biāo) HAV-RNA： 分子雜交技術(shù)和RT-PCR1617乙型肝炎 ( HBV)歷史：1963年，首次發(fā)現(xiàn)HBVAg,又稱“澳抗”； 1970年，Dane顆粒性質(zhì)：雙鏈DNA病毒；Dane顆粒，小球形顆粒，管形顆粒 Dane 顆粒18血液傳播、（輸血、血制品、醫(yī)療器械等） 日常生活（傷口、共用刀具、消化道粘膜破損或

6、潰瘍等） 母嬰 傳播性傳播傳播途徑19標(biāo)志物外膜蛋白 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb 核殼蛋白 HBcAg HBcAb HBV-DNA 新進(jìn)展：PreS1、PreS2 (乙肝五項(xiàng)或兩對(duì)半）20標(biāo)志物HBsAg/抗HBs： 病毒感染指標(biāo)/感染恢復(fù)指標(biāo)，保護(hù)性抗體 HBsAg 潛伏期后期、急性期早期出現(xiàn)可持續(xù)于整個(gè)急性期； 恢復(fù)期消失。 HBsAg 消失數(shù)周后血清中出現(xiàn)抗HBs；表面抗體可持續(xù)數(shù)年或 更長(zhǎng)。 HBsAg和抗HBs同時(shí)出現(xiàn)：不同亞型重復(fù)感染或處于血 清轉(zhuǎn)換期。 21 標(biāo)志物 HBeAg/抗HBe：病毒復(fù)制及傳染性強(qiáng)的指標(biāo)/減少?gòu)?fù)制的指標(biāo) HBeAg出現(xiàn)時(shí)間晚于HBsA

7、g，消失早于HBsAg；HBeAg 僅存在 于 HBsAg ()的血清中；HBeAg的存在代表Dane顆粒的存在 ,表明病毒復(fù)制，傳染性強(qiáng)。 抗HBe隨著HBeAg的消失而出現(xiàn)于血液中，其意義相反； 抗HBe的出現(xiàn)早于抗HBs。22 標(biāo)志物HBcAg/抗HBc ： HBcAg主要存在于肝細(xì)胞內(nèi)，血中不易檢測(cè)，不用于 HBV的常規(guī)檢查。 抗HBc不是一種保護(hù)性抗體。在HBsAg出現(xiàn)后的2-4周 后出現(xiàn)，存在時(shí)間長(zhǎng)；抗HBc分抗HBc-IgM和IgG型； 檢出高效價(jià)抗HBc，表示HBV在肝內(nèi)處于復(fù)制狀態(tài)。232425 標(biāo)志物 PreS1、PreS2/抗PreS1、抗PreS2： 新近感染指標(biāo)； P

8、reS1及PreS2抗原具有吸附于肝細(xì)胞受體的表位，可促進(jìn)病 毒吸附至肝細(xì)胞表面。 PreS1、PreS2先于HBV DNA出現(xiàn)，且 與HBsAg、HBeAg、HBV DNA及HBV DNA多聚酶呈正相關(guān)； 抗PreS1、抗PreS2是HBV感染后最早出現(xiàn)的抗體；陽性提示病 毒正在或已經(jīng)被清除，是預(yù)后良好的指標(biāo)。 26HBV-DNA急性期存在有效地反映HBV活性，是HBV感染、復(fù)制、血液有傳染性的直接指標(biāo)；Real-time PCR檢測(cè)DNA 拷貝數(shù)，不僅用于HBV的診斷，還由于藥物治療的療效觀察。 標(biāo)志物272829303132333435 丙型肝炎(HCV)歷史：1965年，輸血后黃疸型肝

9、炎，80-90%，曾稱非甲非乙型病毒性肝炎性質(zhì)： 40-60nm，有包膜，單股正鏈RNA病毒傳播途徑：輸血；性接觸；母嬰；生活密切接觸 36標(biāo)志物病毒顆粒/抗原：外周血含量非常低；ELISA檢測(cè),敏感性低，不常規(guī)開展抗體： 非保護(hù)性抗體IgM和IgG 抗HCV-IgM：急性期出現(xiàn)； 抗HCV-IgG：感染指標(biāo)，長(zhǎng)期存在。 核酸： HCV-RNA感染指標(biāo)； 治療后監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。37丁型肝炎 (HDV)歷史：1977年，乙肝攜帶者；1984年命名為丁型肝炎病毒性質(zhì)：嗜肝單股RNA病毒， 35-37nm，球形，有包膜，缺陷病毒，是HBV 的專性共生體傳播途徑：與HBV相似，主要經(jīng)血傳播，母嬰傳播少見機(jī)

10、理：HDV直接損傷肝細(xì)胞； HBV免疫反應(yīng)損傷肝臟；雙重?fù)p傷-重癥肝炎或爆發(fā)性肝炎38病毒顆粒/抗原：鏡檢未用于臨床；HDVAg診斷急性HDV感染的最直接的指標(biāo)。在慢性HDV感染中，HDV抗原可呈波動(dòng)性反復(fù)陽性?？贵w：非保護(hù)性抗體 抗HDV-IgM感染早期出現(xiàn)，急性期感染指標(biāo)； 抗HDV-IgG出現(xiàn)比較晚，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。核酸：HDV-RNA HDV感染的指標(biāo)。標(biāo)志物39戊型肝炎 ( HEV)歷史：1955年印度流行，經(jīng)胃腸道傳播的一種非甲非乙的病毒，1989年確定為戊型肝炎病毒性質(zhì)： 32-34nm，球形，無包膜，單股正鏈RNA病毒 傳染途徑：糞-口途徑 特點(diǎn)：水源性污染、青壯年多發(fā)；孕婦病死率

11、高40病毒顆粒/抗原： 免疫電鏡，應(yīng)用的少。（2）熒光免疫，酶聯(lián) 免疫?？贵w： 抗HEV-IgM黃疸后1-2周出現(xiàn)，持續(xù)3-4周消失。 抗HEV-IgG持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，是否免疫力的標(biāo)志還不 明。標(biāo)志物41型別病毒體病毒科傳播途徑疫苗預(yù) 后及標(biāo)志物直徑大小( nm)包膜核酸類型HAV2730無+ ssRNA嗜肝RNA病毒 糞-口傳播有急性感染，預(yù)后好； HAV-IgMHBV42有dsDNA嗜肝DNA病毒輸血，醫(yī)源性，性接觸，母嬰垂直傳播有有慢性傾向，預(yù)后差，與肝癌相關(guān)；兩對(duì)半，HBV-DNAHCV4060有+ss RNA黃病毒 輸血，醫(yī)源性尚無有慢性傾向，預(yù)后差，與肝癌相關(guān)； HCV-IgG，HCV

12、-RNAHDV3537有-ss RNAHBV伴隨病毒 輸血，醫(yī)源性尚無加重HBV感染，預(yù)后差；HDV-IgMHEV3234無+ss RNA杯狀病毒 糞口傳播尚無急性感染，預(yù)后好；HEV-IgM小 結(jié)42細(xì)菌感染性疾病急性時(shí)相反應(yīng)蛋白（acute phase reactants, APR):在感染、燒傷、大型手術(shù)、炎癥、組織損傷等應(yīng)激原出現(xiàn)后，可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生快速反應(yīng)，如血漿中某些蛋白濃度迅速變化。這種變化稱為急性時(shí)相反應(yīng)，這些蛋白稱急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。C-反應(yīng)蛋白（C reactive protein, CRP)降鈣素原（procalcitonin, PCT)意義：連續(xù)監(jiān)測(cè)單次檢測(cè)43C-反應(yīng)蛋白

13、（CRP）分子量：129 kDa由肝臟產(chǎn)生，與肺炎鏈球菌菌體多糖“C”起反應(yīng)炎性細(xì)胞因子刺激其釋放廣泛存在于血液和其他體液中 人類C-反應(yīng)蛋白結(jié)構(gòu)圖44臨床意義：急慢性感染的篩查； 細(xì)菌與病毒感染的鑒別； 監(jiān)測(cè)治療與預(yù)后判斷； 最常用的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。局限性：一種非細(xì)菌感染的特異蛋白質(zhì)； 嚴(yán)重細(xì)菌感染或肝臟嚴(yán)重?fù)p害時(shí)增高不明顯； 可有假陽性，孕婦含量較高。參考值：8mg/L（速率散射比濁法）45降鈣素原(PCT)血清降鈣素(CT)的前肽物質(zhì)分子量：13 kDa由116個(gè)氨基酸組成的糖蛋白無激素活性非類固醇類抗炎物質(zhì)11號(hào)染色體上的降鈣素I基因轉(zhuǎn)錄甲狀腺濾泡細(xì)胞降鈣素原前體內(nèi)源多肽酶降鈣素原

14、PCT分解細(xì)胞內(nèi)特殊蛋白酶降鈣素正常情況下46在細(xì)菌感染/膿毒血癥狀態(tài)下PCT在各個(gè)組織、器官大量形成并釋放進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)JCEM 200147PCT的臨床應(yīng)用American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine: Definitions for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis. Crit Care Med 1992,20:864-874.48艱難梭菌A、B毒素檢測(cè)（

15、A & B toxin detection of Clostridium difficile)革蘭陽性厭氧菌，易形成芽孢自1970年代被確定為腹瀉和結(jié)腸炎的主要致病菌 致病株產(chǎn)生兩種外毒素 腸毒素A 細(xì)胞毒素 B 檢測(cè)：酶聯(lián)熒光免疫分析技術(shù)（ELFA)；PCR49抗鏈球菌溶血素“O”試驗(yàn)（anti-streptolysin O, ASO)定義：A群溶血性鏈球菌的毒素O能溶解紅細(xì)胞、殺白細(xì)胞和血小板，具有抗原性，可使人產(chǎn)生相應(yīng)抗體參考值：200U/ml(速率散射比濁法）臨床意義：A族溶血性鏈球菌感染，常見于活動(dòng)性風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性腎小球腎炎、急性上呼吸道感染、皮膚和軟組織感染等；疾病的動(dòng)

16、態(tài)監(jiān)測(cè)50肥達(dá)反應(yīng)（Widal reaction, WR)定義: 利用傷寒和副傷寒沙門菌菌液為抗原，檢測(cè)病人血清中有無相應(yīng)抗體的一種凝集試驗(yàn) 參考值：傷寒沙門菌O凝集效價(jià)1:80, H1:160； 副傷寒H100ng/ul有意義（ELISA）59性傳播疾病定義： 性傳播疾?。╯exually transmitted diseases， STD）：指通過性接觸可以傳染的一組傳染病，其傳播方式包括直接性傳播、間接性傳播和母嬰傳播。當(dāng)前常見的STD：淋病、梅毒，AIDS、非淋菌性尿道炎、生殖器皰疹等。60獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immune deficiency syndrome,

17、AIDS) HIV（human immuno-deficiency virus)：1981年, 侵犯CD4+T淋巴細(xì)胞性質(zhì)： 100-120nm，球形， RNA病毒； HIV-1和HIV-2檢測(cè)病毒分離培養(yǎng)：科學(xué)研究核酸檢測(cè)：病情觀察和療效觀察抗原檢測(cè)：P24抗原；“窗口期”及HIV陽性母親所生嬰兒早期輔助鑒別診斷抗體檢測(cè)： 初篩：ELISA； 確診：免疫印跡（West blot，WB)63IgMIgG64梅毒（syphilis)梅毒螺旋體（又稱蒼白密螺旋體蒼白亞種）檢測(cè)直接鏡檢：暗視野；熒光抗體 初篩： 用心/卵磷脂作抗原，測(cè)定血清中抗心卵磷脂抗體，即非特異性抗體實(shí)驗(yàn)如TRUST，RPR 確

18、診：用活的或死的梅毒螺旋體或其成分來作抗原測(cè)定抗螺旋體抗體，即特異性抗體實(shí)驗(yàn)如TPPA656667淋病(gonorrhea)由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎性疾病檢測(cè)：直接涂片鏡檢（革蘭陰性雙球菌）；培養(yǎng)金標(biāo)準(zhǔn)6869非淋菌性尿道炎（nongonococcal urethritis,NGU)：由沙眼衣原體、解脲脲原體或人型支原體等通過性接觸而致的尿道炎癥。檢測(cè)直接鏡檢（上皮細(xì)胞內(nèi)有包涵體）核酸檢測(cè)培養(yǎng)（解脲和人型）抗體檢測(cè)意義不大70性病診斷金標(biāo)準(zhǔn)艾滋病免疫印跡法梅毒特異性抗體檢測(cè)淋病分離培養(yǎng)非淋菌性尿道炎培養(yǎng)或核酸檢測(cè)小 結(jié)71先天性感染疾病TORCH定義：弓形蟲（Toxoplasma，TO） 風(fēng)疹病毒（ Rubell